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1、10申请公布号CN104193596A43申请公布日20141210CN104193596A21申请号201410432114322申请日20140828C07C39/373200601C07C39/21200601C07C37/11200601C07C43/23200601C07C41/30200601C07C205/35200601C07C201/12200601C07C255/53200601C07C253/30200601A61P35/0020060171申请人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号72发明人崔孙良张岩侯廷军74专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限公司3。
2、3224代理人胡红娟54发明名称反式邻羟基二苯乙烯衍生物及其制备方法和应用57摘要本发明公开了一种反式邻羟基二苯乙烯衍生物及其制备方法和应用，该制备方法包括如下步骤在铑催化剂和醋酸盐存在的条件下，邻羟基苯乙烯类化合物与芳基硼酸在溶剂中发生反应，反应完成后，经过后处理得到所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物。该制备方法反应条件温和，手段简洁快速，收率较高。所得的产品跟白藜芦醇作为对照，细胞实验表明其抗肿瘤活性普遍较好。51INTCL权利要求书1页说明书13页附图3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书13页附图3页10申请公布号CN104193596ACN1041935。
3、96A1/1页21一种反式邻羟基二苯乙烯衍生物，其特征在于，结构如式所示式中，R1、R2独立地为一个或者多个烷基、卤素、苯基、羟基、烷氧羰基、烷氧基、硝基或氰基；R3为H、烷基或者芳基。2根据权利要求1所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物，其特征在于，所述的R1、R2独立地为硝基、甲基、甲氧基、溴、羟基或氰基。3一种如权利要求1或2所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤在铑催化剂和醋酸盐存在的条件下，邻羟基苯乙烯类化合物与芳基硼酸在溶剂中发生反应，反应完成后，经过后处理得到所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物；所述的邻羟基苯乙烯类化合物的结构如式所示所述的芳基硼酸结构如式所示其。
4、中，R1、R2和R3的定义如权利要求1或2所述。4根据权利要求3所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，所述的铑催化剂为CPRHCL22或者CPRHOAC22，用量为所述的邻羟基苯乙烯类化合物的摩尔量的12。5根据权利要求3所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，所述的醋酸盐为醋酸铜，用量为所述的邻羟基苯乙烯类化合物的摩尔量的200300。6根据权利要求3所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，所述的邻羟基苯乙烯类化合物与芳基硼酸的摩尔比为11525。7根据权利要求3所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，所述的溶剂为水、甲醇、乙醇中的至。
5、少一种。8根据权利要求3所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，反应的温度为580。9一种如权利要求1或2所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。10根据权利要求9所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于抑制结肠癌细胞、乳腺癌细胞或胃癌细胞。权利要求书CN104193596A1/13页3反式邻羟基二苯乙烯衍生物及其制备方法和应用技术领域0001本发明属于药物化学领域，具体涉及一种反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，并对化合物的抗肿瘤细胞生长能力进行了测试。背景技术0002二苯乙稀类化合物是具有生物活性或药用价值的一类。
6、物质。特别地，具有羟基取代二苯乙烯表现出明显的抗氧化、抗肿瘤的特性。反式白藜芦醇RESVERATROL就是一种生物性很强的天然产物，它对乳腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、白血病、卵巢癌、皮肤癌等多种恶性肿瘤细胞均有明显的抑制作用。以下为具有药学活性的含羟基二苯乙烯类化合物结构代表00030004过去常用的合成二苯乙烯类化合物的方法主要是WITTIG反应和MIZOROKIHECK反应。但它们存在收率低，顺反立体选择性差或者反应所需条件苛刻等缺点。如HECK反应一般要在PDOAC2催化下于高温惰性气体环境中进行TETRAHEDRONLETT2002,43,597，反应式如下0005发明内容0006本。
