含笑内酯及其衍生物用于治疗丙型肝炎的用途 技术领域 本发明屙于药物技术领域， 具体地说， 涉及含笑内酯及其衍生物用于治疗丙型肝 炎的用途， 以及该药物化合物和组合物在制备治疗丙型肝炎或辅助治疗丙型肝炎药物中的 用途。
背景技术 丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus， HCV) 是 1989 年被确认的非甲非乙型肝炎主 要病原体。HCV 呈广泛流行态势， 全球至少有 1.7 亿人被 HCV 感染， 占总人口的 3％。HCV 一 经感染， 据估计约有 55％ -85％的感染者会发展为慢性感染， 并有较高比例的感染者最终 会发展为肝硬化、 肝癌。HCV 感染已经成为慢性肝炎、 肝硬化及肝癌的主要病因。目前尚不 能对 HCV 进行高效、 稳定的体外培养， 除人和黑猩猩外， 还没有完全证实其它动物对 HCV 易 感。 高效体外培养体系和合适小动物模型的缺乏， 严重阻碍了抗 HCV 药物的研究和评价。 临 床上正在使用的干扰素与利巴韦林联合疗法， 虽可以在一定程度上控制病毒增殖， 但仍有
50％的丙型肝炎患者对治疗不敏感， 研究和开发新型的抗 HCV 药物是当务之急。
HCV 属单股正链核糖核酸 (RNA) 病毒， 黄病毒科， HCV 属 (Flaviviridae)。其基因 组全长约 9.6kb， 在病毒酶和宿主细胞器的共同作用下， 产生负链中间体和更多的正链基因 组， 编码 3010 个氨基酸的前体蛋白， 被酶切为成熟的病毒结构蛋白和非结构蛋白 (NS)， 最 终完成病毒的组装与释放。以病毒复制周期过程中关键酶为靶点的药物研究， 是现代抗病 毒药物研发的主要思路。HCV NS， NS3 基因编码的丝氨酸蛋白酶和 NS5B 区编码的依赖 RNA 的 RNA 聚合酶 (RNA dependent RNA polymerse， RdRp) 是 HCV 复制和成熟的关键酶。随着 这两个重要酶结构与活性的进一步明确， 使得它们成为抗 HCV 药物研究的理想靶点。目前 已经发现了一些具有药物开发前景的化合物， 部分已进入临床前或临床研究阶段。
目前， 临床正在使用的丙型肝炎药物 ：
1、 干扰素 (IFN) 与利巴韦林 (RBV)
IFN ： IFN 是一种由体细胞合成和分泌的生物活性蛋白， 具有广谱抗病毒的作用。 IFN 本身并非直接抗病毒物质， 它的产生受细胞基因组控制， 在病毒感染或其它诱生剂刺激 下， 经一系列细胞内过程产生 IFN 并分泌到胞外。IFN 与细胞膜特异性受体结合， 经细胞内 的信号转导途径， 激活细胞内抗病毒作用机制， 诱导产生一组抗病毒物质 ( 如双链 RNA 依 赖的蛋自激酶、 R(PKR) 等 )。研究表明， IFN-α 与 IFN-β、 IFN-γ 相比有更强的抗病毒作 用。根据临床疗效， IFN 治疗可使部分患者丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 持续正常及持续的血 清 HCV-RNA 阴性。 但单独使用 IFN 的治疗效率很低， 仅约 15％的患者产生药物应答反应， 且 单独 IFN 治疗容易引起一定的毒副反应， 如类似感冒的症状、 白细胞减少症、 血小板减少症 等。
