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1、(10)申请公布号 CN 103446601 A (43)申请公布日 2013.12.18 CN 103446601 A *CN103446601A* (21)申请号 201210177140.7 (22)申请日 2012.05.31 A61L 2/08(2006.01) G01N 27/26(2006.01) (71)申请人 通用电气公司 地址 美国纽约州 (72)发明人 陈睿 徐轶达 陈林 (74)专利代理机构 北京市柳沈律师事务所 11105 代理人 王国祥 (54) 发明名称 为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法和相应 的生物传感器 (57) 摘要 本发明涉及一种为含有葡萄糖氧化酶的膜杀 。
2、菌的方法， 包括 ： 用伽马射线照射在相对湿度低 于环境相对湿度的真空中的含有葡萄糖氧化酶的 膜。本发明也涉及相应的生物传感器。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103446601 A CN 103446601 A *CN103446601A* 1/1 页 2 1. 一种为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 其包括 ： 用伽马射线照射 在相对湿度低于环境相对湿度的真空中的含有葡萄糖氧化酶的膜。 2. 如权利要求 1 。
3、所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 伽马射线的 剂量为大约 25kGy 到大约 40kGy。 3. 如权利要求 1 所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 真空中的相 对湿度大约为环境相对湿度的一半。 4. 如权利要求 1 所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 含有葡萄糖 氧化酶的膜被置于有干燥剂的真空包装中。 5. 如权利要求 4 所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 干燥剂包含 硅胶。 6. 如权利要求 1 所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 伽马射线照 射比率为大约 20kGy/ 小时。 7. 如。
4、权利要求 1 所述为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 其特征在于 ： 含有葡萄糖 氧化酶的膜位于生物传感器中。 8. 一种生物传感器， 其特征在于 ： 其包括以权利要求 1 中所述为含有葡萄糖氧化酶的 膜杀菌的方法杀菌的含有葡萄糖氧化酶的膜。 9. 如权利要求 8 所述的生物传感器， 其特征在于 ： 其对于葡萄糖的灵敏度大约为包括 未杀菌的含有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器的 80%。 10. 一种装有含有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器， 其特征在于 ： 其通过后述方法杀 菌 ： 在含有葡萄糖氧化酶的膜处于相对湿度低于环境相对湿度的真空中的情况下用伽马射 线照射。 权 利 要 求 书 CN 103。
5、446601 A 2 1/5 页 3 为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法和相应的生物传感器 背景技术 0001 本发明涉及为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法和相应的生物传感器。 0002 装有包含葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器被用于连续及 / 或自动地监控像糖尿 病患者这类人群的体液 （例如血液或者间液） 中的葡萄糖水平。装有包含葡萄糖氧化酶的膜 的生物传感器也被用于自动及 / 或连续地检测葡萄糖水平以监控生物反应器中的细胞生 长。 0003 为避免细菌、 真菌、 病毒等生物污染物或病原体的至少潜在的威胁， 保证使用者的 健康与安全或生物反应器的正常运行， 为生物传感器杀菌是十分重要的。 0004 。
