技术领域
本发明属于植物源农药技术领域，具体地，涉及了一种苦皮藤素 原药及其水悬浮剂，以及它的制备方法和质量检测方法。
背景技术
苦皮藤（Celastrus angulatus MaXim）亦叫苦树皮、菜药，属卫 矛科南蛇藤属植物。在我国长江、黄河流域各省区分布很广。其根皮 和叶子一直被民间作为杀虫药使用，也可以入药用来治疗疗疮肿疼， 具有清热解毒功能，其中根皮的杀虫作用最好[中国科学院西北植物 研究所.秦岭植物志1981,北京:科学出版社]。苦皮藤的杀虫有效成 分为分离得到的一系列4-OH-β-二氢沉香呋喃多元醇酯类化合物， 对害虫具有毒杀、拒食和麻醉作用，可用来防治蔬菜上的菜青虫、稻 苞虫、水稻的粘虫、芫菁叶蜂幼虫、贮粮害虫玉米象等[吴文君.植物 杀虫剂苦皮藤素研究与应用[M].化学工业出版社,2010]。
目前文献报道的苦皮藤的提取方法均为溶剂回流法，提取溶剂包 括石油醚、苯、丙酮、乙醚、甲苯、甲醇、乙醇等；其中工业化生产 大多采用苯[朱文丽,等.苦皮藤根皮的化学成分.中国实验方剂学杂 志,2011,17(13),271-276.]。虽然乙醇为环保溶剂，但与其他溶剂提取 物或原药相比，苦皮藤乙醇提取物（或用乙醇提取获得的原药）化学 成分极其复杂、多样，含有大量黄酮、卫矛醇、三萜等其他成分，4-OH- β-二氢沉香呋喃多元醇酯类化合物含量很低（如苦皮素A含量0.5% 左右），溶解性较差，难于制成相应剂型。因此，苦皮藤基本不采用 乙醇提取。
苦皮藤醇提取物的品质不在于某个单一活性成分，其效果是多个 活性成分协同配比的结果。研究证明苦皮藤中主要杀虫活性成分是以 4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜骨架的多元醇酯化合物及其生物碱，统 称苦皮藤素。苦皮藤素化学成分非常复杂，含有以苦皮素A、苦皮素 B为主的多种杀虫成分。目前，苦皮藤素提取物或原药中苦皮藤素组 分的检测方法：一是测定苦皮藤素提取物或原药水解后产生的苯甲 酸，操作步骤极其复杂，结果不可靠，可行性差；二是仅对其中一个 组分苦皮素A(或苦皮藤素V)进行定量分析[吴文君,等.植物杀虫 剂0.2%苦皮藤素乳油的研究与开发.Pesticides(农药),2001,40(3):17； ②卢桂荣，等.RP-HPLC法测定苦皮藤素中苦皮素A的含量.河南科 学，2007，25（3）：395.]，这种针对单一成分进行定量分析的质量 检测模式不能有效控制苦皮藤素提取物的内在质量，无法满足当前对 于客观有效地评价和控制苦皮藤产品质量的迫切要求。指纹图谱技术 己成为国际公认的区别评价植物天然产物及其原料的最有效的手段 [罗国安,等.中药指纹图谱的分类和发展.中国新药杂志,2002,11(1): 46.]。目前关于苦皮藤素提取物或原药的产品及其指纹图谱检测未见 报道。
IGD核磁共振碳谱偶联（IGD13C NMR coupling）指纹图谱技术， 也叫反门控去偶核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术，是在已研究多年的 核磁共振氢谱（1H NMR）指纹图谱技术[赵天增,等.1HNMR指纹法 鉴定植物中药.中草药，2000,31(11):868-870.]的基础上联合其他技 术（例如目前应用最广泛的高效液相（HPLC）指纹图谱技术）提出 的一种新的非单一手段综合指纹图谱技术。
因此，若能开发出新的苦皮藤素原药产品，并开发出利用IGD 核磁共振碳谱偶联指纹图谱技术对相关苦皮藤素原药产品进行检测 的方法，不仅可以解决其中活性成分的定性问题，也为加强其内在成 分研究的系统化与标准化，加快植物源农药苦皮藤素现代化的发展， 实现与国际接轨提供了科学的保证。
发明内容
为了解决植物源农药现有技术、质量等方面存在的问题，本发明 的目的在于，提供一种醇提苦皮藤素原药及其水悬浮剂。
本发明的另一目的在于，提供一种所述苦皮藤素原药及其水悬浮 剂的制备方法。
本发明的另一目的在于，提供一种所述苦皮藤素原药及其水悬浮 剂的质量检测方法。
为实现上述目的，本发明提供的一种苦皮藤素原药，其中含有以 下质量百分含量的活性成分：苦皮素A2.5~4.0%，苦皮素B 3.0~5.0%，苦皮素C、苦皮素F和苦皮素P1.5~3.0%，苦皮素G 1.5~3.0%，苦皮藤素IV0.05~1.00%，苦皮素A、苦皮素E和苦皮藤 素XIX3.5~5.5%，苦皮素H1.0~2.0%。
本发明苦皮藤素原药中的所述活性成分均为4-OH-β-二氢沉香呋 喃倍半萜多醇酯类化合物。
其中，苦皮素C的质量百分含量为0.5~2.0%，苦皮素F的质量 百分含量为0.5~1.0%，苦皮素P的质量百分含量为0.05~0.75%，苦 皮素E的质量百分含量为0.4~1.0%，苦皮藤素XIX的质量百分含量 为0.2~0.7%，苦皮藤素III的质量百分含量为0.5~1.0%，苦皮素J的 质量百分含量为0.3~2.5%。
本发明所述苦皮藤原药中各活性成分（4-OH-β-二氢沉香呋喃倍 半萜多醇酯类化合物）总的质量百分含量不小于13%。优选15%。
进一步地，苦皮藤原药中各活性成分总的质量百分含量为 15.25~17.05%。
本发明所述苦皮藤素原药为固体状。
本发明提供的苦皮藤素原药的制备方法包括：称取苦皮藤根或/ 和皮，粉碎，用体积为2~6倍的乙醇于60~80℃下回流或超声提取2~3 次，每次提取1~2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩成滤液，取此滤 液，加体积为1~2倍的沉淀剂，沉淀12~24小时，离心后得到沉淀， 即所述苦皮藤素原药。
进一步地，苦皮藤根或/和皮粉碎后过10~24目筛
其中，所述乙醇的质量比为90~95%。
进一步地，浓缩的滤液的密度为1.0~1.2，优选1.08~1.13。
其中，所述沉淀剂为：水或为5~30%乙醇，优选10~30%乙醇。 这里的百分数“%”为质量比。
苦皮藤根或/和皮中的活性成分，除了本发明苦皮藤素原药所述 的成分外，还包括苦皮素U、X、苦皮藤素II、苦皮藤素VII；celangulatin C等4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物和黄酮、生物碱、 三萜等活性成分。
本发明提供的苦皮藤素原药，可以制成水悬浮剂、可湿性粉剂、 水乳剂等各种剂型用于植物源农药杀虫剂。
本发明提供的一种苦皮藤素水悬浮剂，包含所述苦皮藤素原药。
本发明提供的所述苦皮藤素水悬浮剂，包括以下重量份的成分： 所述苦皮藤素原药10~20份，润湿分散剂3~7份，增稠剂2~3份，防 冻剂3~5份，消泡剂0.2~0.5份。
