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1、10申请公布号CN101984827A43申请公布日20110316CN101984827ACN101984827A21申请号201010129403822申请日20100216CGMCCNO246120080421A01N63/02200601A01P21/00200601C09K17/00200601C12N1/20200601C12N1/16200601C12N1/14200601C09K101/00200601C12R1/645200601C12R1/07200601C12R1/11200601C12R1/065200601C12R1/88520060171申请人甘肃求实生物工程有限公。
2、司地址730000甘肃省兰州市城关区张家园70号302室72发明人孙荣高钟芳赵瑾74专利代理机构兰州振华专利代理有限责任公司62102代理人张真54发明名称助植物生长菌剂及其制备方法57摘要本发明主要涉及微生物的一种助植物生长菌剂及其制备方法。属微生物菌剂的制备技术。一种助植物生长的菌剂，其主要特点在于由酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌和液体培养基组成，其菌群的重量百分比为酵母融合菌为2540、胶质芽孢杆菌为1530、巨大芽孢杆菌1530，圆褐固氮菌为1530、康氏木霉菌为1530，所述的酵母融合菌的保藏号为CGMCC2461。本发明的优点是发明人经过试验，在灰钙。
3、土或盐碱土盆栽生长期观察中，施用了本发明的菌剂试验组与对照组不论出苗时间、出苗率、三叶期、苗高均有显著提高。在灰钙土或盐碱土盆栽根系观察中，试验组与对照组不论根系长度、根系数、体积、鲜重均有显著差异。83生物保藏信息51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书7页附图1页CN101984827A1/2页21一种助植物生长的菌剂，其特征在于由酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌和液体培养基组成，其菌群的重量百分比为酵母融合菌为2540、胶质芽孢杆菌为1530、巨大芽孢杆菌1530，圆褐固氮菌为1530、康氏木霉菌为1530，所述的酵。
4、母融合菌的保藏号为CGMCC2461。2如权利要求1所述的助植物生长的菌剂，其特征在于所述的液体培养基包括有在1升新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水中加入硫酸铵12G，磷酸051ML，用1的石灰水调PH5565。3如权利要求1所述的助植物生长的菌剂的制备方法，其特征在于有如下步骤A琼脂斜面培养基的制备及菌种的培养A琼脂斜面培养基的制备葡萄糖0812、蛋白胨0812、琼脂1822、酵母膏0308，氯化钠0812，无菌水80120ML，加热溶解后，用1的氢氧化钠调PH值至6272，经110114，2832分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于1515CM的干燥灭菌的试管摆成斜面待凝固。
5、后备用；B菌种的培养分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的母种琼脂斜面菌，在无菌条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经2832、2448小时培养，即得琼脂斜面菌种，为一级菌种；B液体培养基的制备及液体菌种的培养A液体培养基的制备在1升新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水中加入硫酸铵12G，磷酸051ML，用1的石灰水调PH6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子容量的1/4，然后经110112，3035分钟高压灭菌，冷却后备用；B分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的一级菌种，在无菌条件下，接种于液体。
6、培养液中，经2832、2448小时培养，其培养液为二级菌种；C分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的二级菌种再扩大培养，上摇床振荡培养，经振幅100120R/MIN、温度2832、1824小时培养，其菌液为三级菌种；D分别将重量百分比为酵母融合菌为2540、胶质芽孢杆菌为1530、巨大芽孢杆菌1530，圆褐固氮菌为1530、康氏木霉菌为1530三级菌种再扩大培养，五种菌在同一个发酵罐，经2832、1824小时的通气搅拌发酵培养，其菌液为酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌混合菌剂，即为四级菌种，然后继续逐级扩大培养。4如权利要求3所述的。
7、助植物生长菌剂的制备方法，其特征在于所述的酵母融合菌的制备有如下步骤将酒精酵母菌作母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用1的纤维素酶和1蜗牛酶进行酶解脱壁，时间为2小时，温度33，得到酒精酵母原生质体；将热带假丝酵母菌作母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用15的纤维素酶和05的蜗牛酶进行酶解脱壁，时间为25小时，温度33，得到热带假丝酵母原生质体；将热带假丝酵母原生质体经01碘乙酸灭活，与酒精酵母原生质体以11混合，将沉淀悬于35聚乙二醇的促溶剂中，30水浴静止处理，PH60，时间为40MIN，融合菌液经。
