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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510529008.1 (22)申请日 2015.08.26 (71)申请人 国药集团健康产业研究院有限公司 地址 430000 湖北省武汉市东湖开发区高 新大道666号A20栋 申请人 中国医药工业研究总院 (72)发明人 吴春珍 文雯 陈静 袁淑清 周斌 刘英 胡海峰 (74)专利代理机构 上海衡方知识产权代理有限 公司 31234 代理人 卞孜真 林琳 (51)Int.Cl. A61K 36/535(2006.01) A61K 36/8994(2006.01) A61。
2、P 19/06(2006.01) A23L 33/00(2016.01) A23L 2/39(2006.01) A61K 36/899(2006.01) A61K 36/489(2006.01) A61K 36/488(2006.01) (54)发明名称 一种紫苏叶提取物及其组合物在制备降低 血尿酸的药物或食品中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种中药材紫苏叶及其中药组 合物的新应用， 即通过抑制黄嘌呤氧化酶活性和 促进尿酸从尿液中排泄两种机理， 而降低体内血 中尿酸的浓度， 达到降尿酸和治疗痛风的目的， 因此紫苏叶提取物及其中药组合物可以应用于 制备预防和治疗高尿酸血症或痛风等疾病的药 物或。
3、食品。 本发明的紫苏叶提取物及组合物中的 其他中药材均可以使用水或含水乙醇为溶剂， 加 热提取， 提取1-3次， 除去药渣， 减压浓缩去除溶 剂， 喷雾干燥或冷冻干燥成为粉末， 加辅料制备 成中药制剂或食品， 具体如胶囊、 片剂、 口服液或 固体饮料等剂型。 权利要求书1页 说明书11页 CN 106474185 A 2017.03.08 CN 106474185 A 1/1 页 2 1.一种紫苏叶或紫苏叶提取物在制备降低血尿酸的药物或食品中的应用。 2.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于所述食品包括普通食品、 保健食品以及特 殊医学用途配方食品。 3.根据权利要求 1 所述的应用， 。
4、其特征在于其应用于制备治疗或预防高尿酸血症或痛 风的药物或食品。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于 ： 所述紫苏叶提取物采用如下方法制备 ： 以 紫苏叶为原料， 通过溶剂提取、 浓缩与干燥， 得到所述紫苏叶提取物。 5.根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 使用的所述溶剂为水或含水乙醇， 所述溶 剂与紫苏叶的重量份数比为 5-50:1。 6.根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于， 所述溶剂为含水乙醇时， 含水乙醇与紫苏 叶的重量份数比为 30-50:1 ； 含水乙醇的体积百分含量为 10 -90 ； 优选为 20 -70。 7.根据权利要求 4 所述的应用， 其特征在于。
5、， 所用提取的方式为加热回流、 微波或超声 辅助提取 ； 所述提取时间每次为 1-4 小时， 优选为 2 小时 ； 提取次数为 1-3 次， 优选提取 2 次。 8.一种含有紫苏叶提取物的组合物的应用， 其特征在于 ： 所述组合物由如下方法制 备 ： 将包括紫苏叶、 薏米仁、 槐米和葛根的原料， 通过溶剂混合提取、 浓缩与干燥， 得到所述 组合物。 9.根据权利要求 8 所述的组合物的应用， 其特征在于 ： 所述原料还包括玉米须。 10.根据权利要求 8 或 9 所述的组合物的应用， 其特征在于 ： 按照重量百分含量计， 所述组合物包含紫苏叶 10 40， 薏米仁 10 50， 槐米 20 5。
