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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610948242.2 (22)申请日 2016.10.26 (71)申请人 曹礼静 地址 402460 重庆市荣昌县昌元镇文武街1 号 (72)发明人 曹礼静 袁丽花 廖开燕 郭贵琼 冷长友 程依林 段佐华 杨勇 郭宗荣 蒋中兵 (74)专利代理机构 北京同恒源知识产权代理有 限公司 11275 代理人 赵荣之 (51)Int.Cl. A61K 36/804(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (54)发明名称 一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物及其 。
2、提取物 (57)摘要 本发明涉及一种防治鸡大肠杆菌病的中药 组合物及其提取物， 属于兽药技术领域， 该中药 组合物按重量份计由以下组分组成： 大黄0-8份、 黄芩5-8份、 十大功劳5-8份、 鬼针草5-8份、 地锦 草5-8份、 马齿苋5-8份、 白术3份、 生地黄1份； 由 该中药组合物可进一步制得提取物； 该中药组合 物配伍独特、 疗效确切、 毒副作用低、 成本低廉。 动物实验结果显示， 能够有效防止鸡大肠杆菌 病， 从而为目前治疗鸡大肠杆菌病提供了更好的 备选药物。 权利要求书1页 说明书6页 CN 106421094 A 2017.02.22 CN 106421094 A 1.一种防。
3、治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计由以下组分组成： 大 黄0-8份、 黄芩5-8份、 十大功劳5-8份、 鬼针草5-8份、 地锦草5-8份、 马齿苋5-8份、 白术3份、 生地黄1份。 2.如权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计 由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩8份、 十大功劳8份、 鬼针草5份、 地锦草5份、 马齿苋5份、 白术 3份、 生地黄1份。 3.如权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计 由以下组分组成： 大黄0份、 黄芩5份、 十大功劳5份、 鬼针草8份、 地锦草8份、 马齿苋8份、。
4、 白术 3份、 生地黄1份。 4.如权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计 由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩5份、 十大功劳8份、 鬼针草8份、 地锦草8份、 马齿苋8份、 白术 3份、 生地黄1份。 5.如权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计 由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩5份、 十大功劳5份、 鬼针草5份、 地锦草5份、 马齿苋5份、 白术 3份、 生地黄1份。 6.如权利要求1所述的一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 其特征在于， 按重量份计 由以下组分组成： 大黄8份、 黄芩8份、 十大功劳8份、 鬼针。
5、草8份、 地锦草8份、 马齿苋8份、 白术 3份、 生地黄1份。 7.由权利要求1至6任一项所述的防治鸡大肠杆菌病的中药组合物制得的提取物。 8.如权利要求7所述的提取物， 其特征在于， 采用以下方法制得： 按照中药组合物的组 成称取各味药材， 加水煎煮3次， 合并煎煮液， 95100下蒸发浓缩至浓度为0.5-1.0g/ml， 即制得提取物。 9.如权利要求8所述的提取物， 其特征在于， 采用以下方法制得： 按照中药组合物的组 成称取各味药材， 加入相当于8味药材总重量20倍量的水， 浸泡25-30min， 煎煮1.5h， 过滤， 收集滤液， 药渣再加入相当于8味药材总重量20倍量的水， 煎煮。
