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1、(10)授权公告号 CN 1620302 B (45)授权公告日 2011.04.27 CN 1620302 B *CN1620302B* (21)申请号 02828280.9 (22)申请日 2002.11.15 02075695.3 2002.02.21 EP A61K 31/565(2006.01) A61K 31/519(2006.01) A61K 31/714(2006.01) A61P 15/18(2006.01) A61P 5/30(2006.01) (73)专利权人 拜耳先灵医药股份有限公司 地址 德国柏林 (72)发明人 赫尔曼扬蒂杰曼科林格本宁克 (74)专利代理机构 永新。
2、专利商标代理有限公司 72002 代理人 过晓东 WO 0124772 A,2001.04.12, 权利要求书、 实 施例 1、 5. CN 1300218 A,2001.06.20, 权利要求书、 说 明书第 3 页 5-28 行 . 刘国卿 . 药理学 1. 中国医药科技出版 社 ,2000,280-282、 307-318. 陈新谦、 金有豫 . 新编药物学 14. 人民卫 生出版社 ,1998,399-400. Webb, James LNutritional effects of oral contraceptive use. A reviewJ. Reprod. Med25 4.1。
3、980,25(4),150-6. Kornberg,-A Segal,-R Theitler,-J Yona,-R Kaufman,-S.Folic acid deficiency, megaloblastic anemia and peripheralpolyneuropathy due to oral contraceptivesIsr-J-Med-Sci.25 3.1989,25(3),142-5. 曾志雄 汤佩莲.药源性维生素缺乏.广东药 学 6.2001,(6),16-18. (54) 发明名称 包含一种或多种甾族化合物、 一种或多种四 氢叶酸成分以及维生素 B12 的药物组合物 (。
4、57) 摘要 本发明涉及一种用于雌性哺乳动物激素避孕 方法或激素替代疗法的包含多个口服剂量单位 的药剂盒。该药剂盒包括至少 10 个口服剂量， 这些剂量包括至少 1g 一种或多种选自雌激素 和孕激素的甾族化合物 ； 至少 0.1mg 一种或多 种选自下组的四氢叶酸成分 ： (6S)- 四氢叶酸、 5- 甲基 -(6S)- 四氢叶酸、 5- 甲酰基 -(6S)- 四 氢叶酸、 10- 甲酰基 -(6R) 四氢叶酸、 5， 10- 亚甲 基 -(6R)- 四氢叶酸、 5， 10- 次甲基 -(6R)- 四氢 叶酸、 5- 亚胺甲基 -(6S)- 四氢叶酸、 这些叶酸的 药物学可接受的盐以及谷氨酰衍。
5、生物 ； 以及至少 0.1mg维生素B12。 本发明另一方面涉及一种激素 避孕法， 该方法包括对雌性哺乳动物每天至少口 服给药一次一个或多个含有甾族化合物的剂量单 位， 并且该剂量单位中还含有至少 0.1mg 一种或 多种前述四氢叶酸成分和至少0.1mg维生素B12。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2004.08.23 (86)PCT申请的申请数据 PCT/NL2002/000741 2002.11.15 (87)PCT申请的公布数据 WO2003/070255 EN 2003.08.28 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 韦轶 (19)中华人民共和国国。
6、家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 8 页 CN 1620302 B1/1 页 2 1. 一种用于雌性哺乳动物激素避孕法或激素替代疗法的药剂盒， 该药剂盒包含至少 10 个口服剂量单位， 这些剂量单位包括 ： a)10-40g 的乙炔雌二醇 ； b)0.2-15mg 的一种或多种选自以下组中的四氢叶酸成分 ： (6S)- 四氢叶酸、 5- 甲 基 -(6S)- 四氢叶酸、 5- 甲酰基 -(6S)- 四氢叶酸、 10- 甲酰基 -(6R) 四氢叶酸、 5， 10- 亚甲 基 -(6R)- 四氢叶酸、 5， 10- 次甲基 -(6R)- 四氢叶酸、 5- 亚胺甲基 -(6。
