一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法.pdf

1、10申请公布号CN102461462A43申请公布日20120523CN102461462ACN102461462A21申请号201010540750X22申请日20101104A01H4/0020060171申请人湖北正佳微生物工程股份有限公司地址441300湖北省随州市曾都经济开发区新型工业基地湖北正佳微生物工程股份有限公司72发明人秦万芳魏端红秦万贵董高发钦捷54发明名称一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法57摘要本发明涉及到培养基领域，是一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法。先在空烧瓶中加入所要配制总量的50左右的水，按照配方正确称取各种原料放于烧杯中，用玻棒搅拌，加热

2、溶解，最后定容定容；在分装过程中要不断搅拌，以使每管的琼脂粉都能均匀；分装后在试管和三角烧瓶上分别塞上棉塞并包上牛皮纸，包扎成捆，注明时间；灭菌备用，培养基灭菌后必须在3537下恒温培养24H，确定无菌生长，方可使用。由于采用了本技术方案，所制出的培养基适应蓝莓的组织培养。51INTCL权利要求书2页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书5页1/2页21一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法，其特征是1基本培养基的配方和称量2培养基的配制方法和步骤A、先在空烧瓶中加入所要配制总量的50左右的水；B、称量；按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。若是合成

3、培养基，各成份要逐一溶解；称不溶性固形物时，应单独称，若量少的可以与无机盐一起称，但一定要混匀再分装；C、溶化玻棒搅拌，加热溶解，最后定容；定容可先加少量水溶解，倒入量筒，再补水到刻度；D、调PH值用1NNAOH或1NHCL调PH，用PH试纸对照；E、加琼脂粉分装过程中要不断搅拌，以使每管的琼脂粉都能均匀；权利要求书CN102461462A2/2页3F、分装试管总长的1/4，三角瓶的1/2装量指固体培养基；G、包扎封口试管和三角烧瓶分别塞上棉塞并包上牛皮纸，包扎成捆，注明何种培养基、时间；H、灭菌备用；培养基灭菌后必须在3537下恒温培养24H，确定无菌生长，方可使用。权利要求书CN10246

4、1462A1/5页4一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法技术领域0001本发明涉及到培养基领域，是一种适合蓝莓快速育苗组织培养的培养基制备方法。背景技术0002蓝莓BLUEBERRY，属杜鹃花科ERICACEAE越橘属VACCINIUMSPP，越橘属植物约有400多个品种，原产和主产于美国又被称为美国蓝莓，意为蓝色的浆果之意。蓝莓是一种小浆果，果实呈蓝色，色泽美丽、悦目、果肉细腻，种子极小。蓝莓果实平均重0525G，最大重5G，可食率为100，甜酸适口，且具有香爽宜人的香气，为鲜食佳品。蓝莓果实中含有丰富的营养成分，它不仅具有良好的营养保健作用，还具有防止脑神经老化、强心、抗癌软化血管

5、、增强人的机体免疫等功能，誉称为当今世界上最具有发展前途的黄金水果。0003有关资料分析全世界年需80万吨，但是每年只能产40万吨，预计二十年内难以实现产销平衡，市场需求大，但蓝莓为什么又发展慢，主要原因是受苗木紧缺瓶颈的制约，由于价格贵，鲜果都用于市场，扦插成活率低，便又由于培养基配制技术的制约导致苗木繁殖技术长期处于难以推广状态。0004常用的培养基特点00051、MS培养基。它是1962年由MURASHIGE和SKOOG为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，PH值高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广

6、泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好，有些培养基是由它演变而来的。00062、B5培养基。是1968年由GAMBORG等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。00073、WHITE培养基。是1943年由WHITE为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作WHITE改良培养基，提高了MGSO4的浓度和增加了鹏素。其特点是无机盐数量较低，适于生根培养。00084、N6培养基。是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物培养而设计的。其特点是成分较简单，KNO

7、3和NH42SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。00095、KM80培养基。它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。0010培养基有许多种类，根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的需选用不同的培养基。但是上述各类培养基不适应蓝莓的组织培养。发明内容说明书CN102461462A2/5页50011本发明的目的是要提供一种蓝莓组织培养培养基的制备方法。0012本发明的技术方案是00131基本培养基的配方和称量0014001500162培养基的配制方法和步骤0017A、先在空烧瓶中