6、0， 葛根 10 40， 玉米须 0 30。 11.根据权利要求 8 所述组合物的应用， 其特征在于， 所述组合物通过将所有原料粉碎 后一锅煮混合提取的方式制备或将每种原料单独提取后混合的方式制备 ； 所用提取的方式 为加热回流、 微波或超声辅助提取 ； 所述提取时间每次为 1-4 小时， 优选为 2 小时 ； 提取次 数为 1-3 次， 优选提取 2 次 ； 使用的所述溶剂为水或含水乙醇， 所述溶剂与原料的重量份数 比为 5-50:1。 12.根据权利要求 8 所述组合物的应用， 其特征在于， 所述溶剂为含水乙醇时， 含水乙 醇的体积百分含量为10-90， 优选为20-70， 所述含水乙醇与。
7、所述原料的重量份数 比为 30-50 ： 1。 13.根据权利要求 1-8 中任一项所述紫苏叶或紫苏叶提取物的应用或根据权利要求 9-12 所述的组合物的应用， 其特征在于， 通过加入药剂学或食品中允许的辅料， 将所述紫苏 叶或紫苏叶提取物或含有紫苏叶提取物的组合物制成为相应的药物制剂或食品的固体饮 料。 14.根据权利要求 13 所述的应用， 其特征在于， 所述药物制剂为片剂、 胶囊、 口服液。 权 利 要 求 书 CN 106474185 A 2 1/11 页 3 一种紫苏叶提取物及其组合物在制备降低血尿酸的药物或 食品中的应用 技术领域 0001 本专利涉及一种降低血液中尿酸的紫苏叶提取。
8、物及其组合物， 特别是应用于临床 高尿酸血症或高尿酸人群的预防或治疗用途。 背景技术 0002 紫苏 ( 学名 ： Perilla frutescens)， 古名荏， 又名苏、 白苏、 桂荏 (尔雅 )、 荏子、 赤苏、 红苏、 香苏、 黑苏、 白紫苏、 青苏、 野苏、 苏麻、 苏草、 唐紫苏、 皱叶苏、 鸡苏、 臭苏、 大紫 苏、 假紫苏、 水升麻、 野藿麻、 聋耳麻、 孜珠、 兴帕夏噶(藏语)等， 是唇形科紫苏属下唯一种， 一年生草本植物。紫苏叶也叫苏叶， 有解表散寒、 行气和胃的功能， 主治风寒感冒、 咳嗽、 胸 腹胀满， 恶心呕吐等症。食疗作用， 具有散寒解表， 宣肺止咳， 理气和中，。
9、 安胎， 解毒。 0003 文献报道紫苏具有解热作用， 抑菌作用， 升血糖作用， 对血凝的作用， 促进肠蠕动， 镇静作用等。 但至今没有报道紫苏叶及其提取物具有抑制次黄嘌呤氧化酶活性和体内降尿 酸活性及其应用。 0004 槐米或槐花广义是为豆科植物槐 (Sophora japonica L.) 的干燥花蕾及花。夏季 花未开放时采收其花蕾， 称为 “槐米” ； 花开放时采收， 称为 “槐花” 。槐米主产于河南、 山东、 山西、 陕西、 安徽、 河北、 江苏等地， 近年来宁夏、 甘肃等地也已有规模， 越南也有大面积的栽 种。性微寒， 味苦 ； 凉血止血， 清肝泻火 ； 用于便血、 痔血、 血痢、 。
10、崩漏、 吐血、 衄血、 肝热目赤、 头痛眩晕。槐米含芸香甙芦丁 (rutin)、 三萜皂甙 (0.4 )、 白桦脂醇 (betulin)、 槐花二 醇 (sophoradiol)、 葡萄糖、 葡萄糖酸醛 (glucuronic acid)， 还含有槐花米甲素 (14 ) 槐 花米乙素 (1.25 ) 和槐花米丙素 (0.35 ) 甲素是和芸香苷不同的黄酮类化合物， 乙素和 丙素为甾醇类化合物。 0005 葛根 (Lobed Kudzuvine Root)， 为豆科植物野葛的干燥根， 习称野葛。秋、 冬二季 采挖， 趁鲜切成厚片或小块 ； 干燥。甘、 辛， 凉。有解肌退热， 透疹， 生津止渴， 。
11、升阳止泻之功。 常用于表证发热， 项背强痛， 麻疹不透， 热病口渴， 阴虚消渴， 热泻热痢， 脾虚泄泻。 葛根含异 黄酮成分葛根素、 葛根素木糖甙、 大豆黄酮、 大豆黄酮甙及 - 谷甾醇、 花生酸， 又含多量淀 粉 ( 新鲜葛根中含量为 19 20 )。 0006 薏苡仁， 中药名。为禾本科植物薏苡 Coix lacryma-jobi L.var.mayuen(Roman.) Stapf 的干燥成熟种仁。秋季果实成熟时采割植株， 晒干， 打下果实， 再晒干， 除去外壳、 黄 褐色种皮和杂质， 收集种仁。性凉， 味甘、 淡 ； 具有健脾渗湿， 除痹止泻。薏米可用于治疗水 肿、 脚气、 小便不利。。
