《天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用.pdf（11页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103316147 A (43)申请公布日 2013.09.25 CN 103316147 A *CN103316147A* (21)申请号 201210443865.6 (22)申请日 2012.11.08 A61K 36/815(2006.01) A61P 9/10(2006.01) (71)申请人 三普药业股份有限公司 地址 810007 青海省西宁市城东区德令哈路 58 号 (72)发明人 张国清 邹存生 马世平 傅强 马占强 (74)专利代理机构 江苏圣典律师事务所 32237 代理人 黄振华 (54) 发明名称 天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应 用 。
2、(57) 摘要 本发明公开了天参胶囊在制备治疗脑缺血疾 病药物中的应用。天参胶囊能显著降低结扎双侧 颈总动脉伴低血压脑缺血模型大鼠的脑含水量减 轻脑水肿、 改善脑组织病理变化， 升高脑组织 SOD 活力， 降低脑组织 MDA、 Ca2+水平， 对结扎双侧颈总 动脉伴低血压脑缺血模型大鼠具有显著的抗脑缺 血保护作用 ； 同时， 天参胶囊对大鼠局灶性脑缺 血损伤的保护作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103316147 A CN。
3、 103316147 A *CN103316147A* 1/1 页 2 1. 天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。 2. 权利要求 1 所述在脑缺血疾病治疗中的应用的天参胶囊， 其特征在于， 由如下重量 百分数的组分组成 ： 1333%的红景天、 121%的丹参、 120%的三七、 118%的川木香、 1333% 的枸杞子、 525% 的小檗皮、 118% 的沙棘鲜浆和 15% 的淀粉混合。 权 利 要 求 书 CN 103316147 A 2 1/8 页 3 天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用 技术领域 0001 本发明属于医药领域， 涉及天参胶囊的应用， 具体是其在各种脑缺血疾。
4、病治疗中 的应用。 背景技术 0002 脑缺血性疾病是指包括短暂缺血发作、 脑梗塞和烟雾病在内的颅内血管病变， 其 引起的主要病理变化为脑缺血损害。暂时脑缺血包括短暂缺血发作和可逆性缺血神经障 碍。前者指因暂时缺血， 引起脑、 视网膜和耳蜗等功能障碍， 少有意识改变。症状持续数分 钟， 少数可持续数小时， 但均在 24h 内完全恢复， 不留后遗症。后者的发病同短暂缺血发作， 只不过神经功能障碍持续大于 24h， 但不超过 3 周。如超过 3 周者， 则属永久性脑缺血。目 前治疗脑缺血性疾病的药物主要有甘露醇、 甘油等脱水药， 低分子右旋糖酐等血容量扩充 药， 阿司匹林等抗血小板药， 尼莫地平等。
5、脑血管扩张药等。 0003 天参胶囊的主要成分为红景天、 丹参、 三七、 川木香、 枸杞子、 沙棘鲜浆、 小檗皮等。 天参胶囊益气行滞， 化瘀止痛， 用于气滞血瘀所致冠心病心绞痛。 但天参胶囊是否具有抗脑 缺血作用， 未见报道。 发明内容 0004 发明目的 ： 本发明的目的在于提供天参胶囊的新应用。 0005 技术方案 ： 天参胶囊在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。 0006 上述天参胶囊， 由重量百分数为 13 33% 的红景天、 1 21% 的丹参、 1 20% 的 三七、 118%的川木香、 1333%的枸杞子、 525%的小檗皮、 118%的沙棘鲜浆和1 5% 的淀粉混合。 0007。