8、加入所要配制总量的50左右的水；0018B、称量；0019按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。若是合成培养基，各成份要逐一溶解；0020称不溶性固形物时，应单独称，若量少的可以与无机盐一起称，但一定要混匀再分装；0021C、溶化说明书CN102461462A3/5页60022玻棒搅拌，加热溶解，最后定容；0023定容可先加少量水溶解，倒入量筒，再补水到刻度；0024D、调PH值用1NNAOH或1NHCL调PH，用PH试纸对照；0025E、加琼脂粉分装过程中要不断搅拌，以使每管的琼脂粉都能均匀；0026F、分装试管总长的1/4，三角瓶的1/2装量指固体培养基；0027G、包扎封口试管和三角烧瓶分

9、别塞上棉塞并包上牛皮纸，包扎成捆，注明何种培养基、时间；0028H、灭菌备用；0029培养基灭菌后必须在3537下恒温培养24H，确定无菌生长，方可使用。0030由于采用了上述技术方案，所制出的培养基适应蓝莓的组织培养。具体实施方式0031下面结合实施例对本发明作进一步的说明。00321基本培养基的配方和称量0033说明书CN102461462A4/5页700342培养基的配制方法和步骤0035A、先在空烧瓶中加入所要配制总量的50左右的水；0036B、称量；0037按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。若是合成培养基，各成份要逐一溶解；0038称不溶性固形物时，应单独称，若量少的可以与无机盐一

10、起称，但一定要混匀再分装；0039C、溶化0040玻棒搅拌，加热溶解，最后定容；0041定容可先加少量水溶解，倒入量筒，再补水到刻度；0042D、调PH值用1NNAOH或1NHCL调PH，用PH试纸对照；0043E、加琼脂粉分装过程中要不断搅拌，以使每管的琼脂粉都能均匀；0044F、分装试管总长的1/4，三角瓶的1/2装量指固体培养基；0045G、包扎封口试管和三角烧瓶分别塞上棉塞并包上牛皮纸，包扎成捆，注明何种培说明书CN102461462A5/5页8养基、时间；0046H、灭菌备用；0047培养基灭菌后必须在3537下恒温培养24H，确定无菌生长，方可使用。0048高压蒸汽灭菌步骤0049

11、首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水。放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。加盖，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓。水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，将取出的灭菌培养基放入37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。00503、培养基的酸碱度的调剂0051在培养基的配制过程中，常需要用氢氧化钾或氢氧化钠和盐酸来来调整培养基的酸碱度。0052A、摩尔/升KOH液的配制称取571克KOH，加蒸馏水至1000毫升。0053B、摩尔/升KOH液的配制取

12、10毫升1摩尔/升KOH液加蒸馏水90毫升。0054C、摩尔/升NAOH液的配制称取40克NAOH，加蒸馏水至1000毫升。0055D、摩尔/升NAOH液的配制取10毫升1摩尔/升NAOH液加蒸馏水90毫升。0056E、摩尔/升HCL液的配制取浓盐酸比重119825毫升加蒸馏水至1000毫升。配制时先将浓盐酸缓缓加入约800毫升的蒸馏水中，然后用蒸馏水补足至1000毫升。0057F、摩尔/升HCL液的配制取10毫升1摩尔/升HCL液加蒸馏水90毫升。0058G、酒精是组培工作中常用的消毒液，广泛用于外植体材料、接种用具及接种人员双手的消毒，也用于培养室的酒精喷雾消毒等。00594、常见培养基中植物激素配方类型激素配方、再生方式及用途。0060A、无植物激素诱导生根、无性胚、愈伤组织形成。0061B、单加生长素诱导生根、愈伤组织、无性胚、不定胚芽。0062C、单加细胞分裂素诱导不定芽、侧芽增殖、愈伤组织形成。0063D、高生长素低细胞分裂素诱导芽、原球茎增殖、愈伤组织形成。0064E、低生长素高细胞分裂素诱导丛芽、愈伤组织形成。0065F、低生长素低细胞分裂素诱导不定芽、侧芽增殖。0066G、等量生长素与细胞分裂素诱导侧芽增殖。0067H、加生长抑制剂多效唑、矮壮素等壮苗、延缓生长、利于试管苗保存。0068I、加GA3打破种子、芽休眠，促进伸长生长。说明书CN102461462A