12、薏米含蛋白质 16.2， 脂肪 4.6， 糖类 79.2。 0007 高尿酸血症又称痛风 (gout)， 是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病， 其临床特点为高 尿酸血症。(hyperuricemia) 及由此而引起的痛风性急性关节炎反复发作、 痛风石沉积， 痛风石性慢性关节炎和关节畸形， 常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成。高 尿酸血症又称痛风 (gout)， 是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病， 其临床特点为高尿酸血症 (hyperuricemia) 及由此而引起的痛风性急性关节炎反复发作、 痛风石沉积， 痛风石性慢性 说 明 书 CN 106474185 A 3 2/11 页 4 关节炎和关。
13、节畸形， 常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成。 0008 黄嘌呤氧化酶是人体内重要的氧化酶， 主要参与核酸的代谢， 能催化次黄嘌呤生 成黄嘌呤， 再进一步生成尿酸和自由基。它由 1330 个氨基酸构成， 其氨基酸序列在鼠和人 之间具有 90的同源性， 由两个完全对称的结构单元构成。每一个结构单元为 145， 其催化 中心包括一个钼蝶呤中心、 两个铁硫中心和一个黄素腺嘌呤二核苷酸， 其中钼蝶呤中心 是黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸的关键位点。有效抑制 XOD 活性可减少黄嘌呤向尿酸 的转化， 从而可治疗高尿酸血症。 0009 痛风急性发病后应尽快给予药物治疗， 非甾体消炎药、 秋水仙碱。
14、、 糖皮质激素， 是 痛风性关节炎急性发作的一线治疗药物。 药物的选择取决于关节疼痛的程度和受累关节部 位。对于关节轻中度疼痛患者， 一个或几个小关节， 或 1-2 个大关节受累， 可选非甾体消炎 药、 秋水仙碱或糖皮质激素。 对关节重度疼痛患者， 多关节受累或12个大关节受累， 可联 合使用非甾体消炎药和秋水仙碱， 或糖皮质激素和秋水仙碱治疗。对于初始治疗无效的患 者可选用白介素 1 受体拮抗剂。抑制血尿酸合成的药物是通过抑制黄嘌呤氧化酶， 阻断次 黄嘌呤向黄嘌呤和尿酸转化， 从而降低血尿酸浓度， 减少尿酸盐在关节及其周围组织沉积， 最终减少痛风的发作。代表药物为别嘌呤醇和非布司他。别嘌呤醇。
15、 (allopurin01) 是竞争 性黄嘌呤氧化酶抑制剂， 早在20世纪60年代就被批准用于治疗痛风， 在临床上常作为降尿 酸的首选药物。 0010 尽管临床上已经开发多种治疗高尿酸血症的药物， 但这些药物均具有较大的副作 用， 临床应用受到一定限制 ； 从天然植物或中药材中发现新的治疗药物具有良好的发展前 景中国发明专利 CN104162063 报道一种治疗高尿酸血症的中药复方制剂及其制备方法， 以 天然中药龙胆草为主要原料 ； 中国专利 CN103372159A 报道一种具有降尿酸作用的薏米仁 提取物及其制备方法等。目前， 国内外文献没有报道紫苏提取物具有降血尿酸活性及其含 紫苏、 薏米。
16、仁、 葛根、 槐米和玉米须的中药制剂具有降低血尿酸和治疗痛风的用途。本研究 通过筛选体外黄嘌呤氧化酶抑制剂过程中发现紫苏提取物具有显著的酶抑制活性， 并进一 步发现其小鼠体内降尿酸的活性 ； 中药组合物筛选过程中发现紫苏、 薏米仁、 葛根、 槐米和 玉米须的组合物具有显著的降尿酸活性， 并在小鼠模型中获得验证， 证明单独紫苏叶提取 物或包括紫苏、 薏米仁、 葛根、 槐米和玉米须等的组合物均能够用于临床高尿酸血症的治疗 或高尿酸人群的食疗。 发明内容 0011 本发明的目的是提供传统中药材紫苏叶提取物及其中药组合物的新药理作用， 并 制备含紫苏叶提取物或含紫苏叶的中药组合物各种剂型。 0012 。
17、本发明的发明人在体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂过程中发现紫苏叶提取物及其 中药组合物具有显著的黄嘌呤氧化酶抑制活性， 暗示其具有体内抑制血尿酸合成的功能， 并进一步使用小鼠体内模型证明其体内降低血尿酸的功能。 0013 本发明采用的技术方案如下 ： 0014 本发明提供一种紫苏叶或紫苏叶提取物在制备降低血尿酸的药物或食品中的应 用。 0015 其中， 所述食品包括普通食品、 保健食品以及特殊医学用途配方食品。 说 明 书 CN 106474185 A 4 3/11 页 5 0016 其中， 所述紫苏叶或紫苏叶提取物应用于制备治疗或预防高尿酸血症或痛风的药 物或食品。 0017 其中， 所述紫苏叶提。
