所属技术领域
本发明涉及医药生物工程技术领域，特别是涉及利用低剂量重组人α-2b (IFN-α-2b)干扰素制备口含片及其制备方法。
背景技术
干扰素作为一种细胞因子，具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿 瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化等，已在40多个国家中被批准用于临床 治疗。但其用药途径多采用肌肉注射或静脉滴注，且注射剂量较大，一般为 100万-600万IU。而干扰素口含片则剂量相对较低(100-10000IU)。澳大利 亚的Namalwa细胞干扰素口含片，是一种淋巴母细胞干扰素，此种干扰素以 淋巴瘤为原料，系非健康人体正常组织，且亚型数量较少，对疾病的疗效不 甚理想，因此，我国一直未批准进口。目前我国报道的干扰素口含片都是人 白细胞α-2a型干扰素。虽然人白细胞α-2a型干扰素和人α-2b型干扰素都是 国际上已经大量生产和广泛应用的抗病毒及抗肿瘤的多肽药物，但由于α-2a 型干扰素是来自恶性化细胞系，临床使用过程中产生中和抗体的频率为 17％，大于来自正常细胞系人α-2b的产生中和抗体的频率为6％，因此，临 床上更多考虑生产和使用的是低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)型干扰素。
本发明口含片的有效成分即为低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)型干扰 素，实验证明，低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)型干扰素口含片吸收情况 良好，疗效显著。
发明内容
本发明的目的在于提供一种剂量小、疗效高、副作用小的含低剂量重组 人α-2b(IFN-α-2b)型干扰素为原料的口含片及其制备方法。
本发明低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其有效成分为 低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素，辅料是海藻糖、麦芽糖、糖粉、 淀粉、明胶粉和硬脂酸镁。
上述α-2b干扰素口含片的含量为100-10000IU。上述辅料的重量比是， 海藻糖5-12％、麦芽糖6-12％、糖粉45-55％、淀粉30-45％、明胶粉1-3％、硬 脂酸镁0.5-2％。
本发明所采用α-2b干扰素是我公司自行研制的低剂量重组人α-2b(IFN -α-2b)干扰素。α-2b干扰素的基因序列是采用大肠杆菌偏爱的密码子，设 计出全新的α-2b干扰素序列，与高效表达载体连接，转化至大肠杆菌中，筛 选出高效稳定表达的工程菌种。表达率高达40％左右高于目前所报道的30％ 左右。
目前所报道的α-2b干扰素纯化工艺均采用单克隆抗体亲和层析，制备用 的单克隆抗体亲和层析柱不仅价格昂贵，而且使用次数有限。这些来自鼠的 单克隆抗体蛋白片段难免从亲和层析柱脱落，混入产品造成异源蛋白污染， 十分危险。而我公司研制的α-2b干扰素纯化工艺是通过阴离子交换层析和分 子筛可使α-2b干扰素原液纯度达到95％以上，其它各项质量指标均符合国家 要求。该纯化工艺不但避免鼠单抗的污染又节约了成本提高了收率，更重要 的是提高了α-2b干扰素原液的质量。
本发明低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，经口含给药 后，通过与口腔和咽喉部细胞膜上丰富的干扰素受体结合，相互作用，起动 激活体内产生大量的干扰素，使机体细胞产生抗病毒状态，间接的发挥消灭 病毒和抑制肿瘤细胞生长的作用，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能， 具有显著防治SARS病的作用。
上述辅料中，海藻糖、麦芽糖对低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰 素具有保护剂和赋形剂的作用，以增加干扰素的稳定性。
上述辅料中，糖粉用作矫味剂和粘合剂，可增加口含片的硬度，且具有 甜味适于口含。
上述辅料中，淀粉用作填充剂和赋形剂。
上述辅料中，明胶粉用作口含片的粘合剂，以增加片剂硬度，延长含化 时间，利于吸收。
本发明的上述低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片的制备方 法，系采用冻干粉末室温直接压片法，其压片工艺，依次含下列工序：
(1)将辅料组分中的明胶粉，在0℃以下粉碎，过100目筛。
(2)将糖粉与淀粉按组分重量配比称重，混匀。
(3)将配方量海藻糖和麦芽糖加适量蒸馏水溶解，加入配方量的低剂 量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素原液，混匀，得干扰素浆。
(4)将干扰素浆在搅拌下加入到上述糖粉与淀粉的混合物中，搅拌均 匀。
(5)将上述(4)的混合液，在-35-30℃温度下，冷冻干燥，得低剂量 重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素冻干粉。
(6)在上述干扰素的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经 12-16目筛混合，得冻干粉末。
(7)将干扰素冻干粉末，在室温下直接压成园片状，制得低剂量重组人α- 2b(IFN-α-2b)干扰素口含片。
本发明低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片和其制备工艺， 与已有技术相比，具有显著特点和明显的疗效。