6、 有益效果 ： 1、 近年来的研究发现， 不完全性脑缺血比完全性脑缺血引起的脑损伤 更为严重。脑缺血后的损伤与兴奋性氨基酸 (EAA) 增多、 细胞内钙超负荷、 氧自由基的损 伤、 花生四烯酸 (AA) 代谢活性升高等因素有关。这些因素彼此交叉， 共同构成脑缺血后的 脑实质损伤。 脑缺血时由于毛细血管通透性增加， 大量血浆成分外渗， 尤其水分及小分子物 质， 引起脑组织明显水肿。脑水肿可使颅压升高， 严重时导致脑疝而危及生命。脑缺血时由 于 EAA 释放增加， 作用于其受体， 引起受体门控型 Ca2+通道开放， 使 Ca2+大量内流。此外， 线 粒体及内质网膜Ca2+-ATP酶由于能量代谢障碍。
7、而不能摄取细胞内过量的Ca2+而进一步加重 Ca2+超载。细胞内超载 Ca2+可激活磷脂酶 C， 后者使磷脂酰胆碱 (PIP2) 转变为三磷酸肌 醇 (IP3) 和二酯酰甘油 (DAG)， IP3 作用于其受体， 导致细胞内 Ca2+库释放 Ca2+， 各种因素互相 交叉促使细胞内 Ca2+超载。这是最终引起神经元不可逆性坏死的主要原因。因而有效降低 脑组织中 Ca2+水平， 可减轻脑细胞的不可逆性坏死。天参胶囊能显著降低大鼠结扎双侧颈 总动脉伴低血压模型脑组织含水量， 减轻脑组织的水肿情况， 改善脑缺血导致的脑组织病 理学改变， 对脑缺血有显著的保护作用。天参胶囊显著降低实验性脑缺血大鼠脑组。
8、织 Ca2+ 水平， 表明其对脑组织的保护作用可能与降低脑组织中Ca2+水平有关。 脑缺血时细胞内Ca2+ 说 明 书 CN 103316147 A 3 2/8 页 4 超载可激活依赖Ca2+蛋白水解酶， 使黄嘌呤脱氢酶(XD)变成黄嘌呤氧化酶(XO)。 次黄嘌呤 (Hpy) 在 XO 作用下生成黄嘌呤 (Xan)， Xan 在 XO 作用下生成尿酸， 这两个过程均产生大量 氧自由基， 可攻击生物膜中多聚不饱和脂肪酸引起脂质过氧化作用， 形成脂质过氧化物， 降 低膜的流动性， 使膜的通透性增加， 大量水分离子内流， 导致线粒体及细胞肿胀， 抑制电子 传递和氧化磷酸化， 进一步加重能量代谢障碍，。
9、 溶酶体酶释放引起细胞自身消化， 最终导致 细胞死亡。天参胶囊还能显著降低大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织 MDA 水平， 升高脑组织 SOD 活性， 显示其能通过清除氧自由基对缺血脑组织产生保护作用。本发明发 现， 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压不完全脑缺血模型具有显著的脑缺血保护 作用。 0008 2、 天参胶囊对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用研究结果显示， 局灶性脑缺血模 型大鼠脑缺血 3h 后， 除正常组和假手术组外所有实验动物均出现了不同程度的神经运动 功能障碍， 肌力明显增加， 天参胶囊能剂量依赖性降低局灶性脑缺血大鼠的神经功能评分， 中剂量和高剂量组大鼠的神经功能评。
10、分均显著低于模型组大鼠， 具有统计学意义。经 TTC 染色观察， 假手术组脑片全红， 模型组大鼠缺血侧额、 顶叶皮质及纹状体可见明显的白色梗 死灶， 其梗死率32.87%。 模型组同假手术组比较脑含水量明显降低脑梗死率显著增加， 表明 造模成功。天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑含水量和脑梗死率有一定降低作用。在脑缺血 3h 后， 模型大鼠血清 LDH 含量明显增加、 脑组织 SOD 活性和 GSH 水平明显降低， NO 水平明显 增加。天参胶囊可显著降低脑缺血大鼠血清 LDH 含量， 具有统计学意义， 对 SOD 活性和 GSH 水平较模型组有一定升高作用， 对 NO 有一定降低作用。本发明发现，。