本发明提供的所述苦皮藤素水悬浮剂，优选地，包括以下重量份 的成分：所述苦皮藤素原药16~17份，润湿分散剂5.5~6份，增稠剂 2.5~3.0份，防冻剂4~5份，消泡剂0.3~0.5份。
其中，所述润湿分散剂选自：亚甲基二萘磺酸钠（NNO），烷基 萘磺酸缩聚物的钠盐（MorwetD425），木质素磺酸钠（木钠），亚甲 基双甲基萘磺酸钠（MF），聚羧酸盐类（GYD），烷基酚聚氧乙烯醚 磺化琥珀酸酯（农乳2000#），十二烷基苯磺酸钙（农乳500#），苯 乙基苯酚聚氧乙烯醚（农乳601#），烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚（农 乳33#），苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚（农乳1601#）和蓖麻油 聚氧乙烯醚（BY125）等中的一种或多种。优选：亚甲基二萘磺酸钠， 烷基萘磺酸缩聚物的钠盐和烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚中的一种 或多种。
其中，所述增稠剂选自：阿拉伯胶，黄原胶，羟甲基纤维素，聚 乙烯醇，聚乙烯醇吡咯烷酮、硅酸镁铝和膨润土中的一种或多种。优 选：膨润土，黄原胶和羟甲基纤维素中的一种或多种。
其中，所述防冻剂选自：乙二醇，丙二醇，丙三醇，二甘醇，三 甘醇，聚乙二醇，尿素和无机盐类中的一种或多种。优选：乙二醇。
其中，所述消泡剂为：有机硅酮类，C8~C10脂肪醇类，C10~C20脂肪族羧酸及其脂类，酯-醚型化合物或椰子油EO-PO聚合物等。优 选：有机硅。
本发明提供的一种苦皮藤素水悬浮剂，还包括溶剂。
其中，溶剂为水，加水至100%。
本发明所述的苦皮藤素水悬浮剂，其中的辅料，即润湿分散剂、 增稠剂、防冻剂、消泡剂以及溶剂，也可以是本领域的常规种类及用 量。
本发明所述苦皮藤素水悬浮剂中各活性成分（4-OH-β-二氢沉香 呋喃倍半萜多醇酯类化合物）的总的质量百分含量不小于2%。
进一步地，苦皮藤水悬浮剂中各活性成分总的质量百分含量为 2.3~3.0%。
更进一步地，品种为陕西宝鸡的苦皮藤原药中活性成分总的质量 百分含量为2.5~2.9%，品种为陕西华县的苦皮藤原药中活性成分总的 质量百分含量为2.6~3.0%。
本发明提供的所述苦皮藤素水悬浮剂的制备方法，包括：将所述 苦皮藤素原药与润湿分散剂、增稠剂、防冻剂、消泡剂以及溶剂按所 述比例混合，即得。
本发明提供的所述苦皮藤素原药的质量检测方法，包括以下步 骤：
1）对所述苦皮藤素原药进行处理，得到含有活性成分组的苦皮 藤素原药特征提取物；
2）对所述苦皮藤素原药特征提取物进行IGD核磁共振碳谱指纹 图谱检测，根据指纹图谱得到所述苦皮藤素原药特征提取物中若干个 活性成分特征峰峰强度；并用相同方式（IGD核磁共振碳谱指纹图谱） 测定出所述各活性成分相应的标准参照品的特征峰峰强度；
3）通过定量分析手段测定得到苦皮藤素原药中所述标准参照品 的绝对含量；
4）利用所述特征峰峰强度（各活性成分特征峰峰强度及相应的 标准参照品的特征峰峰强度）的比值和所述绝对含量，计算出苦皮藤 素原药中各活性成分的含量及该类活性成分的总含量，即活性成分组 的含量。
其中，步骤1）中，苦皮藤素原药特征提取物的处理方法，包括： 称取所述苦皮藤素原药，加入体积为6~12倍量的氯仿，60~80℃下回 流或超声提取20~40min，过滤后于60~70℃下减压浓缩，回收溶剂至 干，即得苦皮藤素原药特征提取物。
苦皮藤素原药特征提取物检测方法如下：取苦皮藤素原药特征提 取物，溶于CDCl3中，作IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测。
其中，步骤2）中，所述苦皮藤素原药特征提取物中的活性成分 特征峰为：C-15，其化学位移为δC60.0~66.0。
进一步地，选择C-9和/或C-1作为特征峰进一步区别苦皮素C、苦 皮素F和苦皮素P，其（C-9或C-1）化学位移为70.6~72.6。
其中，步骤2）中，所述峰强度，可以采用峰高法、面积积分法 或重量法计算。
其中，步骤3）中，所述标准参照品的绝对含量是指：用定量分 析手段测定的苦皮藤素原药中标准参照品的质量百分含量。
其中，所述定量分析手段为高效液相色谱（HPLC）法。
进一步地，HPLC法的条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填 料，流动相为甲醇：乙腈：水=(35~45):(15~25):(35~45)的混合溶剂， 流速为1mL/min，检测波长为242nm。甲醇：乙腈：水优选40:20:40。
其中，所述标准参照品为苦皮素B。
本发明主要测定的是苦皮藤素原药中4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半 萜多醇酯类化合物的含量。
其中，苦皮藤素原药中各活性成分的含量及该类活性成分的总含 量计算是通过偶联计算公式将IGD核磁共振碳谱和定量分析手段偶 联，即步骤4）中，计算各活性成分的含量的偶联公式为：
W n = W 1 M n h n M 1 h 1 ; ]]>其中：
W1为步骤3）用定量分析手段测定的苦皮藤素原药中某一活性成 分对应的标准参照品的绝对含量（质量百分含量）；
M1为所述某一活性成分对应的标准参照品的分子量；
h1为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的苦皮藤素原药特征提 取物中所述某一活性成分对应的标准参照品的特征峰峰强度；
Wn为苦皮藤素原药中某一活性成分的质量百分含量；
Mn为某一活性成分的分子量；
hn为由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的苦皮藤素原药特征提 取物中某一活性成分的特征峰峰强度。
通过偶联公式还可计算苦皮藤素原药中主要活性成分的系数和 总系数。
进一步地，所述系数的计算公式为：
F n = M n h n M 1 h 1 ; ]]>
其中Fn为苦皮藤素原药中某一活性成分与其对应的标准参照品 质量百分含量的比值系数。M1、h1、Mn和hn的含义同计算苦皮藤素 原药中各活性成分含量偶联公式中的相应定义。
该系数Fn也同样适用于计算苦皮藤素水悬浮剂中的活性成分及 活性成分组。
本发明提供的苦皮藤素水悬浮剂的质量检测方法，利用上述方法 检测得到苦皮藤素原药中某各活性成分的含量，再推算出苦皮藤素水 悬浮剂中各活性成分的质量百分含量。这里的苦皮藤素水悬浮剂是由 苦皮藤素原药制备得到。
其中，苦皮藤素水悬浮剂中各活性成分的含量计算公式为：