1、虽然人白细胞α-2a干扰素和α-2b干扰素都已广泛用于临床，但由 于重组人α-2a干扰素是来自恶性化细胞系，在临床使用过程中所产生中和 抗体的频率较高为17％，远远大于来自正常细胞系的人α-2b干扰素产生中 和抗体的频率6％，且亚型较少，各亚型相互协调作用力较弱，所以临床更 欢迎使用人α-2b型干扰素。本发明干扰素口含片的有效成分即为人α-2b型 干扰素，其临床治疗作用优于人α-2a型干扰素。
2、有证据表明，干扰素的应答，在敏感的细胞系中，膜受体的数量与 干扰素剂量之间有着明显的关系，即受体数量多的细胞系比受体数量少的 细胞系所需干扰素的剂量要低。本发明为干扰素的口含片，在口腔和咽喉 部粘膜含有大量的干扰素敏感细胞受体，口含给药后，口含片在唾液中缓 缓溶解释药，通过口腔粘膜快速吸收，激活局部免疫系统，并进一步放大 此免疫激活效应，从而迅速发挥抗肿瘤、抗感染和免疫调节作用。口腔粘 膜吸收还可避免胃肠道pH及酶的不良影响，避免肝脏对药物的破坏。目前 对干扰素多采用肌肉注射和静脉滴注给药，药物在运转过程中损失极大， 能达到敏感细胞的药量很少，故其效果也不理想。
3、本发明的低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，剂量较 低，其干扰素含量仅为100-10000IU(国际单位)。由于干扰素的疗效与剂 量并不成正比，大剂量可起免疫抑制作用，而小剂量则可起免疫兴奋作 用，在使用干扰素连续治疗期间，血清干扰素水平还有积蓄作用。因此， 本发明的小剂量干扰素含片，在治疗时若采用长时间给药则对病毒性疾病 的治疗效果将更为显著，并可大大降低干扰素使用量、降低成本、降低副 作用，减轻患者经济负担。目前临床应用干扰素的剂量较大，通常为100- 600万国际单位，其用药量大，成本高，副作用大，不易推广应用。
4、本发明低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，剂量准 确，效价稳定、使用、携带、运输、贮存方便，适于自动化生产，质量易 于控制，成本低廉。
5、本发明口含片可用于多种病毒性疾病如SARS病、乙型肝炎、丙型 肝炎等治疗的首选药物。对口腔溃疡、复发性口腔炎、咽炎、喉炎、艾滋 病等都有一定的治疗效果。并可用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗。
6、本发明的干扰素冻干粉末常温压片的方法，生产工艺简便易于操 作。不使用任何有害物质，制造过程安全，无三废排放。采用冷冻干燥制 备干扰素粉末，致使在制备过程中干扰素活性的损失极小，成品稳定性 高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其配方 为：
低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素100IU
海藻糖粉 6％
麦芽糖粉 5％
糖粉 55％
淀粉 31％
明胶粉 2％
硬脂酸镁 1％
实施例2
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其配方 为：
低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素300IU
海藻糖粉 8％
麦芽糖粉 6％
糖粉 48％
淀粉 35％
明胶粉 2％
硬脂酸镁 1％
实施例3
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其配方 为：
低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素1000IU
海藻糖粉 8％
麦芽糖粉 8％
糖粉 46％
淀粉 35％
明胶粉 2％
硬脂酸镁 1％
实施例4
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其配方 为：
低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素3000IU
海藻糖粉 10％
麦芽糖粉 8％
糖粉 44％
淀粉 35％
明胶粉 2％
硬脂酸镁 1％
实施例5
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片，其配方 为：
低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素10000IU
海藻糖粉 12％
麦芽糖粉 10％
糖粉 45％
淀粉 30％
明胶粉 2％
硬脂酸镁 1％
本发明的一种低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片的制备方 法，是实施例1-5的冻干粉末直接压片工艺，其制备过程如下。
(1)、取明胶粉在0℃以下粉碎，过100目筛。
(2)、将糖粉与淀粉按配方重量配比称重、混匀。
(3)、将配方量海藻糖和麦芽糖加适量蒸馏水溶解，加入配方量的低 剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素原液，混匀，得干扰素浆。
(4)、将干扰素浆在搅拌下加入到上述糖粉与淀粉的混合物中，适当 稀释至成含固体成分量约为45-50％的混合浆。
(5)将上述混合浆在-35-30℃温度下，冷冻干燥15-20小时，水分控制 在2-5％，得干扰素冻干粉。
(6)在上述干扰素的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经 12-16目筛混合，得冻干粉末。
(7)将干扰素冻干粉末，在室温下直接压成园片状，得低剂量重组人 α-2b(IFN-α-2b)干扰素口含片。
(8)经质量检测，包装后得低剂量重组人α-2b(IFN-α-2b)干扰素口 含片成品。