7、S)- 四氢叶酸、 这些四 氢叶酸的药物学可接受的盐以及这些四氢叶酸的谷氨酰衍生物 ； 以及 c)0.2-20mg 的维生素 B12。 2. 如权利要求 1 所述的药剂盒， 其中该药剂盒包含一个或多个包含一种或多种所述含 量的四氢叶酸成分和维生素 B12， 但不含有孕激素或雌激素的剂量单位。 3. 如权利要求 2 所述的药剂盒， 其中该药剂盒包含 3 到 8 个包含一种或多种所述含量 的四氢叶酸成分和维生素 B12， 但不含有孕激素或雌激素的剂量单位。 4. 如权利要求 1-3 之一所述的药剂盒， 其中该一种或多种四氢叶酸成分选自 5- 甲酰 基 - 四氢叶酸、 5- 甲基 - 四氢叶酸以及这。
8、些酸的药物学可接受的盐类和这些叶酸的谷氨酰 衍生物。 5. 如权利要求 4 所述的药剂盒， 其中所述一种或多种四氢叶酸成分选自 5- 甲酰 基-(6S)-四氢叶酸、 5-甲基-四氢叶酸以及这些四氢叶酸酸的药物学可接受的盐类与这些 四氢叶酸的谷氨酰衍生物。 6.如权利要求1-3之一所述的药剂盒， 其中所述剂量单位包含10到30g的乙炔雌二 醇。 7. 如权利要求 1-3 和 5 之一所述的药剂盒， 其中所述一种或多种四氢叶酸成分选自 5- 甲酰基 -(6S)- 四氢叶酸、 5- 甲酰基 -(6S)- 四氢叶酸的药物学可接受的盐类以及 5- 甲 酰基 -(6S)- 四氢叶酸的谷氨酰衍生物。 8. 。
9、如权利要求 1-3 和 5 之一所述的药剂盒， 其中所述剂量单位含有至少 3mg 的维生素 B6。 权 利 要 求 书 CN 1620302 B1/8 页 3 包含一种或多种甾族化合物、 一种或多种四氢叶酸成分以 及维生素 B12 的药物组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种用于雌性哺乳动物激素避孕方法或激素替代疗法的包含多个口 服剂量单位的药剂盒。该药剂盒由包含一种或多种选自雌激素和孕激素的甾族化合物、 一 种或多种四氢叶酸成分及维生素 B12 的至少十种剂量单位组成。 0002 本发明的其他方面涉及一种用于雌性哺乳动物的激素避孕方法和一种激素替代 疗法， 上述方法包含向雌性哺乳动物每日。
10、至少一次口服给药一种或多种剂量单位以提供有 效量的甾族化合物从而抑制排卵和 / 或预防或抑制性腺功能减退症的症状， 其中该剂量单 位还包含一种或多种四氢叶酸成分和维生素 B12。 背景技术 0003 叶酸的损耗与特别是用于激素避孕或激素替代疗法时的持续口服给药激素制 剂 有 关 (Martindale， The Complete Drug Reference，Healthcare SeriesVol.111， expiration date3/2002)。 一些报道还提到在服用口服避孕药的患者中维 生素 B12 水平降低 ( 如 Martindale)。 0004 WO99/53910 记述了。
11、一种含有叶酸的药物组分， 该组合物含有一种口服避孕或者激 素替代组分。 这些组合物的目的是用于为患有用叶酸可治疗的疾病或患上该疾病的风险增 加的患者提供叶酸的方法。WO99/53910 声明在孕妇中纠正低叶酸水平需要最少 2 个月， 而 其储备仅能维持几周之少。 其中还提到在停止服用口服避孕药不久之前或在验孕实验呈阳 性不久之后补充叶酸可能不足以对成长中的胎儿提供最佳的保护。其进一步地声明， 口服 避孕药的服用者中叶酸水平的降低给那些在停止服药3到6个月内怀孕的服用者带来额外 的风险。 0005 如 WO99/53910 中所述， 叶酸与口服避孕药或激素替代组合物的联合用药具有能 够帮助口服避。
