一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法 【技术领域】
本发明涉及到培养基领域， 是一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法。 背景技术
蓝莓 (Blueberry)， 属杜鹃花科 (Ericaceae) 越橘属 (Vaccinium spp)， 越橘属植 物约有 400 多个品种， 原产和主产于美国又被称为美国蓝莓， 意为蓝色的浆果之意。蓝莓 是一种小浆果， 果实呈蓝色， 色泽美丽、 悦目、 果肉细腻， 种子极小。蓝莓果实平均重 0.5 ～ 2.5g， 最大重 5g， 可食率为 100％， 甜酸适口， 且具有香爽宜人的香气， 为鲜食佳品。蓝莓果 实中含有丰富的营养成分， 它不仅具有良好的营养保健作用， 还具有防止脑神经老化、 强 心、 抗癌软化血管、 增强人的机体免疫等功能， 誉称为当今世界上最具有发展前途的黄金水 果。
有关资料分析全世界年需 80 万吨， 但是每年只能产 40 万吨， 预计二十年内难以实 现产销平衡， 市场需求大， 但蓝莓为什么又发展慢， 主要原因是受苗木紧缺瓶颈的制约， 由 于价格贵， 鲜果都用于市场， 扦插成活率低， 便又由于培养基配制技术的制约导致苗木繁殖 技术长期处于难以推广状态。
常用的培养基特点 ：
1、 MS 培养基。它是 1962 年由 Murashige 和 Skoog 为培养烟草细胞而设计的。特 点是无机盐和离子浓度较高， PH 值高， 为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适， 可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高， 广泛地用于植物的器 官、 花药、 细胞和原生质体培养， 效果良好， 有些培养基是由它演变而来的。
2、 B5 培养基。是 1968 年由 Gamborg 等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点 是含有较低的铵， 这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在 B5 培养 基上生长更适宜， 如双子叶植物特别是木本植物。
3、 White 培养基。是 1943 年由 White 为培养番茄根尖而设计的。1963 年又作了 改良， 称作 White 改良培养基， 提高了 MgSO4 的浓度和增加了鹏素。其特点是无机盐数量较 低， 适于生根培养。
4、 N6 培养基。是 1974 年朱至清等为水稻等禾谷类作物培养而设计的。其特点是 成分较简单， KNO3 和 (NH4)2SO4 含量高。在国内已广泛应用于小麦、 水稻及其他植物的花 药培养和其他组织培养。
5、 KM-80 培养基。它是 1974 年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较 复杂， 它包括了所有的单糖和维生素， 广泛用于原生质融合的培养。
培养基有许多种类， 根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的需选用不同的 培养基。但是上述各类培养基不适应蓝莓的组织培养。 发明内容本发明的目的是要提供一种蓝莓组织培养培养基的制备方法。 本发明的技术方案是 ： (1) 基本培养基的配方和称量 ：
(2) 培养基的配制方法和步骤 ： a、 先在空烧瓶中加入所要配制总量的 50％左右的水 ； b、 称量 ； 按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。若是合成培养基， 各成份要逐一溶解 ； 称不溶性固形物时， 应单独称， 若量少的可以与无机盐一起称， 但一定要混匀再分 c、 溶化 ：5装；
CN 102461462 A
说明书3/5 页玻棒搅拌， 加热溶解， 最后定容 ；
定容 ： 可先加少量水溶解， 倒入量筒， 再补水到刻度 ；
d、 调 pH 值 ： 用 1N NaOH 或 1N HCl 调 pH， 用 pH 试纸对照 ；
e、 加琼脂粉 ： 分装过程中要不断搅拌， 以使每管的琼脂粉都能均匀 ；
