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伤口愈合是一个复杂的生理过程，也一直是医学界关注的最重要问题之一，具有伤口治疗和伤口修复的创可贴一直是医学研究的重要课题，创可贴是由一条长形的胶布，中间附以一小块浸过药物的纱条构成。由于它的结构限制，创可贴只能用于小块创伤应急治疗，从而起到暂时止血和保护创面作用。
创可贴具有简单、方便的特点，用于急性小伤口的止血，尤其适用于切口整齐、清洁、表浅和较小的这些不需要缝合的切割伤。但是对于较深伤口，有大血管、神经、肌腱损伤以及疑有异物的伤口，普通的创可贴就难以发挥作用；至于疖肿、烫伤、化脓感染和各种皮肤疾病，就更不能使用创可贴来治疗。
针对创可贴的不足，目前市场上出现了很多不同功能的创可贴，如具有透气、防水、杀菌和呵护皮肤等功能的创可贴，而且还有很多种专利公开和保护的特殊功能的创可贴。
美国专利USP6355858发明了一种伤口包覆材料，含有非凝胶型多糖甘露聚糖，促成纤细胞生长因子，神经细胞生长因子，表皮生长因子等生物活性成分及抗炎成分，这种材料能促进伤口愈合，减少疤痕的形成。
同样在中国也有很多功能各异的创可贴报道并申请专利。中国专利201310080630.X阐述了一种粘贴在伤口和虫叮等患部皮肤面上进行患部的治疗和消毒急用创可贴，可以防止因紫外线透过引起的皮肤色素沉着，也可以抑制紫外线对药液和药膏的不良影响，该创可贴包括在创可贴中间部位的粘贴垫构件，并具有贴在胶片上的剥离纸，垫构件是由纱布、无纺布构成的垫。中国专利2000510042575.0公开了一种含有透明质酸生物组合物的创可贴，在现有创可贴基础上，利用透明质酸、海藻糖，尿囊素的生物学功能按照一定比例混合的组合物，通过侵泡、涂布或者喷洒工艺附着于创可贴的衬垫层和作为隔离层的无纺纱布上，使包扎、隔离、保护和治疗一次完成。
中国专利CN1198921A介绍了一种清创创可贴，包括基带、基带中部的药块、基带两端的不干胶层以及基带外的包装袋和包装盒，即可防止细菌感染，提高创可贴的疗效。中国专利201210426698.4涉及一种水凝胶创可贴，包括粘着层、布料层，所述粘着层粘滞于布料层表面，在所述防护膜的上表面粘贴有多个胶布条。中国专利201310265838.9提供一种创可贴，以至少部分脱水的生物纤维素水凝胶作为吸水垫。中国专利CN1136904C涉及了一种治疗皮肤创伤的贴剂，是云南白药的新剂型，包括药物、胶带和药芯，其特征采用了云南白药组分，对皮肤小的创伤的治愈率高。中国专利201110365918.2具有高吸水率的复合型创可贴，涉及一种具有高吸水率的复合型创可贴，包括PU膜层，护创层和防粘隔离纸，所述护创层由吸水层、蜂蜜干粉层、吸水层和隔离膜依次复合组成；具有强吸附、杀菌、促愈等功能。
日本琳得科株式会社在中国申请的201080012486.0阐述了创可贴用包装材料以及创可贴，提供一种创可贴用包装材料，用于收纳具有表面基材、设置于该表面基材的一面的粘接层、以及以覆盖粘接层的方式进行粘贴的剥离片材的创可贴。
这些关于创可贴的专利分别在材料、药物、新的结构起到了止血，杀菌，保护创口的作用，本发明所不同的是将用于止血的海绵、凝血酶和创可贴有机的结合起来，利用明胶海绵高的吸水率和凝血酶共同作用，因而快速止血，具体方法是将一种较大规格的贴剂，包括有基材和明胶海绵、胶原海绵和壳聚糖海绵等高分子材料可降解海绵，这些海绵中包含了固定在其中的凝血酶。这样可以对突发型大型伤口，或者深入型的伤口，进行快速止血和迅速处理。发挥了创可贴压迫止血，海绵的吸收止血和凝血酶对血浆蛋白结合凝集的三重功能，迅速止住大型伤口的血流，避免因突发的状况引起大量失血，为后期的抢救和治疗赢得机会和时间。
在本发明中，有效地解决了二个技术难题，一是利用可吸收的海绵来吸收血液，海绵中的凝血酶的释放发挥凝血作用。二是利用明胶、壳聚糖等生物可降解材料和凝血酶交联起来，大幅提高了凝血酶的稳定性、保证了迅速止血效果。
发明内容
凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，也是血液凝血级联反应中的主要效应蛋白酶，显现出促凝和抗凝的特性。当循环凝血因子在暴露的血管外组织与组织因子相接触时，凝血酶会在组织上聚集。凝血酶通过激活血小板，催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白，促进血块稳定而在血栓性疾病的引发和传播上有着核心作用。但凝血酶的稳定性差，一般应用其临床止血时都是现配现用，或者和其他药物和器械配合使用。