18、取物采用如下方法制备 ： 以紫苏叶为原料， 通过溶剂提取、 浓 缩与干燥， 得到所述紫苏叶提取物。 0018 其中， 使用的所述溶剂为水或含水乙醇， 所述溶剂与紫苏叶的重量份数比均为 5-50:1。 0019 优选地， 所述溶剂为含水乙醇时， 含水乙醇与紫苏叶的重量份数比为 30-50:1 ； 含 水乙醇的体积百分含量为 10 -90 ； 优选为 20 -70。 0020 其中， 所用提取的方式为加热回流、 微波或超声辅助提取。 0021 优选地， 所述提取时间每次为1-4小时 ； 优选为2小时 ； 提取次数为1-3次， 优选提 取 2 次。 0022 本发明还提供一种含有紫苏叶提取物的组合物。
19、的应用， 所述组合物由如下方法制 备 ： 将包括紫苏叶、 薏米仁、 槐米和葛根的原料， 通过溶剂混合提取、 浓缩与干燥， 得到所述 组合物。 0023 优选地 , 所述原料还包括玉米须。 0024 优选地 , 按照重量百分含量计， 所述组合物包含紫苏叶 10 40， 薏米仁 10 50， 槐米 20 50， 葛根 10 40， 玉米须 0 30。 0025 其中， 所述组合物通过将所有原料粉碎后一锅煮混合提取的方式制备或将每种原 料单独提取后混合的方式制备 ； 所用提取的方式为加热回流、 微波或超声辅助提取 ； 0026 优选地， 所述提取时间每次为1-4小时， 优选为2小时 ； 提取次数为1。
20、-3次， 优选提 取 2 次 ； 使用的所述溶剂为水或含水乙醇， 所述溶剂与原料的重量份数比均为 5-50:1。 0027 更优选地， 所述溶剂为含水乙醇时， 含水乙醇的体积百分含量为 10 -90， 优选 为 20-70， 所述含水乙醇与所述原料的重量份数比为 30-50:1。 0028 其中， 通过加入药剂学或食品中允许的辅料， 将所述紫苏叶或紫苏叶提取物或含 有紫苏叶提取物的组合物制成为相应的药物制剂或食品的固体饮料。 0029 其中， 所述药物制剂为片剂、 胶囊、 口服液。 0030 本发明通过试验证明， 本发明的紫苏叶提取物具有显著抑制体外黄嘌呤氧化酶活 性和降低小鼠体内血尿酸的合成。
21、的药理活性 ； 含紫苏叶提取物的中药组合物不仅具有抑制 体内尿酸合成， 还能够利尿并促进体内尿酸排泄功效。 具体实施方式 0031 下面通过实施例的方式进一步说明本发明， 但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 均按照常规方法和条件， 或按照 商品说明书选择。如下实施例中的原料均为市售。 0032 实施例 1 0033 紫苏叶提取物胶囊的制备 0034 称取紫苏叶 100 克， 加水 500ml 矿泉水或去离子水， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小时， 取出提取液 ； 加 500ml 水再同样萃取 1 次， 合并萃取液， 减压浓缩至浆状物。
22、 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加 1硬脂酸， 装硬胶囊， 得到实施例 1 的紫苏叶提 说 明 书 CN 106474185 A 5 4/11 页 6 取物胶囊。 0035 实施例 2 0036 紫苏叶提取物胶囊的制备 0037 称取紫苏叶 50 克， 加水 1500ml 矿泉水或去离子水， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小时， 取出提取液 ； 加1500ml水再同样萃取1次， 合并萃取液， 减压浓缩至浆状物 ； 按照1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加 1硬脂酸， 装硬胶囊， 得到实施例 2 的紫苏叶提 取物胶囊。 0038。
23、 实施例 3 0039 紫苏叶提取物片剂的制备 0040 称取 50 克紫苏叶， 加 2500ml 矿泉水或去离子水， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小 时， 取出萃取液 ； 加 2500ml 矿泉水或去离子水同样再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆 状物， 按照 1:1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加崩解剂及其他辅料， 混合均匀， 制 粒， 压片， 得到实施例 3 的紫苏叶提取物片剂。 0041 实施例 4 0042 紫苏叶提取物胶囊的制备 0043 称取紫苏叶 100 克， 加水 500ml90乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小 时， 取出提取液 。
