一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103583789 A (43)申请公布日 2014.02.19 CN 103583789 A (21)申请号 201310544409.5 (22)申请日 2013.11.07 A23J 3/04(2006.01) (71)申请人 日照海大博远海洋生物科技有限公 司 地址 山东省日照市国际海洋城右所村 (72)发明人 杨庆利 曹荣军 薛长湖 刘少芳 周忠云 (54) 发明名称 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方 法 (57) 摘要 本发明公开了一种南极磷虾分离蛋白的超 声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 （2） 超声提取 （3） 离。

2、心 （4） 二次超声提取 （5） 酸沉 （6） 醇洗 （7） 水洗。在碱提酸沉提取分离 蛋白的基础上， 采用超声辅助的方法， 对南极磷虾 分离蛋白的提取工艺进行优化， 具有提取时间短， 生产成本低的优点。得到的南极磷虾分离蛋白的 纯度为 99-99.5%。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103583789 A CN 103583789 A 1/1 页 2 1. 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ：。

3、 取南极磷虾粉， 按照料液比为1 ： 10-1:12加入碱溶液， 调节溶液PH=8-9， 浸渍 35-40min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 210-240W， 超声温度为 30-35， 超声波频率 28HZ， 超声提取 20-25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 25-30min， 放入离心机中， 离心得到上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物重复上述步骤， 碱浸， 超声提取， 放入离心机中， 离心合并上 清液 ； （5） 酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 离心得。

4、 到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 10-20 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 1:5(m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得 到的沉淀物冷冻干燥即可。 2. 根据权利要求 1 所述的一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在 于， 所述步骤 （1） 中碱溶液为氢氧化钙、 亚硫酸钠或氢氧化钠中的一种。 3. 根据权利要求 1 所述的一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在 于， 所述步骤 （3） 或 （4） 中离心以 8000-12000r/min 的速度离心 15-20min，。

5、 收集上清液。 4. 根据权利要求 1 所述的一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在 于， 所述步骤 （5） 中离心以 5000-7000r/min 的速度离心 15-20min。 5. 根据权利要求 1 所述的一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在 于， 所述步骤 （1） 中碱溶液优选为氢氧化钠。 6. 根据权利要求 1 所述的一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在 于， 所述步骤 （2） 中超声提取的条件优选为 ： 超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频 率 28HZ， 超声提取 25min。 权 利 要 求 书 CN 1035837。

6、89 A 2 1/5 页 3 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法 技术领域 0001 本发明涉及一种蛋白提取方法， 尤其涉及一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提 取方法。 背景技术 0002 南极磷虾是地球上资源量最大的单种生物之一。据估算， 南极磷虾的生物量约为 6.5亿至10亿吨， 每年的可捕量约为6000万至1亿吨， 相当于全球一年海洋捕捞的总产量。 0003 更重要的是， 磷虾蛋白质含量出众 - 一只南极磷虾抵得上 5 克牛肉， 尤其赖氨酸 含量在对虾、 牛奶和牛肉之上。据国外科学家计算， 一年捕捞 7000 万吨南极磷虾， 即可为世 界四分之一人口每天提供 20 克高质量蛋白。但。

7、是南极磷虾蛋白没有得到充分的利用。特 别是南极磷虾分离蛋白还没有生产出来。 0004 制备花生、 大豆和鱼类分离蛋白的方法主要有碱提酸沉制备法和超滤膜制备法， 我国工业上生产分离蛋白主要应用碱提酸沉的方法。当前南极磷虾还没有分离蛋白粉生 产。 目前除了研究开发更多的新分离方法外， 人们已经开始重视各种技术辅助分离方法， 超 声波本身在化学领域有广泛的应用， 应用在各种分离方法中显示了许多优越性。 0005 发明内容 ： 为了克服现有技术中南极磷虾分离蛋白容易变性， 分离时间长， 分离温度高， 分离蛋白 得率低， 纯度低等现象， 本发明公开了一种南极磷虾的深加工技术， 具体是提供了一种南极 磷虾。

8、分离蛋白的超声波辅助提取方法， 在碱提酸沉的基础上采用超声波辅助的方法从提取 油脂后的南极磷虾粉中提取南极磷虾分离蛋白。 0006 本发明采取的技术方案为 ： 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉， 按照料液比为1 ： 10-1:12加入碱溶液， 调节溶液PH=8-9， 浸渍 35-40min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 210-240W， 超声温度为 30-35， 超声波频率 28HZ， 超声提取 20-25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 25-30min， 放。

9、入离心机中， 离心得到上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物重复上述步骤， 碱浸， 超声提取， 放入离心机中， 离心合并上 清液 ； （5） 酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 离心得 到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 10-20 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 1:5(m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得 到的沉淀物冷冻干燥即可。 0007 上述步骤 （1） 中碱溶液为氢氧化钙、 亚硫酸钠或氢氧化钠中的一种。 0008 上述步骤 。