Xn=X1Fn；其中：
Xn为苦皮藤素水悬浮剂中某一活性成分质量百分含量；
X1为用定量分析手段测定的苦皮藤素水悬浮剂中某一活性成分 对应的标准参照品的绝对含量（质量百分含量）；
其中，所述定量分析手段为高效液相色谱法。
苦皮藤素原药或苦皮藤素水悬浮剂中该类活性成分的总含量就 是同类的各活性成分的Xn相加之和，即活性成分组的含量，单个活 性化合物系数相加之和即苦皮藤素总系数。
本发明方法所述活性成分组，是将苦皮藤药材进行提取后，得到 的苦皮藤素原药中的活性成分组，所述的苦皮藤素原药实际上就是苦 皮藤提取物。
本发明的质量检测方法可以用来检测13%、15%或其他浓度的苦 皮藤原药，以及本发明2%的苦皮藤水悬浮剂或其他浓度的苦皮藤素 水悬浮剂。
本发明方法所述活性成分组，尤其是将苦皮藤药材进行提取后， 得到的苦皮藤素原药和苦皮藤素水悬浮剂中的活性成分组。
本发明的苦皮藤药材，是指苦皮藤植物的根或/和皮的部位。
本发明各活性成分的含量及该类活性成分的总含量的计算，是通 过偶联公式将IGD核磁共振碳谱和分析定量手段偶联。和现有技术 相比，本发明采用IGD13C NMR偶联指纹图谱具有下面几个特点：
①稳定性（重复性）：IGD13C NMR得到的化学位移数据为小数 点后第二位，分辩性好，重复性好；HPLC、GC的非色谱条件（如 色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动 相各组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等）改变等，得到的保 留时间数据变化很大，意味着整体色谱图形的变异，重复性不好。
②整体性（全面性）：IGD13C NMR指纹图谱中包含样品中的每 一个活性成分碳的相应谱峰；HPLC、GC、UV、IR、MS不存在这种 关系。
③可靠性（单一性）：IGD13C NMR谱峰与样品中不同活性成分 及其不同基团上的碳是严格的一一对应关系；HPLC、GC、UV、IR、 MS不存在这种关系。
④可行性（易辨性）：IGD13C NMR指纹图谱规律性很强，一般 情况下，可归属图谱中的每一个碳峰；HPLC、GC需要对照品；IR 不易解析；UV信息量少；MS则有离子化程度和基质干扰等问题。
本发明对苦皮藤醇提取物进行了深入、系统的研究，找到了一系 列杀虫活性成分并确定了其化学结构，并采用现有技术均没有使用过 的沉淀剂沉淀法富集了杀虫活性成分，和目前已有的苦皮藤素原药相 比，得到的苦皮藤乙醇提取物或原药苦皮藤素含量较高（其中有效活 性成分为12种，其总量不小于13%，尤其是15%（本发明中用15% T12表示），苦皮素A含量大于2.5%，苦皮素B含量大于3.0%，苦 皮素G含量大于1.5%，且杂质含量少。相对于苦皮藤苯提取物等毒 性大大降低，易于被制备成后续的制剂产品。并且，本发明的工艺具 有设备简单、指标可控、易操作、成本低，收率高，无环境污染等特 点，适合工业化生产。
本发明的水悬浮剂与现有技术相比的优势在于：水悬浮剂作为水 基性农药剂型的代表，与现有剂型相比，减少了有机溶剂用量，使用 和贮运安全方便，环境相容性好，药效高，成本低，具有广阔的发展 前景，为国内外农药剂型研究的热点。
本发明针对苦皮藤素原药（即苦皮藤提取物），尤其是乙醇提取 物有效成分少、杂质多，及高效液相色谱指纹图谱和核磁共振氢谱（1H NMR）指纹图谱的局限性，对IGD核磁共振碳谱偶联指纹图谱进行 详细研究，确定出的技术方案可以不仅能定性反映出苦皮藤素原药中 主要含有哪些4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物，而且能 反映它们各自的含量、比例关系以及总含量，达到对苦皮藤素原药质 量检测和控制的目的。准确性和稳定性、重复性和可行性与现有技术 相比有很大的提高。
总之，本发明使得苦皮藤素原药成分明确、含量清楚、质量可控、 性能稳定，可以有效控制苦皮藤素原药的内在质量，满足了当前对于 客观有效地评价和控制苦皮藤产品质量的迫切要求，加强了苦皮藤素 原药内在成分研究的系统化与标准化。
附图说明
图1-a为实施例1的15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱。
图1-b为实施例1的15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。
图2-a为实施例2的15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱。
图2-b为实施例2的15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。
图3-a为实施例3的15%T12苦皮藤素原药乙特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱。
图3-b为实施例3的15%T12苦皮藤素原药乙特征提取物IGD 核磁共振碳谱指纹图谱特征峰局部拉宽放大图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步地详细描述， 但本发明的保护范围并不局限于此。
1、15%T12苦皮藤素原药、水悬浮剂的制备方法
（1）15%T12苦皮藤素原药
称取苦皮藤根或/和皮，粉碎（10~24目筛），用体积为2~6倍的 乙醇（质量比90~95%）于60~80℃下回流或超声提取2~3次，每次 提取1~2小时，过滤后合并滤液，减压浓缩成滤液（密度为1.08~1.13）， 取此滤液，加其体积为1~2倍的沉淀剂（水或为5~30%乙醇（质量比）， 优选10~30%乙醇），沉淀12~24小时，离心后得到沉淀，即所述苦 皮藤素原药。
（2）15%T12苦皮藤素水悬浮剂
包括以下重量份的成分：所述苦皮藤素原药10~20份，润湿分散 剂3~7份，增稠剂2~3份，防冻剂3~5份，消泡剂0.2~0.5份。按比 例混合，即得。
2、15%T12苦皮藤素原药IGD核磁共振碳谱指纹图谱质量检测 方法研究步骤
（1）特征提取物获取程序研究
称取苦皮藤素原药1~2g，加入体积为6~12倍量（mL）的氯仿， 60~80℃下回流或超声提取20~40min，过滤后于60~70℃下减压浓缩， 回收溶剂至干，即得15%T12苦皮藤素原药特征提取物。
（2）特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测
取上述15%苦皮藤素原药特征提取物，溶于0.5mL CDCl3中，作 IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图 谱。