24、； 加 500ml90乙醇水溶液再萃取 1 次， 合并萃取液， 减压浓缩至浆状物 ； 按 照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加 1硬脂酸， 装硬胶囊， 得到实施例 4 的紫 苏叶提取物胶囊。 0044 实施例 5 0045 紫苏叶提取物片剂的制备 0046 称取50克紫苏叶， 加1500ml 90乙醇水溶液， 浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出萃取液 ； 再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆状物， 按照 1:1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加崩解剂及其他辅料， 混合均匀， 制粒， 压片， 得到实施例 5 的紫苏提取物 片剂。 0047 实施例。
25、 6 0048 紫苏提取物片剂的制备 0049 称取50克紫苏叶， 加1500ml 70乙醇水溶液， 浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出萃取液 ； 再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆状物， 按照 1:1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加崩解剂及其他辅料， 混合均匀， 制粒， 压片， 得到实施例 6 的紫苏叶提取 物片剂。 0050 实施例 7 0051 紫苏叶提取物固体饮料的制备 0052 称取 50 克紫苏叶， 加 2500ml 40乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 超声和微波辅助萃取 2 小时， 取出萃取液 ； 再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆状物， 按照 1:1。
26、 比例加入微晶纤 维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅料， 制粒， 装袋， 得到实施例 7 的紫苏叶提取物固体饮料。 0053 实施例 8 0054 紫苏叶提取物固体饮料的制备 0055 称取 50 克紫苏叶， 加 2500ml 20乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 超声和微波辅助萃取 说 明 书 CN 106474185 A 6 5/11 页 7 2 小时， 取出萃取液 ； 再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆状物， 按照 1:1 比例加入微晶纤 维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅料， 制粒， 装袋， 得到实施例 8 的紫苏叶提取物固体饮料。 0056 实施例 9 0057 紫苏叶提。
27、取物口服液的制备 0058 称取50克紫苏叶， 加2500ml 10乙醇水溶液， 浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出萃取液 ； 再提取一次， 合并提取液减压浓缩至浆状物， 按照 1:1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加崩解剂及其他辅料， 混合均匀， 制成口服液， 得到实施例 9 的紫苏叶提 取物口服液。 0059 实施例 10 0060 中药组合物胶囊的制备 0061 称取紫苏叶 10 克、 薏米仁 50 克， 槐米 20， 葛根 10 克， 玉米须 10 克， 加 500ml 矿泉 水或去离子水， 浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出提取液 ； 加500ml水再同样。