8、高渗磷酸缓冲液权利要求书CN101984827A2/2页3PBS反复冲洗，涂布于高渗基础型培养基MMS和高渗完全培养基YPDS平板培养基上，经30、7天培养，平板生长出酵母融合菌。5如权利要求4所述的助植物生长菌剂的制备方法，其特征在于所述的酵母融合菌的培养基为麦芽汁052、葡萄糖052、蛋白胨0206、琼脂粉13、无菌水80120ML，加热溶解后，用1的氢氧化钠调PH值至5565，经110114，3035分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于1515CM的干燥灭菌的试管摆成斜面待凝固后备用。权利要求书CN101984827A1/7页4助植物生长菌剂及其制备方法技术领域0001本发明主要涉及微生。
9、物的一种助植物生长菌剂及其制备方法。属微生物菌剂的制备技术。背景技术0002国内已有多种用于植物生长的微生物菌剂，如日本的EM，神力CM，VT等，但用原生质体融合技术制备的基因工程菌株与胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌复合制备菌剂的方法并能助植物快速生长的菌剂的技术目前尚属空白。发明内容0003本发明的目的在于避免现有技术不足而提供一种助植物生长菌剂及其制备方法。尤其是用原生质体融合技术制备的基因工程菌株与胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌复合制备微生物菌剂的方法。0004使用基因工程菌与胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌科学配伍的培养基的原料。
10、是，以新鲜的豆腐或粉丝或玉米淀粉或洋芋淀粉的废水或麸皮、玉米浆混合液为原料，添加少量无机盐制备。该方法是利用食品、轻工业产生的废液为原料，生产过程无“三废”污染，生产工艺简单，操作方便，节省人力，节省能源，其菌剂，可用于液体微生物肥料，也可作为微生物固体肥料和有机堆肥的微生物菌种接种剂。0005本发明的目的可以通过采用以下技术方案实现一种助植物生长的菌剂，其主要特点在于由酵母融合菌FUSANTBETWEENCANDIDATROPICALISANDSACCHAROMYCESCEREVISIAEF306、胶质芽孢杆菌BACILLUSMEGTERIUMBME8、巨大芽孢杆菌BACILLUSMUCIL。
11、AGINOSUSBMU36、圆褐固氮菌AZOTOBACTERCHROOCOCCUMAC6、康氏木霉菌TREESITR12和液体培养基组成，其菌群的重量百分比为酵母融合菌为2540、胶质芽孢杆菌为1530、巨大芽孢杆菌1530，圆褐固氮菌为1530、康氏木霉菌为1530，所述的酵母融合菌的保藏号为CGMCC2461。0006所述的助植物生长的菌剂，所述的液体培养基包括有在1升新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水中加入硫酸铵12G，磷酸051ML，用1的石灰水调PH5565。0007所述的助植物生长的菌剂的制备方法，其有如下步骤0008A琼脂斜面培养基的制备及菌种的培养0009A琼脂。
12、斜面培养基的制备葡萄糖0812、蛋白胨0812、琼脂1822、酵母膏0308，氯化钠0812，无菌水80120ML，加热溶解后，用1的氢氧化钠调PH值至6272，经110114，2832分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于1515CM的干燥灭菌的试管摆成斜面待凝固后备用；0010B菌种的培养分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的母种琼脂斜面菌，在无菌条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经说明书CN101984827A2/7页52832、2448小时培养，即得琼脂斜面菌种，为一级菌种；0011B液体培养基的制备及液体菌种的培养0012A液体培养基的制备在1升。
13、新鲜豆腐废水或粉丝废水或玉米淀粉废水或洋芋淀粉废水中加入硫酸铵12G，磷酸051ML，用1的石灰水调PH6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子容量的1/4，然后经110112，3035分钟高压灭菌，冷却后备用；0013B分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的一级菌种，在无菌条件下，接种于液体培养液中，经2832、2448小时培养，其培养液为二级菌种；0014C分别取酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌的二级菌种再扩大培养，上摇床振荡培养，经振幅100120R/MIN、温度2832、1824小时培养，其菌液为三级菌种；0015。