（3）特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析
1）鉴别
特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱中，应清楚地显示 4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的特征信号，且全部或 大部分含有苦皮素A、E、H、苦皮藤素XIX；苦皮素B、C、F、G、 P、苦皮藤素IV；苦皮素J、苦皮藤素Ⅲ信号。
具体数据如下：
δC74.9-75.5或70.5-70.9或75.8-76.0，66.9-68.1，41.1-42.1，72.1-72.2 或69.7-69.9，91.3-91.7分别为A环1，2，3，4，5位脂环碳信号；76.2-77.0 或75.0-75.6，53.0-53.8，73.3-74.7或75.6-76.5或69.7-69.8，74.9-75.5 或70.6-72.6，50.1-50.8或53.9-54.5或52.9-53.0分别为B环6,7,8,9,10位脂 环碳信号，82.5-84.6为4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物 C-11碳信号，29.3-30.1，26.2-26.4或25.4-25.7或24.3-24.4，24.1-24.6 为4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物C-12、C-13、C-14甲 基碳信号，61.4-61.8或65.0-65.7或60.2-60.7为4-OH-β-二氢沉香呋喃倍 半萜多醇酯类化合物C-15亚甲基碳信号。
2）15%T12苦皮藤素原药特征提取物中各活性成分特征峰选取 由于特征提取物中含有一系列活性成分4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜 多醇酯类化合物，碳峰交叉得较多，为了测定各活性成分的比例，必 须选择化学位移差别较大的相应峰作为特征峰。为此，经实际考察， 选择了δC60.0-66.0左右一组C-15峰。其原因为：一般情况下，C-15 峰作为连氧碳，易于辨认；C-15位受C-9上α和β位取代基的γ效 应不同，其化学位移差别较大。如苦皮素A、E、H、苦皮藤素XIX 的化学位移为δC61.0左右；苦皮素B、C、F、G、P、苦皮藤素IV 的化学位移为δC65.0左右；苦皮素J、苦皮藤素Ⅲ的化学位移为δC60.0左右。另选择C-9和/或C-1作为特征峰进一步区别苦皮素C、 苦皮素F、苦皮素P，C-9或C-1的化学位移为δC70.6~72.6左右。
3）标准参照品的选择
苦皮素B是杀虫植物苦皮藤的主要杀虫活性成分之一，其特征峰 的化学位移为δC65.4，与其他主要活性成分特征峰在此没有重叠。因 此，选择苦皮素B作为标准参照品。
（4）采用HPLC测定15%T12苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮 剂中苦皮素B的含量
1）HPLC检测
①色谱条件
仪器：岛津LC-20AT
流动相：（甲醇：乙腈：水）=40:20:40
流速：1mL/min
色谱柱:Sunfire C18(4.6mm×150mm,5μm)；
检测器：紫外
波长：242nm
进样量：20μL；
②标准参照品溶液的配制
精确称取苦皮素B5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至 刻度，摇匀后即得标准参照品溶液（苦皮素B100μg/mL）。
③标准曲线和检出限
浓度范围：1~100μg/mL（ppm）;标准参照品浓度分别为：1 μg/mL、5μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。
在上述色谱条件下，进行HPLC分析，苦皮素B总峰面积Y对 浓度C的线性回归方程为：Y=12472.59*C+396.23（n=5,R=0.9999）。
检出限为：0.5ug/mL(S/N=3)。
根据标准曲线图，在所选的浓度范围内，苦皮素B的标准溶液的 工作曲线线性关系良好。
④供试品溶液的制备
准确称取15%T12苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮剂200mg 于100mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，超声振荡后稀释至刻度，摇 匀后即得15%苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮剂供试品溶液。
⑤精密度测定
供试品溶液重复进样5次，峰面积相对标准偏差RSD=1.02%， 保留时间相对标准偏差RSD=0.45%。
⑥供试品的测定
吸取各供试品溶液，进样，测其峰面积，求得苦皮素B含量。
⑦回收率测定
采用标准加入方法，在苦皮藤素原药供试品中加标100μg/mL， 平均回收率为103.5%。
2）苦皮素B绝对含量计算
①由下式计算供试品溶液中苦皮素B质量浓度
C X = C R × A X A R ]]>
CX：15%T12苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮剂供试品溶液 中苦皮素B质量浓度（ug/mL）；
CR：标准参照品（苦皮素B）溶液质量浓度（ug/mL）；
AX：由HPLC测定的15%T12苦皮藤素原药供试品溶液或2%苦 皮藤素水悬浮剂中苦皮素B的峰面积；
AR：由HPLC测定的标准参照品溶液中苦皮素B的峰面积。
②由下式计算15%T12苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮剂中 苦皮素B质量百分含量
W苦皮素B(%)：15%T12苦皮藤素原药中或2%苦皮藤素水悬浮剂 苦皮素B质量百分含量，即标准参照品苦皮素B的绝对含量（质量 百分含量）；
CX：15%苦皮藤素原药供试品或2%苦皮藤素水悬浮剂溶液中苦 皮素B质量浓度(ug/mL)；
m供试品：称取的15%T12苦皮藤素原药或2%苦皮藤素水悬浮剂 质量(mg)。
（5）通过偶联公式计算15%T12苦皮藤素原药中主要活性成分 含量及总量
W n = W 1 M n h n M 1 h 1 ]]>
Wn（%）：15%T12苦皮藤素原药中某一活性成分质量百分含 量%；
