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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710252799.7 (22)申请日 2017.04.18 (71)申请人 河南省农业科学院烟草研究所 地址 461000 河南省许昌市魏都区高桥营 乡俎庄 (72)发明人 孙计平 李雪君 吴照辉 孙焕 平文丽 丁燕芳 李旭辉 侯咏 俎焕新 张慧敏 王文星 (74)专利代理机构 郑州联科专利事务所(普通 合伙) 41104 代理人 时立新 杨海霞 (51)Int.Cl. A01G 1/00(2006.01) A01G 31/00(2006.01) (54)发明名称 一种烟。
2、草品种耐旱性快速鉴定方法 (57)摘要 本发明涉及一种烟草品种耐旱性快速鉴定 方法， 具体为： 1） 在培养皿中加入灭菌过的河沙， 河沙高度不超过培养皿高度的1/3， 再加入15% PEG溶液， 同时以蒸馏水作对照； 2） 在河沙表面铺 一层滤纸， 在滤纸上点消毒过的烟草种子， 盖上 培养皿盖， 密封， 放入培养箱常规培养； 3） 每天调 查发芽率， 于第14天调查完后计算发芽指数， 测 量根长和茎高， 并称量鲜重， 分别计算相对发芽 指数A、 相对根长B、 相对茎高C和相对鲜重D， 取上 述A、 B、 C和D的平均值， 即为该烟草品种的干旱胁 迫指数： 干旱胁迫指数越大， 说明该品种耐旱性 。
3、越强。 该方法试验方便简捷， 又不受试验人员和 场地限制， 适宜大批量烟草种质资源的耐旱性鉴 定。 权利要求书1页 说明书4页 CN 107046998 A 2017.08.18 CN 107046998 A 1.一种烟草品种耐旱性快速鉴定方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 1） 选择干净无污染的河沙， 用清水冲洗干净， 121高压灭菌； 2） 在培养皿中加入灭菌过的河沙， 河沙高度不超过培养皿高度的1/3， 再加入15% PEG 溶液， 每8ml PEG溶液添加2224g河沙； 同时以蒸馏水作对照； 3） 在河沙表面铺一层滤纸， 滤纸直径与培养皿大小一致， 在滤纸上点消毒过的烟草种 子， 。
4、盖上培养皿盖， 密封， 放入培养箱常规培养； 4） 每天调查发芽率， 每天调查后密封， 于第14天调查完后计算发芽指数GI、 及相对发芽 指数A： GI = （Gt/Dt） ， 式中Gt为第t天的发芽种子数， Dt 为调查天数； A = 15% PEG处理的发芽指数/正常条件下发芽指数； 5） 同时于第14天取代表性幼苗， 测量根长和茎高， 并称量鲜重； 计算相对根长B： B = 15%PEG处理的根长/正常条件下根长； 计算相对茎高C： C = 15%PEG处理的茎高/正常条件下茎高； 计算相对鲜重D： D = 15%PEG处理的鲜重/正常条件下鲜重； 6） 取上述相对发芽指数A、 相对根长。
5、B、 相对茎高C和相对鲜重D的平均值， 即为该烟草品 种的干旱胁迫指数， 干旱胁迫指数越大， 说明该烟草品种耐旱性越强。 2.如权利要求1所述的烟草品种耐旱性快速鉴定方法， 其特征在于， 步骤1） 中河沙粒径 为0.22mm。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107046998 A 2 一种烟草品种耐旱性快速鉴定方法 技术领域 0001 本发明属于烟草鉴定处理技术领域， 具体涉及一种烟草品种耐旱性快速鉴定方 法。 背景技术 0002 烟草是重要的经济作物之一， 尤其是烤烟， 我国的烤烟面积和产量均居世界第一。 目前我国烟区主要集中在灌溉条件较差的丘陵山地， 水资源短缺和不平衡是制约现。