12、孕药及激素替代组合物服用者预防叶酸缺乏的优点。 0006 然而， 叶酸与口服避孕药和激素替代组合物结合能够掩盖维生素 B12 缺乏的症状 如巨红细胞性贫血， 因此带来严重的健康风险。伴随维生素 B12 缺乏所见的血液异常可以 由单独应用叶酸进行治疗。然而， 由维生素 B12 缺乏引起的神经精神异常将不能得到纠正， 而且事实上有可能恶化。例如， 患有由叶酸缺乏引起的巨红细胞性贫血的患者服用叶酸将 掩盖早期症状， 使得在后期出现神经症状如共济失调、 感觉错乱 ( 联合系统病 )。 0007 维生素 B12 缺乏是一种多系统疾病， 其临床表现迥异， 并存在于美国人口总数的 0.4中。维生素 B12 。
13、缺乏的症状包括重症贫血， 表现为例如血细胞比容的降低或血红蛋白 的减少， 伴随有巨红血细胞， 或周围神经病和 / 或共济失调的神经症状。所见的血液异常是 由细胞内叶酸的缺乏所致。因为许多在 DNA 和 RNA 合成中的基本酶促反应都需要叶酸， 且 血清中叶酸 (5- 甲酰基四氢叶酸 ) 的形式必须通过维生素 B12 依赖性酶蛋氨酸合酶代谢为 四氢叶酸才可以被与 RNA- 和 DNA- 相关的酶利用。 0008 叶酸缺乏症在人群中的发病率未知， 但被认为通常发生于不同程度酒精中毒的 说 明 书 CN 1620302 B2/8 页 4 人、 患有吸收不良或营养不良的人、 应用激素避孕药的女性、 孕。
14、妇以及一些癌症患者。治疗 或预防叶酸缺乏症的常见方法是口服叶酸。为了缓解或预防叶酸缺乏症的症状， 叶酸必须 经过许多步骤被代谢为具有代谢活性的形式。被吸收以后， 通过叶酸还原酶与二氢叶酸还 原酶， 叶酸被还原为二氢叶酸继而四氢叶酸 (THF)。这两种酶都需要 NADPH( 烟酸依赖性 ) 作为辅因子。然后， 丝氨酸与吡哆醛 -5 - 磷酸酯结合把羟甲基基团传递至 THF。结果生成 5， 10- 亚甲基四氢叶酸和甘氨酸。该分子极为重要， 因为它是具有代谢活性并参与激素高 半胱氨酸代谢的 5- 甲基四氢叶酸， 以及次甲基四氢叶酸 (methylidynetetrahydrofolate) ( 参与。
15、嘌呤合成 ) 的前体。次甲基四氢叶酸还独立作用于构成 DNA 的胸腺嘧啶的侧链的生 成。 研究证实， 叶酸的口服生物利用度变化很大。 有文献报道对肌肉注射反应正常的个体对 叶酸的肠道摄取不良。已知口服叶酸到其活性代谢物的代谢过程受种种生理的、 营养的以 及药物学的因素影响。特别地， 已知叶酸还原成 THF 受外界因素如应用激素避孕药和某些 药物 ( 如甲氨喋呤、 氟脲嘧啶 (5-florouracil)、 柳氨磺胺嘧啶、 二苯乙内酰脲、 甲氧苄啶、 乙胺嘧啶以及磺胺类药物 ) 的妨碍。因此， 为应用激素避孕药的女性补充叶酸具有如下缺 点 (a) 此方法不足以恢复正常的血清中的叶酸水平以及 (b。
16、) 更重要地， 由于叶酸代谢的个 体差异， 这种补充的效果在个体和个体之间都不相同。 发明内容 0009 本发明的主要目的是在激素避孕药方法以及激素替代疗法中避免上述的不良结 果而实现为维生素 B12 缺乏患者补充叶酸的好处。发明者发现可以通过在口服避孕法或激 素替代疗法中共同服用四氢叶酸和维生素 B12 来有效并可靠地达到该目的。 0010 此外， 在本发明方法中， 叶酸缺乏症的预防是通过服用选自下组中的四氢叶酸有 效并可靠地实现 ： (6S)- 四氢叶酸、 5- 甲基 -(6S)- 四氢叶酸、 5- 甲酰基 -(6S)- 四氢叶酸、 10- 甲酰基 -(6R) 四氢叶酸、 5， 10- 亚。
17、甲基 -(6R)- 四氢叶酸、 5， 10- 次甲基 -(6R)- 四氢叶 酸、 5- 亚胺甲基 -(6S)- 四氢叶酸、 这些叶酸的药物学可接受的盐以及谷氨酰衍生物。跟叶 酸不同， 上述四氢叶酸的生理效应可预测且可靠， 因为其不受外界因素如特别是同时服用 口服避孕药的影响。 具体实施方式 0011 因此， 本发明一方面涉及一种用于雌性哺乳动物激素避孕法或激素替代疗法中 的药剂盒。该药剂盒包括至少 10 个口服剂量单位， 这些剂量单位包括至少 1g 一种或 多种选自雌激素和孕激素的甾族化合物 ； 至少 0.1mg 一种或多种选自以下组中的四氢叶 酸成分 ： (6S)- 四氢叶酸、 5- 甲基 。