W1（%）：15%T12苦皮藤素原药中苦皮素B质量百分含量%， 即标准参照品苦皮素B的绝对含量（质量百分含量），即W苦皮素B(%)；
M1：苦皮素B（标准参照品）分子量；
h1：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的15%T12苦皮藤素原 药特征提取物中苦皮素B（标准参照品）特征峰峰强度（峰高）；
Mn：15%T12苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分分子量；
hn：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的15%T12苦皮藤素原 药特征提取物中某一活性成分特征峰峰强度（峰高）。
总量即Wn之和。
（6）通过偶联公式计算15%苦皮藤素原药中主要单个活性成分 系数与总系数
①系数计算公式
F n = M n h n M 1 h 1 ]]>
Fn：15%苦皮藤素原药中某一活性成分与苦皮素B（标准参照品） 质量百分含量的比值系数；
M1：苦皮素B（标准参照品）分子量；
h1：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的15%苦皮藤素原药特 征提取物中苦皮素B（标准参照品）特征峰峰强度（峰高）；
Mn：15%苦皮藤素原药特征提取物中某一活性成分分子量；
hn：由IGD核磁共振碳谱指纹图谱测定的15%苦皮藤素原药特 征提取物中某一活性成分特征峰峰强度（峰高）。
该系数Fn也同样适用于计算苦皮藤素水悬浮剂剂中的活性成分 及活性成分组。
（7）2%苦皮藤素水悬浮剂中主要活性成分含量及总量计算
Xn（%）=X1（%）Fn
Xn：2%苦皮藤素水悬浮剂中某一活性成分质量百分含量%；
X1：2%苦皮藤素水悬浮剂中苦皮素B质量百分含量%，即标准 参照品苦皮素B的绝对含量。
3、仪器、试剂与材料
核磁共振波谱仪Bruker DPX 400型。
质谱仪：Waters Micromass Q-Tof MicroTM型。
半制备高效液相色谱仪：Waters 600型。
高效液相色谱仪：Agilent 1200型。
2000mL蒸馏烧瓶、5000mL蒸馏烧瓶、球型冷凝管、2000mL分 液漏斗。
DE-52AA旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。
DEF-6020型真空干燥箱：上海精宏实验设备有限公司。
柱层析硅胶G和薄层层析硅胶H：青岛海洋化工厂。
硅胶层析柱6cm×70cm（直径×高度）。
苦皮藤药材（陕西宝鸡，2009年11月大量收购自当地），苦皮 藤药材（陕西华县，2010年11月大量收购自当地），苦皮藤药材（河 南淅川，2009年11月大量收购自当地），均经河南省农业大学朱长 山教授鉴定。苦皮素B，标准参照品，实验室自制（经光谱数据鉴定）。
试剂：色谱纯（甲醇，天津市四友精细化学品有限公司）及分析 纯（天津市化学试剂一厂）。
4、基础研究
（1）分离提取流程1
称取阴干的河南淅川产苦皮藤根、皮1kg，粉碎，用6倍量体积 苯回流提取3次，滤液合并后60℃减压浓缩，回收溶剂至浸膏状， 浸膏用6倍量体积纯度80%的甲醇溶解后，60mL的石油醚萃取1次， 甲醇层过滤后减压浓缩，回收溶剂得浸膏（27.5g）。取此浸膏用硅胶 柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯（10：1~4：6）溶剂体系进行梯度 洗脱，每250mL收集1份，合并相同馏分。第38份经制备色谱纯化， 得苦皮素E（18mg）；第42~43份得苦皮素A纯品（60mg）；第54 份经制备色谱纯化，得苦皮素B（25mg），苦皮素H（40mg）；第61 份得苦皮素G（95mg）；第69~70份经制备色谱纯化，得苦皮素F （45mg）；第76份经制备色谱纯化得苦皮素J（45mg）。
（2）分离提取流程2
称取1kg陕西宝鸡产苦皮藤根皮粉末，依次加入3︰2︰2倍量 95%乙醇80℃下回流提取2h，过滤，合并三次滤液，减压浓缩至浸 膏。按此方法共提取苦皮藤根皮粉末7kg，总共得浸膏1120g。称取 上述醇提物浸膏，加入六倍量氯仿，80℃下回流提取40min，过滤， 减压浓缩至浸膏，得浸膏147g。此浸膏硅胶拌样后上柱，采用石油 醚／乙酸乙酯(10:1～4:6)进行梯度洗脱，经高效液相制备纯化 [Sunfire C18色谱柱(150mm×10mm,10μm)；流动相：甲醇-水；柱 温：25℃；流速：10mL/min；检测波长：232nm；进样量：200μl] 得到下列4-OH-β-二氢沉香呋喃多元醇酯类化合物。第381-385份经 制备纯化[甲醇-水65:35]得苦皮素E(27mg)；第420份经制备纯化[甲 醇-水62:38]得苦皮素A(80mg)；第546-554份经制备纯化[甲醇-水 60:40]得苦皮藤素XIX(43mg)；第590-594份经制备纯化[甲醇-水 68:32]得苦皮素C(28mg)和苦皮素P(16mg)；第613-614份经制备纯 化[甲醇-水62:38]得苦皮素B(95mg)、苦皮素H(60mg)；第679-681 份经制备纯化[甲醇-水60:40]得苦皮藤素III(26mg)；第820份经制 备纯化[甲醇-水68:32]得苦皮素J(29mg)。
苦皮藤素IV数据见文献[吴文君.植物杀虫剂苦皮藤素研究与 应用[M].化学工业出版社,2010]。
（3）15%T12苦皮藤素原药中主要活性成分的结构及核磁共振 碳谱数据
苦皮素A:R1=R4=OiBu,R2=R5=H,R3=OBz,R6=OH,R7=OAc
苦皮素B:R1=R5=OiBu,R2=OFu,R3=R4=H,R6=R7=OAc
苦皮素C:R1=R5=OiBu,R2=OBu,R3=R4=H,R6=R7=OAc
苦皮素E:R1=OiPet,R2=R5=H，R3=OBz,R4=OiBu,R6=OH,R7= OAc
苦皮素F:R1=R6=R7=OAc,R2=R5=OFu,R3=R4=H
苦皮素G:R1=R6=R7=OAc,R2=OFu,R3=R4=H,R5=OiBu
苦皮素H:R1=R7=OAc,R2=R5=H，R3=OBz,R4=OiBu,R6=OH
苦皮素J:R1=R5=R6=R7=OAc,R2=R4=H,R3=OBz
苦皮素P:R1=OiPet,R2=OBu,R3=R4=H,R5=OiBu,R6=R7=OAc
苦皮藤素Ⅲ:R1=OiBu,R2=R4=H,R3=OBz,R5=R6=R7=OAc
苦皮藤素IV:R1=OiBu,R2=R5=OFu,R3=R4=H,R6=R7=OAc
苦皮藤素XIX:R1=OiBu,R2=R5=H,R3=OBz,R4=OFu,R6=OH,R7= OAc
