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1、(10)申请公布号 CN 103548699 A (43)申请公布日 2014.02.05 CN 103548699 A (21)申请号 201310593867.8 (22)申请日 2013.11.22 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 广西壮族自治区林业科学研究院 地址 530002 广西壮族自治区南宁市西乡塘 区邕武路 23 号 (72)发明人 蔡玲 姚瑞玲 刘海龙 吴幼媚 (74)专利代理机构 广西南宁汇博专利代理有限 公司 45114 代理人 邹超贤 (54) 发明名称 一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种高脂松树茎段组培。
2、芽诱导 和增殖培养的方法， 将高脂松树嫩枝茎段灭菌消 毒后， 接入初代培养基中， 在温度 7-10暗培养 5-7d， 温度20-25培养50-60d形成初代芽 ； 将初 代芽转入增殖培养基内， 温度 17-20培养 5-7d 后， 温度20-25培养15-20d形成增殖芽丛， 芽丛 转入伸长培养基中， 温度 17-20培养 5-7d， 温度 20-25培养 18-22d， 芽增殖和伸长交替培养。该 方法能有效遏制继代芽的褐化， 使芽健康增殖， 平 均增殖系数 6.95 以上， 芽伸长快， 并且长势良好， 经过多代培养增殖系数稳定， 达到继代芽快速扩 繁的目的， 具有较好的经济效益和社会效益。 。
3、(51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103548699 A CN 103548699 A 1/2 页 2 1. 一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 其特征在于 ： 组培茎段选择与处 理、 组培芽诱导、 继代增殖扩繁、 丛生芽伸长和壮芽培养等组培技术体系， 获得优质高脂松 树芽， 其操作步骤如下 ： （1） 组培茎段选择与处理 高脂松树的组培茎段芽选自年产松脂 4-4.5kg/a. 株的高脂松树穗条嫁接成活的植 株， 剪取春季。
4、萌发的半木质化嫩枝稍， 长 6-10cm, 用苯扎溴铵按常规方法清洗， 然后用自 来水冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的尘埃和苯扎溴铵， 再将嫩枝稍裁成 1-2cm 长的茎 段， 视木质化程度分类置放容器内， 用 0.1% 新吉尔灭浸泡 10-15min， 在无菌条件下， 用 0.15%HgCl2灭菌消毒 3-5min， 无菌水冲洗 3-4 次， 再用 0.1%HgCl2灭菌消毒 4-6min， 无菌水 冲洗 4-5 次后， 将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干 ； （2） 组培芽诱导 将无菌茎段放入诱导培养基中进行组培芽诱导， 组培芽诱导的方法是 ： 先置温度 7-10的环境,暗培养。
5、5-7d， 再转入温度20-25,光照强度1200-2000lux,光照12-14h/ d 条件下培养 50-60d， 形成初代芽 ； （3） 芽继代增殖扩繁 将初代芽接入增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 继代增殖扩繁控制温度 17-20 光 照 强 度 2000-4000lux， 光 照 10-14h/d， 培 养 5-7d， 再 在 温 度 20-25 ， 光 照 强 度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d 的条件下培养 15-20d， 经 2-3 次继代增殖扩繁周期形成丛生 芽 , 平均增殖系数 6.95 以上 ； （4） 丛生芽伸长 将高 1cm 的芽丛接入伸长培养基。
6、中进行丛生芽伸长， 丛生芽伸长控制温度 17-20， 光照强度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d， 培养 5-7d， 再在温度 22-25， 光照强度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d 的条件下培养 20-25d， 得到长 2-3cm 的伸长丛生芽 ； （5） 壮芽培养 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 温度20-25， 光照强度2000-4000lux， 光 照 10-14h/d， 培养壮芽 ； 将 1cm 的芽丛， 接入继代增殖扩繁培养基中， 继续进行丛生芽的 增殖扩繁培养。 2. 根据权利要求 1 所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的。