18、-(6S)- 四氢叶酸、 5- 甲酰基 -(6S)- 四氢叶酸、 10- 甲酰 基-(6R)四氢叶酸、 5， 10-亚甲基-(6R)-四氢叶酸、 5， 10-次甲基-(6R)- 四氢叶酸、 5-亚胺 甲基 -(6S)- 四氢叶酸、 这些叶酸的药物学可接受的盐以及谷氨酰衍生物 ； 以及至少 0.1mg 维生素 B12。 0012 贯穿本文件的 “叶酸” 一词包含叶酸以及叶酸的盐类。同样地，“四氢叶酸” 一词指 四氢叶酸以及其盐类。在本发明特别优选的实施方案中， 该一种或多种四氢叶酸成分选自 5- 甲酰基 - 四氢叶酸 ( 亚叶酸 )、 5- 甲基 - 四氢叶酸以及这些酸的药物学可接受的盐类和 谷。
19、氨酰衍生物。更优选地， 该一种或多种四氢叶酸成分选自亚叶酸以及其药物学可接受的 说 明 书 CN 1620302 B3/8 页 5 盐和谷氨酰衍生物。最优选地， 该四氢叶酸成分为亚叶酸。 0013 亚叶酸 (5- 甲酰基 - 四氢叶酸或甲酰四氢叶酸 ) 用于几种疾病的治疗剂中已久。 其实例包括甲氨蝶呤化疗毒性的抢救以及与氟脲嘧啶协同作用以治疗不同的癌症。 其还用 于治疗急性贫血。高剂量 ( 例如， 50mg/ 天 ) 的 5- 甲基 - 四氢叶酸取得了用于治疗抑郁症 和其它神经病的专利 ( 授予 Le Grazie 的 EP382019 和 EP388827， 1990 ； 以及授予 Le G。
20、reca 的 EP482493， 1992)。 0014 维生素 B12 一词用以表示钴类咕啉类化合物， 特别是钴胺素组。这组化合物中最 常用的是氰钴胺素， 并且因此维生素 B12 一词有时也用以表示氰钴维生素。在本说明书中， 维生素 B12 一词应该表征其包括所有氰钴胺素组中所有钴类咕啉类的广义涵义， 其具体地 包括氰钴胺素、 羟钴胺、 甲钴胺和硝基钴胺素。本发明包括应用维生素 B12 本身和根据本方 法应用的能够在体内释放维生素 B12 的维生素 B12 前体， 以及特别是就缓解维生素 B12 缺 乏的症状来说与维生素 B12 表现出相同的体内功效的维生素 B12 体内代谢产物 ( 如与多。
21、肽 的结合物 )。 0015 维生素 B12 缺乏可能发生在患有肠吸收问题 ( 吸收不良 ) 和几种其他病症的不健 康个体中。它也可由应用某些药物引起。并且维生素 B12 缺乏在严格的素食者和素食者中 并不常见。 0016 适用于本发明剂量单位中的雌激素的实例包括乙炔雌二醇、 雌醇甲醚、 quinestranol、 雌二醇、 雌酮、 雌烷 (estran)、 雌三醇、 结合型马雌激素及它们在以本发明方 法应用时能够在体内释放出类似的雌激素的前体药物。 0017 可适用于本发明剂量单位中的孕激素包括左炔诺孕酮、 诺孕酯、 炔诺酮、 地屈孕 酮、 屈螺酮、 3- 羟基去氧孕烯、 3- 酮去氧孕烯 。
22、( 依托孕烯 )、 17- 去乙酰基诺孕酯、 19- 去 甲孕酮、 乙酰氧基孕烯醇酮、 烯丙雌醇、 阿那孕酮、 氯地孕酮、 环丙孕酮、 地美孕酮、 去氧孕 烯、 地诺孕素、 二氢孕酮、 地美炔酮、 炔孕酮、 炔诺醇二醋酸酯、 氟孕酮醋酸酯、 gastrinon、 孕二烯酮、 孕三烯酮、 羟甲孕酮、 羟孕酮、 利奈孕酮 ( lynostrenol)、 美屈孕酮、 甲羟孕 酮、 甲地孕酮、 美仑孕酮、 诺美孕酮、 炔诺酮 ( norethisterone 炔诺酮 )、 异炔诺酮、 炔诺 孕酮 ( 包括 d- 炔诺孕酮和 dl- 炔诺孕酮 )、 诺孕烯酮、 normethisterone、 孕酮、 。
23、奎孕醇、 (17)-17- 羟基 -11- 亚甲基 -19- 去甲孕 -4， 15- 二烯 -20- 炔 -3- 酮、 替勃龙、 曲美孕酮、 苯乙酮缩二羟孕酮、 nestorone、 普美孕酮、 17-羟基孕酮酯、 19-去甲-17羟基孕酮、 17-乙 炔基 - 睾酮、 17- 乙炔基 -19- 去甲 - 睾酮、 d-17- 乙酸基 -13- 乙基 -17- 乙炔 基 -gon-4- 烯 -3- 酮肟以及这些化合物的前体。优选的用于孕激素相的孕激素选自包含左 炔诺孕酮、 诺孕酯、 炔诺酮、 屈螺酮、 地屈孕酮及其当以本发明方法应用时能够在体内释放 出类似的孕激素的前体药物。 0018 本发明药。