苦皮素A
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:75.01(C-1)，67.26(C-2),41.15 (C-3),72.13(C-4)，91.41(C-5)，76.89(C-6)，53.51(C-7)，73.69(C-8)， 75.28(C-9)，50.52(C-10),84.54(C-11),30.05(C-12)，26.35(C-13)， 24.14(C-14)，61.69(C-15)
OAC:169.49,169.60，20.50，21.13
OiBu:175.82,176.77,34.09,34.31,18.46,18.66,19.06,19.14
OBz:165.67,129.26,129.44,128.63,133.45
苦皮素B
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.63(C-1)，67.96(C-2), 42.00(C-3),69.84(C-4)，91.33(C-5)，75.39(C-6)，52.97(C-7)， 76.05(C-8)，71.44(C-9)，53.87(C-10),83.44(C-11),29.59(C-12)，25.45 (C-13)，24.47(C-14)，65.45(C-15)
OAC:169.54,169.66,169.79,20.55,21.12,21.48
OiBu:175.74,176.90,33.95,34.10,18.73,18.99,19.00,19.06
OFu:160.91,148.99,117.81,109.69,144.00
苦皮素C
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.86(C-1),67.98(C-2),42.04(C-3), 69.88(C-4)，91.42(C-5),75.48(C-6),53.04(C-7),76.19(C-8),72.03(C-9), 54.10(C-10),83.54(C-11),29.61(C-12),25.66(C-13),24.50(C-14), 65.55(C-15);
OAC:169.44,169.57,169.26,20.38,21.13*,21.50*(-CH3)(*归 属可互换)
OiBu:175.77,176.95,33.98,34.12,18.78,18.91,19.04,19.08
OBz:164.52,128.31,130.18,128.47,133.87
苦皮素E
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:75.09(C-1)，67.31(C-2), 41.21(C-3),72.15(C-4)，91.49(C-5)，76.92(C-6)，53.53(C-7)， 73.80(C-8)，75.23(C-9)，50.49(C-10),84.54(C-11),30.08(C-12)， 26.31(C-13)，24.06(C-14)，61.68(C-15)
OAC:169.55,169.46,20.48,21.13
OiBu:175.72,34.11,18.48,18.64
OiPet:176.19,41.56,26.59,11.69,16.92
OBz:165.68,129.36,129.49,128.61,133.42
苦皮素F
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.53(C-1)，67.80(C-2), 41.93(C-3),69.90(C-4)，91.31(C-5)，75.34(C-6)，53.80(C-7)，76.54 (C-8)，71.65(C-9)，54.33(C-10),83.12(C-11),25.55(C-12)，29.51 (C-13)，24.32(C-14)，65.56(C-15)
OAC:169.51,169.75,169.86,170.52,20.47,21.13,21.52,21.11
OFu:161.61,160.53,148.69,148.87,118.84,118.05,109.96, 109.78,144.01,144.01
苦皮素G
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.49(C-1)，67.82(C-2), 41.92(C-3),69.81(C-4)，91.51(C-5)，75.00(C-6)，53.34(C-7)，76.10 (C-8)，72.65(C-9)，53.97(C-10),83.27(C-11),29.45(C-123)，25.48 (C-13)，24.35(C-14)，65.67(C-15)
OAC:169.47,169.69,169.74,170.53,20.45,21.14,21.52,21.04
OiBu:175.86,33.92,18.81,18.89
OFu:160.91,148.99,117.83,109.71,144.02
苦皮素H
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:74.89(C-1)，67.31(C-2), 41.10(C-3),72.11(C-4)，91.44(C-5)，76.87(C-6)，53.59(C-7)， 73.36(C-8)，75.40(C-9)，50.64(C-10),84.52(C-11),30.03(C-123)， 26.24(C-132)，24.23(C-14)，61.38(C-15)
OAC:169.39,169.55,170.28,20.49,21.10,21.47
OiBu:175.88,34.02,18.41,18.58
OBz:165.72,129.23,129.40,128.64,133.40
苦皮素J
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:75.96(C-1),67.85(C-2),41.92(C-3), 69.68(C-4),91.70(C-5),75.00(C-6),53.25(C-7),69.75(C-8),72.01(C-9), 52.90(C-10),82.62(C-11),29.28(C-12),24.34(C-13),24.11(C-14), 60.23(C-15)
OAC:169.52,169.71,169.52,169.92,170.47,20.27,20.99*,21.22*, 21.46*,21.55(*归属可互换)