11、 天参胶囊对大鼠局灶 性脑缺血损伤具有显著的保护作用。 附图说明 0009 图 1 为天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织病理的影响 ； 其 中， 1 假手术组、 2 模型组、 3 阳性药、 4 高剂量组、 5 中剂量组、 6 低剂量组。 图 2 为各组局灶 性脑缺血大鼠脑 TTC 染色。 具体实施方式 0010 实施例 1 ： 0011 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑缺血的保护作用 0012 1 材料与方法 0013 1.1 药品与试剂天参胶囊 ： 三普药业股份有限公司， 批号 ： 120225 ； 尼莫地平片 ： 拜 耳医药保健有限公司， 批号 ： BJ00529。
12、。受试药和阳性对照药在实验时以生理盐水配制成所 需浓度使用。丙二醛 (MDA)、 超氧化物歧化酶 (SOD) 及 Ca2+试剂盒均购于南京建成生物技 术研究所。 0014 1.2 实验动物 SD 大鼠， 雄性， 体重 250 300g， 购自苏州市工业园区爱尔麦特科技 有限公司， 许可证号 ： SCXK（苏） 2009-0001。 0015 1.3 仪器与设备 BESN- 多通道尾动脉测压实验系统 （上海） ， 台式高速冷冻离心 机 （sigma， 美国） 。 0016 1.4 动物分组与给药取 SD 雄性大鼠， 按体重随机分成 6 组， 即 ： 假手术组、 模型组、 说 明 书 CN 103。
13、316147 A 4 3/8 页 5 尼莫地平 （阳性药） 组及天参胶囊高、 中、 低剂量组， 每组 10 只。尼莫地平 （阳性药） 组灌胃 20mg/kg， 天参胶囊组大鼠分别灌胃天参胶囊 180、 360、 720mg/kg， 假手术组及模型组灌胃生 理盐水， 体积均为 1mL/100g， 每日 1 次， 连续 7d。 0017 1.5 大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型的建立动物于末次给药后 1h 用水合氯 醛 0.3mL/kg 腹腔麻醉， 鼠尾测血压， 塑料管从颈外静脉插入右心房供放血用。用抽血的方 法放血， 失血使血压达到 10.7kPa(80mmHg) 时分离双侧颈总动脉并结扎， 再。
14、继续抽血， 当血 压下降到 6.7kPa(50mmHg) 时， 此时即造成不完全性脑缺血模型， 维持 15min。假手术组只 插管， 不放血及结扎。抽出的血放入肝素化试管中， 37水浴保存， 以备血压过低时回输。 15min 后， 断头处死， 开颅取脑， 去除嗅脑、 脑干、 小脑后取大脑左侧半球， 右侧放置冰盆上， 用冰生理盐水冲去残血， 质量与体积比按19在冰浴下以冰生理盐水为匀浆介质制备10% 脑组织匀浆， 分装至 4 个 1.5mLEp-pendorf 管中于 4、 以 3500r/min 离心 10min， 取上清 液采用酶标仪分别测定脑组织 MDA、 SOD 及 Ca2+水平。与此同。
15、时， 左脑称脑湿重， 然后放入 110烤箱中烤至恒重， 称其干重， 计算脑含水量。每组取出 1 只动物， 断头处死， 开颅取脑， 去除嗅脑、 脑干、 小脑后取大脑冲净残血后， 放入 10% 甲醛中固定， 常规石蜡包埋， HE 染色， 光镜下观察病理改变。 0018 脑含水量 =( 脑湿重 - 脑干重 )/ 脑湿重 100% 0019 1.6 统计学处理所有数据以均数 标准差表示， 采用组间比较 t 检验进 0020 行统计分析。 0021 2 实验结果 0022 2.1 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织含水量的影响 0023 实验结果见表 1， 天参胶囊可显著降低大鼠结扎双侧颈。