7、发明提供了一种邻羟基二苯乙烯衍生物及其制备方法和应用，该制备方法能够专一性的生成反式产品，并且反应收率高。同时，细胞实验COLO205,MDA468,HT29以及MGC803表明其中一部分化合物具有明显优于白藜芦醇的抗肿瘤活性。0007一种反式邻羟基二苯乙烯衍生物，结构如式所示0008说明书CN104193596A2/13页40009式中，R1、R2独立地为一个或者多个烷基、卤素、苯基、羟基、烷氧羰基、烷氧基、硝基或氰基；0010R3为H、烷基或者芳基。细胞实验表明该类结构具有较好的抗肿瘤活性，尤其是对于COLO205,MDA468,HT29以及MGC803这些细胞。0011作为优选，所述的R。
8、1、R2独立地为硝基、甲基、甲氧基、溴、羟基或氰基。0012作为进一步的优选，所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物选自如下具体化合物中的一种00130014说明书CN104193596A3/13页50015说明书CN104193596A4/13页60016本发明还提供了一种所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤在铑催化剂和醋酸盐存在的条件下，邻羟基苯乙烯类化合物与芳基硼酸在溶剂中发生反应，反应完成后，经过后处理得到所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物；0017所述的邻羟基苯乙烯类化合物的结构如式所示00180019所述的芳基硼酸结构如式所示00200021其中，R1、R2和R3。
9、的定义如前文所述。0022反应过程中，RH首先插入芳基硼酸中的CB键中，然后与邻羟基苯乙烯类化合物中的羟基作用形成环状的CRHO键，接着乙烯基插入到CRH键发生亲电反应，最后还原消除，形成最终的反式邻羟基二苯乙烯类化合物。0023作为优选，所述的铑催化剂为CPRHCL22CAS12354857或者CPRHOAC22，用量为所述的邻羟基苯乙烯类化合物的摩尔量的12，该种铑催化剂说明书CN104193596A5/13页7对本发明中的底物的适用性好，催化效率高。0024作为优选，所述的醋酸盐为醋酸铜，用量为所述的邻羟基苯乙烯类化合物的摩尔量的200300。0025作为优选，所述的R1为烷基、卤素或烷。
10、氧基，此时，邻羟基苯乙烯类化合物容易得到，并且底物的反应活性较高。0026作为优选，所述的R2为氢、甲基、甲氧基、羟基、卤素，此时，反应的活性较高。0027所述的邻羟基苯乙烯类化合物可以参照现有方法制备，具体可参见文献JAMCHEMSOC2014,136,834。0028作为优选，所述的邻羟基苯乙烯类化合物与芳基硼酸的摩尔比为11525，后者稍稍过量，便于反应进行的比较彻底。0029作为优选，所述的溶剂为水、甲醇、乙醇中的至少一种，这些溶剂都为极性质子溶剂，作为进一步的优选，所述的溶剂为甲醇。0030作为优选，反应的温度为580，反应温度过高，芳基硼酸类化合物易分解聚合，反应温度过低，会降低反。
11、应物的转化率，作为进一步的优选，反应的温度为室温。0031本发明中，反应的时间可以通过TLC进行监测，在室温下搅拌054小时反应能够发生完全。0032本发明还提供了一种所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。0033作为优选，所述的抗肿瘤药物用于抑制结肠癌细胞、乳腺癌细胞或胃癌细胞。所述的反式邻羟基二苯乙烯衍生物对这些癌细胞的生长普遍具有较好的抑制作用。0034同现有技术相比，本发明的有益效果体现在反应底物易得，操作方便，该反应得到的反式邻羟基二苯乙烯类衍生物收率高，反应所需条件温和，反应时间短。附图说明0035图1为实施例1制得的产物的1HNMR谱图；0036图2为实施例1制。
12、得的产物的13CNMR谱图；0037图3为实施例2制得的产物的1HNMR谱图；0038图4为实施例2制得的产物的13CNMR谱图；0039图5为实施例1制得的产品的单晶结构图。具体实施方式0040下面结合具体实施例对本发明做详细的描述，这些实施例只是用于解释本发明的技术方案，并不是对本发明形成任何的限制。0041本发明中所用的反应物邻羟基苯乙烯类化合物可以采用如下方法进行制备0042说明书CN104193596A6/13页80043以R1和R3都选H为例，具体操作如下在三口反应瓶中加入甲基三苯基碘化膦以及叔丁醇钾，抽真空，氩气置换，用注射器打入四氢呋喃，放于0环境搅拌，滴加水杨醛，滴完放于室温。
