白藜芦醇包衣纳米脂质体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种抗肿瘤的药物，具体的说，涉及一种白藜芦醇包衣纳米脂 质体及其制备方法。
背景技术
肿瘤是一种常见病与多发病，对人民的生命健康威胁很大，在医学领域中 是越来越受到重视的研究课题。全世界每年死于癌症者700万以上，现在癌症患 者约3700万。在我国，每年约有130万人死于肿瘤，估计发病率在180万～200 万之间，总的发病率在不断上升。在国内多个大城市中，恶性肿瘤已超过心脑 血管疾病，排在所有疾病死亡原因的第一位，而在35～59岁年龄段，肿瘤一直 是第一杀手。由于过去许多严重威胁人民生命健康的烈性传染病得到了控制， 人均寿命逐渐延长，诊断技术不断提高，但是人类环境中的致癌因素日渐增多， 因此在很多国家，目前癌症居死亡原因首位或每二位。
目前肿瘤的治疗有手术、放疗和化疗，很大程度上以化学治疗为主。手术 与放射治疗方法的顺应性较差，而化学治疗又会给患者带来较大的毒副作用， 在抑制和毒害增生活跃的肿瘤细胞的同时，对骨髓细胞、肠上皮细胞、毛发细 胞、以及生殖细胞也同样产生抑制作用，同时容易产生耐药性从而失去治疗作 用。随着社会经济的发展和人民生活的不断提高，人们对生活、生命质量的要 求也在不断提高，高效低毒绿色环保的抗肿瘤药物的出现也是众望所归。
白藜芦醇是许多植物中存在的一种活性较强的非黄酮类多酚化合物，白藜 芦醇具有的对心血管疾病和肿瘤的预防和保健作用已在国际上引起广泛的关注 及深入研究，并已作为保健品及食品添加剂在欧美市场广泛销售。近年来，国 内外对白藜芦醇抗肿瘤的活性及具体机制进行大量深入研究，认为是目前可与 紫杉醇媲美的最有希望的抗癌成份之一。目前研究证明白藜芦醇不但具有防治 心血管疾病、消炎作用，而且更重要的是它具有广泛的防癌、抗癌作用。
现代医药技术与方法应用表明，许多中药活性成分，如葛根素、槲皮素、 黄芩苷等均存在严重的体内吸收问题，致使其生物利用度低，不能有效地发挥 其治疗作用，限制了其临床应用及其相关的产业化发展。
虽然白藜芦醇为一很有前途的肿瘤预防和治疗药，但是由于白藜芦醇难溶 于水，并且对光不稳定，其自身物理化学性质的局限，导致其在体内吸收较差， 生物利用度不高，临床效果不甚理想。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备工艺简单，无毒、无免疫原性、可降解、缓 释，作用时间长的白藜芦醇包衣纳米脂质体及其制备方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：白藜芦醇包衣纳米脂质体，其特征 是：所述脂质体由以下成分组成：
白藜芦醇、卵磷脂或大豆磷脂、胆固醇、氯化壳聚糖、辅料。
以下为上述技术方案的改进：
所述辅料为以下成分的一种或两种：
甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖。
所述脂质体各成分的重量百分比为：
白藜芦醇 5～10％
卵磷脂或大豆磷脂、胆固醇 50～85％
氯化壳聚糖 0.5～1％
辅料 5～40％。
所述脂质体各成分的重量百分比为：
白藜芦醇 6～9％
卵磷脂或大豆磷脂、胆固醇 60～70％
氯化壳聚糖 0.6～0.8％
辅料 10～30％。
所述脂质体各成分的重量百分比为：
白藜芦醇 7％
卵磷脂或大豆磷脂、胆固醇 62.3％
氯化壳聚糖 0.7％
辅料 30％。
白藜芦醇包衣纳米脂质体的制备方法包括以下步骤：
a、制备脂质体