6、40min， 过滤， 收集滤液， 药渣 再加入相当于8味药材总重量20倍量的水， 煎煮30min， 过滤， 收集滤液， 合并三次滤液， 100 下蒸发浓缩至浓度为1.0g/ml， 即制得提取物。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106421094 A 2 一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物及其提取物 技术领域 0001 本发明属于兽药技术领域， 具体涉及一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物及其提 取物。 背景技术 0002 禽大肠杆菌病(avian colibacillosios)是由致病性大肠杆菌引起的。 其主要的 病型有胚胎和幼雏的死亡、 急性败血症、 气囊炎、 心包炎、 输卵管炎、 。
7、肠炎、 腹膜炎、 全眼球炎 和大肠杆菌性肉芽肿等。 由于常和霉形体病合并感染， 又常继发于其他传染病(如新城疫、 禽流感惑、 传染性支气管炎、 巴氏杆菌病等)， 使治疗十分困难。 大肠杆菌感染鸡后， 鸡只主 要表现为精神萎靡不振、 采食减少或不食、 离群呆立或蹲伏不动、 冠髯呈青紫色、 眼虹膜呈 灰白色、 视力减退或失明、 羽毛松乱、 肛门周围羽毛粘有粪便、 绿色或黄白色稀粪、 关节肿 大、 不愿动或跛行、 肝肿大并在表面形成一层易剥落的白色薄膜， 肠道粘膜出血和溃疡、 心 包发炎， 产蛋鸡感染后， 表现为腹腔积有腹水和卵黄。 0003 近年来抗生素作为饲料添加剂已屡见不鲜， 多年来的研究和应。
8、用表明， 抗生素在 一定程度上可以有效的预防和治疗腹泻、 痢疾， 促进畜禽的生长， 这给畜牧业生产者带来了 巨大的经济利益， 但是也存在相当多的问题， 比如耐药性的产生， 畜禽产品中的药物残留， 引起畜禽体内正常菌群失调等。 现代养殖大多是集约化养殖， 上述问题无论哪一种都会给 养殖业造成巨大的危害。 0004 中药是在中兽医基础理论指导下， 用于预防和治疗各种动物疾病。 中药有许多无 可比拟的优势， 如稳定、 高效、 毒副作用小、 多靶点作用等， 并且我国中草药资源丰富， 成本 低。 现代研究表明中药中抑菌或抗菌的成分很多， 可以作用于细菌繁殖的不同阶段和多个 代谢环节， 且不容易产生耐药性。
9、， 具有改变、 抑制， 甚至消除细菌的耐药性的作用， 中药制剂 极大可能用于高效、 低毒的耐药抑制剂的研制。 发明内容 0005 有鉴于此， 本发明的目的在于： (1)提供一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物； (2) 提供一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物的提取物。 0006 为达到上述目的， 本发明提供如下技术方案： 0007 1、 一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 按重量份计由以下组分组成： 大黄0-8 份、 黄芩5-8份、 十大功劳5-8份、 鬼针草5-8份、 地锦草5-8份、 马齿苋5-8份、 白术3份、 生地黄 1份。 0008 优选的， 按重量份计由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩8。
10、份、 十大功劳8份、 鬼针草5 份、 地锦草5份、 马齿苋5份、 白术3份、 生地黄1份。 0009 优选的， 按重量份计由以下组分组成： 大黄0份、 黄芩5份、 十大功劳5份、 鬼针草8 份、 地锦草8份、 马齿苋8份、 白术3份、 生地黄1份。 0010 优选的， 按重量份计由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩5份、 十大功劳8份、 鬼针草8 说 明 书 1/6 页 3 CN 106421094 A 3 份、 地锦草8份、 马齿苋8份、 白术3份、 生地黄1份。 0011 优选的， 按重量份计由以下组分组成： 大黄5份、 黄芩5份、 十大功劳5份、 鬼针草5 份、 地锦草5份、 马齿苋5份、。
11、 白术3份、 生地黄1份。 0012 优选的， 按重量份计由以下组分组成： 大黄8份、 黄芩8份、 十大功劳8份、 鬼针草8 份、 地锦草8份、 马齿苋8份、 白术3份、 生地黄1份。 0013 2、 由所述的防治鸡大肠杆菌病的中药组合物制得的提取物。 0014 优选的， 所述提取物采用以下方法制得： 按照中药组合物的组成称取各味药材， 加 水煎煮3次， 合并煎煮液， 95100下蒸发浓缩至浓度为0.5-1.0g/ml， 即制得提取物。 0015 优选的， 所述提取物采用以下方法制得： 按照中药组合物的组成称取各味药材， 加 入相当于8味药材总重量20倍量的水， 浸泡25-30min， 煎煮1。