RBV ： RBV 是鸟嘌呤的类似物， 为人工合成的广谱强效抗病毒药物。一般认为其作 用机制是 ： RBV 在细胞内磷酸化， 转化为 RBV 三磷酸 (RTP)， RTP 是病毒聚合酶的抑制剂。同 时， 其单磷酸化产物 RBV 单磷酸 (RMP) 能够有效抑制 ： 磷酸鸟苷 (GTP) 合成中的次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶 (IMPDH)， 阻滞肌苷酸变成鸟苷酸， 影响了病毒核酸的合成， 从而抑制多种病 毒的复制。 RBV 的主要不良反应在于因红细胞缺乏脱磷酸化的酶， 造成 RBV 磷酸盐在红细胞 内堆积， 抑制三磷酸腺苷 (ATP) 依赖性的物质利用， 进而影响细胞的呼吸作用， 缩短了红细 胞的半衰期， 造成可逆性的溶血性贫血。 以 RBV 为基础也有很多改进的药物如 Viramidine、 Levovirin 等。Viramidine 是一种肝脏靶向的 RBV 前体药， 它主要在肝脏中被丙氨酸脱氨 酶迅速转化为 RBV， 它在肝脏中的水平要比其它组织高 3 倍。机体对 Viramidine 产生的不 良反应也比 RBV 低， 目前它已进入 II 期临床研究。Levovirin 是一种 RBV 的左旋对映体， 它 保留了 RBV 的免疫调节作用， 能增强机体 Th 一 1 型细胞因子反应， 在体内可以刺激机体产 生广谱的抗病毒状态， 并具有比 RBV 低得多的不良反应， 现已通过 I 期临床试验。
2、 联合疗法
普通 IFN 与 RBV ： 仅有 16％ -20％慢性丙型肝炎对普通 IFN 治疗产生持续治疗应 答 (Sustained virological response， SVR)， 但与 RBV 联合使用可提高 35％ -40％的应答 效率。 IFN-RBV 联合疗法使慢性丙型肝炎治疗无应答的危险性有效降低， 并有助于损伤肝脏 组织学的改善。
长效 IFN 及其与 RBV 联合治疗 ： 长效 IFN 是用聚乙二醇 (PEG) 对 IFN 进行修饰 后的新型抗病毒药物， 与普通 IFN 相比， 它在吸收、 分布、 代谢、 排泄等方面均具有良好的药 动学特性。目前， 国际上批准用于治疗丙型肝炎的 PEG-IFNa 有 2 种类型， 分别为分支状 的 PEG-IFNα2a(Pegasys) 和线状的 PEG-IFNα2b(PEG-mtron)。就临床药动学观点， 分支 状的 PEG IFN 优于线状 PEG-IFN。Lindsay 等的临床试验显示无论是 PEG-IFNα2b 还是 PEG-IFNα2a 单药治疗慢性丙型肝炎， 均有较好的临床疗效， 较普通 IFNα 的临床疗效提高 2-3 倍。根据 Fried 等的大规模临床试验结果， PEG-IFNα 与 RBV 联合治疗的持续治疗应答 效率为 54％ -56％， 而对照的 IFNα-2a 与 RBV 联合治疗持续治疗砬答效率为 44％ -47％， 二者相差约 10％。尽管 PEG-IFNα 的半衰期延长， 其不良反应并没有明显增加。
IFN 与其它药物的联合治疗 ： 一些天然植物提取物有很好的抗病毒活性及较轻的 不良反应， 如金丝桃苷。 无毒性低剂量的金丝桃苷具有抑制多种病毒的活性， 以色列科学家 发现它在体外具有中和 HCV 病毒的能力。国内屡见使用中药复方制剂治疗丙型肝炎的报 道。 据报道， 复方清肝冲剂等药物在临床上能减轻慢性丙型肝炎组织炎症， 并能减轻或逆转 肝纤维化。复方甘草酸苷对 500 多例慢性丙型肝炎治疗的远期疗效结果发现， 用药 15a 后 复方甘草酸苷可使慢性丙型肝炎的肝癌发生率减少 50％以上。 这些天然的提取药物和中药 与 IFN 联合使用， 以 IFN 治疗抗病毒为主， 辅以中药成分的药物治疗效果更好。
作为对 HCV 能够产生持续应答的主要治疗方法， PEG 化 IFN 与 RBV 联合疗法在治 疗 HCV 的地位毋庸置疑， 当前对 IFN 和 RBV 的改进正在不断的深入， 以期达到更好的治疗效 果。但此疗法仅仅使 50％ -60％的患者产生 SVR， 同时伴随着较大副作用。另外， IFN 治疗 具有型特异性， 1 型 HCV 相对于其它基因型明显表现出对 IFN 治疗不敏感。因此， 开发新型 的抗 HCV 药物已迫在眉睫。