6、伽马射线照射、 高压杀菌处理、 和乙撑氧处理是一些杀菌技术。但是， 在消除或者 灭活有害的、 潜在危险的生物污染物或病原体的同时， 伽马射线也会损害含有葡萄糖氧化 酶的膜， 降低生物传感器的灵敏度。所以， 人们开发了在为生物传感器和 / 或含有葡萄糖氧 化酶的膜杀菌的同时保护它们免受损害的方法。 0005 例如， 美国专利申请第2010/0293892号公开了一项保护酶 （葡萄糖氧化酶） 传感器 并同时保持其无菌状态的包装方法， 涉及用射线照射密封的包装之前向包装内充入惰性气 体以产生过量的气压， 或者将包装抽真空。 0006 包括在以上专利申请中提及的用伽马射线为生物传感器和 / 或含有葡萄。
7、糖氧化 酶的膜杀菌等现有方法， 都不能将灵敏度损失控制在一些特定环境中所要求的合理范围 内。 0007 因此， 需要提供新的或者改进的为生物传感器和 / 或含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌 的方法及相应的生物传感器。 发明内容 0008 一方面， 本发明涉及一种为含有葡萄糖氧化酶的膜杀菌的方法， 包括 ： 用伽马射线 照射在相对湿度低于环境相对湿度的真空中的含有葡萄糖氧化酶的膜。 0009 另一方面， 本发明涉及装有通过以上所述方法杀菌的含有葡萄糖氧化酶的膜的生 物传感器。 0010 另一方面， 本发明涉及装有包含葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器。其通过后述方 法杀菌 ： 在含有葡萄糖氧化酶的膜处于相对湿。
8、度低于环境相对湿度的真空中的情况下用伽 马射线照射。 0011 结合详细说明并参照附图可以更好地理解本发明的特色， 组成以及优点。 附图说明 0012 图 1 是例 1 所得到的图表。 0013 图 2 是例 2 所得到的图表。 具体实施方式 说 明 书 CN 103446601 A 3 2/5 页 4 0014 说明书中的近似用语用来修饰数量， 表示本发明并不限定于该具体数量， 还包括 与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的， 用 “大 约” 、“约” 等修饰一个数值， 意为本发明不限于该精确数值。在某些例子中， 近似用语可能对 应于测量数值的仪器的精度。 0。
9、015 本发明中所提及的数值包括从低到高一个单元一个单元增加的所有数值， 此处 假设任何较低值与较高值之间间隔至少两个单元。举例来说， 如果说了一个组分的数量 或一个工艺参数的值， 比如， 温度， 压力， 时间等等， 例如从 25 到 40， 是想表达 30 到 35， 26 到 39， 33 到 35， 28 到 32 等数值都已经明白的列举在此说明书中。对于小于 1 的数值， 0.0001,0.001,0.01 或者 0.1 被认为是比较适当的一个单元。前述只是想要表达的特别示 例， 所有在列举的最低到最高值之间的数值组合均被视为以类似方式清楚地列在本说明书 中。 0016 在以下的说明和。
10、权利要求中， 除非另有说明， 单复数没有特别限定。 0017 在此涉及的 “也许” 、“可能” 、“可” 、“可以” 表示在某种情况下发生的可能性 ； 某种 特定所有权、 特点或功能 ； 和 / 或通过修饰动词来表示一个或多个能力、 性能或与被修饰动 词相关的可能性。相应地，“也许” 、“可能” 、“可” 、“可以” 表示尽管在一些情境下， 被修饰词 不能合适地、 可能地或适当地来说明容量、 功能或用处， 但是在此被视为合适的、 可能的或 适当的。 例如， 在一些情境下， 需要某些事项或容量， 但是在另外的情境下， 它们可能不会出 现。这些区别由 “也许” 、“可能” 、“可” 、“可以” 等。
11、词来表示。 0018 本发明中，“杀菌” 及其类似表达表示依据本发明方法处理含有葡萄糖氧化酶的膜 和 / 或生物传感器时， 存在于待处理的含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器中的至少 一种活性生物污染物或病原体的减少。 0019 本发明中，“生物污染物或病原体” 指的是在与含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物 传感器直接或非直接接触时， 会对含有葡萄糖氧化酶的膜或其使用环境产生有害影响的生 物污染物或病原体。生物污染物或病原体包括各种细菌、 真菌和病毒等。 0020 本发明中提及的 “活性生物污染物或病原体” 是指能单独或与其他因素一起对含 有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或其使用环境产生有害影响。
12、的生物污染物或病原体， 其他因素的 示例如第二生物污染物或病原体、 天然蛋白质 （野生或变异） 或抗体。 0021 在一些实施例中， 其使用环境可为生物传感器运行和细胞生长的生物反应器。如 果生物传感器未被杀菌， 存在于生物传感器和 / 或含有葡萄糖氧化酶的膜中的 “生物污染 物或病原体” 可能污染生物反应器中培养的细胞并造成细胞培养的失败。 0022 含有葡萄糖氧化酶的膜可能是任何含有葡萄糖氧化酶的膜。在一些实施例中， 含有葡萄糖氧化酶的膜是任意一种含有葡萄糖氧化酶并可被用于， 例如， 测试葡萄糖 的水平的生物传感器的膜， 这些膜可通过商业渠道从美国马萨诸塞州 Waltham 的 NOVA 。
