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1、(10)授权公告号 CN 101005768 B (45)授权公告日 2012.07.11 CN 101005768 B *CN101005768B* (21)申请号 200580028247.3 (22)申请日 2005.08.24 04077425.9 2004.08.31 EP A23K 1/16(2006.01) A23K 1/00(2006.01) A23L 1/275(2006.01) (73)专利权人 阿克佐诺贝尔股份有限公司 地址 荷兰阿纳姆 (72)发明人 D塞尔瑟 (74)专利代理机构 北京市中咨律师事务所 11247 代理人 刘金辉 林柏楠 WO 2004/043163 。
2、A2,2004.05.27, 权利要求 1-36. CN 1124584 A,1996.06.19, 说明书实施例 . (54) 发明名称 颜料的增溶方法和颜料组合物及其用途 (57) 摘要 本发明涉及一种通过萃取含有油溶性颜料的 固体制剂而使油溶性颜料在油或脂肪中有效增溶 的改进方法， 其中萃取在水、 食用油或脂肪及非离 子表面活性剂存在下进行。本发明也涉及通过萃 取制得的组合物以及该组合物在动物饲料中生产 饲料粒料的用途。水与非离子表面活性剂的结合 增加了萃取及增溶的颜料量。 具体而言， 本发明方 法涉及一种通过萃取含有油溶性颜料的固体制剂 而使油溶性颜料在油或脂肪中增溶的方法， 其包 括。
3、步骤 a) 将含有颜料的固体制剂与水、 含有食用 油或脂肪的萃取介质以及具有含至少 6 个碳原子 的烃基、 酰基或取代烃基或取代酰基的非离子表 面活性剂混合， 和 b) 任选将所得混合物进行离心 并且分离油相。然后可将所得初始混合物或分离 的油相加入多孔饲料粒料的前体中以生产饲料粒 料。这些粒料具有更高量的可被动物摄取的油溶 性颜料。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2007.02.17 (86)PCT申请的申请数据 PCT/EP2005/054145 2005.08.24 (87)PCT申请的公布数据 WO2006/024620 EN 2006.03.09 (51)In。
4、t.Cl. (56)对比文件 审查员 汪建斌 权利要求书 1 页 说明书 19 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 19 页 1/1 页 2 1. 一种通过萃取含有油溶性颜料的固体制剂而使油溶性颜料在油或脂肪中增溶的方 法， 其包括如下步骤 ： a) 将含有颜料的固体制剂与水、 含有食用油或脂肪的萃取介质以及具有含至少 6 个碳 原子的烃基、 酰基或取代烃基或取代酰基的非离子表面活性剂混合， b) 任选将所得混合物进行离心并且分离油相。 2. 根据权利要求 1 的方法， 其中所述含有颜料的固体制剂为包核颜料， 并且 a) 在 4-100的温度。
5、下在水中搅拌所述涂覆颜料并在食用油或脂肪的熔点至 100的 温度下将包含非离子表面活性剂的食用油或脂肪搅拌加入所得混合物中， 或者在 4-100的温度下在水中搅拌所述包核颜料和非离子表面活性剂且在食用油或 脂肪的熔点至 100的温度下将食用油或脂肪搅拌加入颜料 - 表面活性剂的混合物中。 3. 根据权利要求 1 的方法， 其中所述非离子表面活性剂为酯、 酯的烷氧基化物或醇的 烷氧基化物。 4. 根据权利要求 2 的方法， 其中所述非离子表面活性剂为酯、 酯的烷氧基化物或醇的 烷氧基化物。 5.根据权利要求3的方法， 其中所述表面活性剂为具有2-25摩尔氧化乙烯的蓖麻油乙 氧基化物或二乙酰酒石酸。