已 有 文 献 报 道 [Bioorganic&Medicinal Chemistry(2006)， 14(1)， 83-91， US 20040229936] 倍半萜内酯类化合物小白菊内酯及其衍生物具有抗丙肝病毒活性， 但小白菊 内酯结构不稳定， 限制了其作为新型抗丙肝病毒药物的开发， 本发明发现了结构稳定的含 笑内酯及其衍生物具有抗丙肝病毒活性， 具有治疗丙肝的用途。发明内容 本发明提供了一种如下式 (I) 的含笑内酯衍生物治疗丙型肝炎的用途， 具体地， 式 (I) 含笑内酯衍生物及含有效量的式 (I) 含笑内酯衍生物的组合物， 其与其他治疗丙型 肝炎药物的组合物制备治疗丙型肝炎药物中的用途。
具体地， 本发明提供了一种如下式 (I) 的含笑内酯衍生物治疗丙型肝炎的用途， 其中式 (I) 的含笑内酯衍生物如下 ：
其中 R1 为 H 或 -C(O)R4， 其中 R4 为烷基、 环烷基， 烯基， 炔基， 芳基， 烷基芳基， 芳基 烷基， 芳基烯基， 芳基炔基或杂环基 ；
R2 ＝ R3 为双键， 或者
R3 为 H， R2 为取代的 C1-8 烃基、 其中取代基为环烷基， 杂原子环烷基， 芳基或杂环芳 基， 氨基酸片段或 -NR5R6， 其中 R5 和 R6 分别为烃基， 环烷基， 杂原子环烷基， 芳基或杂芳基 ； 其中烃基优选为烷基、 烯基和炔基。
X 为氧 ；
Y 为单键或氧。
其中 R1 为 H、 Y 为单键和 R2 ＝ R3 为双键时为含笑内酯。
优选地， R1 为酰基， 特别是碳原子数为 1-8 的酰基。
优选地， R3 为 H， R2 为 -NR5R6 取代的 C1-8 烷基， 其中 R5 和 R6 分别为 C1-8 的烷基。
本发明还提供了上述式 (I) 的含笑内酯衍生物制备治疗丙型肝炎药物中的用途。
本发明还提供了包含上述式 (I) 的含笑内酯衍生物的组合物治疗丙型肝炎的用 途。
本发明还提供了包含上述式 (I) 的含笑内酯衍生物的组合物在制备治疗丙型肝 炎药物中的用途。
本发明还还提供了上述式 (I) 化合物作为辅助治疗丙型肝炎用途。
本发明还还提供了上述式 (I) 化合物用于制备作为辅助治疗丙型肝炎药物的用 途。
本发明还提供了一种用于治疗丙型肝炎的药物组合物， 其中含有有效量的式 (I) 的含笑内酯及其衍生物和药学上可接受的载体或与其他治疗丙肝的药物的组合物。
上述式 (I) 的含笑内酯衍生物制备方法包括如下步骤 ： 以含笑内酯为原料， 在有 机溶剂中， 加入催化剂， 通过与带有相应基团或结构的原料物质反应制备得到。
优选地， 本发明的上述式 (I) 含笑内酯衍生物为如下式 (II)、 式 (III) 或式 (IV) 化合物 ：
具体地， 制备式 (II) 含笑内酯衍生物化合物的方法包括如下步骤 ： 原料为含笑内 酯和甲醇， 催化剂为三乙胺， 加热反应制备得到式 (II) 的含笑内酯衍生物。
具体地， 制备式 (HI) 含笑内酯衍生物化合物的方法包括如下步骤 ： 原料为含笑内 酯和丙酰氯， 催化剂为三乙胺， 溶剂为二氯甲烷， 加热反应制备得到式 (III) 的含笑内酯衍 生物。
具体地， 制备式 (IV) 含笑内酯衍生物化合物的方法包括如下步骤 ： 原料为含笑内 酯和间氯过氧苯甲酸， 溶剂为二氯甲烷， 加热反应制备得到式 (IV) 的含笑内酯衍生物。
本发明还提供了上述含笑内酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物治疗丙型肝炎 用途。