16、总动脉伴低血压模型脑组 织含水量， 减轻脑水肿。 0024 表 1 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织含水量的影响 0025 0026 与假手术组比较 ： P0.05、 P0.01 ； 与模型组比较 ： *P0.05、 *P0.01 0027 2.2 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织 SOD、 MDA 的影响 0028 实验结果见表 2， 天参胶囊可显著降低大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组 织 MDA 含量， 升高 SOD 活力。 说 明 书 CN 103316147 A 5 4/8 页 6 0029 表 2 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织 。
17、SOD、 MDA 的影响 0030 0031 0032 与假手术组比较 ： P0.05、 P0.01 ； 与模型组比较 ： *P0.05、 *P0.01 0033 2.3 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织 Ca2+水平的影响 . 0034 实验结果见表 3， 天参胶囊可显著降低大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组 织 Ca2+水平。 0035 表 3 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈总动脉伴低血压模型脑组织 Ca2+水平的影响 0036 0037 与假手术组比较 ： P0.05、 P0.01 ； 与模型组比较 ： *P0.05、 *P0.01 0038 2.4 天参胶囊对大鼠结扎双侧颈。
18、总动脉伴低血压模型脑组织病理的影响 0039 1) 大体标本检查 ： 肉眼观察表面及切面各组之间无明显差别。 0040 2) 光镜检查 ： 镜下所见石蜡制片的假手术组大鼠脑组织神经细胞正常， 核仁明 显， 神经胶质细胞核仁清楚， 胞浆透亮或淡染， 毛细血管和小血管管腔较窄或呈一道缝隙， 神经细胞、 毛细血管和小血管周围都产生一道空隙。脑缺血模型组大鼠脑组织病理性改变 不明显， 神经细胞及毛细血管、 小血管周围的空隙增宽， 间质疏松， 神经胶质细胞肿胀。 阳性 药组及天参胶囊 3 个剂量组整个脑细胞结构与假手 说 明 书 CN 103316147 A 6 5/8 页 7 0041 术组大鼠脑组织。
19、无明显差异。见图 1。 0042 实施例 2 ： 0043 天参胶囊对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用研究 0044 1 材料和方法 0045 1.1 药物天参胶囊 （三普药业股份有限公司， 批号 ： 120225） ， 研钵研磨后用双 蒸 水配成所需剂量 ； 尼莫地平片 （拜耳医药保健有限公司中国北京， 批号 ： BJ00529） ； 2， 3， 5氯化三苯基四氮唑 （TTC， Amresco， 货号 ： 0765） 0046 1.2 动物 SD 大鼠， 雄性， 体重 180 220g， 许可证号 ： SCXK（苏） 2009-0001， 苏州市 工业园区爱尔麦特科技有限公司提供， SPF级标。
20、准 ； 饲养环境 ： 动物分笼饲养， 保持12h昼夜 节律， 室温 （221）， 自由饮水摄食。 0047 1.3 仪器和试剂 0048 ThermoMultiskanMK3 酶 标 仪 ； BS110S 电 子 分 析 天 平 （Sartorius 公 司） ； SHH-W21-CY420 型恒温水浴箱 （北京长安科学仪器厂） ； 恒温干燥箱 (Ecocell， 德国 ) ； MCAO 线栓 （购自北京沙东生物技术有限公司， 产品号 ： 2634-A4） 。 0049 乳酸脱氢酶 （LDH）测定试剂盒 （批号 ： 20120718） ； 一氧化氮测试盒 （硝酸还原酶 法） （批号 ： 201。