6、甘油单酯和 / 或二乙酰酒石酸甘油二酯。 6.根据权利要求4的方法， 其中所述表面活性剂为具有2-25摩尔氧化乙烯的蓖麻油乙 氧基化物或二乙酰酒石酸甘油单酯和 / 或二乙酰酒石酸甘油二酯。 7. 根据权利要求 1-6 中任一项的方法， 其中所述颜料为类胡罗卜素。 8.根据权利要求1-6中任一项的方法， 其中所述颜料选自虾青素、 斑蝥黄和-胡萝卜 素。 9. 根据权利要求 7 的方法， 其中所述颜料选自虾青素、 斑蝥黄和 - 胡萝卜素。 10. 一种可通过权利要求 1-9 中任一项的方法得到的食用油或脂肪组合物， 其包 含 0.25-15 重量的一种或多种依据权利要求 1-6 中任一项中的非离子。
7、表面活性剂， 0.0005-1 重量的一种或多种油溶性颜料及 0-20 重量的包括水的其它组分。 11. 根据权利要求 10 的组合物， 其中所述颜料为类胡罗卜素。 12. 根据权利要求 10 或 11 的组合物， 其中所述油选自蓖麻油、 鱼油、 油菜籽油、 玉米油 和豆油。 13. 一种通过将权利要求 1-9 中任一项中所得增溶的油溶性颜料加入多孔的饲料粒料 前体而生产饲料粒料的方法。 14. 如权利要求 1 中所定义的非离子表面活性剂在权利要求 1 所述的方法中作为用于 油溶性颜料在食用油中的增溶剂的用途。 15.根据权利要求14的表面活性剂的用途， 其中所述表面活性剂为具有2-25摩尔氧。
8、化 乙烯的蓖麻油乙氧基化物或二乙酰酒石酸甘油单酯和 / 或二乙酰酒石酸甘油二酯。 16. 根据权利要求 10-12 中任一项的组合物在生产用于动物饲料的粒料中的用途。 17. 一种粒料组合物， 其特征在于其通过在饲料粒料前体中填充根据权利要求 10-12 中任一项的组合物而得到并且其中油的量为填充的饲料粒料的 1-50 重量。 权 利 要 求 书 CN 101005768 B 2 1/19 页 3 颜料的增溶方法和颜料组合物及其用途 0001 本发明涉及一种通过萃取含有油溶性颜料的固体制剂而使油溶性颜料在油或脂 肪中有效增溶的改进方法， 其中所述萃取在水、 食用油或脂肪及非离子表面活性剂存在下。
9、 进行。 本发明也涉及通过萃取制得的组合物以及该组合物在动物饲料中生产饲料粒料的用 途。水与非离子表面活性剂的结合增加了萃取及增溶的颜料量。 0002 在动物饲料组合物中， 通常加入颜料以赋予消耗该饲料的动物的肉或皮肤吸引人 的颜色。所用颜料可以是天然、 合成或发酵的， 并且它们通常为油溶性的。一类油溶性颜料 的实例为类胡萝卜素， 例如虾青素、 斑蝥黄和 - 胡萝卜素。它们不可溶于水且在有机溶剂 脂肪和油中具有低的溶解度。虾青素和斑蝥黄常用于鱼类饲料以改进鲑鱼肉的颜色， 而且 它们对健康有益。 颜料在动物饲料中的其它用途为使某些暖水海洋鱼类或热带淡水鱼类如 真鲷的皮肤着色以及赋予虾壳和虾肉以粉。
10、色。除这些水产用途以外， 其它的饲料应用领域 为蛋黄及雏鸡皮肤的着色。 0003 常规的饲料粒料通常由固体原料形成， 其可以基于蛋白质如鱼粉或基于碳水化合 物如淀粉， 并且该原料填充有脂肪或油组分。在由该原料形成的饲料粒料前体的孔中填充 动物或植物来源的脂肪或油。该脂肪或油使饲料的能量增加。饲料的其它成分例如为维生 素、 矿物质、 酶和上述颜料。这些后述成分和脂肪或油优选在造粒步骤之后加入， 这是因为 油组分会干扰造粒加工并且在加热时许多颜料会失去活性。 许多敏感性的颜料可以涂敷形 式得到， 例如以珠粒形式出售的 CarophyllPink。该珠粒产品由乳化于抗氧化剂中且存 在于明胶及碳水化合。