28、萃取1次， 合并后获得 950ml 萃取液， 减压浓缩至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加 1硬脂酸镁， 装硬胶囊， 得到实施例 10 的中药组合物胶囊。 0062 实施例 11 0063 中药组合物片剂的制备 0064 称取紫苏叶 10 克、 薏米仁 30 克， 槐米 20， 葛根 10 克， 玉米须 30 克， 加 1000ml20 乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小时， 取出提取液 ； 加 1000ml 20乙醇水溶液 再同样萃取 1 次， 合并萃取液， 减压浓缩至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘。
29、 干、 粉碎， 加崩解剂及其他辅料， 混合均匀， 制粒， 压片， 得到实施例 11 的中药组合物片剂。 0065 实施例 12 0066 中药组合物固体饮料 1 的制备 0067 称取紫苏叶 40 克、 薏米仁 10 克， 槐米 20， 葛根 20 克， 玉米须 10 克， 加 3000ml90 乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小时， 取出提取液 ； 加 3000ml 90乙醇水溶液再 同样萃取 1 次 ； 残渣再加 1500ml 90乙醇水溶液再同样萃取 1 次， 合并萃取液， 减压浓缩 至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅。
30、料， 制粒， 装袋， 得到 所述中药组合物固体饮料 1。 0068 实施例 13 0069 中药组合物口服液的制备 0070 称取紫苏叶 20 克、 薏米仁 10 克， 槐米 50， 葛根 20 克， 加 5000ml 70乙醇水溶液， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 2 小时， 取出提取液 4500ml 萃取液， 减压浓缩至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合， 制成实施例 13 的中药组合物口服液。 0071 实施例 14 0072 中药组合物固体饮料 2 的制备 0073 称取紫苏叶40克、 薏米仁10克， 槐米10， 葛根40克， 加水500ml 90乙醇水溶液， 。
31、浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出提取液 ； 加500ml 90乙醇水溶液再同样萃取1次 ； 残渣再加 500ml 90乙醇水溶液再同样萃取 1 次， 合并后获得 1350ml 萃取液， 减压浓缩至 浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅料， 制粒， 装袋， 制成实 施例 14 的中药组合物固体饮料 2。 说 明 书 CN 106474185 A 7 6/11 页 8 0074 实施例 15 0075 中药组合物固体饮料 3 的制备 0076 称取紫苏叶 30 克、 薏米仁 10 克， 槐米 50， 葛根 10 克， 加水 2000ml 60。
32、乙醇水溶 液， 浸泡2小时， 加热回流萃取2小时， 取出提取液 ； 加2000ml60乙醇水溶液再同样萃取1 次 ； 残渣再加 1000ml60乙醇水溶液再同样萃取 1 次， 合并后获得 1350ml 萃取液， 减压浓 缩至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅料， 制粒， 装袋， 制 成实施例 15 的中药组合物固体饮料 3。 0077 实施例 16 0078 中药组合物固体饮料 4 的制备 0079 称取紫苏叶 10 克、 薏米仁 50 克， 槐米 20， 葛根 20 克， 加水 500ml 90乙醇水溶 液， 浸泡 2 小时， 加热回流萃取 。