14、D分别将重量百分比为酵母融合菌为2540、胶质芽孢杆菌为1530、巨大芽孢杆菌1530，圆褐固氮菌为1530、康氏木霉菌为1530三级菌种再扩大培养，五种菌在同一个发酵罐，经2832、1824小时的通气搅拌发酵培养，其菌液为酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌混合菌剂，即为四级菌种，根据需要可继续逐级扩大培养，也可作为产品应用。所述的助植物生长菌剂的制备方法，所述的酵母融合菌的制备有如下步骤将酒精酵母菌作母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用1的纤维素酶和1蜗牛酶进行酶解脱壁，时间为2小时，温度33，得到酒精酵母原生质体；将。
15、热带假丝酵母菌作母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用15的纤维素酶和05的蜗牛酶进行酶解脱壁，时间为25小时，温度33，得到热带假丝酵母原生质体；将热带假丝酵母原生质体经01碘乙酸灭活，与酒精酵母原生质体以11混合，将沉淀悬于35聚乙二醇的促溶剂中，30水浴静止处理，PH60，时间为40MIN，融合菌液经高渗磷酸缓冲液PBS反复冲洗，涂布于高渗基础型培养基MMS和高渗完全培养基YPDS平板培养基上，经30、7天培养，平板生长出酵母融合菌。0016所述的助植物生长菌剂的制备方法，所述的酵母融合菌的培养基为麦芽汁052、葡萄糖052、蛋白胨0206、琼。
16、脂粉13、无菌水80120ML，加热溶解后，用1的氢氧化钠调PH值至5565，经110114，3035分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于1515CM的干燥灭菌的试管摆成斜面待凝固后备用。0017本发明的有益效果发明人经过试验，在灰钙土和盐碱土盆栽生长期观察中，施用了本发明的菌剂试验组与对照组不论出苗时间、出苗率、三叶期、苗高均有显著提高。在灰钙土和盐碱土盆栽根系观察中，试验组与对照组不论根系长度、根系数、体积、鲜重均有显著差异。0018发明人采用先进的单亲灭活原生质体融合技术，对热带假丝酵母CANDIDATROPICALIS968和酒精酵母SAECHAROMYCESCERVSIAR2399两。
17、亲本菌株做融合，构建新的基因工程菌，这些融合菌即具有双亲的生物特性，又具有优于双亲的活性酶，絮凝性和耐高温的生物特性。能充分利用豆腐、粉丝和玉米洋芋淀粉废水中有机物的营养物质进行生长繁殖，利用2008年04月21日，地址是在北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO2461的说明书CN101984827A3/7页6酿酒酵母F306SACCHAROMYCESCEREVISIAE配伍胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌五菌组合，胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌具有适应性强、耐受性好，能将土壤中的不溶性磷和钾元素。
18、转化为有效磷和速效钾供植物生长；芽孢杆菌具有易生长，抗逆性强，适应广，不但能助植物生长，而且可增强植物的抗病虫害能力；康氏木霉菌能分泌纤维素酶可将土壤中的纤维素转化为淀粉和糖，为植物生长提供营养，经科学配比和独特的发酵工艺，使其菌群在生长过程中产生的有用物质及其分泌物质成为各自或相互生长的基料和原料，通过相互间的共生增殖关系，形成了一个复杂而稳定的微生态系统，发挥了多功能的优势。0019酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌在新鲜的豆腐、粉丝、玉米、洋芋淀粉产生的废水中，添加少量的无机盐，直接发酵制备液体菌剂，既节省了培养基的原料，减少原料配制和高压灭菌的工序，节省了能。
19、源，也解决了这些行业治污的难题，是一项变废为宝，一举多得的生物技术。0020酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌菌剂即可作为植物生长剂，也可作为有机废水处理净化剂，还可作为生物絮凝剂，表面活性剂，生物吸附剂等应用于石油开采、食品工业、环境工程、医疗和精细化工等行业，具有较广的应用价值。附图说明0021图1为本发明的制备工艺流程示意图。具体实施方式0022下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明0023见图1，实施例100241试管液体菌种的培养，取新鲜豆腐废水经煮沸10分钟自然沉淀取上清液100ML，加入NH42SO401G，H3PO4005ML，充分溶解后调节PH至。
20、6272，分装于1515CM的干燥试管中，经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，分别接种F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌于试管液体培养基中，经2832培养2448小时，即为试管液体菌种一级菌种00252三角烧瓶液体菌种的培养0026取新鲜豆腐废水经煮沸10分钟自然沉淀取上清液1000ML，加入NH42SO41G，H3PO405ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将试管液体菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，经2832培养2448小时，即为液体三角烧瓶菌种二级菌种。