11、物基质中的虾青素的芯组成， 其中芯涂敷有玉米淀粉。虾青素的量至 少为珠粒的 8。也有其它类似种类的虾青素产品， 即所谓的 CarophyllPink10 CWS， 其与首先提及的产品的不同之处仅在于基质为磺化油。 若将这些珠粒直接加入预成型的粒 料中， 则它们中的多数仅沉积在粒料表面。 这尤其对于水产饲料而言是一个缺点， 因为当饲 料接触到水时所述珠粒将被洗掉。即使颜料仍包含在珠粒中， 其生物利用率也较差。 0004 EP 839 004-B1 中公开了一种在饲料粒料中填充生物活性成分如颜料的方法。该 方法包括以下步骤 ： 通过酶催化或水解除去包围生物活性成分的明胶和碳水化合物保护 壳， 将未。
12、涂敷的生物活性成分与脂肪或油混合， 并且将所得混合物填充多孔饲料粒料前体 以生产饲料粒料。 0005 JP7-16075-A 描述了一种使水溶性颜料在脂肪中增溶的方法。首先将多元醇溶于 水中并与水溶性颜料混合， 然后加入含有乳化剂的油相以得到水溶性颜料在油中的乳液。 0006 JP7-23736-A 描述了一种使类胡罗卜素颜料在水中增溶的方法， 其中使 pH 为碱 性， 将环糊精混入水和颜料中， 最后使 pH 恢复为中性。 0007 EP 682 874-A2 公开了一种生物活性饲料粒料， 其中的生物活性成分例如可以是 颜料。将该生物活性成分以在脂肪组分或食用油混合物中的初级涂料分散体和 / 。
13、或乳液和 / 或溶液的形式施涂饲料， 其中所述组分或食用油包含熔点高于 35的甘油三酯和 / 或其 脂肪酸。然后施涂油性产品的第二涂层。在待添加的生物活性化合物与悬浮助剂不混溶的 情况下， 可以加入分散剂或乳化剂以改进混合性能。所提及的该类乳化剂的实例为蒸馏的 说 明 书 CN 101005768 B 3 2/19 页 4 甘油单酯、 脂肪酸的多不饱和聚甘油脂和脱水山梨醇脂肪酸酯， 优选饱和甘油单酯。 0008 由以上引用的文献明显可知从固体制剂如上述珠粒中萃取油溶性颜料需要进一 步改进。 0009 现在已令人惊讶地发现在水和非离子表面活性剂存在下用疏水性萃取介质如油 或脂肪对含有油溶性颜料的。
14、固体制剂进行萃取时， 对颜料的萃取和增溶得到显著改进。 0010 具体而言， 本发明方法涉及一种通过萃取含有油溶性颜料的固体制剂而使油溶性 颜料在油或脂肪中增溶的方法， 其包括步骤 a) 和 b) ： 0011 a) 将含有颜料的固体制剂与水、 含有食用油或脂肪的萃取介质以及具有含至少 6 个碳原子的烃基、 酰基或取代烃基或取代酰基的非离子表面活性剂混合， 0012 b) 任选将所得混合物进行离心并且分离油相。 0013 该方法导致更有效地从固体制剂中萃取颜料且更有效地使颜料在油或脂肪中增 溶。然后可将所得初始混合物或分离的油相加入多孔的饲料粒料的前体中以生产饲料粒 料。这些粒料具有更高量可被。
15、动物摄取的油溶性颜料。 0014 在本发明方法的一个实施方案中， 所述固体颜料制剂为包核颜料如上述珠粒， 该 实施方案包括以下步骤 ： 0015 a) 在 4-100的温度下在水中搅拌包核颜料， 并且在食用油或脂肪的熔点至 100的温度下将包含非离子表面活性剂的食用油或脂肪搅拌加入所得混合物中， 或者 0016 在 4-100的温度下在水中搅拌包核颜料和非离子表面活性剂， 并且在食用油或 脂肪的熔点至 100的温度下将食用油或脂肪搅拌加入颜料 - 表面活性剂的混合物中， 0017 b) 任选将所得混合物进行离心并且分离油相， 0018 c)将由步骤a)所得混合物或由步骤b)所得分离的油相加入多。
16、孔的饲料粒料的前 体中以生产饲料粒料。 0019 使用本发明方法有几个优点。 该方法在颜料的萃取和增溶中比现有技术方法更有 效， 从而从固体制剂中萃取出更大比例的颜料并存在于油相中。 0020 这在实施例中说明， 与 EP 839 004-B1 的在水存在下通过酶催化打破包围颜料 的明胶和碳水化合物保护壳而从固体制剂 ( 珠粒 ) 中释放颜料的方法相比， 本发明方法 中水和非离子表面活性剂的加入更有效地释放了颜料。由于颜料的萃取和增溶更有效， 本发明方法导致颜料在油中具有更高的浓度。这进而导致填充有这种油或脂肪的饲料中 保留更大比例的颜料。此外， 该油相不象未处理的珠粒一样易于洗掉。而且， 在。
