一种小桐子油脂多不饱和脂肪酸单离的方法 【技术领域】
本发明属于生物质能源转化技术领域， 主要涉及小桐子油脂中多不饱和脂肪酸 (PUFAs) 单离及尿素的回收利用方法。背景技术
小桐子油作为能源油脂产量丰富， 油脂中的不饱和脂肪酸 (UFAs) 的含量达到 75％， PUFAs 的含量达到 40％以上。其中， 具有潜在生理功效和医用药用价值的油酸和亚 油酸可将其广泛应用于运动食品、 营养保健品、 医药甚至化妆品等行业， 特别是高纯度的 PUFAs 可以应用于开发更高品味的精细化学品。目前利用小桐子油脂制备燃料油是小桐子 油脂研究应用的主要方面， 而对于小桐子油脂中不饱和脂肪酸的单离和尿素的回收利用的 研究甚少， 使得小桐子油脂在高附加值化学品的开发和利用上受到制约。
相比较多种不饱和脂肪酸分离方法， 低温冷冻结晶法 - 尿素包合法单离 PUFAs 具 有设备简单、 药品试剂便宜、 溶剂和尿素可回收再利用、 操作方法简单、 能比较完全地保留 PUFAs 营养和生理活性等特点， 是大规模单离各种 PUFAs 的理想方法， 所得的 PUFAs 纯度高。 专利 (CN1696261A) 介绍了一种富集黑加仑籽油中多不饱和脂肪酸及其酯化物的方法， 专 利中获得纯度 80 ～ 95％的产品所需的单离周期很长， 需要 11 ～ 36h， 耗能较大 ； 张或等在 包和周期为 10h 的条件下， 将松油酸的纯度提高了 70％ ； 胡小泓等采用浸出法和稀酸酸解 浸出法回收尿素包合物中脂肪酸。因此， 针对目前采用尿素包和法单离油脂中多不饱和脂 肪酸及其酯化物的工艺中仍存在需解决的两个方面 ： 1、 单离周期长， 能耗较大 ； 2、 对尿素 包合物中的尿素和脂肪酸回收工艺的研究甚少， 尿素包合物中含有大量的脂肪酸， 包和时 尿素用量较大， 对尿素后期的处理和利用还没有达到真正的环境友好。 发明内容
为了解决现有技术存在的单离周期长、 能耗大、 对尿素包合物没有利用的缺点， 本 发明提供了一种小桐子油脂多不饱和脂肪酸单离的方法， 单离周期短、 能耗低、 对尿素包合 物进一步处理， 提高利用率。
本发明的技术方案为 ： 一种小桐子油脂多不饱和脂肪酸单离的方法， 粗脂肪酸、 尿 素和甲醇经过加热溶解、 冷冻、 过滤分离得到尿素包合物和滤液， 滤液减压蒸馏得到的粘稠 固相物用石油醚萃取， 萃取相减压蒸馏经得到富集的淡黄色脂肪酸， PUFAs 单离过程中采用 预冷 - 冷冻分阶段包合的方法， 在冷冻前先在 0.5 ～ -5℃下预冷 1h， 然后再在 0.5 ～ -30℃ 下冷冻 2h ；
得到富集的淡黄色脂肪酸中 PUFAs 的纯度为 69.38 ～ 100 ％， PUFAs 的收率为 9.63 ～ 54.51％。
所述的尿素包合物经过处理回收其中的尿素和脂肪酸， 具体处理方法为 ： 取所述 的尿素包合物和甲醇、 甲苯按照质量比 1 ∶ 3 ∶ 3 的比例混合加热回流形成均相溶液后， 减 压蒸馏脱除甲醇和甲苯， 然后加入石油醚萃取脂肪酸， 抽滤， 所得固相为回收的尿素， 尿素回收率为 80.8％ ； 滤液减压蒸馏脱除石油醚及残余的甲苯， 回收得脂肪酸， 脂肪酸回收率为 95.89％。
所述的回收尿素再次与粗脂肪酸、 甲醇混合进行饱和和不饱和脂肪酸的分离反 应， 使用回收尿素进行包合后单离得到的产品脂肪酸得率为 21.20％， 脂肪酸中 PUFAs 纯度 为 91.65％， 收率为 39.96％。
所用原料粗脂肪酸为工业小桐子油脂皂化酸解得到的脂肪酸， 酸值 193mgKOH/ -1 g， 碘值 108g.(100g) ， 和甲醇混合均匀密封后， 先经过 0.5 ～ -5 ℃下预冷 1h， 然后再在 0.5 ～ -30℃下冷冻 2h 冷冻分离过滤得到原料粗脂肪酸。
所述的降温方式先从 55 ℃在空气中自然冷却到 30 ℃， 再以 -0.1 ℃ /s 的速度从 30℃降温至 -30℃后冷冻 2h 或者将冷却到 30℃的混合液迅速放入到已降温至 -30℃的恒温 反应浴中冷冻 2h。
有益效果 ：
1. 小桐子油脂肪酸原料来源丰富， 价格低廉， 脂肪酸中活性成分含量高。
2. 首次在低温冷冻结晶和尿素包和法分离前增加预冷操作， 可防止脂肪酸 - 甲醇 溶液和预浓缩脂肪酸 - 尿素 - 甲醇溶液瞬间处于过冷状态， 尿素还未来得及充分包合脂肪 酸就迅速生成细小不均匀晶核， 细碎不均匀晶体在过滤时会导致液相被包藏， 降低 PUFAs 的收率和脂肪酸得率。 3. 单离周期短， 低温冷冻结晶和尿素包和单离时间只需 3h 就能达到高纯度的 PUFAs 产品， 降低能耗。
4. 尿素的回收利用新方法， 在不加入水或稀酸的情况下回收脂肪酸和尿素， 解决 了尿素和水的排放问题， 环保无污染， 尿素可再次利用。
附图说明
图 1 为本专利的 PUFAs 单离工艺流程图。
图 2 为尿素回收利用工艺流程图。 具体实施方式
作为实验用油脂原料的小桐子油脂为市售 ； 甲醇、 尿素为分析纯。 分离所用脂肪酸 是通过小桐子油脂皂化酸化水解制得。
本发明采用低温冷冻结晶 - 尿素包合法单离小桐子油脂中 PUFAs， 并回收利用尿 素包合物中脂肪酸和尿素。包合过程分预冷和冷冻两个阶段， 反应条件易于控制 ； 原料、 试 剂可回收再利用， 反应体系能耗低、 成本低、 清洁无污染 ； 单离周期短， 产品纯度显著提高， 能保证一定的得率和收率， 并能很高程度上保留 PUFAs 的营养成分和生理功效 ； 回收并充 分利用尿素包合物中的脂肪酸和尿素，
整个单离和回收工艺中做到零排放， 对环境友好。
一种小桐子油脂多不饱和脂肪酸单离的方法， 如图 1 和 2 所示， 包括如下步骤 ：
A 采用低温冷冻结晶法预浓缩不饱和脂肪酸 (UFAs) ： 用原料粗脂肪酸为工业小桐 子油脂皂化酸解得到的脂肪酸， 酸值 193mgKOH/g， 碘值 108g.(100g)-1， 和甲醇混合均匀密 封后， 脂肪酸与甲醇的质量比为 1 ∶ 2 ～ 6， 然后采用低温冷冻结晶法先在 0.5 ～ -5℃下预冷 1h， 然后在 0.5 ～ -30℃下冷冻 2h， 通过冷冻分离饱和和不饱和脂肪酸， 再在冷冻条件下 1 大气压下过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇得原料粗脂肪酸， 以下简称脂肪酸 I， 主要 含有十五烷酸、 棕榈酸、 硬脂酸、 油酸、 亚油酸， 脂肪酸 I 中 UFAs 的纯度为 83.61 ～ 96.40％、 PUFAs 的纯度为 45.55 ～ 65.36％、 PUFAs 的收率为 54.34 ～ 67.78％。