6、代烟草 农业发展的一个重要因素， 不同烤烟品种的耐旱能力不同， 受干旱的影响程度也不同。 因 此， 筛选耐旱品种尤为重要。 0003 耐旱鉴定技术在其它作物如小麦、 玉米等中研究较多。 由于作物不同， 鉴定方法差 异很大。 目前烟草耐旱鉴定技术一直不成熟。 主要表现在： 1） 现有烟草品种耐旱性鉴定多采 用盆栽控水试验， 虽然结果可靠， 但周期长， 费时费力， 仅适合个别品种耐旱性鉴定， 不适宜 大批量试验。 2） 王仁刚等公开了一种 “苗期鉴定烟草抗旱性的方法 （CN201110106454.3） ” ， 其较大田鉴定相对快速省力， 但需要在温室里进行， 也有一定局限性： 需要特殊的设施和 。
7、场地； 需要人为观察烟苗干旱情况， 每个人判断萎蔫情况有差异， 因此， 复水时间不好掌 握； 需要反复控水、 复水， 需要大量人力物力， 也不适宜大批量鉴定烟草品种耐旱性。 3耐 旱鉴定方法多、 指标多， 没有统一的鉴定标准。 发明内容 0004 本发明目的在于克服现有技术缺陷， 提供一种烟草品种耐旱性快速鉴定方法， 该 方法在试验过程中一次加入PEG溶液、 后续无需补充， 试验方便简捷， 又不受试验人员和场 地限制， 适宜大批量烟草种质资源的耐旱性鉴定。 0005 为实现上述目的， 本发明采用如下技术方案： 1） 选择干净无污染的河沙， 用清水冲洗干净， 121高压灭菌； 2） 在培养皿中加。
8、入灭菌过的河沙， 河沙高度不超过培养皿高度的1/3， 再加入15% PEG （聚乙二醇） 溶液， 每8ml PEG溶液添加2224g河沙； 同时以蒸馏水作对照； 3） 在河沙表面铺一层滤纸， 要求滤纸直径与培养皿大小一致， 在滤纸上点消毒过的烟 草种子 （9cm的滤纸上约可点100粒烟草种子） ， 盖上培养皿盖， 用封口膜密封， 放入培养箱常 规培养； 4） 每天调查发芽率， 每天调查后用封口膜密封， 于第14天调查完后计算发芽指数GI、 及 相对发芽指数A： GI = （Gt/Dt） ， 式中Gt为第t天的发芽种子数， Dt 为调查天数； A = 15% PEG处理的发芽指数/正常条件下发芽。
9、指数； 5） 同时于第14天取代表性幼苗， 测量根长和茎高， 并称量鲜重； 计算相对根长B： B = 15%PEG处理的根长/正常条件下根长； 计算相对茎高C： C = 15%PEG处理的茎高/正常条件下茎高； 说 明 书 1/4 页 3 CN 107046998 A 3 计算相对鲜重D： D = 15%PEG处理的鲜重/正常条件下鲜重； 6） 取上述相对发芽指数A、 相对根长B、 相对茎高C和相对鲜重D的平均值， 即为该烟草品 种的干旱胁迫指数， 干旱胁迫指数越大， 说明该烟草品种的耐旱性越强。 为了保证不同批次 试验结果的可比性， 试验过程中也可以选用耐旱烟草品种 “牛津26” 或 “农大。
10、202” 作为对照 品种。 0006 优选的， 步骤1） 中河沙粒径为0.22mm。 0007 本发明主要解决快速鉴定烟草品种耐旱性问题， 本发明方法采用15%PEG溶液对烟 草品种进行耐旱性鉴定， 适合批量种质资源筛选。 本发明中， 发芽床定量加入河沙和PEG溶 液， 保证试验条件的一致性； 试验过程中无需补充PEG溶液， 试验方便简捷。 此外， 本发明为 了消除种子之间的自然差异， 用蒸馏水作对照， 选用发芽指数、 根长、 茎高和苗鲜重四个指 标的相对值来鉴定品种耐旱性， 和大田表现高度相关， 鉴定结果准确可靠。 0008 和现有技术相比， 本发明具有如下有益效果： 1） 本发明主要解决速。