OBz:164.69,129.00,129.54,128.74,133.59
苦皮素P
13C NMR(100MHz,CDCl3)：δC：70.94（C-1），68.07（C-2），42.09 （C-3），69.92（C-4），91.42（C-5），76.22（C-6），52.98（C-7），75.58 （C-8），72.01（C-9），54.08（C-10），83.55（C-11），29.62（C-12）， 25.63.（C-13），24.55（C-14），65.56（C-15）
OAc：169.52，169.75，169.52，20.40,21.10,21.50
OiBu-8：175.77，33.99，18.84，18.84
OiPet-15：176.55，41.21，26.50，11.67，16.57
OBz：164.52，128.47，130.19,128.34,133.85
苦皮藤素Ⅲ
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:75.84(C-1),67.83(C-2),42.02(C-3), 69.73(C-4),91.57(C-5),75.39(C-6),53.27(C-7),69.84(C-8),71.95(C-9), 53.05(C-10),82.47(C-11),29.27(C-12),24.45(C-13),24.27(C-14), 60.74(C-15)
OAC:169.59*,169.59*,169.59*,170.07*,20.30,20.93**,21.23**, 21.50**(*,**归属可互换)
OiBu-15:177.29,33.92,19.12,19.32
OBz-9:164.58,129.07,129.50,128.73,133.59
苦皮藤素IV
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:70.3*(C-1,)，70.6*(C-2),42.0 (C-3),69.9(C-4)，91.4(C-5)，75.6*(C-6)，53.6(C-7)，76.1*(C-8)， 68.0*(C-9)，54.4(C-10),83.4(C-11),29.6(C-12)，25.5(C-13)，24.4 (C-14)，65.0(C-15)(*归属可互换)
OAC:169.6×3,20.5,21.0,21.4
OiBu:176.7,34.0,18.8,18.9
OFu:161.3,160.6,148.9,148.7,118.8,118.1,109.8,109.7,143.9 ×2
苦皮藤素XIX
13C NMR(100MHz,CDCl3)δC:75.08(C-1),67.37(C-2),41.28(C-3), 72.17(C-4),91.51(C-5),76.84(C-6),53.39(C-7),74.71(C-8),75.08(C-9), 50.06(C-10),84.57(C-11),30.05(C-12),26.31(C-13),24.23(C-14), 61.76(C-15)
OAC:169.47*,169.59*,20.43,21.15(*归属可互换)
OiBu-15:176.74,34.37,19.15,19.15
OBz-9:165.74,129.27,129.46,128.62,133.44
OFu-8:161.86,148.25,118.65,109.59,143.87
实施例1
（1）15%T12苦皮藤素原药甲制备方法
将筛分后符合规定的陕西宝鸡苦皮藤根或/和皮（24目），依次加 入体积为3︰2︰2倍量95%（质量比）的乙醇，于80℃下回流提取2 h（提取3次，每次均2h），过滤，合并三次滤液，减压浓缩至密度 1.08的滤液。取此滤液，加其体积为1倍量的沉淀剂（质量比为10% 的乙醇），沉淀12h，经离心得沉淀，即15%T12苦皮藤素原药甲。
（2）15%T12苦皮藤素原药甲质量检测方法
①特征提取物制备
取15%T12苦皮藤素原药甲1g，加入体积为6倍量（6mL）的 氯仿，80℃下回流提取40min，过滤后于60℃下减压浓缩，回收溶剂 至干，即得15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物。
②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测
取上述特征提取物，溶于0.5mL CDCl3中，作IGD核磁共振碳 谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图谱。
③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析
1）鉴别
15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹 图谱中，清楚地显示4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的 特征信号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证 12个4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物苦皮素A、B、C、 E、F、G、H、J、P、苦皮藤素III、IV、XIX在IGD核磁共振碳谱指 纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图 1-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图1-b。
2）15%T12苦皮藤素原药甲各活性成分比例测定结果如下：
3）15%T12苦皮藤素原药甲中苦皮素B浓度含量测定结果如下：
称取原药质量 200mg 15%T12苦皮藤素原药甲中苦皮素B质量浓度 67.62ug/mL 15%T12苦皮藤素原药甲B质量百分含量 3.34%
4）15%T12苦皮藤素原药甲含量测定结果如下：
下表中苦皮素C+苦皮素F+苦皮素P的分子式是以苦皮素C作为 代表的分子式，苦皮素A+苦皮素E+苦皮藤素XIX的分子式是以苦 皮素A作为代表的分子式（以下实施例均同实施例1）。
实施例2
（1）15%T12苦皮藤素原药甲制备方法
其他条件同实施例1，所不同的是使用滤液两倍量体积的水做沉 淀剂，效果与实施例1类似。
（2）15%T12苦皮藤素原药甲质量检测方法