24、剂盒优选包含至少 10 个口服剂量单位， 它们包括 2g 到 30mg 一种或多 种甾族化合物、 0.2 到 15mg 一种或多种四氢叶酸成分以及 0.2 到 20mg 维生素 B12。适宜的 口服剂量单位的实例包括片剂和胶囊剂。它们可以含有赋形剂如粘合剂 ( 如羟丙基甲基纤 维素、 聚乙烯吡咯烷酮、 其它纤维素材料和淀粉 )、 稀释剂 ( 如乳糖和其它糖类、 淀粉、 磷酸 二钙和纤维素材料)、 崩解剂(如淀粉聚合物和纤维素材料)和润滑剂(如硬脂酸盐和滑石 粉 )。 0019 本发明药剂盒适合采取含有多个口服剂量单位的容器或条板的形式。 如果是条板 说 明 书 CN 1620302 B4/8 。
25、页 6 形式， 每日 ( 或其它周期性的 ) 剂量以适当顺序排列以便服用。在一优选实施方案中， 本发 明提供一种用于连续每日服用的药剂盒， 该药剂盒由含有多个剂量单位的药包组成。 0020 本发明药剂盒适用于不同的口服避孕法。 一种众所周知的口服避孕方案使用在整 个给药周期内含有定量雌激素和孕激素的所谓单阶段制剂。 更新型的制剂二或三阶段制剂 具有不同水平的雌激素和孕激素 ； 一般地含有在整个给药周期内水平相对固定的雌激素和 逐步增加的孕激素。单、 二以及三阶段避孕药通常称为复合避孕法。 0021 事实上所有复合避孕法的共同点是它们都基于具有 7 天无需服药的间歇期的方 案， 在该间歇期内出现。
26、撤退出血、 模拟正常月经的症状。这样， 21 天时间服用激素然后代以 7 天不服用激素的间歇期。 0022 作为上述避孕法的替代方法， 提出了所谓的序贯法。典型的序贯避孕法包含两个 阶段， 即一个只服用雌激素不服用孕激素的阶段和另一个结合服用雌激素和孕激素的阶 段。最早的序贯法， 如上述复合避孕法， 同样具有 7 天不用服药的间歇期。新近， 提出了不 包含这种不服药 ( 或服用安慰剂 ) 期的序贯法， 即雌激素在整个给药期间服用而仅在部分 周期内结合服用孕激素。WO95/17895(Ehrlich 等 ) 描述了此类不间断的序贯法。 0023 口服避孕法的另一个不间断连续给药的实例是所谓的连续。
27、结合法， 该方法在多于 28 天、 尤其是 2 个月以上的期间结合服用雌激素和孕激素。口服避孕法的又一个不间断连 续给药的实例是孕激素单独法， 该方法在多于 28 天、 尤其是 2 个月以上的期间连续服用孕 激素而不服用雌激素。 0024 当本发明药剂盒用于具有不服用甾族化合物的间歇期的避孕法时， 优选在该间歇 期间继续服用四氢叶酸成分和维生素B12(以及其他任选的维生素， 如维生素B6)。 因此， 上 述药剂盒优选包含一种或多种剂量单位， 优选3到8个剂量单位， 其中包含一种或多种本文 所述含量的四氢叶酸成分和维生素 B12 但实际上不含有孕激素或雌激素。 0025 研究发现， 与在每个 (。
28、4 周 ) 周期内间断几天服药的治疗方案相比， 连续、 不间断 地服用一种或多种四氢叶酸成分和维生素 B12 对于预防和治疗其一种或全部两种成分的 缺乏更有效。因此， 在优选实施方案中， 该方法主要包括在最少 40 天， 优选最少 90 天的时 间间隔内连续服用一种或多种四氢叶酸成分和维生素 B12( 及其他任选的维生素如维生素 B6)。在另一优选的实施方案中， 该方法包括 3-8 天的间歇期， 在该期间服用一种或多种四 氢叶酸成分和维生素 B12 而不服用雌激素或孕激素。如上所述， 即使在避孕方案 ( 如在复 合避孕法中 ) 需要在特定周期内不服用雌激素或孕激素的情况下， 连续不间断地服用四。
29、氢 叶酸成分和维生素 B12 也是有利的。 0026 不具有不服药间歇期(或服用安慰剂)的避孕法比具有这种间歇期的方法更有可 能导致叶酸的损耗。 因此， 本发明的优势在不具有定期的如4周不服药间歇的口服 避孕方法中得以凸显。 类似地， 本发明为使用连续不间断服用甾族化合物、 特别是与孕激素 联合应用的雌激素的激素替代疗法提供了重要的帮助。 相应地， 在一个优选的实施方案中， 本发明药剂盒中所有的剂量单位都含有所述含量的一种或多种甾族化合物、 一种或多种四 氢叶酸成分和维生素 B12， 即本发明药剂盒不含有任何安慰剂。 0027 本发明另一方面涉及一种激素避孕法， 该方法包括对雌性哺乳动物每天至。