17、较大程度 地将颜料增溶于油中时具有更好的生物利用率 ( 参见 Bjerkeng， B. 等， Bioavailability ofall-E-astaxanthin and Z-isomers of astaxanthin in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)， Aquaculture157， 63-82)。 0021 该分散体或油相包含食用油或脂肪， 一种或多种油溶性颜料及一种或多种非离子 表面活性剂， 并且本发明也涉及这种适用于填充用作动物饲料的粒料的组合物。合适的组 合物为包含 0.25-15 重量， 优选 2-10 重量， 最优选 4-10 重量的。
18、一种或多种非离子表 面活性剂， 0.0005-1 重量， 优选 0.0005-0.3 重量， 更优选 0.0005-0.2 重量， 最优选 0.0005-0.1 重量的一种或多种油溶性颜料及 0-20 重量的包括水的其它组分的食用油或 脂肪， 其中所述表面活性剂为酯、 酯的烷氧基化物或醇的烷氧基化物， 优选具有 2-40 摩尔， 优选 2-25 摩尔， 最优选 4-20 摩尔氧化乙烯的蓖麻油乙氧基化物或二乙酰酒石酸甘油单酯 说 明 书 CN 101005768 B 4 3/19 页 5 和 / 或二乙酰酒石酸甘油二酯。所述其它组分可以是维生素、 酶、 抗氧化剂、 来自珠粒的明 胶和碳水化合物的。
19、残余物、 矿物质、 预防剂、 药物活性化合物、 调味剂、 防腐剂和其它常用饲 料添加剂。存在于组合物中的水通过表面活性剂在油中溶解或乳化， 并且通常为 0.1-15 重 量。 0022 所述食用油或脂肪可以是鱼油如油鲱油、 鲱鱼油、 沙丁鱼油、 Tobis 油或毛鳞鱼 (capelin) 油、 氢化鱼油、 蓖麻油、 油菜籽油、 氢化油菜籽油、 玉米油、 豆油、 氢化豆油、 葵花籽 油、 氢化葵花籽油、 橄榄油、 氢化橄榄油、 棕榈油、 氢化棕榈油、 椰子油、 氢化椰子油、 牛油或 猪油。通常在油或脂肪的总量高时需要氢化油， 例如鱼饲料中油或脂肪的总量为 26 重量 或更高 ( 基于粒料的总重量。
20、 ) 时。存在于这些粒料中的氢化油或脂肪的量通常为油或脂肪 总量的 0.2-10 重量。 0023 所述颜料优选为类胡罗卜素， 它属于胡萝卜素亚群， 或者属于叶黄素亚群。合适 的叶黄素为黄体素、 玉米黄质、 斑蝥黄、 虾青素或 - 玉米黄质， 合适的胡萝卜素为 - 胡 萝卜素、 - 胡萝卜素和番茄红素。含有这些颜料的市售产品的实例为 Carophyll Pink(Hoffman LaRoche， 虾青素最少为 8 重量 )、 LucantinPink(BASF， 虾青素最少为 10 重量 )、 Lucarotin10 Feed(BASF， - 胡萝卜素最少为 10 重量 )、 Lucantin。
21、 Red(BASF， 斑蝥黄最少为 10 ) 和 Rovimix(Hoffman LaRoche， - 胡萝卜素最少为 10 重 量 )。 0024 所述表面活性剂应为非离子表面活性剂， 例如酯、 酯的烷氧基化物或醇的烷氧基 化物。 优选的非离子表面活性剂为脱水山梨醇酯、 乙氧基化的脱水山梨醇酯、 酒石酸甘油单 酯、 酒石酸甘油二酯、 烷氧基化的脂肪、 烷氧基化的油或烷氧基化的其它酯以及烷氧基化的 醇。最优选的非离子表面活性剂为蓖麻油乙氧基化物， 优选每摩尔蓖麻油具有 2-40 摩尔， 更优选 2-25 摩尔， 最优选 4-20 摩尔氧化乙烯的蓖麻油乙氧基化物。实验中也已使用离子 表面活性剂如。