13、Biomedical公司、 美国俄亥俄州Yellow Springs的YSI Incorporated and Xylem,Inc.公 司、 中国山东科学院生物研究所等购得。 0023 在一些实施例中， 用于检测葡萄糖水平的生物传感器包含复合电极以及含有葡萄 糖氧化酶的膜。其中复合电极包含两个电极， 以及介于两电极之间的绝缘体。电极可由例 如铂和 / 或银 / 氯化银制成。可在杀菌之前或之后将含有葡萄糖氧化酶的膜安装于生物传 感器中。 若在杀菌之前将含有葡萄糖氧化酶的膜安装于生物传感器中， 在一些实施例中， 可 说 明 书 CN 103446601 A 4 3/5 页 5 于安装后在含有葡萄糖。
14、氧化酶的膜处于相对湿度低于环境相对湿度的真空中情况下用伽 马射线照射来对生物传感器进行杀菌。 0024 伽马射线可由钴或铯的同位素产生。施加伽马射线的有效比率可以为 ： 既能有效 为含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器杀菌， 又能将其对含有葡萄糖氧化酶的膜的损 害控制在可接受范围内。合适的伽马射线比率可根据特性作相应调整， 例如特定的含有葡 萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器， 和 / 或要被杀灭的特定的生物污染物或病原体的属性 和特征。在杀菌过程中， 保持伽马射线的比率稳定更为适宜。若无法达到此要求或并无需 要， 可以使用可变的或间断的射线。 0025 在一些实施例中， 可根据如使用的生。
15、物物质而优化伽马射线的施加比率。低 ( 3kGy/ 小时 ) 和高 (3kGy/ 小时 ) 都能达到效果。降低伽马射线的比率能减少对含有 葡萄糖氧化酶的膜的损害， 但是它也导致需要更长的放射时间以获取所需的特定总剂量。 在一定环境中可能更需要较高的剂量比率， 例如用以最小化物流问题和成本， 以及在可能 情况下， 依据本发明所述， 用来保护含有葡萄糖氧化酶的膜避免受到放射的损害。 根据本发 明的一实施例， 伽马射线的放射比率为 20kGy/ 小时。 0026 在一些实施例中， 对含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器进行的伽马射线放 射应保持一段有效时间以达到杀菌目的。与放射比率相应， 合适的。
16、放射时间由用于含有葡 萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器上的合适的放射剂量决定。合适的放射时间可依据特定 的放射比率和 / 或含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传感器的属性和特质来作相应调整。 0027 在一些实施例中， 伽马射线放射的有效总剂量为 ： 既能有效为含有葡萄糖氧化酶 的膜和 / 或生物传感器杀菌， 又能将其对含有葡萄糖氧化酶的膜的损害控制在可接受范围 内。合适的伽马射线的总剂量可根据一定特性作相应调整， 例如特定的含有葡萄糖氧化酶 的膜和/或生物传感器的属性和特征， 所用伽马射线的特定形式， 和/或要被杀灭的特定的 生物污染物或病原体。在一些实施例中， 伽马射线的总剂量为至少约 。
17、25kGy， 在另一些实施 例中， 则在约 25kGy 到约 40kGy 的范围内。 0028 在一些实施例中， 伽马射线照射可以在任何不对含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生 物传感器产生不利影响的温度进行， 或者在任何不对含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生物传 感器产生实质性损害的温度进行。 0029 在一些实施例中， 伽马射线的照射是在常温进行的。 在一些实施例中， 照射是在低 温环境进行， 例如低于常温的 0 ,-20 ,-40 ,-60 ,-78或者 -196。在一些实施 例中， 照射在高温环境进行， 例如高于常温的 37 ,60 ,72或者 80。 0030 在一些实施例中， 照射在一个。
18、温度范围内进行， 而不是在一个特定的温度值进行。 0031 在一些实施例中， 伽马射线照射可以在任何不对含有葡萄糖氧化酶的膜和 / 或生 物传感器产生不利影响的气压中进行。在一些实施例中， 照射在常压进行。 0032 可通过多种途径实现真空。在一些实施例中， 可将含有葡萄糖氧化酶的膜或装有 含有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器置于包装中， 然后将包装抽真空。 0033 本发明中， 相对湿度是指空气与水汽混合物中水汽的量， 即， 特定温度空气和水汽 混合物中的水汽的实际压力与水汽饱和时的压力之比。在一些实施例中， 相对湿度用温湿 计测得。 0034 在一些实施例中， 含有葡萄糖氧化酶的膜或装有含有葡。