7、方法， 其特征在 于 ： 所述的诱导培养基配方为 ： 1/2改良DCR十6-BA3-5mg/L十NAA0.5-1.0mg/L十VC15 mg/ L 十椰子汁 40-60ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L。 3. 根据权利要求 1 所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 其特征在 于 ： 所述的增殖扩繁培养基配方为 :1/2 改良 DCR 十 6-BA0.5-3mg/L 十 NAA0.05-0.5mg/L 十 VC15mg/L 十椰子汁 10-30ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L。 4. 根据权利要求 1 所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培。
8、养的方法， 其特征在 于 ： 所述的伸长培养基配方为 ： 改良DCR十6-BA0.1-0.3mg/L十NAA0.05-0.2mg/L十椰子汁 10-20ml/L 十活性碳 3g/L 十琼脂粉 4.0g/L 十蔗糖 20g/L。 5. 根据权利要求 1 所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 其特征在 于 ： 所述的壮芽培养基配方为 ： 改良 DCR 十琼脂粉 4.0g/L 十蔗糖 20g/L。 6. 根据权利要求 1 所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 其特征在 权 利 要 求 书 CN 103548699 A 2 2/2 页 3 于 ： 所述的改良 DCR 培养基。
9、配方为 ： DCR 十 NH4NO3250 mg/L 十谷氨酰胺 5mg/L。 权 利 要 求 书 CN 103548699 A 3 1/5 页 4 一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法 技术领域 0001 本发明属植物繁殖技术领域， 涉及松树组织培养技术， 尤其是一种高脂松树茎段 组培芽诱导和增殖培养的方法。 背景技术 0002 高脂松树是新松木品种， 是集采脂、 纸浆、 纤维板， 胶合板、 建筑材、 家具材为一身 的优良树种， 具有速生、 树干通直， 高产脂， 抗逆性及适应性强等优良性状， 适合亚热带地区 种植。高脂松树一般 5-8 年左右可以成材， 综合利用价值高。由于高脂松树种子。
10、量少， 同时 种子苗有分化， 良种资源极少。无性繁殖高脂松树， 可以保持母本的优良性状。目前， 高脂 松树主要是扦插和嫁接。 高脂松树的扦插和嫁接， 由于受良种穗条有限， 制约优良品种的快 速推广。作为苗木的组培快繁技术， 虽然在组织培养过程有所研究， 仍存在着许多问题。例 如继代芽松脂含量高造成芽褐死、 易玻璃化， 增殖系数低， 有效芽数少， 继代周期长， 多次继 代芽活性降低， 增殖系数降低。因此， 在高脂松组培继代芽培养中， 上述问题更为突出 , 特 别需要一种高脂松组培继代芽的培养方法， 解决现有存在的技术问题， 适应大力发展高脂 松树人工林的需要。 发明内容 0003 本发明的目的是。
11、针对现有高脂松树组织培养初代芽褐化严重至死， 芽增殖系数 低 , 高生长缓慢等问题 , 提供一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法。 0004 本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现 ： 一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 采用组培茎段选择与处理、 组培芽 诱导、 继代增殖扩繁、 丛生芽伸长和壮芽培养等组培技术体系， 获得优质高脂松树芽， 其操 作步骤如下 ： （1） 组培茎段选择与处理 高脂松树的组培茎段芽选自年产松脂达 4-4.5kg/a. 株的高脂松树穗条嫁接成活的 植株， 剪取春季萌发的半木质化嫩枝稍， 长 6-10cm, 用苯扎溴铵按常规方法清洗， 然后用自 来水。
12、冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的尘埃和苯扎溴铵， 再将嫩枝稍裁成 1-2cm 长的茎 段， 视木质化程度分类置放容器内， 用 0.1% 的新吉尔灭浸泡 10-15 min， 在无菌条件下， 用 0.15%HgCl2灭菌消毒 3-5min， 再用无菌水冲洗 3-4 次， 最后用 0.1%HgCl2灭菌消毒 4-6min， 无菌水冲洗 4-5 次后， 将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干 ； （2） 组培芽诱导 将无菌茎段放入诱导培养基中进行组培芽诱导， 组培芽诱导的方法是 ： 先放置温度 7-10的环境,暗培养5-7d， 再转入温度20-25,光照强度1200-2000lux,光照12。
13、-14h/ d 条件下培养 50-60d， 形成初代芽 ； （3） 芽继代增殖扩繁 将初代芽接入增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 继代增殖扩繁控制温度 说 明 书 CN 103548699 A 4 2/5 页 5 17-20， 光照强度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d， 培养 5-7d， 再在温度 20-25， 光照强度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d 的条件下培养 15-20d， 经 2-3 次继代增殖扩繁周期形成丛生 芽 , 平均增殖系数 6.95 以上 ； （4） 丛生芽伸长 将 1cm 芽丛接入伸长培养基中进行丛生芽伸长， 丛生芽伸长控制温度 。