22、天然卵磷脂， 但是结果不如用非离子表面活性剂的好。特定的非离子物对特 定颜料表现更好。 例如， 蓖麻油乙氧基化物尤其适用于虾青素和斑蝥黄的增溶， 而二乙酰酒 石酸甘油单酯和二乙酰酒石酸甘油二酯尤其适于 - 胡萝卜素的增溶。通过对比具有不同 氧化乙烯量并因此具有不同 HLB 值的某些蓖麻油乙氧基化物和脱水山梨醇单油酸酯 +20EO 及具有相同 HLB 值的脱水山梨醇单油酸酯的对应混合物表明具有至多为 25 摩尔氧化乙烯 的蓖麻油乙氧基化物在虾青素的增溶中更加有效。 0025 所述多孔饲料粒料的前体可通过任何已知方法如挤出法由任何常用材料制造， 其 中所述常用材料例如为碳水化合物或蛋白质。在填充所。
23、述饲料粒料的前体时， 温度应该高 到足以使脂肪或油保持液态， 但是不应高于颜料的分解温度。合适的温度为脂肪或油的熔 点至 60。用含有颜料的油填充饲料粒料可通过混合、 浸渍、 喷雾、 涂敷或其它常用方式进 行。 0026 通过用上述油或脂肪组合物填充饲料粒料的前体而得到的合适粒料组合物的油 量为填充的饲料粒料的 1-50 重量， 优选 3-45 重量， 最优选 5-40 重量。 0027 本发明通过以下实施例进一步说明。 0028 实施例 1 说 明 书 CN 101005768 B 5 4/19 页 6 0029 将 10 重量的 CarophyllPink1与 90 重量的水在 60的温度。
24、下搅拌混 合。冷却到室温之后制成含有 7.5 重量的该混合物和 92.5 重量的表面活性剂 / 鱼油 混合物的配制剂 ( 样品类型 A)， 将该配制剂在 45的温度下搅拌 2 分钟并且在第二天在 5000rpm(G 34000m/s2) 下离心 5 分钟。用注射器取样并通过 0.2m 的微孔过滤器过滤。 若在几天后取样， 则不需要离心该配制剂， 样品可以直接从油相中取出并过滤。 然后用丙酮 将样品稀释至所需浓度并且测量在 474nm 的吸收。表 1 中列出了不同样品的吸收值， 它为 不同表面活性剂使虾青素颜料增溶的能力的度量。 所述配制剂也可以通过首先将表面活性 剂与颜料 / 水的混合物混合，。
25、 然后与鱼油混合而制得 ( 样品类型 B)。 0030 说 明 书 CN 101005768 B 6 5/19 页 7 0031 实施例 2 0032 本实施例中所用的颜料为 CarophyllPink。依据的程序与实施例 1 相同。 说 明 书 CN 101005768 B 7 6/19 页 8 0033 回收率的值基于假定 CarophyllPink 产品含有 8的虾青素， 这是制造商保证 的虾青素存在量。 0034 样品 类型 颜料 / 水 的混合物 (g) 蓖麻油 +6EO(g) 蓖麻油 +28EO(g) 鱼油 Tobis(g) 1 天后在 474nm 的 吸收 3 13 天后在 47。
26、4nm 的吸收 4( 回收率 ) 对照 3 37 0.05 0.02(4.4) A 3 3 34 1.48 0.33(72.6) A 3 1.5 35.5 1.52 0.3(66.3) A 3 6 31 1.16 0.2(43.7) A 3 9 28 1.66 0.22(47.6) A 3 3 34 1.02 0.2(44.0) A 3 6 31 0.98 0.19(41.5) 0035 3 用丙酮将 0.200ml 油相稀释至 10ml 0036 4 用丙酮将 0.400ml 油相稀释至 100ml 0037 表面活性剂的量在所研究的范围内不非常重要。 0038 样品 类型 颜料 / 水的 。