21、00273液体扩大培养生产菌种0028取新鲜豆腐废水经煮沸10分钟自然沉淀取上清液10000ML，加入NH42SO410G，H3PO45ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将二级菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，上摇床振荡培养，振幅为100120R/MIN，经温度2832培养1824小时发酵培养，其培养液为三级菌种。说明书CN101984827A4/7页700294取三级菌种再扩大培养，上发酵罐，所用新鲜豆腐废水不灭菌，将重量百分比为酵母融合菌为40、胶质芽孢杆菌为15、巨大芽孢杆菌15，圆褐固氮菌。
22、为15、康氏木霉菌为15五菌培养液接入后，经2832培养1824小时，通气搅拌发酵培养，其发酵液即为F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌液体菌剂，活细胞数为1020109个/ML；00305根据需要可逐级扩大产量。0031实施例200321试管液体菌种的培养，取新鲜粉丝废水100ML，加入NH42SO401G，H3PO4005ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于1512CM的干燥试管中，经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，分别接种F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌于试管液体培养基中，经2832培养2448小时，即为。
23、试管液体菌种一级菌种。00332三角烧瓶液体菌种的培养0034取新鲜粉丝废水1000ML，加入NH42SO41G，H3PO405ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将试管液体菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，经2832培养2448小时，即为液体三角烧瓶菌种二级菌种。00353液体扩大培养生产菌种0036取新鲜粉丝废水10000ML，加入NH42SO410G，H3PO45ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32。
24、，将二级菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，上摇床振荡培养，振幅为100120R/MIN，经温度2832培养1824小时发酵培养，其培养液为三级菌种。00374取三级菌种再扩大培养，上发酵罐，所用新鲜粉丝废水不灭菌，将重量百分比为酵母融合菌为25、胶质芽孢杆菌为30、巨大芽孢杆菌15，圆褐固氮菌为15、康氏木霉菌为15五菌培养液接入后，经2832培养1824小时，通气搅拌发酵培养，其成熟的发酵液即为F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌液体菌剂，活细胞数为0818109个/ML；00385根据需要可逐级扩大产量。0039实施例300401试管液体菌种的培养，取新鲜玉。
25、米淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液100ML，加入NH42SO401G，H3PO4005ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于1512CM的干燥试管中，经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，分别接种F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌于试管液体培养基中，经2832培养2448小时，即为试管液体菌种一级菌种。00412三角烧瓶液体菌种的培养0042取新鲜玉米淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液1000ML，加入NH42SO41G，H3PO405ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112。
26、，30分钟高压灭菌，冷却至32，将试管液体菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，经2832培养2448小时，即为液体三角烧瓶菌种二级菌种。说明书CN101984827A5/7页800433液体扩大培养生产菌种0044取新鲜玉米淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液10000ML，加入NH42SO410G，H3PO45ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将二级菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，上摇床振荡培养，振幅为100120R/MIN，经温度2832培养1824小时发酵培养，其培养液为三级菌种。0045。