13、下搅拌12H，用饱和氯化铵淬灭，减压旋转蒸发去除四氢呋喃，用乙醚提取，盐水洗，干燥，过柱PE/EA得产品。0044实施例10045在5ML单口反应瓶中，加入60MG03MMOL5溴邻羟基苯乙烯10EQ，64MG3,5二甲基苯硼酸，CPRHCL2237MG2，CUOAC120MG20EQ。加入3ML甲醇，于室温下搅拌。约2H后TLC检测反应完毕，加入约500MG硅胶，蒸出溶剂，固化，固体上样，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱剂进行柱色谱分离。得产品52MG，收率86。反应式如下00460047产品物理性质及谱图数据如下白色固体；熔点9092；1HNMRCDCL3,400MHZ,768D,J24HZ,1H。
14、,731726M,2H,720S,2H,709D,J164HZ,1H,699S,1H,675D,J84HZ,1H,508S,1H,240S,6H；13CNMRCDCL3,100MHZ,1521,1383,1370,1318,1311,1300,1297,12721247,1211,1177,1135,214；IRKBRV3509,3022,2917,1595,1486,1409,1313,1263,1099,966,860,801,688CM1；HRMSEIM/ZCALCDFORC16H15BROM,3020306；FOUND,3020306产物的1HNMR谱图见图1，13CNMR谱图见图2，。
15、单晶结构图见图5。0048实施例20049在5ML单口反应瓶中，加入30MG02MMOL4甲氧基邻羟基苯乙烯10EQ，89MG3,4,5三甲基苯硼酸，CPRHCL22248MG2，CUOAC80MG20EQ。加入2ML甲醇，于室温下搅拌。约2H后TLC检测反应完毕，加入约500MG硅胶，蒸出溶剂，固化，固体上样，以石油醚和乙酸乙酯为洗脱剂进行柱色谱分离。得产品38MG，收率60。反应式如下00500051产品物理性质及谱图数据如下OIL；1HNMRCDCL3,400MHZ,742D,J84HZ,1H,721D,J164HZ,1H,692D,J160HZ,1H,670S,2H,651DD,J18。
16、8HZ,J228HZ,1H,641D,J24HZ,1H,602BR,S,1H,388S,6H,387S,3H,376S,3H；13CNMRCDCL3,100MHZ,1603,1545,1534,1374,1341,1280,1277,1227,1177,1069,1034,1019,611,562,554；IRKBRV3404,2938,2837,1615,1580,1508,1463,1421,1286,1238,1127,1000,960,817,782CM1；HRMSEIM/ZCALCDFORC18H20O5M,3161311；FOUND,31613100052产物的1HNMR谱图见图3。
17、，13CNMR谱图见图4。说明书CN104193596A7/13页90053实施例3230054实施例323的制备方法与实施例1相同，不同之处在于将两个原料替换成其他相似结构，得到的产物结构列于表1。0055实施例323的产物结构0056说明书CN104193596A8/13页100057说明书CN104193596A109/13页110058说明书CN104193596A1110/13页120059细胞敏感性实验0060实验原理MTT分析法以活细胞代谢物还原剂MTT噻唑蓝为基础，利用酶标仪测定490NM处的光密度OD值，以反映出活细胞数目，从而测定化合物对肿瘤细胞的杀伤效果。0061实验步骤。
18、00621收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100L，铺板使待测细胞密度为100010000个/孔边缘孔用无菌PBS填充；00632将96孔板放在5CO2，37培养箱中孵育，至细胞单层铺满孔底,加入浓度梯度的药物即对照物RESVERATROL和实施例123的化合物。原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，本实验在前一天晚上铺板，次日上午加药。一般57个梯度，每孔5L，设35个平行孔；006435CO2，37孵育1648小时，倒置显微镜下观察；00654每孔加入20LMTT溶液5MG/ML，即05MTT，继续培养4H。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲。
19、23遍后，再加入含MTT的培养液；00665终止培养，小心吸去孔内培养液；00676每孔加入150L二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10MIN，使结晶物充分溶解。酶联免疫检测仪在490NM处测量各孔的吸光值。得到的结果如表2所示。0068表2化合物结构及活性汇总00690070说明书CN104193596A1211/13页130071说明书CN104193596A1312/13页140072说明书CN104193596A1413/13页150073表2中，“”代表活性与RESVERATROL相当，或者低于RESVERATROL。说明书CN104193596A151/3页16图1图2说明书附图CN104193596A162/3页17图3图4说明书附图CN104193596A173/3页18图5说明书附图CN104193596A18。