本发明还还提供了上述含笑内酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物作为辅助治 疗丙型肝炎用途。
本发明还提供了一种含笑内酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物在制备治疗丙 型肝炎的药物中的用途。
本发明还提供了一种含笑内酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物在制备治疗丙 型肝炎的辅助药物中的用途。
本发明还提供了一种用于治疗丙型肝炎的药物组合物， 其中含有有效量的含笑内 酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物和药学上可接受的载体或与其他治疗丙型肝炎药物 的组合物。
本发明还提供了一种含有有效量的含笑内酯衍生物式 (II)、 (III) 或 (IV) 化合物 和药学上可接受的载体或与其他治疗丙型肝炎药物的组合物用于制备治疗丙型肝炎药物 的用途。
本发明化合物用作药物时， 可以直接使用， 或者以药物组合物的形式使用。 该药物 组合物含有 0.1-99％， 优选为 0.5-90％的本发明化合物， 其余为药物学上可接受的， 对人 和动物无毒和惰性的可药用载体和 / 或赋形剂或与其他治疗丙肝药物联合用药。本发明的 组合物可以制备成注射液、 片剂和胶囊等。
所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、 半固体和液体稀释剂、 填料以及药 物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注 射和口服两种形式给药， 注射如静脉注射和肌肉注射， 口服的剂型可以是片剂和胶囊剂。
本发明的含笑内酯及其衍生物对丙肝病毒显示出较强的抑制活性， 而且对正常细 胞在 50μM 时， 均未表现出明显的杀伤作用。含笑内酯及该衍生物具有治疗丙肝的用途。
具体实施方式
为了理解本发明， 下面以实施例进一步说明本发明， 但不意于限制本发明的保护 范围。
实施例 1 ：
11βH， 13- 二甲基氨基含笑内酯 ( 化合物 1， 结构式如下式 (II)) 的制备
含 笑 内 酯 (106mg， 0.40mmol)， 三 乙 胺 (2.0mL)， 甲 醇 (30mL) 加 到 100mL 的 圆 底 烧 瓶 中， 加 热 回 流 3 小 时， 减 压 浓 缩， 硅胶柱层析 ( 石油醚∶乙酸乙酯∶三乙胺＝ 50 ∶ 50 ∶ 0.5)， 得白色固体 107.4mg， 收率 ： 86％。分子式 ： C17H27NO3
分子量 ： 293
性状 ： 白色无定型粉末
谱图数据 ： 1
H NMR(CDCl3， 400MHz)δ3.76(t， J ＝ 10.0Hz， 1H)， 2.96(s， 1H)， 2.49-2.67(m， 3H)， 2.28-2.34(m， 1H)， 2.30-2.34(m， 2H)， 2.18(s， 6H)， 2.09(brs， 2H)， 1.96(d， J ＝ 11.2， 13 1H)， 1.67-1.73(m， 2H)， 1.60(s， 3H)1.22(br s， 3H)， 1.18(br s， 2H) ；C NMR(CDCl3， 100MHz) δ177.0， 131.8， 131.3， 84.0， 80.2， 58.3， 58.1， 50.9， 46.0， 44.6， 38.4， 35.3， 30.0， 27.2， 23.7， 22.8。
实施例 2
4- 丙酰基含笑内酯 ( 化合物 2， 结构式如下式 (III)) 的制备