27、4取三级菌种再扩大培养，上发酵罐，所用新鲜粉丝废水不灭菌，将重量百分比为酵母融合菌为35、胶质芽孢杆菌为15、巨大芽孢杆菌20，圆褐固氮菌为15、康氏木霉菌为15五菌培养液接入后，经2832培养1824小时，通气搅拌发酵培养，其成熟的发酵液即为F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌液体菌剂，活细胞数为1222109个/ML；00465根据需要可逐级扩大产量。0047实施例400481试管液体菌种的培养，取新鲜洋芋淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液100ML，加入NH42SO401G，H3PO4005ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于1512CM的干。
28、燥试管中，经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，分别接种F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌于试管液体培养基中，经2832培养2448小时，即为试管液体菌种一级菌种。00492三角烧瓶液体菌种的培养0050取新鲜洋芋淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液1000ML，加入NH42SO41G，H3PO405ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将试管液体菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，经2832培养2448小时，即为液体三角烧瓶菌种二级菌种。00513液体扩大培养。
29、生产菌种0052取新鲜洋芋淀粉废水，经煮沸10分钟自然沉淀取上清液10000ML，加入NH42SO410G，H3PO45ML，充分溶解后调节PH至6272，分装于500ML三角烧瓶中，分装量为瓶子总量的1/4，然后经112，30分钟高压灭菌，冷却至32，将二级菌种接种在液体三角烧瓶培养基中，上摇床振荡培养，振幅为100120R/MIN，经温度2832培养1824小时发酵培养，其培养液为三级菌种。00534取三级菌种再扩大培养，上发酵罐，所用新鲜粉丝废水不灭菌，将重量百分比为酵母融合菌为25、胶质芽孢杆菌为15、巨大芽孢杆菌15，圆褐固氮菌为30、康氏木霉菌为15五菌培养液接入后，经2832培养。
30、1824小时，通气搅拌发酵培养，其成熟的发酵液即为F306酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌液体菌剂，活细胞数为1222109个/ML；00545根据需要可逐级扩大产量。0055实施例50056一种酵母融合菌的制备有如下步骤将酒精酵母菌作母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用1的纤维素酶和1蜗牛酶进行酶解脱壁，时间为2小时，温度33，得到酒精酵母原生质体；将热带假丝酵母菌作说明书CN101984827A6/7页9母种的斜面转种和培养，在液体振荡培养14小时后，用EDTA巯基乙醇进行预处理，使用15的纤维素酶和05的蜗牛酶进。
31、行酶解脱壁，时间为25小时，温度33，得到热带假丝酵母原生质体；将热带假丝酵母原生质体经01碘乙酸灭活，与酒精酵母原生质体以11混合，将沉淀悬于35聚乙二醇PEG的促溶剂中，30水浴静止处理，PH60，时间为40MIN，融合菌液经高渗磷酸缓冲液PBS液反复冲洗，涂布于高渗基础培养基MMS和高渗完全培养基YPDS平板培养基上，经30、7天培养，平板生长出酵母融合菌。0057所述的酵母融合菌的培养基为麦芽汁052、葡萄糖052、蛋白胨0206、琼脂粉13、无菌水80120ML，加热溶解后，用1的氢氧化钠调PH值至5565，经110114，3035分钟蒸汽灭菌，然后在无菌条件下分装于1515CM的干。
32、燥灭菌的试管摆成斜面待凝固后备用。0058实施例6，酵母融合菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、圆褐固氮菌、康氏木霉菌液体菌剂在以灰钙土和盐碱土为试验土壤的试验效果。0059用苜蓿种籽做盆栽试验，经三次重复其结果见表1、表2、表3、表4和表50060表10061项目试验处理试验组生长期间施用本发明菌剂对照生长期间不施用菌剂0062表2灰钙土盆栽生长期观察0063项目出苗时间D出苗率三叶期D苗高CM试验组3941862对照48421450064试验与对照不论出苗时间、出苗率、三叶期、苗高均有显著提高。0065表3盐碱土盆栽生长期观察0066项目出苗时间D出苗率三叶期D苗高CM试验组4662032对照。
33、62025250067试验与对照不论出苗时间、出苗率、三叶期、苗高均有显著提高。0068表4灰钙土盆栽苜蓿根系观察0069项目根系长度CM根系数根体积CM3鲜重KG试验组797000002001314对照4840000010007260070试验与对照不论根系长度、根系数、体积、鲜重均有显著差异。0071表5盐碱土盆栽苜蓿根系观察0072项目根系长度CM根系数根体积CM3鲜重KG试验组4270000008000811说明书CN101984827A7/7页10对照32400000060005210073试验与对照不论根系长度、根系数、体积、鲜重均有显著差异。说明书CN101984827A1/1页11图1说明书附图。