本发明应用于突发性大型、深型伤口的快速止血贴剂，包含了四个部分，基材层，衬垫层，粘胶层和海绵层，其中海绵层交联了快速止血的凝血酶。
组成本发明的基材包括成分包括聚乙烯醇、弹力布、PE、PU等材料，基材作为本发明速凝型创可贴的支持材料，具有保护、防护和粘附其它材料的作用，同时也具有保护伤口的作用，具有一定的强度，并具有透气，保湿等作用。从基材的选择而言，弹力布型创可贴是中国市场的主导产品。
本发明粘胶层所采用的粘结胶为热熔胶、丙烯酸胶，氧化锌和透明胶，这些胶根据不同性质可以按照一定的比例和种类调配。
基材和交联了凝血酶的生物可降解海绵可以是交接，粘结和连接的。
作为构成粘接层的材料，并没有特别地限定，可以列举出例如：丙烯类粘接剂、有机硅类粘接剂、聚氨酯类粘接剂、以及天然橡胶等。
粘胶层的选用应与基材联系起来考虑，一般而言，应考虑如下几个因素：初粘、持粘、剥离强度和重复使用性；胶液对皮肤的刺激性及过敏程度。目前普遍用于弹力布创可贴上的溶剂性氧化锌胶浆被认为是过敏率较高的胶种。目前被广泛用于各种基材上的热熔胶，它不仅使生产得到环保和高效率，也使产品得到透气性，较好的初粘的重复。丙烯酸胶被认为是过敏性较低的胶种，这种胶在柔软度较好的基材上体现出了优异的性能：如无纺布、弹力布等。
衬垫层为各种海绵进行保护等功能的层。作为衬垫层能够使用织布或无纺织布等、或者含有水或油状成分的高分子凝胶等。此外，作为织布或无纺织布的构成材料，可以列举出例如：人造纤维、聚乙烯、聚丙烯、聚烯烃、褐藻酸盐等，能够将其中的一种或者两种以上组合而使用。聚乙烯无纺织布、聚烯烃薄膜、聚酯薄膜等。
制备含有凝血酶的海绵材料可以是明胶、聚乙烯醇，壳聚糖和胶原蛋白等高分子材料物质，这些物质都具有在一定的条件和组合下形成海绵的特性，根据分子量、来源、聚合度的不同制备的工艺略有不同。
凝血酶是在交联剂加入之后加入，其用量越大，凝血速度越快，加入的凝血酶在交联剂的作用下固定到生物可降解海绵的内部和表面上，这种交联作用大幅提高了凝血酶的稳定性，凝血酶交联到各种明胶海绵、聚乙烯醇海绵和壳聚糖海绵中，这些海绵能够吸收本身重量几十倍的血液，并且能释放固定其中的凝血酶，激活血液中的纤维蛋白原，这些纤维蛋白原不仅能够互相粘结凝血，并能够依附于海绵的纤维上使血流迅速凝固，这样几重凝血过程组合使得凝血速度更快。
壳聚糖由于其特殊的结构制成的交联凝血酶的海绵还具有抑菌的功能。
这些可降解海绵是通过这样的方式制备的：取海绵材料壳聚糖、聚乙烯醇或明胶适量，加入适量的水，在一定温度下加热搅拌使壳聚糖、聚乙烯醇或明胶全部溶解成一种胶液。加入凝血酶和交联剂在一定的温度水浴中保温一定时间进行交联。保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥，将水分去除。将制备出交联了凝血酶的生物可降解海绵，这些海绵可切割成合适大小或形状的块状物。
将制备的交联凝血酶的海绵采用各种不同的粘结剂，粘结到基材上，其厚度和大小根据需要进行调整。也以将海绵直接贴到贴剂的基材上，这样对治疗和保护的效果稍差，可降解海绵的数量根据需要可以贴一块，也可以在海绵的再重复贴一块。
在制备交联凝血酶海绵过程中胶液粘度对形成海绵的质量非常重要，胶原蛋白、壳聚糖、聚乙烯醇或明胶和水的重量比控制在1∶3-1∶30之间，优选的比例是在1∶8∶1∶15(重量体积比，g/ml)之间，更优选的重量比例是在1∶10-1∶15(重量体积比，g/ml)之间。
胶液的温度在本发明中对于不同海绵材料，所需要的温度不需要明显的控制，一般来说明胶和壳聚糖在60℃左右，聚乙烯醇根据分子的不同变化较大。
凝血酶的加入可以是在整个过程中的各个步骤，对于对热不稳定的凝血酶，温度越低越有利于其稳定，所以本发明的酶凝血酶采用的是加入交联剂冷却后再加入，待胶液冷却到30-40℃时加入。
在本发明中采用的交联剂为甲醛或戊二醛溶液或其任意比例的混合液，胶液的体积比为1∶2-1∶30，优选的体积比例为1∶10-1∶15。甲醛和戊二醇的配制主要和全部是水，适当加入适量的有机溶剂如乙醇、甲醇等有可能起到更好的效果。