21、20727） ； 微量还原型谷胱甘肽试剂盒 ( 批号 ： 20120425) ； SOD 试剂盒 （批号 ： 20120721） ， 以上试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 0050 1.4 实验方法 0051 1.4.1 分组与给药 0052 100 只大鼠随机分为 7 组 （n=10） ： 空白组、 假手术组、 模型组、 尼莫地平组 （20mg/ kg)、 天参胶囊低 （180mg/kg） 、 中 （360mg/kg） 、 高 （720mg/kg） 剂量组。给药 7d 末次给药 1h 后手术， 模型组及假手术组灌胃相同容积水。 0053 1.4.2 手术操作步骤 0054 采用线栓法制备大。
22、鼠局灶性脑缺血模型。大鼠用 10% 水合氯醛按 350mg/ kg 腹腔注射麻醉， 仰卧固定于手术台上， 消毒术野， 颈部左侧旁正中切口， 剪开浅筋膜， 显露左侧胸锁乳突肌。钝性分离胸锁乳突肌与胸骨舌骨肌间的肌间隙， 暴露左侧颈总 动脉 （commoncarotidartery,CCA）和迷走神经。钝性分离 CCA， 结扎 CCA 近心端， 注 意避免损伤迷走神经。分离左侧颈外动脉 （externalcarotidartery,ECA） 、 颈内动脉 （internalcarotidartery,ICA） ， 结扎 ECA 近端。分离 ICA 至颅底， 并找出 ICA 的唯一分支 翼突腭动脉 。
23、（pterygopalatine,PPA） ， 将 ICA 与 PPA 交叉处的周围组织分离干净， 用微动脉 夹夹住ICA， 在CCA距动脉分叉5mm处剪一个0.2mm的小口， 插入线栓， 将线栓与CCA结扎固 定， 松开夹住 ICA 的微动脉夹， 线栓缓慢向 ICA 插入， 至 ICA、 PPA 交叉处时， 用微动脉夹夹住 PPA 暂时阻止血流， 待线栓进入 ICA 后， 松开夹住 PPA 的微动脉夹。调整插入角度， 目视线 栓头部进入ICA， 而不是PPA。 继续将线栓缓慢向ICA入颅方向推动， 推入长度约180.5mm （从 CCA 分叉处计算） ， 微遇阻力时停止。插线完毕， 剪除线栓。
24、多余末端， 在 ICA 根部结扎固 定， 缝合皮肤。假手术组将线栓插入深度控制在 10mm 以内， 其他操作同其他组。 0055 1.4.3 对脑缺血大鼠神经功能缺陷进行评价 0056 按 Bederson 氏六级评分标准， 主要通过观察行为变化进行评分， 0 分 ： 没有可见的 行为功能缺陷 ； 1分 ： 左侧前爪不能完全伸直 ； 2分 ： 行走时断续向缺血侧倾斜划圈 ； 3分 ： 向 说 明 书 CN 103316147 A 7 6/8 页 8 左侧持续转圈 ； 4 分 ： 向左侧倾倒 ； 5 分 ： 不能行走。大于等于 2 分的动物均为造模成功。 0057 1.4.4 脑含水量， 梗塞百。
25、分比测定 0058 在脑缺血 3h 后， 10% 水合氯醛过量麻醉断头处死， 迅速取出鼠脑， 一部分称完湿 重后将脑组织置于 110烘箱烘干计算脑含水量， 脑含水量 %=（湿脑重 - 干脑重） / 湿脑 重 100%。另一部分生理盐水冲洗残血， 将脑组织置于 -20冷冻 10min， 置于冰盘上在视 交叉及其前后各 2mm 处做冠状切片 5 片， 迅速投入 1%TTC 的磷酸盐缓冲溶液中， 37恒温孵 育 30min， 其中每隔 7 8min 翻动 1 次， 将染色后的脑片置于 4% 多聚甲醛中固定 24h 后数 码相机拍照。大鼠脑未缺血部分呈红色、 梗死灶呈苍白色。再分离苍白区 （梗塞区） 。
26、和非苍 白区 （正常区） ， 计算梗塞百分比。梗塞百分比 （%） = 苍白区重量 /（苍白区质量 + 非苍白区 质量） 100%。 0059 1.4.5 生化指标测定 0060 在脑缺血 3h 后， 各组大鼠眼眶静脉取血离心 （3000rpm） 分离血清， 测定 LDH。同时 处死大鼠， 切取大脑右侧前 1/2 半球约黄豆大小作 10% 脑匀浆， 测定 SOD、 GSH、 NO。 0061 1.5 统计方法 0062 采用 SPSS13.0ForWindows 统计软件进行分析。实验数据均以表示， 组间数 据比较采用 t 检验单因素方差分析。 0063 2 结果 0064 2.1 天参胶囊对局。