B 按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素 ∶ m 甲醇 ＝ 1 ∶ 1 ～ 2.5 ∶ 4 ～ 8 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ～ -5℃下预冷 1h、 0.5 ～ -30℃下冷冻 2h， 进行尿素包合法单离 PUFAs。并在冷冻条件 下 1 大气压过滤， 得到滤液及尿素包合物， 滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中脂肪酸并过滤， 滤液经减压蒸馏回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸， 简称脂 肪酸 II， 主要含有成分 ： 少量饱和脂肪酸、 油酸及大部分亚油酸， 脂肪酸 II 中 PUFAs 纯度 69.38 ～ 100％， PUFAs 的收率为 9.63 ～ 54.51％， 脂肪酸 II 得率 4.68 ～ 38.20％， 脂肪酸 II 得率＝脂肪酸 II 质量 ×100/ 脂肪酸 I 的质量。
C 对尿素包合物再进行提取 ： 称取尿素包合物、 甲醇和甲苯 ( 质量比 1 ∶ 3 ∶ 3) 置 于圆底烧瓶， 在 55℃下搅拌回流 10min 形成均相溶液后， 减压蒸馏脱除甲醇和大部分甲苯， 然后加入 30ml 石油醚萃取脂肪酸， 抽滤， 所得固相为回收尿素， 尿素回收率为 80.8％ ； 滤液 减压蒸馏脱除石油醚及残余的少量的甲苯， 得回收脂肪酸， 脂肪酸回收率≥ 95％。
D 回收尿素再利用 ： 按步骤 B 的方法所用尿素为回收尿素单离得到的透明淡黄色 脂肪酸记作脂肪酸 II， 脂肪酸 II 中的 PUFAs 含量为 91.65％ wt、 脂肪酸 II 得率为 21.20％、 PUFAs 收率为 39.96％。
冷冻所用降温方式先从 55℃在空气中自然冷却到 30℃， 再以 -0.1℃ /s 的速度从 30℃降温至 -30℃后冷冻 2h 或者将冷却到 30℃的混合液迅速放入到已降温至 -30℃的恒温 反应浴中冷冻 2h。
实施例 1 ：
按质量比 m 脂肪酸∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 的比例， 将甲醇和脂肪酸混合均匀后密封于 冰箱内， 在 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 的低温冷冻结晶法预浓缩 UFAs， 并在 -20℃的 冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得脂肪酸 I。脂肪酸 I 得率 38.08％、 PUFAs 纯度 65.36％、 PUFAs 收率 61.44％。
实施例 2 ：
按质量比 m 脂肪酸∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 3 的比例， 将甲醇和脂肪酸混合均匀后密封于冰箱 内， 在 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 的低温冷冻结晶法分离饱和和 UFAs， 并在 -20℃的 冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得脂肪酸 I。脂肪酸 I 得率 40.04％、 PUFAs 纯度 57.23％、 PUFAs 收率 56.57％。
实施例 3 ：
按质量比 m 脂肪酸∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 4 的比例， 将甲醇和脂肪酸混合均匀后密封于冰箱 内， 在 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 的低温冷冻结晶法分离饱和和 UFAs， 并在 -20℃的 冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得脂肪酸 I。脂肪酸 I 得率 41.89％、 PUFAs 纯度 52.55％、 PUFAs 收率 54.34％。
实施例 4 ：
按质量比 m 脂肪酸∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 5 的比例， 将甲醇和脂肪酸混合均匀后密封于冰箱内， 在 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 的低温冷冻结晶法分离饱和和 UFAs， 并在 -20℃的 冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得脂肪酸 I。脂肪酸 I 得率 56.47％、 PUFAs 纯度 48.62％、 PUFAs 收率 67.78％。
实施例 5 ：
按质量比 m 脂肪酸∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 6 的比例， 将甲醇和脂肪酸混合均匀后密封于冰箱 内， 在 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 的低温冷冻结晶法分离饱和和 UFAs， 并在 -20℃的 冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得脂肪酸 I。脂肪酸 I 得率 59.15％、 PUFAs 纯度 45.55％、 PUFAs 收率 66.50％。
实施例 6 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 1 ∶ 4 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55 ℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 38.20％、 PUFAs 纯度 69.38％、 PUFAs 收 率 54.51％。 实施例 7 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 1.5 ∶ 4 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 10.82％、 PUFAs 纯度 84.58％、 PUFAs 收 率 18.82％。