(1)按照1∶1～4∶1的摩尔比精密称取卵磷脂或大豆磷脂与胆固醇并混 合，然后将混合物溶解于氯仿溶液中，得到类脂溶液；
(2)按照比例称取白藜芦醇，溶解于乙醇，将得到的白藜芦醇乙醇溶液加 入到类脂溶液中，再转移至250mL茄形瓶中，于30～40℃水浴恒温；
(3)用旋转蒸发仪减压蒸馏除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀类脂薄膜， 用温度为30～40℃、溶解有冻干保护剂的水化介质水化类脂薄膜，形成粗混悬 液，轻轻振摇1～2h，超声处理1～2min，得到脂质体，将其置于4℃的冰箱 中保存；
b、制备包衣脂质体
(1)取适量脂质体，以1mL/min的速度恒速滴加到氯化壳聚糖溶液中，并 搅拌，搅拌速度为250～300r/min，待脂质体全部滴加完毕再继续搅拌5～10min， 即得混悬状氯化壳聚糖包衣脂质体；
(2)将混悬状氯化壳聚糖包衣脂质体经高压均质机在120～150MPa压力下 经50nm膜挤压乳匀5～6次，得到包衣脂质体，然后置4℃的冰箱中保存；
c、包衣脂质体的冻干
(1)在包衣脂质体内加入辅料，每种辅料占包衣脂质体悬浮液的5％～15 ％，然后取2mL加入辅料后的包衣脂质体，装入青霉素小瓶中，预冻20～24h， 再冷冻干燥24～30h，得包衣脂质体的干燥品。
白藜芦醇的结构式为：
白藜芦醇，英文名称为Resveratro|，Res，化学名3，4′，5-三羟基-反- 均二苯代乙烯，分子式C14H12O3，分子量228.2。
白藜芦醇是许多植物中存在的一种活性非黄酮类多酚化合物。白藜芦醇呈 白色针状晶体，难溶于水，不溶于乙醚，能溶于乙醇，乙酸乙酯，丙酮等溶剂 中。1940年首次发现该成分以来，一直受到医药界的重视。迄今为止的研究表 明：白藜芦醇具有抗肿瘤、抗氧化、抗心血管疾病、抗细菌、抗炎，抑制血小 板聚集，调节免疫等作用。白藜芦醇被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌 药物，已成为科学家们高度重视的天然活性成分，具有很大的药用价值和市场 前景。
白藜芦醇是植物在恶劣环境下或遭到病原体侵害时，植物自身分泌的一种 抗毒素，可抵御霉菌的感染。它是因植物受到真菌感染，紫外线照射或病理状 况下而产生的，结构类似于雌激素己烯雌酚。
白藜芦醇广泛存在于葡萄科、百合科、蓼科、豆科、伞形科、落草科、棕 榈科、买麻藤科等多种植物中，在花生仁、桑椹、葡萄等70种植物中也含有这 种物质。在我国的传统中药虎杖、何首乌等植物中也发现了白藜芦醇的存在。 在白藜芦醇的各项药理作用中最引人注目的是抗肿瘤作用，据报道白藜芦醇可 拮抗消化、呼吸、血液、生殖等多个系统来源的多种肿瘤细胞的增殖，对鼻咽 癌、肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、白血病等都有治疗作 用。
目前认为，白藜芦醇主要是通过抑制细胞色素酶、诱导解毒酶、抑制环氧 化酶、抑制蛋白激酶、拮抗雌激素受体、促进肿瘤细胞分化和凋亡等途径达到 抗肿瘤的作用。
有益效果：
本发明采用以上技术方案，脂质体在人体内具有无毒、无免疫原性、可降 解、缓释等特点，所载药物广泛，并且能够减少药物的用量，增强在体内的稳 定性和药理作用，可以降低药物的毒副作用等特点，脂质体对正常细胞和组织 无损害和抑制作用，并可以长时间地吸附于靶细胞周围，使药物能充分向靶细 胞组织渗透，也可以通过静电的作用与细胞膜接触融合进入细胞内。