12、.5h， 过滤， 收集滤液， 药渣再加 入相当于8味药材总重量20倍量的水， 煎煮40min， 过滤， 收集滤液， 药渣再加入相当于8味药 材总重量20倍量的水， 煎煮30min， 过滤， 收集滤液， 合并三次滤液， 100下蒸发浓缩至浓度 为1.0g/ml， 即制得提取物。 0016 本发明的有益效果在于： 本发明主要以清热解毒、 凉血止痢中药为主， 辅以燥湿健 脾， 养阴凉血中药组成一种防治鸡大肠杆菌病的中药组合物， 并制得其提取物。 该中药组合 物配伍独特、 疗效确切、 毒副作用低、 成本低廉。 动物实验结果显示， 能够有效防止鸡大肠杆 菌病， 从而为目前治疗鸡大肠杆菌病提供了更好的备选。
13、药物。 具体实施方式 0017 下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。 0018 实施例1 0019 单味中药提取液抑菌效果测试 0020 1、 试验方法 0021 (1)培养基的制备 0022 用电子天平精确称取需要制备的培养基， 按照说明书加入一定量的蒸馏水溶解于 锥形瓶中， 121条件下灭菌15min。 若制备液体培养基， 则待冷却后放置于37生化培养箱 中过夜， 检查确认无杂菌后方可放置在4冰箱中备用； 若制备固体培养基， 则待冷却至大 约5060时， 倒入直径为10cm的培养平皿中， 厚度约4mm， 冷却后再放入于37生化培养 箱培养1824h， 检查确认无杂菌后方可放置在4冰箱。
14、中备用。 0023 (2)单味中药提取液的制备 0024 将十大功劳、 黄芩、 大黄、 马齿苋、 地锦草、 鬼针草等6味中药各准备50g。 分别加入 1L水， 浸泡30min， 煎煮1.5h， 过滤， 收集滤液， 药渣再加入1L水， 煎煮40min， 过滤， 收集滤液， 药渣再加入1L水， 煎煮30min， 过滤， 收集滤液， 合并3次滤液， 100下蒸发浓缩至100ml (0.5g/ml)， 再取50ml第一次的浓缩液浓缩至25ml(1.0g/ml)， 即分别制得单味药材的提取 液， 提取液以1000r/min离心15min， 取上清液， 调pH值为7.5， 最后在105下灭菌后4保存 备用。
15、。 0025 (3)菌液的制备 0026 将菌株用划线法接种到普通琼脂平板上， 37生化培养箱培养1824h， 勾取单个 菌落， 用灭菌的生理盐水稀释校正菌液浊度至0.5麦氏单位， 即菌液浓度为1.5108CPU/ 说 明 书 2/6 页 4 CN 106421094 A 4 mL， 现配现用。 0027 (4)药敏试验 0028 采用牛津杯法及药敏纸片法对大肠杆菌进行6味中药的药敏试验， 观察并记录试 验结果。 0029 牛津杯法： 采取无菌操作将灭菌的不锈钢小管(内径6nm、 外径8nm、 高10nm的圆形 小管)， 放在培养基上， 轻轻地加压， 使其与培养基的之间零空隙。 每个平板可以放。
16、4个。 待放 好后， 分别向各牛津杯中滴加一定数量的各种药液， 勿使其外溢， 并在小管处标记各种中药 的名称。 0030 药敏纸片法： 自制直径6mm的滤纸片药敏纸片， 高压灭菌烘干并浸泡于浓缩液中过 夜， 60烘干， 无菌保存。 0031 2、 试验结果 0032 表1 单味中药提取液的抗菌效果 0033 0034 由表1可知， 本发明所选中药均有一定的抑菌效果， 采用牛津杯法抑菌效果优于药 敏纸片法， 且浓度为1.0g/ml的提取液抗菌效果较0.5g/ml的提取液抗菌效果好。 大肠杆菌 对大黄、 地锦草高度敏感， 对黄芩、 十大功劳中度敏感。 0035 实施例2 0036 防治鸡大肠杆菌病。
17、的中药组合物提取液抑菌效果测试 0037 1、 试验方法 0038 (1)培养基的制备同实施例1。 0039 (2)培养基的制备同实施例1。 0040 (3)中药组合物提取液的制备 0041 按照表2中各中药组合物的配方， 即分别按照各组方中各药材的质量份比称取各 味药材， 使中药组合物总重量为120g， 然后加入2.4L水， 浸泡30min， 煎煮1.5h， 过滤， 收集滤 液， 药渣再加入2.4L水， 煎煮40min， 过滤， 收集滤液， 药渣再加入2.4L水， 煎煮30min， 过滤， 收集滤液， 合并三次滤液， 100下蒸发浓缩至240ml(0.5g/ml)， 再取120ml第一次的浓。