10、（3） 或 （4） 中离心以 8000-12000r/min 的速度离心 15-20min， 收集上清 说 明 书 CN 103583789 A 3 2/5 页 4 液。 0009 上述步骤 （5） 中离心以 5000-7000r/min 的速度离心 15-20min。 0010 上述步骤 （1） 中碱溶液优选为氢氧化钠。 0011 上述步骤 （2） 中超声提取的条件优选为 ： 超声功率为 230W， 超声温度为 33， 超声 波频率 28HZ， 超声提取 25min。 0012 本发明的有益效果 ： 本发明在碱提酸沉提取分离蛋白的基础上， 采用超声辅助的方法， 对南极磷虾分离蛋 白的提取工艺。

11、进行优化， 最终确定最佳工艺条件， 根据本发明的方法得到的南极磷虾分离 蛋白的纯度为99-99.5%。 本方法具有提取时间短， 提取的醇溶蛋白纯度高， 生产成本低的优 点。 具体实施方式 0013 实施例 1 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉 15kg， 按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钙溶液， 调节溶液 PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 220W， 超声温度为 30， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶。

12、液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钙溶液， 调节溶液 PH=8， 浸 渍35min， 将其溶均匀， 控制超声功率为220W， 超声温度为30， 超声波频率28HZ， 超声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， 合并上清液 ； （5）酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 2。

13、0min 得到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 10 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 淀物冷冻干燥即可。 0014 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 11.2kg， 纯度为 99%。 0015 实施例 2 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉 15kg， 按照料液比为 1 ： 10 加入亚硫酸钠溶液， 调节溶液 PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ：。

14、 将碱浸液控制超声功率为 220W， 超声温度为 30， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为1 ： 10加入亚硫酸钠溶液， 调节溶液PH=8， 浸渍 说 明 书 CN 103583789 A 4 3/5 页 5 35min， 将其溶均匀， 将碱浸液控制超声功率为 220W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心。

15、机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， 合并上清液 ； （5）酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 20min 得到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 10 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 淀物冷冻干燥即可。 0016 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 11.7kg， 纯度为 99%。 0017 实施例 3 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅。

16、助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉 15kg， 按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钠溶液， 调节溶液 PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 220W， 超声温度为 30， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为1 ： 10加入氢氧化钠溶液， 调节溶液PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀， 将。

17、碱浸液控制超声功率为 220W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 8000r/min 的速度离心 20min， ， 合并上清液 ； （5）酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 20min 得到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 10 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 。

18、淀物冷冻干燥即可。 0018 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 11.6kg， 纯度为 99.2%。 0019 实施例 4 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉， 按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钠溶液， 调节溶液 PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 1000r/min 的速度离心 20min。

19、， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为1 ： 10加入氢氧化钠溶液， 调节溶液PH=8， 浸渍 35min， 将其溶均匀， 将碱浸液控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 1000r/min 的速度离心 20min， 合并上清液 ； 说 明 书 CN 103583789 A 5 4/5 页 6 （5）酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 20min 得到沉。

20、淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 15 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 淀物冷冻干燥即可。 0020 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 12.4kg， 纯度为 99.3%。 0021 实施例 5 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉， 按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钠溶液， 调节溶液 PH=9， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率。

21、为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 1000r/min 的速度离心 20min， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为1 ： 10加入氢氧化钠溶液， 调节溶液PH=9， 浸渍 35min， 将其溶均匀， 将碱浸液控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 1000r/min 的速度离心 20min， 合并上清液 ； （5）酸沉。

22、 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 20min 得到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 15 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 淀物冷冻干燥即可。 0022 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 12.7kg， 纯度为 99.5%。 0023 实施例 6 一种南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 碱浸 ： 取南极磷虾粉 1。

23、5kg， 按照料液比为 1 ： 10 加入氢氧化钠溶液， 调节溶液 PH=9， 浸渍 35min， 将其溶均匀 ； （2） 超声提取 ： 将碱浸液控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超 声提取 25min ； （3） 离心 ： 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 10000r/min 的速度离 心 20min， 收集上清液 ； （4） 二次超声提取 ： 沉淀物按照料液比为1 ： 10加入氢氧化钠溶液， 调节溶液PH=9， 浸渍 35min， 将其溶均匀， 将碱浸液控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ，。

24、 超 声提取 25min， 将超声提取后的溶液， 静置 30min， 放入离心机中， 以 10000r/min 的速度离 心 20min， 合并上清液 ； （5）酸沉 ： 向上清液中加入含量 40% 的盐酸， 调节溶液 pH=4-5， 搅拌 10min 后， 以 6000r/min 的速度离心 15-20min 得到沉淀物 ； （6） 醇洗 ： 按照 1 20 的重量比例， 用 95% 的乙醇将沉淀物醇洗 2 次 ； 说 明 书 CN 103583789 A 6 5/5 页 7 （7） 水洗 ： 将所得沉淀物按照料液比为 1:3 (m:v)， 加蒸馏水搅拌， 水洗 3 次， 得到的沉 淀物冷冻干燥即可。 0024 根据上述方法得到的南极磷虾分离蛋白的量为 12.1kg， 纯度为 99.3%。 0025 从上述几个实施例中可以看出， 在对南极磷虾分离蛋白的超声波辅助提取方法 中， 碱溶液优选为氢氧化钠， 碱浸调节控制为 pH=9， 控制超声功率为 230W， 超声温度为 35， 超声波频率 28HZ， 超声提取 25min， 蛋白保持较高纯度的同时， 提取效率偏高。 说 明 书 CN 103583789 A 7 。