27、混合物 (g) 蓖麻油 +6EO(g) 蓖麻 油(g) 鱼油 Tobis(g) 1 天后在 474nm 的 吸收 5( 回收率 ) 23 天后在 474nm 的吸收 6 A 3 3 34 0.11 - A 3 3 34 1.24*(54.6) 0.41(72.2) A 3 1.5 35.5 1.28*(56.6) 0.33(58.3) A 3 0.75 36.25 0.57(25.2) 0.14(24.8) A 3 0.375 36.625 0.14(6.2) 0.05(8.9) A 1.5 3 35.5 0.72(66.0) 0.22(80.6) 0039 5 用丙酮将 0.200ml 油相。
28、稀释至 10ml 0040 6 用丙酮将 0.500ml 油相稀释至 100ml 0041 * 对于 0.9 的吸收值， 在吸收和浓度之间没有线性关系 0042 在该范围内， 颜料增溶的量与所用表面活性剂的量有关。 0043 实施例 3 0044 在本实施例中， 基于总的混合物， 待增溶的颜料量在约 25ppm 和至多 750ppm 之间 说 明 书 CN 101005768 B 8 7/19 页 9 变化， 并且所用表面活性剂 ( 蓖麻油 +6EO) 的量也变化。 0045 搅拌下将 5-10 重量的 LucantinPink CWD 与 95-90 重量的水在室温下混 合。制成含有约 0.。
29、5-7.5 重量的该混合物和约 99.5-92.5 重量的表面活性剂 / 鱼油混 合物的配制剂。将该配制剂在 45的温度下搅拌 2 分钟， 然后在 5000rpm 下离心 5 分钟。 将该样品通过 0.2m 的微孔过滤器过滤并将 0.400ml 的滤液用丙酮稀释至 100ml。 0046 样品类 型 表面活性剂 / 油的重量比 颜料 / 水的 混合物 (g) 颜料浓度 (ppm) 蓖麻油 +6EO(g) 鱼油 Tobis(g) 在 474nm 的吸 收 a( 回收率 )c 对照 0 0 0 37 0.015 仅有油 0/100 0.19 26 0 37 0.031a A 2/98 0.18 2。
30、4 0.75 36.25 0.032a(102.2) A 8/92 0.17 23 3 34 0.029a(94.5) A 16/84 0.18 24 6 31 0.032a(113.0) 仅有油 0/100 0.5 133 0 37 0.015b(0 ) A 2/98 0.51 136 0.75 36.25 0.107b(96.2) A 8/92 0.5 133 3 34 0.017b(98.5) A 16/84 0.5 133 6 31 0.098b(89.5) 对照 0 0 0 37 0.013 仅有油 0/100 2.432 750 0 30 0.018a(0.9) A 2/98 3 。
31、750 0.75 36.25 0.103a(16.0) A 8/92 3 750 3 34 0.515a(88.6) A 16/84 3 750 6 31 0.479a(81.8) 0047 a 在冰箱中 4 天 0048 b 直接测量 0049 吸收值已经用没有加入颜料的油本身的吸收进行校正。 0050 c 回收率的值基于假定 LucantinPink CWD 产品含有 10的虾青素， 这是制造 商保证的虾青素存在量。 0051 该实验显示对于 23-136ppm 的颜料量， 甚至在低的表面活性剂与油的重量比 (2/98) 时也可容易地使所有量增溶， 而对于 750ppm 的较高量时需要较高。
32、的重量比。然而， 高于 8/92 的重量比不会导致增溶颜料量的增加。 0052 实施例 4 说 明 书 CN 101005768 B 9 8/19 页 10 0053 依据的程序与实施例 1 相同。 0054 样品 类型 颜料颜料 / 水的 混合物 (g) 蓖麻油 +6EO(g) 鱼油 Tobis(g) 在冰箱中 1 天且过滤后在 474nm 的吸收 4( 回收率 ) 对照 Lucantin Pink CWD 3370.018(3.2) A Lucantin Pink CWD 33340.522(91.9) A Lucantin Pink CWD 23340.362(95.6) A Lucan。