27、灶性脑缺血大鼠神经功能缺陷评分的影响 0065 实验结果见表 4， 大鼠脑缺血 3h 后， 除正常组和假手术组外所有实验动物 均出现 了不同程度的神经运动功能障碍， 肌力明显增加。天参胶囊能剂量依赖性降低局灶性脑缺 血大鼠的神经功能评分， 中剂量和高剂量组大鼠的神经功能评分均显著低于模型组大鼠， 具有统计学意义。 0066 表 4 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺陷评分影响 0067 0068 注 ： *p0.01， 与模型组比较 0069 2.2 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑含水量和梗死率影响 0070 实验结果见图 2 和表 5， 大鼠脑缺血 3h 后， 模型组同假手术组比较脑含水量明。
28、显 降低脑梗死率明显增加， 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠的脑含水量和梗死率有一定降低作 用， 但未见统计学显著性差异。 说 明 书 CN 103316147 A 8 7/8 页 9 0071 表 5 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠脑含水量和梗死率影响 0072 0073 注 ： #p0.01 与空白组比较 ； #p0.05， *p0.01 与模型比较 0074 2.3 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠各生化指标的影响 0075 实验结果见表 6， 大鼠脑缺血 3h 后， 模型大鼠血清 LDH 含量明显增加、 脑组织 SOD 活性和 GSH 水平明显降低， NO 水平明显增加。天参胶囊可显著降低脑缺血大鼠血。
29、清 LDH 含 量， 具有统计学意义， 对 SOD 活性和 GSH 水平较模型组有一定升高作用， 对 NO 有一定降低作 用， 但无统计学意义。 0076 表 6 天参胶囊对局灶性脑缺血大鼠生化指标影响 0077 0078 注 ： *P0.01,*P0.05 与模型组比较 ； #P0.01 与空白组比较 0079 实施例 3 ： 0080 天参胶囊由重量百分数为 13% 的红景天、 21% 的丹参、 20% 的三七、 15% 的川木香、 13% 的枸杞子、 10% 的小檗皮、 6% 的沙棘鲜浆和 2% 的淀粉混合。 0081 实施例 4 ： 0082 天参胶囊由重量百分数为 18% 的红景天、。
30、 16% 的丹参、 10% 的三七、 18% 的川木香、 20% 的枸杞子、 15% 的小檗皮、 2% 的沙棘鲜浆和 1% 的淀粉混合。 0083 实施例 5 ： 说 明 书 CN 103316147 A 9 8/8 页 10 0084 天参胶囊由重量百分数为 23% 的红景天、 11% 的丹参、 5% 的三七、 5% 的川木香、 33% 的枸杞子、 13% 的小檗皮、 5% 的沙棘鲜浆和 5% 的淀粉混合。 0085 实施例 6 ： 0086 天参胶囊由重量百分数为 28% 的红景天、 6% 的丹参、 5% 的三七、 10% 的川木香、 20% 的枸杞子、 12% 的小檗皮、 18% 的沙棘鲜浆和 1% 的淀粉混合。 0087 实施例 7 ： 0088 天参胶囊由重量百分数为 33% 的红景天、 1% 的丹参、 10% 的三七、 5% 的川木香、 15% 的枸杞子、 25% 的小檗皮、 10% 的沙棘鲜浆和 1% 的淀粉混合。 说 明 书 CN 103316147 A 10 1/1 页 11 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103316147 A 11 。