f、 分装 ： 试管总长的 1/4， 三角瓶的 1/2( 装量指固体培养基 ) ；
g、 包扎封口 ： 试管和三角烧瓶分别塞上棉塞并包上牛皮纸， 包扎成捆， 注明何种培 养基、 时间 ；
h、 灭菌备用 ；
培养基灭菌后必须在 35-37℃下恒温培养 24h， 确定无菌生长， 方可使用。
由于采用了上述技术方案， 所制出的培养基适应蓝莓的组织培养。 具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
(1) 基本培养基的配方和称量 ：
(2) 培养基的配制方法和步骤 ： a、 先在空烧瓶中加入所要配制总量的 50％左右的水 ； b、 称量 ； 按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。若是合成培养基， 各成份要逐一溶解 ； 称不溶性固形物时， 应单独称， 若量少的可以与无机盐一起称， 但一定要混匀再分 c、 溶化 ： 玻棒搅拌， 加热溶解， 最后定容 ； 定容 ： 可先加少量水溶解， 倒入量筒， 再补水到刻度 ； d、 调 pH 值 ： 用 1N NaOH 或 1N HCl 调 pH， 用 pH 试纸对照 ； e、 加琼脂粉 ： 分装过程中要不断搅拌， 以使每管的琼脂粉都能均匀 ； f、 分装 ： 试管总长的 1/4， 三角瓶的 1/2( 装量指固体培养基 ) ； g、 包扎封口 ： 试管和三角烧瓶分别塞上棉塞并包上牛皮纸， 包扎成捆， 注明何种培7装；
CN 102461462 A说明书5/5 页养基、 时间 ；
h、 灭菌备用 ；
培养基灭菌后必须在 35-37℃下恒温培养 24h， 确定无菌生长， 方可使用。
高压蒸汽灭菌步骤 ：
首先将内层灭菌桶取出， 再向外层锅内加入适量的水。 放回灭菌桶， 并装入待灭菌 物品。 加盖， 以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。 水沸腾以排除锅内的冷空气。 待 冷空气完全排尽后， 关上排气阀。当锅内压力升到所需压力时， 控制热源， 维持压力至所需 时间。当压力表的压力降至 0 时， 打开排气阀， 旋松螺栓， 打开盖子， 将取出的灭菌培养基放 入 37℃温箱培养 24 小时， 经检查若无杂菌生长， 即可待用。
(3)、 培养基的酸碱度的调剂 ：
在培养基的配制过程中， 常需要用氢氧化钾或氢氧化钠和盐酸来来调整培养基的 酸碱度。
a、 摩尔 / 升 KOH 液的配制 ： 称取 57.1 克 KOH， 加蒸馏水至 1000 毫升。
b、 摩尔 / 升 KOH 液的配制 ： 取 10 毫升 1 摩尔 / 升 KOH 液加蒸馏水 90 毫升。
c、 摩尔 / 升 NaOH 液的配制 ： 称取 40 克 NaOH， 加蒸馏水至 1000 毫升。 d、 摩尔 / 升 NaOH 液的配制 ： 取 10 毫升 1 摩尔 / 升 NaOH 液加蒸馏水 90 毫升。
e、 摩尔 / 升 HCL 液的配制 ： 取浓盐酸 ( 比重 1.19)82.5 毫升加蒸馏水至 1000 毫 升。配制时先将浓盐酸缓缓加入约 800 毫升的蒸馏水中， 然后用蒸馏水补足至 1000 毫升。
f、 摩尔 / 升 HCL 液的配制 ： 取 10 毫升 1 摩尔 / 升 HCL 液加蒸馏水 90 毫升。
g、 酒精是组培工作中常用的消毒液， 广泛用于外植体材料、 接种用具及接种人员 双手的消毒， 也用于培养室的酒精喷雾消毒等。
(4)、 常见培养基中植物激素配方类型激素配方、 再生方式及用途。
a、 无植物激素 ： 诱导生根、 无性胚、 愈伤组织形成。
b、 单加生长素 ： 诱导生根、 愈伤组织、 无性胚、 不定胚芽。
c、 单加细胞分裂素 ： 诱导不定芽、 侧芽增殖、 愈伤组织形成。
d、 高生长素低细胞分裂素 ： 诱导芽、 原球茎增殖、 愈伤组织形成。
e、 低生长素高细胞分裂素 ： 诱导丛芽、 愈伤组织形成。
f、 低生长素低细胞分裂素 ： 诱导不定芽、 侧芽增殖。
g、 等量生长素与细胞分裂素 ： 诱导侧芽增殖。
h、 加生长抑制剂 ( 多效唑、 矮壮素等 ) ： 壮苗、 延缓生长、 利于试管苗保存。
i、 加 GA3 ： 打破种子、 芽休眠， 促进伸长生长。
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