33、tin Pink CWD 13340.164(86.6) A Lucantin Pink CWD 0.53340.107(113.1) A Lucantin Pink CWD 0.253340.063(133.1) 0055 4 用丙酮将 0.400ml 油相稀释至 100ml 0056 LucantinPink CWD 为 BASF 生产的含有至少 10 重量虾青素颜料的产品。所 述回收率的值基于颜料在产品中的所述量。 0057 实施例 5 0058 在该实施例中， 对蓖麻油乙氧基化物与其它种类的表面活性剂进行了对比。所用 颜料为 CarophyllPink。依据的程序与实施例 1 相同。 。
34、0059 说 明 书 CN 101005768 B 10 9/19 页 11 0060 实施例 6 0061 在该实施例中， 研究了蓖麻油乙氧基化物和 HLB 值与该蓖麻油乙氧基化物相同的 说 明 书 CN 101005768 B 11 10/19 页 12 Tween808/Span809混合物的 HLB 值对增溶能力的影响。所用颜料为 LucantinPink CWD 并且油为 Tobis 鱼油。程序与实施例 1 相同， 不同之处为将颜料与水在室温下混合并搅拌。 所有样品均为类型 A。该配制剂含有 2g 的特定表面活性剂或表面活性剂混合物， 并且表面 活性剂 ： 鱼油的重量比为 6 94。。
35、颜料 / 水的混合物的量为 2.57g。 0062 HLB 值 蓖麻油乙氧 基化物的 EO 单元数 蓖麻油乙氧基化 物在 474nm 的吸 收 10( 回收率 ) Tween80/Span 80 混合物 (g/g) Tween80/Span80 混合物在 474nm 的 吸收 10( 回收率 ) 5.9 6 0.464(82.6) 0.3/1.7 0.109(19.2) 9.4 15 0.498(88.7) 0.954/1.046 0.167(29.7) 10.5 20 0.424(75.5) 1.196/0.804 0.218(38.8) 11.8 25 0.261(46.5) 1.384/。
36、0.616 0.244(43.5) 13.3 36 0.17(30.3) 1.682/0.318 0.218(38.8) 0063 8Tween80 为脱水山梨醇单油酸酯 +20EO 0064 9Span80 为脱水山梨醇单油酸酯 0065 10 用丙酮将 0.200ml 过滤过的油相稀释至 100ml。 0066 然后取出 2.00ml 丙酮溶液将该样品进一步稀释至 10ml。 0067 对于蓖麻油乙氧基化物， 在 HLB 值约为 11 时增溶能力显著下降， 而对于 Tween80/ Span80 混合物， 所有混合物的增溶水平几乎相同且通常低于蓖麻油乙氧基化物的增溶水 平。然而， 两种类型。
37、的化合物均对虾青素颜料的增溶有效。 0068 实施例 7 0069 该实验中的所有样品均为类型 A。实验使用了两种含有虾青素的产品和一种含有 斑蝥黄的产品。 用与实施例1中所述的相同程序制备样品， 不同之处为将CarophyllPink CWS 和 LucantinRed CWD 与水在室温下混合并搅拌。 0070 说 明 书 CN 101005768 B 12 11/19 页 13 0071 说 明 书 CN 101005768 B 13 12/19 页 14 0072 说 明 书 CN 101005768 B 14 13/19 页 15 0073 说 明 书 CN 101005768 B 。