14、17-20， 光 照 强 度 2000-4000lux， 光 照 10-14h/d， 培 养 5-7 天， 再 在 温 度 22-25 ， 光 照 强 度 2000-4000lux， 光照 10-14h/d 的条件下培养 20-25d， 得到长 2-3cm 的伸长丛生芽 ； （5） 壮芽培养 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 温度20-25， 光照强度2000-4000lux， 光 照 10-14h/d， 培养壮芽 ； 将 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行丛生芽继代增殖培养。 0005 以上所述的诱导培养基配方为 :1/2 改良 DCR 十 6-BA3-5mg/L 十 NAA。
15、0.5-1.0mg/L 十 VC15 mg/L 十椰子汁 40-60ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L。 0006 以 上 所 述 的 增 殖 扩 繁 培 养 基 配 方 为 :1/2 改 良 DCR 十 6-BA0.5-3mg/L 十 NAA0.05-0.5mg/L 十 VC15mg/L 十椰子汁 10-30ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L。 0007 以上所述的伸长培养基配方为 ： 改良 DCR 十 6-BA0.1-0.3mg/L 十 NAA0.05-0.2mg/ L 十椰子汁 10-20ml/L 十活性碳 3g/L 十琼脂粉 4.0g/L 十蔗糖 2。
16、0g/L。 0008 以上所述的壮芽培养基配方为 ： 改良 DCR 十琼脂粉 4.0g/L 十蔗糖 20g/L。 0009 以上所述的改良 DCR 培养基配方为 ： DCR 十 NH4NO3250 mg/L 十谷氨酰胺 5mg/L。 0010 本发明相对于现有的技术具有优点和积极效果 ： 1、 本发明筛选出一个适应高脂松树茎段芽的组培技术体系， 其方案为 ： 常规洁净溶液 处理组培茎段， 用诱导培养基组培芽诱导， 用增殖扩繁培养基继代增殖扩繁， 经 2-3 次继代 周期形成丛生芽 , 伸长培养基丛生芽伸长， 将高 2cm 的单芽切下插于壮芽培养基培养， 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行。
17、丛生芽继代增殖培养， 实现丛生芽继代增殖， 能有 效完成组培快繁芽培养过程。 0011 2、 本发明在芽继代培养初期， 采用低温度培养后， 转到较高温度下培养， 通过前期 低温培养有效遏制继代芽褐化和玻璃化， 较高温度下培养促进芽快速生长， 获得恒稳的健 康芽增殖体系， 保持较高增殖系数和优质有效芽数 , 达到组培芽高效扩繁的目的， 增殖系 数达到 6.95 以上。 0012 3、 本发明一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法， 其操作过程简便， 培 养周期短， 继代芽质量优， 继代芽产量大幅度提高， 增殖系数达到 6.95 以上， 具有较好的经 济效益和社会效益。 附图说明 0013 图。
18、 1 和图 2 均为高脂松树茎段组培壮芽。 具体实施方式 0014 下面结合实施例对本发明做进一步说明。 0015 实施例 1 本实施例采用高脂松树穗条为年产松脂达 4kg/a. 株的母株穗条。在晴朗日剪取春季 说 明 书 CN 103548699 A 5 3/5 页 6 萌发的半木质化嫩枝稍， 长 6-10cm, 剪除针叶， 在常规洗洁净溶液苯扎溴铵中刷洗干净， 然 后用自来水冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的洗洁净溶液， 再将嫩枝稍裁成 1-2cm 长的茎 段， 视木质化程度分类置放容器内， 将幼嫩顶梢用 0.1% 的新吉尔灭浸泡 15min， ， 无菌水冲 洗 2 遍， 再用 0.。
19、15% 的 HgCl2灭菌消毒 3min， 然后用无菌水冲洗 5 次， 最后用 0.1% 的 HgCl2 灭菌消毒 6min， 再用无菌水冲洗 5 次， 将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干。 0016 将无菌茎段放入含有 :1/2 改良 DCR 十 6-BA4mg/L 十 NAA0.8mg/L 十 VC15mg/L 十 椰子汁 50ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的诱导培养基中进行组培芽诱导。方法是 ： 先放置放置人工光照培养箱， 控制温度 10 , 全暗培养 5d， 再转入温度 25 , 光照强度 1600lux, 光照 13h/d 条件下培养 56d 形成初代芽。。
20、 0017 将形成的初代芽接入 1/2 改良 DCR 十 6-BA2mg/L 十 NAA0.2mg/L 十 VC15mg/L 十椰 子汁 20ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 控制 温度 18， 光照强度 3000lux， 光照 12h/d， 培养 6d， 再在温度 23， 光照强度 3000lux， 光照 12h/d， 培养 18d， 经 3 次继代周期形成丛生芽 , 平均增殖系数 7.1。 0018 将 1cm 芽丛接入改良 DCR 十 6-BA0.2mg/L 十 NAA0.1mg/L 十椰子汁 15ml/L 十活 性碳3g/L十琼。