含笑内酯 (106mg， 0.40mmol)， 三乙胺 (2.0mL)， 丙酰氯 (0.2mL)、 5mL 二氯甲烷加 入到 20mL 的圆底烧瓶中， 室温搅拌反应 24h， 减压浓缩， 硅胶柱层析 ( 石油醚∶乙酸乙酯＝ 90 ∶ 10)， 得白色固体 87mg， 收率 ： 72％。制备得到的 4- 丙酰基含笑内酯的结构数据 ：
分子式 ： C18H24NO4
分子量 ： 304
性状 ： 白色无定型粉末
谱图数据 ： 1
H NMR(CDCl3， 400MHz)δ6.14(s， 1H)， 5.42(s， 1H)， 3.74(t， J ＝ 10.0Hz， J ＝ 13 10.0Hz， 1H)， 1.80-2.74(m， 12H)， 1.67(s， 3H)， 1.50(s， 3H)， 1.07(t， J ＝ 4.0Hz， 3H) ； C NMR(CDCl3， 100MHz)δ173.8， 170.1， 139.5， 131.5， 130.4， 118.6， 88.4， 83.0， 56.6， 50.1， 36.5， 34.9， 30.4， 28.7， 25.9， 24.1， 18.8， 9.1。
实施例 3
1， 10- 环氧含笑内酯 ( 化合物 3， 结构式如下式 (IV)) 的合成方法 ：
含笑内酯 (106mg， 0.40mmol)， 间氯过氧苯甲酸 (0.45mmol)、 5mL 二氯甲烷加入 到 20mL 的圆底烧瓶中， 室温搅拌反应 6h， 减压浓缩， 硅胶柱层析 ( 石油醚∶乙酸乙酯＝ 80 ∶ 20)， 得白色固体 96mg， 收率 ： 91％。制备得到的 1， 10- 环氧含笑内酯的结构数据 ：
分子式 ： C15H20NO4
分子量 ： 264
性状 ： 白色无定型粉末
谱图数据 ： 1
H NMR(CDCl3， 400MHz)δ6.13(d， J ＝ 3.2Hz， 1H)， 5.44(d， J ＝ 2.8Hz， 1H)， 3.73(t， 13 J ＝ 10.4Hz， 1H)， 1.30-2.46(m， 11H)， 1.29(s， 3H)， 1.28(s， 3H) ；C NMR(CDCl3， 100MHz) δ168.7， 137.8， 118.6， 79.2， 77.3， 74.2， 66.7， 52.6， 48.4， 37.1， 33.8， 29.0， 24.6， 22.5， 21.3。
实施例 4 ： 含笑内酯衍生物的药理作用
将 Ava5-EG(D4AB)SEAP 细胞以 7×103 的密度接种于 96 孔板圆底细胞培养板内， 37℃下培养一天， 分别加入待测化合物， 置 37℃、 5％ CO2 饱和湿度条件下培养 48 小时后， 检 测结果。
表 1 含笑内酯及其衍生物的抗丙肝病毒活性
活性测试结果表明， 筛选的化合物对丙肝病毒均表现出较强的抑制活性。含笑内酯及该衍生物具有治疗丙肝的用途。
实施例 5 ： 注射液
含笑内酯及实施例制备的化合物 1-3 用少量的 DMSO 溶解后， 按常规加注射用水， 精滤， 灌封灭菌制成注射液。
实施例 6 ： 片剂
含笑内酯及实施例制备的化合物 1-3 与赋形剂按照重量比为 5 ∶ 1 的比例加入赋 形剂， 制粒压片， 得片剂。
实施例 7 ： 胶囊
含笑内酯及实施例制备的化合物 1-3 与赋形剂按照重量比为 5 ∶ 1 的比例加入赋 形剂， 制成胶囊。
本发明的化合物用途已经通过具体的实施例进行了描述。 本领域技术人员可以借 鉴本发明的内容适当改变原料、 工艺条件等环节来实现相应的其它目的， 其相关改变都没 有脱离本发明的内容， 所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的， 都 被视为包括在本发明的范围之内。10