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1、10申请公布号CN104193623A43申请公布日20141210CN104193623A21申请号201410445684622申请日20140904C07C69/732200601C07C67/4820060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法57摘要本发明涉及一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，具体涉及一种生物酶发酵辅助提取迷迭香酸的方法。其处理步骤包括A迷迭香粉碎，过40目筛；B生物酶发酵；C连续逆流超声波辅助提取；D柱层析分离，乙醇洗脱，收集洗脱液，浓。
2、缩、干燥，即得迷迭香酸。本发明将现代生物发酵工艺运用到迷迭香酸的提取中，充分利用生物酶发酵和超声波的叠加效果，提高迷迭香酸的提取率。本发明具有工艺简单、反应条件温、能耗小、提取率高、可连续操作等优点，易于实现工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104193623ACN104193623A1/1页21一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，其特征在于，包括以下步骤A迷迭香粉碎，过40目筛；B向上述原料中加入原料重量12的生物酶，搅拌均匀，再喷洒PH4050的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握。
3、成团即可，于4050发酵57天；C将发酵好的原料置于频率为20KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入46倍的1020的乙醇溶液，控温在4560，提取90120MIN；D将提取液经无机陶瓷膜设备过滤，滤液转入径高比为148、粒径为80100目的聚酰胺树脂柱，先用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，后用46BV的3050的PH40的盐酸乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；E洗脱液经反渗透膜浓缩，收集浓缩液，用盐酸调PH至23，低温放置，即析出迷迭香酸结晶。2根据权利要求1所述的一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，其特征在于，步骤B中所述的生物酶为重量比0703的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为5000U/。
4、G。3根据权利要求1所述的一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，其特征在于，步骤E中所述的反渗透膜为三醋酸纤维复合膜。4根据权利要求1所述的一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，其特征在于，步骤E中所述的洗脱液通过反渗透膜的压力为2040MPA、温度2535、流速为1525M/S。权利要求书CN104193623A1/3页3一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法技术领域0001本发明涉及一种从迷迭香中提取迷迭香酸的方法，尤其涉及一种利用生物酶发酵辅助提取迷迭香酸的方法。背景技术0002迷迭香是唇形科迷迭属植物全草，是目前公认的具有较高抗氧化作用且安全无毒的一种植物。迷迭香酸作为迷迭香中最有效的抗氧化成分之一。
5、，已被美国食品药物管理局（FDA）认可为“公众安全食品”。迷迭香酸，化学名为R（E）3（3,4二羟基苯基）1氧代2丙烯基氧基3,4二羟基苯丙酸，是一种多功能酚酸类化合物，结构不稳定，对光照、温度、金属离子等都比较敏感。其具有很强的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、免疫抑制等作用，在食品、化妆品、医药等方面有着广阔的应用前景。0003迷迭香酸常见的提取方法如下回流提取法、微波提取法、超临界二氧化碳萃取法等。这些方法均存在诸多不足回流提取法虽然设备简单、成本低且对环境和人类无毒害而适宜工业化生产，但是高温易破坏有效成分的活性，提取率低、杂质含量较高；微波提取法提取率较传统方法高，但是能耗大、条件苛刻，难。
6、以实现大规模生产；超临界二氧化碳萃取技术是一项新的分离、提取技术，具有低温提取、无有毒残溶和可以选择性分离等特点，但是其设备昂贵，难于维修。0004在中草药提取过程中，存在于细胞原生质中的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞质的双重阻力。选用适当的酶作用于植物材料，可以使细胞壁及细胞质中的纤维素、半纤维素、果胶质等物质降解，破坏细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减少细胞壁细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从而有利于有效成分的溶出。0005经文献检索，未见采用生物酶发酵辅助提取迷迭香酸的文献报道。发明内容0006本发明的目。
7、的是针对现有技术的不足，提供一种迷迭香酸的提取方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好等优点。0007本发明包括以下步骤A迷迭香粉碎，过40目筛；B向上述原料中加入原料重量12的生物酶，搅拌均匀，再喷洒PH4050的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于4050发酵57天；C将发酵好的原料置于频率为20KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入46倍的1020的乙醇溶液，控温在4560，提取90120MIN；D将提取液经无机陶瓷膜设备过滤，滤液转入径高比为148、粒径为80100目的聚酰胺树脂柱，先用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，后用46BV的3050的。
8、PH40的盐酸乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；说明书CN104193623A2/3页4E洗脱液经反渗透膜浓缩，收集浓缩液，用盐酸调PH至23，低温放置，即析出迷迭香酸结晶。0008步骤B中所述的生物酶为重量比0703的纤维素酶和果胶酶的混合物，酶的活力单位为5000U/G。0009步骤E中所述的反渗透膜为三醋酸纤维复合膜。0010步骤E中所述的洗脱液通过反渗透膜的压力为2040MPA、温度2535、流速为1525M/S。0011本发明与现有技术相比，具有以下优点（1）迷迭香酸收率较高且产品较纯本发明采用生物酶发酵，破坏细胞壁的致密结构，在结合超声波的空化作用，使有效成分最大限度的溶出，提高了迷迭香酸。
9、的提取率；（2）本发明采用聚酰胺树脂进行分离纯化，反渗透膜系统来除去溶剂，实现无热处理浓缩的目的，减小能耗。0012下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0013具体实施方式实施例1迷迭香粉碎，过40目筛，取500G粉末，加入原料重量1的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH40的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于40发酵5天；将发酵好的原料置于频率为20KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入4倍的20的乙醇溶液，控温在60，提取120MIN；将提取液经无机陶瓷膜设备过。
10、滤，滤液转入径高比为14、粒径为80目的聚酰胺树脂柱，先用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，后用4BV的30的PH40的盐酸乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经反渗透膜浓缩，收集浓缩液，用盐酸调PH至2，低温放置，即析出迷迭香酸结晶276G，纯度为938。0014实施例2迷迭香粉碎，过40目筛，取500G粉末，加入原料重量15的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH45的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于45发酵6天；将发酵好的原料置于频率为20KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入5倍的15的乙醇溶液，控温在50，提。
11、取100MIN；将提取液经无机陶瓷膜设备过滤，滤液转入径高比为16、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，先用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，后用5BV的50的PH40的盐酸乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经反渗透膜浓缩，收集浓缩液，用盐酸调PH至25，低温放置，即析出迷迭香酸结晶284G，纯度为958。0015实施例3迷迭香粉碎，过40目筛，取500G粉末，加入原料2重量的纤维素酶和果胶酶（重量比为0703，酶的活力单位为5000U/G，）的混合酶，搅拌均匀，再喷洒PH50的柠檬酸/柠檬酸钠的缓冲溶液，使原料达到手握成团即可，于50发酵7天；将发酵好的原料置于频率为20KHZ的连续逆流超声波提取器中，加入6倍的10的乙醇溶液，控温在45，提取90MIN；将提取液经无机陶瓷膜设备过滤，滤液转入径高比为18、粒径为100目的聚酰胺树脂柱，说明书CN104193623A3/3页5先用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，后用6BV的40的PH40的盐酸乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；洗脱液经反渗透膜浓缩，收集浓缩液，用盐酸调PH至3，低温放置，即析出迷迭香酸结晶255G，纯度为938。说明书CN104193623A。