21、脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸长培养基中进行丛生芽伸长， 控制温度18， 光照强度 3000lux， 光照 12h/d 的条件下培养 6 天， 再控制温度 23， 光照强度 3000lux， 光 照 12h/d 的条件下培养 23d， 得到芽长 2.6cm 的伸长丛生芽。 0019 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 控制温度25， 光照强度3000lux， 光 照 12h/d， 培养壮芽。将 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行丛生芽继代增殖培养。 0020 以上所述的改良DCR培养基配方为 ： DCR十NH4NO3250mg/L十谷氨酰胺5mg/L， 培养 基 pH 5.。
22、8。 0021 实施例 2 本实施例采用高脂松树穗条为年产松脂达 4kg/a 的母株穗条。在晴朗日剪取春季萌发 的半木质化嫩枝稍， 长 6-8cm, 剪除针叶， 在常规洗洁净溶液苯扎溴铵中刷洗干净， 然后用 自来水冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的洗洁净溶液， 再将嫩枝稍裁成 1-2cm 长的茎段， 视木质化程度分类置放容器内， 将幼嫩顶梢用 0.1% 的新吉尔灭浸泡 10min， ， 无菌水冲洗 1 遍， 再用 0.1% 的 HgCl2灭菌消毒 5min， 然后用无菌水冲洗 3 次， 最后用 0.1% 的 HgCl2灭菌 消毒 4min， 再用无菌水冲洗 4 次， 将灭菌消毒的茎段放在。
23、无菌滤纸上将水吸干。 0022 将无菌茎段放入含有 :1/2 改良 DCR 十 6-BA3mg/L 十 NAA0.5mg/L 十 VC15mg/L 十 椰子汁 60ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的诱导培养基中进行组培芽诱导。方法是 ： 先放置放置人工光照培养箱， 控制温度 10 , 全暗培养 5d， 再转入温度 20 , 光照强度 1200lux, 光照 14h/d 条件下培养 60d， 形成初代芽。 0023 将形成的初代芽接入 1/2 改良 DCR 十 6-BA0.5mg/L 十 NAA0.05mg/L 十 VC15mg/L 十椰子汁 30ml/L 十琼脂粉 3.8。
24、g/L 十蔗糖 20g/L 的增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 控制温度 17， 光照强度 2000lux， 光照 14h/d， 培养 7d， 再在温度 25， 光照强度 2000lux， 光照 10h/d， 培养 15d， 经 2 次继代周期形成丛生芽 , 平均增殖系数 6.86。 0024 将1cm芽丛接入改良DCR十6-BA0.1mg/L十NAA0.05mg/L十椰子汁20ml/L十活 性碳3g/L十琼脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸长培养基中进行丛生芽伸长， 控制温度17， 光照强度 2000lux， 光照 14h/d 的条件下培养 7 天， 再控制温度 22， 光照强度 200。
25、0lux， 光 说 明 书 CN 103548699 A 6 4/5 页 7 照 14h/d 的条件下培养 25d， 得到芽长 2.4cm 的伸长丛生芽。 0025 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 控制温度22， 光照强度2000lux， 光 照 12h/d， 培养壮芽。将 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行丛生芽继代增殖培养。 0026 以上所述的改良 DCR 培养基配方为 ： DCR 十 NH4NO3250mg/L 十谷氨酰胺 5mg/L, 培 养基 pH5.8。 0027 实施例 3 本实施例采用高脂松树穗条为年产松脂达 4.5kg/a 的母株穗条。在晴朗日剪取春季 萌。
26、发的半木质化嫩枝稍， 长 8-10cm, 剪除针叶， 在常规洗洁净溶液苯扎溴铵中刷洗干净， 然 后用自来水冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的洗洁净溶液， 再将嫩枝稍裁成 1-2cm 长的茎 段， 视木质化程度分类置放容器内， 将幼嫩顶梢用 0.1% 的新吉尔灭浸泡 15min， ， 无菌水冲 洗 2 遍， 再用 0.1% 的 HgCl2灭菌消毒 5min， 然后用无菌水冲洗 5 次， 最后用 0.1% 的 HgCl2灭 菌消毒 4min， 再用无菌水冲洗 4 次， 将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干。 0028 将无菌茎段放入含有 :1/2 改良 DCR 十 6-BA5mg/L 十 。