19、萄糖氧化酶的膜的生物传 说 明 书 CN 103446601 A 5 4/5 页 6 感器与干燥剂均置于真空包装中， 以实现含有葡萄糖氧化酶的膜处于相对湿度低于、 或约 为环境相对湿度一半的真空中。 干燥剂中可含有硅胶、 活性炭、 硫酸钙、 氯化钙、 蒙脱粘土和 分子筛等。 从以下示例中， 可以惊奇地发现， 伽马射线照射时含有葡萄糖氧化酶的膜处在相 对湿度低于环境相对湿度的真空的， 装有其的生物传感器的灵敏度明显高于装有伽马射线 照射时处于相对湿度等于环境相对湿度的真空的含有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器的 灵敏度。 0035 实验示例 0036 以下实验例子可以为本领域中具有一般技能的人实施该。
20、发明提供参考。但是， 这 些例子并不用于限制权利要求的范围。 0037 干燥密封于铝箔袋中的含有葡萄糖氧化酶的膜由美国马萨诸塞州 Waltham 的 NOVA Biomedical公司获得并且在使用前于4C温度保存。 在以下示例中， 除非另有说明， 都在常温常压下使用钴 60 放射源， 伽马射线的用量为大约 25kGy 到大约 40kGy。 0038 例 1 0039 用伽马射线照射 4 个铝箔袋中的含有葡萄糖氧化酶的膜以杀菌。其中两个含有葡 萄糖氧化酶的膜的放射剂量比率为 6kGy 每小时， 另外两个为 20kGy 每小时。 0040 每一照射后的含有葡萄糖氧化酶的膜与一个复合电极相组合后获。
21、得一个生物传 感器。其中复合电极由铂工作电极、 银 / 氯化银参考或反电极， 以及介于铂电极和银 / 氯化 银电极之间的绝缘体组成。 0041 将每一生物传感器浸入含有葡萄糖的磷酸盐缓冲溶液中， 然后通过电缆与电化学 工作站相连接。电化学工作站施加于生物传感器的电压为 0.6V。 0042 逐渐增加磷酸盐缓冲液中的葡萄糖浓度， 同时用电化学工作站读出每一浓度相应 的电流。以葡萄糖浓度为横轴， 相应电流为纵轴建立二维图表。图表中电流与葡萄糖浓度 线的斜率用以表示生物传感器的灵敏度。 0043 用上述所得灵敏度分别除以安装有未经伽马射线照射的含有葡萄糖氧化酶的膜 的生物传感器的灵敏度， 得到如图 。
22、1 所示的归一化灵敏度。从图 1 可见， 含有葡萄糖氧化酶 的膜经 6kGy 每小时伽马射线照射后， 与未经伽马射线照射的情形相比较， 还剩下大约 50% 的灵敏度， 但是经 20kGy 每小时伽马射线照射后， 与未经伽马射线照射的情形相比较， 仅剩 不到 20% 的灵敏度。 0044 例 2 0045 将两份含有葡萄糖氧化酶的膜的每一份分别与三包硅胶干燥剂共同放置于一个 塑料包中， 以将塑料包中的相对湿度降低至大约26%， 而环境相对湿度为大约45%至60%。 将 另外两份含有葡萄糖氧化酶的膜分别放入相对湿度为大约 45% 到大约 60% 的塑料包中。用 真空器抽取四个塑料包中的空气大约1分。
23、钟， 热密封， 然后用伽马射线以20kGy每小时的剂 量比率进行照射。 0046 如上述例 1 中所述方法获得装有照射后的上述四份膜的生物传感器的灵敏度， 并 且除以安装有未经伽马射线照射的含有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器的灵敏度， 得到图 2 中所示归一化灵敏度。 0047 从图 2 可以看出， 装有处于相对湿度为约 26% 的真空中时经过伽马射线放射的含 有葡萄糖氧化酶的膜的生物传感器， 与未经伽马射线照射的情形相比， 还剩下大约 85% 的 说 明 书 CN 103446601 A 6 5/5 页 7 灵敏度， 但是装有处于相对湿度等于环境相对湿度的真空中时伽马射线放射的含有葡萄糖 氧化酶的膜的生物传感器， 与未经伽马射线放射的情形相比， 仅剩不到 60% 的灵敏度。 0048 虽然结合特定的实施例对本发明进行了说明， 但本发明不局限于这些具体情况， 本领域的技术人员可以对本发明作出许多修改和变型。 同时， 要认识到， 权利要求书意图覆 盖在本发明真正构思范围内的所有这些修改和变型。 说 明 书 CN 103446601 A 7 1/2 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 103446601 A 8 2/2 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 103446601 A 9 。