38、15 14/19 页 16 0074 说 明 书 CN 101005768 B 16 15/19 页 17 0075 说 明 书 CN 101005768 B 17 16/19 页 18 0076 说 明 书 CN 101005768 B 18 17/19 页 19 0077 实施例 11 0078 在该实施例中与描述于现有技术中的酶催化法进行了对比。酶催化法的程序如 说 明 书 CN 101005768 B 19 18/19 页 20 下 ： 将 10 重量的 LucantinPink 与缓冲至 pH 为 7.5 且含有 0.5mg/ml 蛋白酶 ( 灰色链 霉菌蛋白酶 (Protease 。
39、Streptomyces griseus) ； CAS 号 9036-06-0， 5.6 个 /mg 固体粉末 ) 的水在 55的温度下搅拌混合。然后在 45下将该颜料 / 水 / 酶混合物搅拌 90 分钟。冷 却到室温之后， 制成含有 7.4 重量该混合物和 92.6 重量鱼油的配制剂， 在约 45的温 度下将该配制剂搅拌 2 分钟并且在第二天将其在 5000rpm(G 34000m/s2) 下离心 5 分钟。 用注射器取样并通过 0.2m 的微孔过滤器过滤。然后将 0.400ml 过滤的样品用丙酮稀释 至 100ml 并且测量在 474nm 的吸收。将本发明的样品以同样方式进行处理， 不同。
40、之处为其 不含蛋白酶并且配制剂通过与 92.6 重量蓖麻油 +6EO/ 鱼油混合物混合而制得。下表中 列出了不同样品的吸收值， 它为使虾青素颜料增溶的不同方法的能力的度量。 0079 样品类 型 颜料 颜料 / 水的 混合物 (g) 蓖麻油 +6EO(g) 鱼油 Tobis(g) 在冰箱中 2 天且过滤 后在 474nm 的吸收 对照 Lucantin Pink 3 37 0.025 A Lucantin Pink 3 2 35 0.589 对比 ( 蛋 白酶 24) Lucantin Pink 3 37 0.099 0080 24 该蛋白酶在 25-70的温度及 7.0-10.0 的 pH 。
41、值下具有活性。 0081 该对比显示通过使用本发明方法可以增溶比使用现有技术公开的酶催化程序更 多的虾青素。 0082 实施例 12 0083 该实施例也与描述于现有技术中的酶催化法进行了对比。程序与实施例 11 相同， 不同之处为将水缓冲至 pH 为 9.5 且水中含有 1.0mg/ml 或 0.35mg/ml 的蛋白酶 (Genencor International 生产的 Protex6L， 活性为 580000DU/g)。 0084 样品类型 颜料 颜料 / 水的 混合物 (g) 蓖麻油 +6EO(g) 鱼油 Tobis(g) 在冰箱中 3 天且过滤 后在 474nm 的吸收 A Lu。
42、cantin Pink 3 2 35 0.603 对比 ( 蛋白酶 240.35mg/ml) Lucantin Pink 3 37 0.016 说 明 书 CN 101005768 B 20 19/19 页 21 对比 ( 蛋白酶 241.0mg/ml) Lucantin Pink 3 37 0.046 A+ 蛋白酶 (1.0mg/ml) Lucantin Pink 3 2 35 0.567 0085 24 该蛋白酶在 25-70的温度及 7.0-10.0 的 pH 值下具有活性。 0086 该对比显示在更高的 pH、 不同蛋白酶及更高浓度的蛋白酶条件下通过使用本发明 方法也可以增溶比使用现有技术公开的酶催化程序更多的虾青素。 说 明 书 CN 101005768 B 21 。