33、2 小时， 取出提取液 ； 加 500ml90乙醇水溶液再同样萃取 1 次 ； 残渣再加 500ml90乙醇水溶液再同样萃取 1 次， 合并后获得 1350ml 萃取液， 减压浓缩 至浆状物 ； 按照 1 ： 1 比例加入微晶纤维素， 混合、 烘干、 粉碎， 加其他辅料， 制粒， 装袋， 制成 实施例 16 的中药组合物固体饮料 4。 0080 实施例 17 0081 紫苏叶提取物及中药复合物的体外抑制黄嘌呤氧化酶活性 0082 1. 试剂配制 0083 配制 ： 70mM 磷酸缓冲液 (pH 6.5) ； 0.3mM 黄嘌呤溶液 (2.28mg 黄嘌呤溶解在 50ml 70mM 磷酸缓冲液中。
34、 ) ； 配制黄嘌呤氧化酶溶液 (0.01U/ml 在 70mM 磷酸缓冲液中 ) ； 1N HCL 溶液 (8.5ml 浓 .HCL 91.5ml 水中 )。 0084 阳性对照药 ： 别嘌醇 0085 其他药品 ： DMSO 溶液 0086 受试样品 ： 按实施例 1-16 制备。 0087 2. 给药溶液的配制测试样品溶液 : 将实施例 1-9 的样品 ( 含紫苏叶提取物 2mg 溶于 1ml DMSO， 配制成 2mg/ml 溶液。再用 PBS 缓冲液稀释 10 倍 (200g/ml), 得到含紫 苏叶提取物 200g/ml 的溶液。实施例 10-16 的样品取适量样品 2mg 溶于 。
35、1mlDMSO, 配制 成 2mg/ml 溶液 , 再用 PBS 缓冲液稀释 10 倍 (200g/ml), 得到含中药组合物 200g/ml 的溶液 ( 口服液冷冻干燥获得固体粉末， 称取 2mg)。阳性对照品溶液 ： 1mg 别嘌醇溶于 1ml DMSO， 再用 PBS 缓冲液稀释 180 倍后， 得到含别嘌醇 40mol/mL 的溶液。 0088 3. 步骤操作 ： 0089 使用 96 孔版进行酶反应， 依次取 35l 的 70mM 磷酸缓冲液、 50l 测试样品溶液 或阳性对照品溶液和 30l 酶溶液加入一个反应池， 阳性对照加别嘌呤溶液 ； 酶反应化合 物在 37孵育 15 分钟，。
36、 在加入 60l 黄嘌呤底物溶液， 在 25下反应 30 分钟， 加入 25l 1N HCL 终止反应。在 Bio-Tek 酶标仪读取 295nm 下各个反应池中溶液的吸光度数据。计算 各个样品的抑制率。 0090 按照公式计算提取物样品对 XOD 的抑制率。 0091 抑制率 ( ) (E标准品-E样品)/E标准品100 0092 4. 测定结果 ： 0093 表 1 紫苏叶提取物及中药组合物对黄嘌呤氧化酶体外活性抑制活性 ( 酶标法 ) 说 明 书 CN 106474185 A 8 7/11 页 9 0094 样品重量 ： 2mg抑制率 ( ) 别嘌呤 ( 阳性对照 )95 实施例 1 的。
37、紫苏叶胶囊65 0095 实施例 2 的紫苏叶胶囊60 实施例 3 的紫苏叶片剂61 实施例 4 的紫苏叶胶囊62 实施例 5 的紫苏叶片剂62 实施例 6 的紫苏叶片剂58 实施例 7 的紫苏叶固体饮料65 实施例 8 的紫苏叶固体饮料64 实施例 9 的紫苏叶口服液62 实施例 10 的中药组合物胶囊75 实施例 11 的中药组合物片剂78 实施例 12 的中药组合物固体饮料 177 实施例 13 的中药组合物口服液68 实施例 14 的中药组合物固体饮料 275 实施例 15 的中药组合物固体饮料 378 实施例 16 的中药组合物固体饮料 471 0096 结果表明， 紫苏叶及中药组合。
38、物各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出较 强的黄嘌呤氧化酶抑制活性， 比临床化药别嘌呤稍低。 0097 实施例 18 抑制尿酸合成动物模型 0098 1、 实验动物 ICR, 雄性， 体重 22g 左右。由上海西普尔 - 必凯实验动物有限公司提 供， 动物生产许可证号 ： SCXK( 沪 )2013-0016。 0099 2、 测试样品 0100 实施例 1-16 阳性对照药 ： 别嘌醇 0101 3、 仪器及试剂 说 明 书 CN 106474185 A 9 8/11 页 10 0102 全自动生化分析仪 ZY-260, 科华 0103 4、 给药溶液的配制 0104 测试样品溶液 : 。