实施例 8 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 1.5 ∶ 5 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 13.05％、 PUFAs 纯度 84.94％、 PUFAs 收 率 22.80％。
实施例 9 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 1.5 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中多脂肪酸 I 并过滤， 滤液经减压蒸馏 回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 18.90％、 PUFAs 纯度 84.23％、 PUFAs 收率 32.74％。
实施例 10 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 4 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55 ℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ℃下预冷
1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 7.65％、 PUFAs 纯度 94.14％、 PUFAs 收率 14.81％。
实施例 11 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 5 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55 ℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 8.21％、 PUFAs 纯度 95.23％、 PUFAs 收率 16.08％。
实施例 12 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55 ℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 12.23％、 PUFAs 纯度 94.52％、 PUFAs 收 率 23.78％。 实施例 13 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 7 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55 ℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5 ℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 18.66％、 PUFAs 纯度 93.70％、 PUFAs 收 率 35.96％。
实施例 14 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素 ∶ m 甲醇 ＝ 1 ∶ 2.5 ∶ 8 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 24.80％、 PUFAs 纯度 92.47％、 PUFAs 收 率 46.12％。
实施例 15 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2.5 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 4.68％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 9.63％。
实施例 16 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2.5 ∶ 7 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 4.84％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 9.95％。
实施例 17 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2.5 ∶ 8 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压 蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收 石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 4.92％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 16.08％。
实施例 18 ： 按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下放置 3h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得粘 稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收石油醚， 得透明淡黄 色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 28.4％、 PUFAs 纯度 89.00％、 PUFAs 收率 51.99％。
实施例 19 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h， 然后置于 -10℃冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经 减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏 回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 20.56％、 PUFAs 纯度 92.74％、 PUFAs 收率 39.22％。