①特征提取物制备-同实施例1。
②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测
同实施例1。
③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析
1）鉴别
15%T12苦皮藤素原药甲特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹 图谱中，清楚地显示4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的 特征信号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证 12个4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物苦皮素A、B、C、 E、F、G、H、J、P、苦皮藤素III、IV、XIX在IGD核磁共振碳谱指 纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图 2-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图2-b。
2）15%T12苦皮藤素原药甲各活性成分比例测定结果如下：
3）15%T12苦皮藤素原药甲中苦皮素B浓度含量测定结果如下：
称取原药质量 200mg 15%T12苦皮藤素原药甲中苦皮素B质量浓度 68.00ug/mL 15%T12苦皮藤素原药甲中苦皮素B质量百分含量 3.40%
4）15%T12苦皮藤素原药甲含量测定结果如下：
实施例3
（1）15%T12苦皮藤素原药乙制备方法
将筛分后符合规定的陕西华县苦皮藤根或/和皮（10目），依次加 入体积为6︰6倍量90%（质量比）的乙醇，于60℃下超声提取1h （提取2次，每次均提取1h），过滤，合并两次滤液，减压浓缩至密 度1.13的滤液。取此滤液，加其体积为2倍量的沉淀剂（质量比为 30%的乙醇），沉淀24h，经离心得沉淀，即15%T12苦皮藤素原药 乙。
（2）15%T12苦皮藤素原药乙质量检测方法
①特征提取物制备
取15%T12苦皮藤素乙1g，加入体积为12倍量（12mL）的氯 仿，60℃下超声提取20min，过滤后于70℃下减压浓缩，回收溶剂至 干，即得15%T12苦皮藤素原药乙特征提取物。
②特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱检测
取上述特征提取物，溶于0.5mL CDCl3中，作IGD核磁共振碳 谱指纹图谱检测，即得到IGD核磁共振碳谱指纹图谱。
③特征提取物IGD核磁共振碳谱指纹图谱解析
1）鉴别
15%T12苦皮藤素原药乙特征提取物的IGD核磁共振碳谱指纹 图谱中，清楚地显示4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物的 特征信号。根据其母核信号及其C-15特征峰信号的化学位移，确证 12个4-OH-β-二氢沉香呋喃倍半萜多醇酯类化合物苦皮素A、B、C、 E、F、G、H、J、P、苦皮藤素III、IV、XIX在IGD核磁共振碳谱指 纹图谱中均有相应的NMR信号。IGD核磁共振碳谱指纹图谱见附图 3-a，其特征峰局部拉宽放大图见附图3-b。
2）15%T12苦皮藤素原药乙各活性成分比例测定结果如下：
3）15%T12苦皮藤素原药乙中苦皮素B浓度含量测定结果如下：
称取原药质量 200mg 15%T12苦皮藤素原药乙中苦皮素B质量浓度 63.74ug/mL 15%T12苦皮藤素原药乙中苦皮素B质量百分含量 3.19%
4）15%T12苦皮藤素原药乙含量测定结果如下：
上述实施例1~3说明：用本发明制备方法得到的苦皮素原药，其 中有效活性成分的含量稳定，且本发明的检测方法，重复性和稳定性 很高。
实施例4
（1）2%T12苦皮藤素水悬浮剂配制
将检测合格的15%T12苦皮藤素原药置于反应釜中，按照配比量 加入下表中的辅料（润湿分散剂、增稠剂、防冻剂和消泡剂），搅拌， 再加溶剂至规定含量，搅拌至完全溶解，得到2%T12苦皮藤素水悬 浮剂。配制比例见下表：
（2）田间试验-参照农业部农药检定所生测室制定的农药田间药 效试验准则进行。
1）材料与方法
a．供试药剂
2%苦皮藤素水悬浮剂（见本实施例上述表格中的第一列的水悬 浮剂），10%吡虫啉悬浮剂（市售）。
b．防治对象与试验作物
防治对象为小麦蚜虫：麦长管蚜，合谷缢蚜，麦二叉蚜。试验作 物为小麦。
c．试验地及作物
试验地设在山东省泰安市试验田，该园土壤肥沃、肥力均匀、管 理水平一致，小麦蚜虫历年均有发生。
d．药剂处理
设2%苦皮藤素水悬浮剂800、1000、1200倍液3个处理，以40% 氧化乐果、20%氰戊菊酯对水稀释2000倍液为对照药剂，喷清水为 空白对照。小区面积20m2，顺序排列，重复3次。随机区组排列。
e．施药时间与方法
初次施药于2011年5月12日进行，正值小麦蚜虫为害盛期。试 验当天天气气晴为少云天气，平均气温20.1℃。用卫士牌WS-16P背 负式手动喷雾器施药。
f.调查时间与方法
于施药前在每小区中按对角线五点取样，挂牌固定5点，每点选 取有蚜虫的小麦5株，调查定株小麦旗叶及穗上的蚜虫数，以此作为 施药前虫口基数。施药后1、3、7d在标记的小麦上调查残存活虫数, 计算各处理区防治效果并进行差异显著性测验。
防效(％)=[1一处理区药后活虫数×对照区药前活虫数／(对照 区药后活虫数×处理区药前活虫数)]×100
2）统计分析结果
小麦蚜虫田间药效实验分析结果见下表。从表中可看出，2%苦 皮藤素水悬浮剂稀释成800~1000倍防效效果较好，其药后1天的防 治效果为81.93%~92.16%；对水稀释800倍处理区防效最好，其药后 3天的防治效果为91.90%~92.28%；优于对照药剂10%吡虫啉悬浮剂 倍对水稀释1000倍。
按照本实施例配制的其他水悬浮剂和上述给出田间试验的水悬 浮剂效果相似，以上述给出田间试验的水悬浮剂为最优。
实施例5
（1）2%T12苦皮藤素水悬浮剂苦皮藤素系数计算
取实施例1-2的15%T12苦皮藤素原药甲（陕西宝鸡）苦皮藤素 总系数的平均值作为苦皮藤素原药甲（陕西宝鸡）苦皮藤素总系数。
取实施例3的15%T12苦皮藤素原药乙（陕西华县）苦皮藤素总 系数实际值作为苦皮藤素原药乙（陕西华县）苦皮藤素总系数。
计算结果如下:
药材产地 苦皮藤素原药苦皮藤素总系数 陕西宝鸡 4.68 陕西华县 5.40
（2）2%T12苦皮藤素水悬浮剂苦皮素B浓度含量测定结果如下：
（3）2%T12苦皮藤素水悬浮剂苦皮藤素含量计算