39、将实施例 1-9 的样品配制成含紫苏叶提取物 75mg/ml 0.5纤维 素钠溶液 ； 将实施例 10-16 中药组合物配制成含 75mg/ml 中药组合物制剂的 0.5纤维素 钠溶液 0105 阳性对照品溶液 ： 别嘌醇 12.5mg/ml 的 0.5纤维素钠溶液 0106 5、 实验方法 ： 0107 小鼠分为模型组， 阳性药别嘌醇 (50mg/kg) 组， 以上样品组。每个小鼠腹腔注射次 黄嘌呤 1000mg/kg(0.2ml/10g)， 正常组注射水 ； 模型组灌胃等容积蒸馏水， 其他样品组给 予相应测试样品药液和阳性对照品溶液， 给药体积均为 0.2ml/10g， 各组灌胃 1 次 。
40、/d， 连续 5d。 0108 6、 血清尿酸测定 0109 小鼠禁食不禁水 16 小时， 末次给药 30min 后， 各组腹腔注射 HX(Hypoxanthlne， 次 黄嘌呤 ) 的水混悬液 (600mg/kg)， 注射体积均为 0.2mL/10g。注射 HX 45min 后摘眼球取血 0.5mL， 放置30分钟， 5000rpm),离心5min， 分离血清， 采用全自动生化分析仪及其原装配套 试剂测定血清尿酸浓度。 0110 表 2 紫苏叶提取物对 ip HX( 腹腔注射次黄嘌呤 ) 致高尿酸血症小鼠模型血清 UA( 尿酸 ) 的影响 0111 说 明 书 CN 106474185 A 。
41、10 9/11 页 11 0112 #p 0.01vs 正常组， *p 0.05， *p 0.01vs 模型组。 0113 结果表明， 紫苏叶及中药组合物的各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出 较强的小鼠体内降低血尿酸活性， 与模型均具有显著性差异， 比阳性药活性弱。 0114 实施例 19 利尿动物模型 0115 实验动物ICR,雄性， 体重22g左右。 由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供， 动物生产许可证号 ： SCXK( 沪 )2013-0016。 0116 2、 测试样品 0117 实施例 1-16 阳性对照药 ： 苯溴马隆 0118 3、 仪器及试剂 0119 全自动生化分析。
42、仪 ZY-260, 科华 0120 4、 给药溶液的配制 说 明 书 CN 106474185 A 11 10/11 页 12 0121 测试样品溶液 : 将实施例 1-9 的样品配制成含紫苏叶提取物 75mg/ml 0.5羧甲 基纤维素钠溶液 ； 将实施例 10-16 中药组合物配制成含 75mg/ml 中药组合物制剂的 0.5 羧甲基纤维素钠溶液 0122 阳性对照品溶液 ： 苯溴马隆 2.5mg/ml 的 0.5羧甲基纤维素钠溶液 0123 5、 实验方法 ： 0124 小鼠分为正常组、 模型组， 阳性药苯溴马隆 (50mg/kg) 组， 测试样品组。模型组、 阳性药组及测试样品组每个小。
43、鼠腹腔注射尿酸 250mg/kg(0.2ml/10g)， 正常注射同体积的 0.5羧甲基纤维素钠溶液 ； 模型组灌胃等容积 0.5纤维素钠溶液， 阳性药组罐胃苯溴马 隆， 其他样品组给予相应测试样品药液和阳性对照品溶液， 给药体积均为 0.2ml/10g， 各组 灌胃 1 次 /d， 连续 5d。 0125 6、 血清尿酸测定 0126 小鼠禁食不禁水16小时， 末次给药30min后， 各组腹腔注射尿酸的0.5羧甲基纤 维素钠混悬液(250mg/kg)， 注射体积均为0.2mL/10g。 注射尿酸60min后摘眼球取血0.5mL， 放置30分钟， 5000rpm),离心5min， 分离血清， 。
44、采用全自动生化分析仪及其原装配套试剂测 定血清尿酸浓度。 0127 表 3 紫苏叶提取物及中药组合物对腹腔注射尿酸致高尿酸血症小鼠模型血清 UA( 尿酸 ) 的影响 0128 说 明 书 CN 106474185 A 12 11/11 页 13 0129 #p 0.01vs 正常组， *p 0.05， *p 0.01vs 模型组。 0130 结果表明， 紫苏叶及中药组合物的各种提取方法制备提取物及各种剂型均表现出 较强的小鼠体内利尿生物活性， 与模型组相比均具有显著性差异， 比阳性药活性相当 ； 而且 中药组合物实施例较之紫苏叶实施例表现地更为优异。 说 明 书 CN 106474185 A 13 。