壳聚糖具有良好的生物相容性，溶于稀盐酸后形成氯化壳聚糖。氯化壳聚 糖表面带有高密度的正电荷，在生理条件下，肿瘤细胞表面带有较多负电荷， 因此决定用带正电荷的亲水性氯化壳聚糖溶液包被脂质体，并乳匀至纳米级。 包衣后的纳米脂质体可以进一步增加药物对肿瘤细胞的靶向性，并且能够逃匿 网状内皮系统的捕获以及延长脂质体在血液循环中的滞留时间，从而达到缓释、 靶向、长效的作用。
本发明具有无毒、无免疫原性、可降解、缓释等特点，作用时间长，能够 有效预防和治疗肿瘤疾病，所以具有比较高的经济价值和社会价值。
具体实施例
实施例1：白藜芦醇包衣纳米脂质体，所述脂质体由以下成分组成：白藜芦 醇、卵磷脂、胆固醇、氯化壳聚糖、甘露醇、山梨醇。
所述脂质体各成分的重量百分比为：
白藜芦醇 5％
卵磷脂、胆固醇 55％
氯化壳聚糖 0.5％
甘露醇、山梨醇 39.5％。
白藜芦醇包衣纳米脂质体的制备方法包括以下步骤：
a、制备脂质体
(1)按照1∶1的摩尔比精密称取卵磷脂与胆固醇并混合，然后将混合物 溶解于氯仿溶液中，得到类脂溶液；
(2)按照比例称取白藜芦醇，溶解于乙醇，将得到的白藜芦醇乙醇溶液加 入到类脂溶液中，再转移至250mL茄形瓶，于37℃水浴恒温；
(3)用旋转蒸发仪减压蒸馏除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀类脂薄膜， 用温度为37℃、溶解有冻干保护剂的水化介质水化类脂薄膜，形成粗混悬液， 轻轻振摇1h，超声处理1min，得到脂质体，将其置于4℃的冰箱中保存；
b、制备包衣脂质体
(1)取适量脂质体，以1mL/min的速度恒速滴加到氯化壳聚糖溶液中，并 搅拌，搅拌速度为250r/min，待脂质体全部滴加完毕再继续搅拌5min，即得混 悬状氯化壳聚糖包衣脂质体；
(2)将混悬状氯化壳聚糖包衣脂质体经高压均质机在120MPa压力下经50nm 膜挤压乳匀5次，得到包衣脂质体，然后置于4℃的冰箱中保存；
c、包衣脂质体的冻干
在包衣脂质体内加入辅料，每种辅料占包衣脂质体混悬液的5％，然后取2 mL加入辅料后的包衣脂质体，装入青霉素小瓶中，预冻20h，再冷冻干燥24h， 得包衣脂质体的干燥品。
实施例2：白藜芦醇包衣纳米脂质体，所述脂质体由以下成分组成：白藜芦 醇、大豆磷脂、胆固醇、氯化壳聚糖、乳糖、蔗糖。
所述脂质体各成分的重量百分比为：
白藜芦醇 9％
大豆磷脂、胆固醇 70％
氯化壳聚糖 0.8％
乳糖、蔗糖 20.2％。
白藜芦醇包衣纳米脂质体的制备方法包括以下步骤：
a、制备脂质体
(1)按照3∶1的摩尔比精密称取大豆磷脂与胆固醇并混合，再按照比例 称取混合物溶解于氯仿溶液中，得到类脂溶液；
(2)按照比例称取白藜芦醇，溶解于乙醇，将得到的白藜芦醇乙醇溶液加 入到类脂溶液中，再转移至250mL茄形瓶，于37℃水浴恒温；
(3)用旋转蒸发仪减压蒸馏除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀类脂薄膜， 用温度为37℃、溶解有冻干保护剂的水化介质水化类脂薄膜，形成粗混悬液， 轻轻振摇2h，超声处理2min，得到脂质体，置于4℃的冰箱中保存；
b、制备包衣脂质体
(1)取适量脂质体，以1mL/min的速度恒速滴加到氯化壳聚糖溶液中，并 搅拌，搅拌速度为280r/min，待脂质体全部滴加完毕再继续搅拌6min，即得混 悬状氯化壳聚糖包衣脂质体；
(2)将混悬状氯化壳聚糖包衣脂质体经高压均质机在140MPa压力下经50nm 膜挤压乳匀6次，得到包衣脂质体，然后置于4℃的冰箱中保存；
c、包衣脂质体的冻干
在包衣脂质体内加入辅料，每种辅料占包衣脂质体悬浮液的5％，然后取2mL 加入辅料后的包衣脂质体，装入青霉素小瓶中，预冻22h，再冷冻干燥26h， 得包衣脂质体的干燥品。