交联温度在本发明中尤为重要，在本发明中，既要使海绵材料交联，又要使蛋白酶和海绵材料交联，温度控制在15-45℃是适当的，温度越低，交联的过程会越慢，通常交联的时间控制在1h左右为宜，在本法发明中更优选的温度是25-40℃，再优选的温度为32-38℃。
交联的时间和温度与交联剂的浓度、种类有关，当交联剂的浓度低时，可适当延长交联的时间。
将交联后的胶液用搅拌器剧烈搅拌，含凝血酶的胶液就会形成泡沫，将泡沫装入适量的容器内，放入到冷冻干燥机或冰箱中冷冻。后采用冻干或低温烘干或晾干的方式去除水分后，交联有凝血酶的生物可降解海绵就制备成型。
根据需要可以将含凝血酶的海绵切割成不同大小，厚度，形状的块状物，将海绵粘结在基材上就可以使用。
也可根据需要将交联了凝血酶的生物可降级海绵粉碎成不同大小的颗粒或块状物，对于非常深或者宽的伤口，直接将这种粉末倒入伤口内，再进行包扎、压迫处理，具有更好的止血效果，由于这些材料都是生物相容性的材料，在体内能够为蛋白酶或者其他酶水解可以被组织逐渐吸收。
凝血实验考察试管法凝血考察分别将2ml静脉血注入备好的5组(分别为对照组，明胶海绵组，胶原蛋白海绵组，凝血酶明胶海绵组和凝血酶胶原蛋白海绵组)20支试管中，立即放入37℃恒温水浴箱内，观察，1min后将动管轻轻倾斜45度，观察血液是否凝固。而后每隔15s观察1次，直至试管内血液不流动为止，所需要的时间即为凝血时间。比较凝血时间。交联凝血酶明胶海绵和交联凝血酶胶原蛋白海绵为实施例1和2制备的海绵。结果可以看出，交联凝血酶的明胶海绵止血时间为对照组的1/4。交联凝血酶明胶海绵的止血时间要快于交联凝血酶胶原蛋白海绵。
表1.明胶海绵的凝血比较实验
种类 对照 明胶海绵 交联凝血酶明胶海绵 时间(分钟) 8.19±0.11 4.43±0.37 2.31±0.27
表2.胶原蛋白海绵的凝血比较实验
种类 对照 胶原蛋白海绵 交联凝血酶海绵 时间(分钟) 8.19±0.11 4.73±0.31 2.69±0.21
附图说明：
图1是快速止血贴剂的结构图。
具体实施方式
实施例1
称取明胶20g，加入水200ml，在60℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶1000单位和11％甲醛稀释液10ml，在35℃水浴中保温约1h(但不超过1h)。保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。
实施例2
称取明胶20g，加入水200ml，在60℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶10000单位和6％戊二醛稀释液5ml，在35℃水浴中保温约2h。保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。
实施例3
称取胶原蛋白20g，加入水300ml，在60℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶10000单位和11％甲醛稀释液10ml，在35℃水浴中保温约1h(但不超过1h)。保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。
实施例4
称取壳聚糖20g，加入水250ml，在65℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶5000单位和6％甲醛稀释液10ml，在35℃水浴中保温约2h。保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。
实施例5
称取胶原蛋白10g，加入水100ml，在60℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶1000单位和11％戊二醛稀释液5ml，在35℃水浴中保温约0.5小时保温结束后，边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。
实施例6
称取明胶20g，加入水150ml，在70℃水浴中加热搅拌使明胶全部溶解。加入凝血酶1000单位和3％甲醛稀释液10ml，在37℃水浴中保温约1.5h，保温结束后。边向溶液中鼓入少量空气边用搅拌器快速搅拌。待全部溶液生成泡沫后，倒入模具中。立即冷冻干燥。切割即得。将切割好的基材、衬垫层和含凝血酶的海绵以粘结材料粘结，包装灭菌。