30、少口服 一次一种或多种含有甾族化合物的剂量单位以提供有效量的甾族化合物以抑制排卵， 并且 其中剂量单位还含有至少 0.1mg 一种或多种四氢叶酸成分和至少 0.1mg 维生素 B12。 说 明 书 CN 1620302 B5/8 页 7 0028 本发明的又一方面涉及用于近绝经期、 绝经期或绝经后期雌性哺乳动物的激素替 代疗法， 该方法包括向雌性动物每日口服给药至少一次一种或多种含有甾族化合物的剂量 单位从而提供有效量的甾族化合物以预防或抑制性腺功能减退症的症状。其中， 该剂量单 位还含有至少 0.1mg 一种或多种四氢叶酸成分和至少 0.1mg 维生素 B12。 0029 用于上述方法的甾族。
31、化合物优选选自雌激素和孕激素。 适用的雌激素和孕激素的 实例如上所述。 优选地， 雌激素选自以下组中 ： 乙炔雌二醇、 17-雌二醇、 estetrol以及它 们的前体。 孕激素优选选自以下组中 ： 左炔诺孕酮、 诺孕酯、 炔诺酮、 屈螺酮、 地屈孕酮、 曲美 孕酮以及它们的前体。 0030 由于乙炔雌二醇对血清中的叶酸浓度具有显著的抑制作用， 在结合服用乙炔雌二 醇与四氢叶酸和维生素 B12 时凸显出本发明的优势。乙炔雌二醇用于迄今为止销售的几乎 所有口服避孕药中。 在本发明特别优选的实施方案中， 剂量单位包含3到40g、 优选10到 30g 乙炔雌二醇。 0031 共同加入四氢叶酸成分和维。
32、生素 B12 的主要目的是预防或治疗缺乏这两种维生 素中的任一种。叶酸缺乏症的原因一般是长期应用上述甾族化合物。因此， 优先服用该剂 量单位以提供治疗有效量的一种或多种叶酸成分， 从而预防或治疗叶酸缺乏症。本发明方 法对预防或抑制由长期应用上述甾族化合物引起的叶酸缺乏症特别有效。 优选同样服用维 生素 B12 以提供治疗有效量的维生素 B12 从而预防或治疗维生素 B12 缺乏症。 0032 维生素缺乏症通常通过测定血清水平来确诊。正常的血清维生素 B12 水平为 211-911pg/ml， 低于100pg/ml的水平确定为预示着临床显著的缺乏。 然而， 血清维生素B12 水平是确诊维生素 B。
33、12 缺乏相对不灵敏的方法， 因为只有 50临床确诊为维生素 B12 缺乏 的病人具有低于 100pg/ml 的水平， 40为 100-200pg/ml， 以及至少 5-10在 200-300 之 间。2.5没有任何维生素 B12 缺乏症状的受检者的血清维生素 B12 水平低这一事实使诊 断变得更加复杂。 0033 正常的血清叶酸水平为约 2.8ng/ml， 低于 2.8ng/ml 的水平预示着有可能为临 床显著的缺乏。然而， 如同维生素 B12 血清中水平， 血清叶酸水平是相对不灵敏的方法， 因为仅有 50-75的叶酸缺乏的患者血清叶酸水平在 2.8ng/ml 以下。高半胱氨酸 (HC， h。
34、omocystein)、 丙氨酸丁氨酸硫醚 (CT)、 甲基丙二酸 (MMA) 以及 2- 甲基柠檬酸 (2-MCA) 灵敏的血清代谢物分析的进展使得能够研究代谢物水平与维生素缺乏症之间的关系。 (Stabler 等， (1987)Anal.Biochem.162 ： 185-196 ； Stabler 等， (1986)J.Clin.Invest.77 ： 1606-1612 ； Stabler 等， (1988)J.Clin.Invest.81 ： 466-474)。 0034 研究发现升高的血清 HC 和 MMA 水平可临床用于功能性细胞内维生素 B12 和叶 酸缺乏的检验， 其中升高的。
35、 HC 水平伴随维生素 B12 和叶酸的缺乏， 以及升高的 MMA 水 平伴随维生素 B12 的缺乏 (Allen 等， (1990)Am.J.Hematol.34 ： 90-98 ； Lindenbaum 等， (1990)Am.J.Hematol.34 ： 99-107 ； Lindenbaum 等， (1988)N.Engl.J.Med.318 ： 1720-1728 ； Beck(1991)in Neuropsychiatric Consequences of Cobalamin Deficiency， Mosby YearBook36 ： 33-56 ； Moelby等， J Int。