27、NAA1.0mg/L 十 VC15mg/L 十 椰子汁 40ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的诱导培养基中进行组培芽诱导。方法是 ： 先放置放置人工光照培养箱， 控制温度 10 , 全暗培养 5d， 再转入温度 25 , 光照强度 2000lux, 光照 12h/d 条件下培养 50d， 形成初代芽。 0029 将形成的初代芽接入 1/2 改良 DCR 十 6-BA3mg/L 十 NAA0.5mg/L 十 VC15mg/L 十椰 子汁 10ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 控制 温度 20， 光照强度 4000lu。
28、x， 光照 10h/d， 培养 5d， 再在温度 25， 光照强度 4000lux， 光照 10h/d， 培养 15d， 经 2 次继代周期形成丛生芽 , 平均增殖系数 6.95。 0030 将 1cm 芽丛接入改良 DCR 十 6-BA0.3mg/L 十 NAA0.2mg/L 十椰子汁 10ml/L 十活 性碳3g/L十琼脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸长培养基中进行丛生芽伸长， 控制温度20， 光照强度 4000lux， 光照 10h/d 的条件下培养 7 天， 再控制温度 25， 光照强度 4000lux， 光 照 10h/d 的条件下培养 25d， 得到芽长 2.8cm 的伸长丛生。
29、芽。 0031 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 控制温度22， 光照强度4000lux， 光 照 14h/d， 培养壮芽。将 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行丛生芽继代增殖培养。 0032 以上所述的改良DCR培养基配方为 ： DCR十NH4NO3250mg/L十谷氨酰胺5mg/L， 培养 基 pH5.8。 0033 实施例 4 本实施例采用高脂松树穗条为年产松脂达 4kg/a 的母株穗条。在晴朗日剪取春季萌发 的半木质化嫩枝稍， 长 6-8cm, 剪除针叶， 在常规洗洁净溶液苯扎溴铵中刷洗干净， 然后用 自来水冲洗十浸泡 15min， 洗去嫩枝稍上的洗洁净溶液， 再将嫩枝。
30、稍裁成 1-2cm 长的茎段， 视木质化程度分类置放容器内， 将幼嫩顶梢用 0.1% 的新吉尔灭浸泡 12min， ， 无菌水冲洗 1 遍， 再用 0.12% 的 HgCl2灭菌消毒 3.5min， 然后用无菌水冲洗 3 次， 最后用 0.1% 的 HgCl2灭 菌消毒 4min， 再用无菌水冲洗 4 次， 将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干。 0034 将无菌茎段放入含有 ： 1/2 改良 DCR 十 6-BA5mg/L 十 NAA1.0mg/L 十 VC15mg/L 十 椰子汁 45ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的诱导培养基中进行组培芽诱导， 方法是 ： 先放置。
31、放置人工光照培养箱， 控制温度 9 , 全暗培养 5.5d， 再转入温度 22 , 光照强度 1200ux, 光照 13h/d 条件下培养 50d， 形成初代芽。 说 明 书 CN 103548699 A 7 5/5 页 8 0035 将形成的初代芽接入 1/2 改良 DCR 十 6-BA1mg/L 十 NAA0.3mg/L 十 VC15mg/L 十椰 子汁 12ml/L 十琼脂粉 3.8g/L 十蔗糖 20g/L 的增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁， 控制 温度 18， 光照强度 3200lux， 光照 11h/d， 培养 6d， 再在温度 24， 光照强度 3200lux， 光照 11h/。
32、d， 培养 16d， 经 3 次继代周期形成丛生芽 , 平均增殖系数 7.13。 0036 将 1cm 芽丛接入改良 DCR 十 6-BA0.3mg/L 十 NAA0.2mg/L 十椰子汁 12ml/L 十活 性碳3g/L十琼脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L的伸长培养基中进行丛生芽伸长， 控制温度18， 光照强度3200lux， 光照11h/d的条件下培养6天， 再控制温度24， 光照强度3200ux， 光照 11h/d 的条件下培养 20d， 得到芽长 2.6cm 的伸长丛生芽。 0037 将高2cm的单芽切下， 插入壮芽培养基中， 控制温度23， 光照强度3000lux， 光 照 12h/d， 培养壮芽。将 1cm 芽丛接入增殖扩繁培养基中， 进行丛生芽继代增殖培养。 0038 以上所述的改良DCR培养基配方为 ： DCR十NH4NO3250mg/L十谷氨酰胺5mg/L， 培养 基 pH5.8。 说 明 书 CN 103548699 A 8 1/2 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 103548699 A 9 2/2 页 10 图 2 说 明 书 附 图 CN 103548699 A 10 。