11、鉴定烟草品种耐旱性问题， 与盆栽控水鉴定和温室控水复水鉴定 相比， 本发明方法更加方便快捷， 适合批量种质资源的筛选鉴定； 2） 本发明与纸床做发芽床相比， 河沙具有良好的蓄水保水功能， 能够一次性加入足够 量PEG高渗溶液， 无需后期补加溶液， 试验更简便； 3） 本发明用蒸馏水作对照， 消除了种子之间的自然差异， 选用发芽指数、 茎高、 根长和 苗鲜重等四个指标的相对值来鉴定品种耐旱性， 和大田表现高度相关， 鉴定结果准确可靠。 具体实施方式 0009 以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍， 但本发明的保护范围 并不局限于此。 0010 实施例采用15%PEG溶液鉴定烟草品种。
12、的耐旱性。 0011 1、 PEG溶液配制 采用PEG-6000作为处理剂， 用蒸馏水作溶剂， 按照15%的质量浓度进行配制， 形成一定 渗透势的干旱胁迫处理。 0012 2、 发芽床的制备： 1） 选择干净无污染的河沙 （粒径0.2-2mm） ， 用清水冲洗干净， 于121高压灭菌； 2） 选用直径9cm的培养皿， 在培养皿中定量加入24g灭菌过的河沙。 平行摇动培养皿， 使 沙子均匀平铺培养皿底部； 3） 定量加入8ml 15%PEG溶液， 同时用8ml 的蒸馏水作对照； 4） 15%PEG溶液完全浸润河沙后， 在河沙表面铺一张直径9.0cm的定性滤纸。 0013 3、 种子干旱胁迫处理 。
13、试验选用烤烟品种 “豫烟13号” 、“中烟100” 、 “豫烟9号” 、“牛津26” 和 “农大202” 。 种子 预先用75%酒精消毒后用清水洗3次， 播于发芽床 （即将烟草种子点在滤纸上， 每一个烟草品 种点100粒种子） 。 种子置床后， 盖上培养皿盖， 用封口膜密封培养皿。 置于人工光照培养箱 中培养， 黑暗20C （12h） ， 光照30C （12h） ， 恒温培养14天， 逐日调查发芽率 （每日调查结束后 用封口膜密封培养皿） ， 于第14天调查结束后计算发芽指数， 并取50株代表性幼苗， 测量根 长和茎高， 及称量鲜重， 计算出相对发芽指数A、 相对根长B、 相对茎高C和相对鲜重。
14、D。 试验重 说 明 书 2/4 页 4 CN 107046998 A 4 复三次， 每次重复100粒。 结果见表1至4。 0014 4、 试验结果。 0015 4.1不同品种发芽指数比较 表1不同烤烟品种的发芽指数比较 表1显示， 15%PEG处理下五个品种发芽指数差异较大， 牛津26相对发芽指数最高， 中烟 100最低。 0016 4.2 不同品种幼苗根长和茎高比较 表2 不同烤烟品种茎高比较 表2的结果显示： 15%PEG处理下五个品种茎高受影响程度不同， 其中， 中烟100受影响程 度最大， 农大202、 豫烟9号和牛津26的茎高生长受影响程度较小。 0017 表3 不同烤烟品种根长比。
15、较 表3的结果显示： 15%PEG处理下五个品种根长受影响程度不同， 其中， 中烟100受影响程 度最大， 豫烟13号根系生长受影响程度较小。 0018 4.3不同品种幼苗鲜重比较 表4不同烤烟品种幼苗鲜重比较 说 明 书 3/4 页 5 CN 107046998 A 5 表4的结果显示： 15%PEG处理下五个品种幼苗鲜重受影响程度不同， 其中， 中烟100受影 响程度最大， 豫烟9号幼苗鲜重受影响程度较小。 0019 为了消除种子本身发芽率的误差， 对相对发芽指数、 相对根长、 相对茎高和相对苗 鲜重四个指标进行分析， 并取四个指标的平均值作为该品种的干旱胁迫指数。 经计算获知： 豫烟13号、 中烟100、 豫烟9号、 农大202和牛津26的干旱胁迫指数分别为73.78%， 62.45%、 79.47%、 78.99%和78.71%。 说明牛津26、 豫烟9号和农大202耐旱性较强， 其次为豫烟13号， 中 烟100耐旱性相对较差。 该试验结果与前人研究结论及大田表现结果一致。 0020 本试验结果说明， 用PEG能够对不同烟草品种进行耐旱鉴定， 且试验简捷， 可用于 快速筛选耐旱种质资源， 尤其适合大批量烟草种质资源的耐旱性鉴定。 说 明 书 4/4 页 6 CN 107046998 A 6 。