36、ern Med(1990)228 ： 373-378 ； Ueland和Refsum(1989) J.Lab.Clin.Med.114 ： 473-501 ； Pennypacker 等， J AmGeriatr Soc(1992)40 ： 1197-1204)。 升高的 CT 水平可见于两种缺乏中， 并且在维生素 B12 缺乏时 2-MCA 水平升高。 0035 在本发明方法的优选实施方案中， 给高半胱氨酸、 丙氨酸丁氨酸硫醚、 甲基丙二酸 说 明 书 CN 1620302 B6/8 页 8 和 / 或 2- 甲基柠檬酸血清水平升高的雌性动物服用能够显著减少至少一种上述物质的治 疗有效量的一。
37、种或多种四氢叶酸成分和维生素B12。 在特别优选的实施方案中， 本发明方法 使上述全部物质恢复至正常血清水平。 0036 本发明方法优选包含一种为雌性动物提供至少连续 18 天日剂量的给药方案 ： 0037 从 2g 到 30mg 一种或多种甾族化合物 ； 0038 从 0.2 到 15mg 一种或多种四氢叶酸成分 ； 以及 0039 从 0.2 到 20mg 维生素 B12。 0040 在另一优选实施方案中， 本发明方法包含一种为雌性动物提供至少连续 18 天日 剂量的给药方案， 该每日剂量包含与3-40g乙炔雌二醇相当的雌激素和/或与30-750g 左炔诺孕酮相当的孕激素。 0041 如前。
38、文所述， 本发明优点突出显示在特别是在激素替代疗法或连续不间断服用一 种或多种甾族化合物的口服避孕法中。因此， 本发明方法优选主要包含在至少 40 天、 优选 至少 90 天时间间隔内连续服用含有甾族化合物的剂量单位。 0042 “连续” 一词用于服用一种或多种有效成分时是指该一种或多种有效成分间隔相 对规律的时间服用， 并且没有 ( 治疗学上 ) 显著的中断。自然地， 不影响本发明方法整体效 果的短期中断可以存在， 并且事实上这种偏差为本发明所包括。 在优选的实施方案中， 更多 从算术角度看来， 一种给药方案， 如果其两次连续服药之间的间隔不长于其平均服药间隔 的 3.5 倍， 则认为该给药。
39、方案是连续的。进一步更优选地， 上述最长间隔不长于平均间隔的 2.5 倍。 0043 同维生素B12缺乏类似， 维生素B6(吡哆素)缺乏也导致血液及神经精神异常。 维 生素 B6 为血红素合成的第一步所需， 且在氨基酸代谢中的氨基转移反应中、 在去羧基作用 以及刺激神经的胺类如组胺、 酪胺、 五羟色胺和 - 氨基丁酸的合成中起重要作用。维生素 B6 缺乏的临床症状包括小红细胞性血红蛋白过少性贫血、 显著的皮肤病变如皮炎和肢端 疼痛、 肌无力， 以及种种神经精神异常包括应激性增高、 惊厥、 抑郁症和意识错乱 (Newberne 和 Conner(1989)， Clinical Biochemis。
40、try ofDomestic Animals， Academic Press， San Diego， pp.796-834)。 0044 人体通常含有40-150mg维生素B6。 每日需要摄入1-2mg。 怀孕期间通常建议摄取 更高量的维生素B6。 正常的饮食就可以满足该升高的需求， 但对26名美国孕妇的饮食分析 表明只有一名孕妇摄取了多于每天2.5mg的维生素B6。 在美国和瑞典进行的研究(Hamfelt 和 Tuveno， ClinChem Acta(1972)41 ： 287 以 及 Lumeng 等， Am J Clin Nutr(1976)29 ： 1376-1383) 建议孕妇宜于。
41、每日摄入约 10mg 维生素 B6。据信， 维生素 B6 需求的增长可以由 该维生素对胎儿发育的重要作用解释。 该重要作用可通过由人类孕妇脐带取出的血液中维 生素 B6 的浓度高于母亲血液中维生素 B6 的浓度这一发现证明。并且， 在大鼠中进行的实 验性研究 (Davis 等， Science(1970)169 ： 1329) 表明维生素 B6 缺乏可导致先天性畸形。 0045 研究同样证明 (Martindale) 口服避孕药可导致一些使用者维生素 B6 缺乏。因此 显而易见， 口服避孕药使用者面临产生维生素 B6 缺乏的危险。特别是在停止服用口服避孕 药不久即怀孕的女性中， 维生素B6缺乏。