18、缩液 浓缩至60ml(1.0g/ml)， 分别制得五种配方的中药组合物的提取液， 提取液以1000r/min离 心15min， 取上清液， 调pH值为7.5， 最后在105下灭菌后4保存备用。 0042 表2 中药组合物配方 说 明 书 3/6 页 5 CN 106421094 A 5 0043 0044 0045 (4)药敏试验 0046 采用牛津杯法进行中药复方的药敏试验， 步骤同实施例1中牛津杯法， 观察并记录 试验结果。 0047 2、 试验结果 0048 表3 防治鸡大肠杆菌病的中药组合物提取液的抗菌效果 0049 0050 由表3可知， 当提取液浓度为0.5g/ml时， 大肠杆菌对。
19、组方III、 IV高度敏感， 对组方 I、 II、 V中度敏感； 当提取液浓度为1.0g/ml时， 大肠杆菌对组方I、 II、 III、 IV、 V中度敏感。 根 据抑菌圈大小综合考虑， 当提取液浓度为1.0g/ml时， 对大肠杆菌的抑制效果更好。 0051 实施例3 0052 自拟防治鸡大肠杆菌病的中药组合物对人工感染鸡大肠杆菌病的防治作用 0053 1、 试验方法 0054 (1)模型建立 0055 试验鸡胸肌注射大肠杆菌菌液0.3ml/只(菌液浓度为109个/ml)， 若鸡出现精神迟 钝、 垂翅、 呆立、 食欲减少、 拉稀和呼吸困难； 鸡尸体剖检后， 心包膜和肝脏有淡黄色纤维素 薄膜， 。
20、很容易从脏器表面剥离， 心脏壁变薄， 心包液增多， 有纤维素渗出， 气囊混浊等典型的 特行性病变， 并分离出相应的大肠杆菌， 即证明造模成功。 0056 (2)试验分组与处理 0057 试验鸡饲养到18日龄， 检查体况无异常现象后， 将其随机分为模型组、 空白对照 组、 中药复方I、 II、 III、 IV、 V组、 阳性药物(氨苄西林钠)对照组， 每组各10只。 除空白对照组 外， 其余各组鸡胸肌注射菌液0.3ml/只。 待造模鸡只出现大肠杆菌病的典型症状以后， 模型 组、 空白组灌服生理盐水、 阳性药物组肌肉注射氨苄西林钠， 各中药复方组灌服相应中药组 说 明 书 4/6 页 6 CN 1。
21、06421094 A 6 合物提取液0.5ml/只， 每天上、 下午各1次， 连用7d， 具体见表4。 每天定时观察并记录鸡只的 精神状况、 饮食、 粪便、 死亡等临床表现等。 0058 表4 试验分组及处理 0059 0060 (3)疗效判定标准 0061 表5 中药组合物提取液疗效判定标准 0062 0063 2、 试验结果 0064 (1)造模结果 0065 造模5d后试验鸡出现精神迟钝、 垂翅、 呆立、 食欲减少、 拉稀和呼吸困难； 鸡尸体剖 检后， 心包膜和肝脏有淡黄色纤维素薄膜， 很容易从脏器表面剥离， 心脏壁变薄， 心包液增 多， 有纤维素渗出， 肝脏质地变脆， 易碎， 气囊混浊。
22、增厚有淡黄色渗出物等病变； 革兰氏染色 镜检观察到大肠杆菌， 并从肝脏、 心脏分离出大肠杆菌， 证明试验造模成功。 0066 (2)治疗结果 0067 表6 各试验组治疗结果 0068 说 明 书 5/6 页 7 CN 106421094 A 7 0069 由表6可知， 中药复方III组治疗鸡大肠杆菌病效果较好， 经治疗后治愈率为 71.4， 死亡率为14.3， 有效率为14.3。 0070 中草药具有残毒低， 能够调节机体的免疫机能和不易产生耐药性等优点， 在畜禽 传染病防治中， 可解决抗生素药物残留和耐药性的问题， 生产无公害的绿色产品， 在畜牧业 生产中发挥着越来越重要的作用。 本发明基于以上试验结果， 可以得出结论： 按组方III(即 中药组合物按重量份计： 大黄5份、 黄芩5份、 十大功劳8份、 鬼针草8份、 地锦草8份、 马齿苋8 份、 白术3份、 生地黄1份)制得的中药组合物对鸡大肠杆菌病具有较好的防治效果。 0071 最后说明的是， 以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管通 过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述， 但本领域技术人员应当理解， 可以在 形式上和细节上对其作出各种各样的改变， 而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。 说 明 书 6/6 页 8 CN 106421094 A 8 。