实施例 20 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h， 然后置于 -20℃冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。 并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减 压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回 收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 12.23％、 PUFAs 纯度 94.523％、 PUFAs 收率 23.78％。
实施例 21 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h， 然后置于 -30℃冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经 减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏
回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 8.26％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收 率 16.99％。
实施例 22 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， -2.5℃下预冷 1h， 然后置于 -20℃冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液 经减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸 馏回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 7.47％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 15.36％。
实施例 23 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， -5℃下预冷 1h， 然后置于 -20℃冷冻 2h 进行尿素包和单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经 减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏 回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。脂肪酸 II 得率 7.08％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收 率 14.56％。
实施例 24 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇同 时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 密封后进行慢速降温慢速降温 ( 从 55℃ 在空气中自然冷却到 30℃， 再以 -0.1℃ /s 的速度从 30℃降温至 -30℃后冷冻 2h) 包和分 离 PUFAs， 在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石 油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。 脂肪酸 II 得率 12.36％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 25.42％。
实施例 25 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲醇 同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 密封后进行快速降温 ( 从 55℃在空气 中自然冷却到 30℃， 再将 30℃混合液迅速放入到以降温至 -30℃的恒温反应浴中冷冻 2h) 包和分离 PUFAs， 在冷冻条件下常压过滤， 所得滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中 PUFAs 并过滤， 滤液经减压蒸馏回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。 脂肪酸 II 得率 8.26％、 PUFAs 纯度 100％、 PUFAs 收率 16.99％。
实施例 26 ：
称取 5g 尿素包合物、 15g 甲醇和 15g 甲苯置于圆底烧瓶， 在 55℃下搅拌回流 10min 形成均相溶液后， 减压蒸馏脱除甲醇和大部分甲苯， 然后加入 30ml 石油醚萃取脂肪酸， 抽 滤， 所得固相为回收尿素 ( 干燥后质量为 2.828g)， 滤液减压蒸馏脱除石油醚及少量的甲 苯， 得脂肪酸 1.446g， 脂肪酸回收率 95.89％ (5g 尿素包合物中含 1.508g 脂肪酸 )。
实施例 27 ：
按质量比 m 脂肪酸 I ∶ m 回收尿素∶ m 甲醇＝ 1 ∶ 2 ∶ 6 的比例， 称取脂肪酸 I、 尿素和甲 醇同时加入到圆底烧瓶中， 55℃下回流溶解尿素 10min， 冷却后密封于冰箱内， 0.5℃下预冷 1h、 -20℃下冷冻 2h 进行尿包合法单离 PUFAs。并在冷冻条件下常压过滤， 得到滤液及尿素包合物， 滤液经减压蒸馏回收甲醇， 得粘稠固相物用 30mL 石油醚萃取其中脂肪酸并过滤， 滤液经减压蒸馏回收石油醚， 得透明淡黄色脂肪酸 II。回收尿素进行包和法分离后产品脂 肪酸 II 得率为 21.20％， 脂肪酸 II 中 PUFAs 收率为 39.96％， UFAs 纯度为 91.65％。
实施例 28 ：
将 7.4gNaOH 溶于 25ml 蒸馏水后与 50ml 乙醇一起转入三口烧瓶， 油脂从分液漏斗 恒速滴加到三口烧瓶， 机械搅拌均匀， 70℃下滴加反应 1.5h， 保温 2h， 冷却到室温后滴加盐 酸至 pH 值 3 ～ 4， 室温下继续保温 1h 后， 静置分层， 下层为粗甘油相， 上层为脂肪酸， 上层水 洗 (50ml 蒸馏水 )1 次， 旋转蒸发去溶剂乙醇得分离用脂肪酸。