42、的风险更为显著， 尤其是因为维生素B6血清水平恢 复到正常需要很长时间。 0046 因此， 在本发明特别优选的实施例中， 该剂量单位还含有至少 3mg 维生素 B6， 更优 说 明 书 CN 1620302 B7/8 页 9 选为 5 到 250mg 维生素 B6。本文全文应用的 “维生素 B6” 一词包括任意能够在体内转化为 吡哆醛、 磷酸吡哆醛或吡哆醛盐的成分。服用后 24 小时内在体内至少 10 摩尔转变为吡 哆醛、 磷酸吡哆醛或吡哆醛盐的维生素 B6 组分特别有用。在活的人类或动物细胞内， 磷酸 吡哆醛和磷酸吡哆胺作为 100 多种生物反应的辅酶， 是维生素 B6 的生物活性形式。 0。
43、047 已知， 叶酸、 维生素B12和维生素B6缺乏的诊断通常基于血清/血浆中的浓度。 普 遍接受的是成年人类若血清浓度低于 2.8ng/ml 则缺乏叶酸。类似地， 如果维生素 B12 血清 浓度低于 211pg/ml， 维生素 B6 血浆浓度 ( 测定吡哆醛 -5- 磷酸盐 ) 低于 5ng/ml 则诊断为 缺乏维生素 B12 和维生素 B6。这些基准值已由圣地亚哥加利福尼亚大学的临床实验室发 表。这些临床实验室所提倡的测定叶酸、 维生素 B12 和维生素 B6 水平的方法是 ： 0048 叶酸 ： 化学发光竞争法， CPTCode82746 0049 维生素 B12 ： 化学发光竞争法， 。
44、CPTCode82746 0050 维生素 B6 ： 放射性免疫测定法， CPTCode84207 0051 本发明进一步由下述实施例加以说明。 0052 实施例 0053 实施例 1 0054 制备一种包含 28 枚药片的条板状的避孕药药剂盒， 每枚药片重 0.25 克。在 28 枚 药片中， 21 枚含有组合物 A 和 7 枚含有组合物 B。组合物 A 和 B 如下所示 ： 0055 组合物 A 组合物 B 0056 乙炔雌二醇 30g 0057 左炔诺孕酮 150g 0058 叶酸 0.5mg 0.5mg 0059 维生素 B12 1mg 1mg 0060 维生素 B6 50mg 50m。
45、g 0061 赋形剂 余额 余额 0062 实施例 2 0063 制备一种用于序贯避孕法的含有 28 枚药片的条板状而成的药剂盒。该药剂盒含 有 14 枚组合物 A 药片和 14 枚组合物 B 药片。组合物 A 和 B 如下所示 ： 0064 组合物 A 组合物 B 0065 乙炔雌二醇 30g 30g 0066 左炔诺孕酮 150g 0067 叶酸 0.5mg 0.5mg 0068 维生素 B12 1mg 1mg 0069 维生素 B6 50mg 50mg 0070 赋形剂 余额 余额 0071 实施例 3 0072 40 名女性随机分为 2 组， 每组 20 名女性。在 4 个月时间内， 。
46、一组使用实施例 1 所 述的避孕药试剂盒。 在同样长时间内， 另一组使用同样的试剂盒， 但该试剂盒中的药片不含 有叶酸或维生素 B12 或维生素 B6。 0073 试验开始前及结束后， 用前述圣地亚哥加利福尼亚大学临床实验室发表于 2002 说 明 书 CN 1620302 B8/8 页 10 年的方法测定叶酸、 维生素 B12 和维生素 B6 的血清浓度。研究发现， 在实验过程中， 接受不 含叶酸、 维生素 B12 或维生素 B6 的口服避孕药的一组其上述物质的血清浓度没有显著变 化。然而， 另外一组的大部分女性的叶酸、 维生素 B12 和 / 或维生素 B6 水平有显著提高。 0074 在。
47、实验开始前发现一些女性缺乏叶酸、 维生素 B12 和 / 或维生素 B6。患有这种缺 乏症并且接受增加了叶酸、 维生素B12和维生素B6的口服避孕药的女性在实验结束时发现 不再缺乏任意一种上述的 3 种物质。 0075 实施例 4 0076 用实施例 2 中所述的药剂盒代替实施例 1 中所述的药剂盒重复实施例 4 的试验。 0077 实验过程中发现， 接受不含叶酸、 维生素 B12 或维生素 B6 的口服避孕药的一组女 性， 其血清叶酸、 维生素 B12 和维生素 B6 水平没有显著变化。实验结束时， 发现另外一组的 大部分女性的叶酸、 维生素 B12 和 / 或维生素 B6 水平有显著提高。 0078 在实验开始前发现缺乏叶酸、 维生素 B12 和 / 或维生素 B6 并且接受增加了叶酸、 维生素B12和维生素B6的口服避孕药的女性， 在实验结束后已经不在缺乏任何一种上述的 三种物质。 说 明 书 。