一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201711177708.4

申请日:

20171123

公开号:

CN108013031A

公开日:

20180511

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:

IPC分类号:

A01N25/26,A01N63/04,C09K17/32,A01P5/00,C09K101/00,C09K109/00

主分类号:

A01N25/26,A01N63/04,C09K17/32,A01P5/00,C09K101/00,C09K109/00

申请人:

云南微态源生物科技有限公司

发明人:

李文鹏,陈芬玲,朱芳乐,朱云九

地址:

655600 云南省曲靖市北坛路121号

优先权:

CN201711177708A

专利代理机构:

昆明今威专利商标代理有限公司

代理人:

赛晓刚

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内容摘要

本发明涉及一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,该颗粒剂含有按重量百分比的下述成分:10%‑20%母粉,0.6%‑2.7%粘结剂,77.3%‑89.4%载体。本发明还涉及上述厚垣孢普可尼亚菌颗粒剂的包衣成型制备方法。本发明的厚垣孢普可尼亚菌颗粒剂包衣量大,减少农药用量,强化防治效果,加速了防治效率,节省了防治成本,改善土壤条件。本发明的制备方法采用的原料属于农业废弃物资源,成本低廉,设备投资少,工艺易控制,产品重量稳定,能够连续生产,适合于工业化规模生产。

权利要求书

1.一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,该颗粒剂含有按重量百分比的下述成分:母粉10%-20%;粘结剂0.6%-2.7%;载体颗粒77.3%-89.4%。 2.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,所述的母粉由以下成分按重量百分比构成:84%-98.8%孢子粉;0.5%-5%抗结剂;0.1%-5%分散剂;0.1%-5%润湿剂;0.5%~1%保护剂。 3.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,所述的粘结剂,为羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、壳聚糖、聚乙烯醇、海藻酸钠或黄原胶中的任何两种或两种以上的混合物。 4.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,所述的载体颗粒是蚕沙,为蚕蛾科昆虫家蚕(BombyxmoriLinnaeus)幼虫的干燥粪便,收集后晒干或烘干,水分低于10%,簸净泥土及桑叶碎屑,过筛收集长2~5毫米,直径1.5~3.0毫米的颗粒。 5.根据权利要求2所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,所述的孢子粉是厚垣孢普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia=Verticilliumchlamydosporium)CGMCC14131产生的活孢子粉,该菌株已于2017年6月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。 6.根据权利要求2所述的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,其特征在于,所述的抗结剂,是磷酸三钙、磷酸二钙、微晶纤维素、硅酸钙、碳酸钙镁、硬脂酸钙或硬脂酸镁中的任何一种或几种的混合物;所述的分散剂,为聚乙二醇200或400、聚乙烯蜡、液体石蜡、微晶石蜡、脂肪酸类、脂肪族酰胺类或酯类中的任何一种或几种的混合物;所述的润湿剂,为蔗糖酯、失水山梨醇脂肪酸酯、聚山梨酯中的任何一种或多种的混合物;所述的保护剂,为海藻糖和丁基羟基茴香醚、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基羟基甲苯中的一种或几种混合而成的复合保护剂。 7.一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:第一步,制备母粉:按重量比取厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84%-98.8%、抗结剂0.5%-5%、分散剂0.1%-5%、润湿剂0.1%-5%和保护剂0.5%~1%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉;第二步,制备粘结浆料:按照重量比取5%-10%粘结剂置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右;第三步,制备成品:按重量比取60%-80%载体颗粒置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入10%-20%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入10%-20%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料,再将湿料置于30~42℃流化床或真空干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制备方法。

背景技术

植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,在全世界普遍发生,其寄主范围广,为害严重。另外,线虫还是诱发植物真菌和细菌病害的重要原因之一。其中根结线虫Meloidogyne spp.和孢囊线虫Heterodera spp.是为害最为严重的植物寄生线虫,因其分布广、寄主多,成为威胁农业生产的重要病原物。目前防治植物寄生线虫仍以化学药剂为主,但其毒性大、污染环境,对人畜健康存在潜在威胁,随着越来越多化学药剂被禁止使用,急需找到环境友好的替代防治方法。

生物防治作为一种安全有效手段在植物病原线虫防治中得到了广泛的研究和应用。厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia=Verticillium chlamydosporium)是孢囊线虫Heterodera spp.、球孢囊线虫Globodera spp.、根结线虫Meloidogyne spp.、珍珠线虫Nacobbus spp.和肾状线虫 Rotylenchulus spp.卵及雌虫寄生菌,分布广泛,易于培养且能够产生抗逆性很强的厚垣孢子,容易在土壤中定殖,是最具开发价值的生防真菌之一。该菌不仅可以产生几丁质酶和碱性蛋白酶,促进线虫卵的孵化,提高线虫的死亡率,而且还可以产生抗生素、植物促生物质和对线虫具有很强毒杀活性的金轮霉素和基点霉内酯。在植物寄生线虫防治方面,该菌剂具有杀虫活性高,广谱、长效、安全、无污染、无残留、土壤适应力好,抗抗逆性强的特点,可明显刺激植物生长。

目前厚垣孢普可尼亚菌在多个国家已生产成商品制剂,古巴以厚垣孢普可尼亚菌为活性成分制成了Klamic颗粒剂。我国也用厚垣孢普可尼亚菌制成了“厚孢轮枝菌”微粒剂,田间防效较好。但是目前市场上商品化的厚垣孢普可尼亚菌制剂存在剂型少、制剂价格偏高、外界环境对菌剂的影响比较大和防治效果不稳定的问题。如何降低制剂成本、稳定制剂效果是厚垣孢普可尼亚菌生物农药推广的关键所在。

厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)属于真菌界,子囊菌门,子囊菌亚门,粪壳菌纲,肉座菌目,麦角菌科,普可尼亚属。厚垣孢普可尼亚菌是兼性寄生菌,在没有线虫寄主的情况下,可以在根际周围及土壤中营腐生生活。在有线虫寄主存在时,厚垣孢普可尼亚菌通过与寄主线虫的相互识别,吸附或粘着于雌虫体表或卵上,同时在几丁质酶和碱性蛋白酶作用下,菌丝穿透体壁将卵壳消解,侵染其中的卵及幼虫,并繁殖菌体。

厚垣孢普可尼亚菌施入土壤以后,其存活率和活性的大小受土壤生态因子 (微生物、线虫寄主、水分、有机质含量和pH等)以及菌剂自身质量的影响。如何将活性厚垣孢普可尼亚菌集中、固定在制剂中,保持菌剂的活性,保证施入土壤以后菌体的存活率和繁殖,是开发该菌生物农药制剂的突破口和关键之处。

农药载体是指农药制剂中荷载或者稀释农药的惰性物质。载体为受药体,其理化性质往往会对药剂性能产生深刻影响,要求它对药剂为惰性、具有较大的比表面积、吸附力适度,还要求易造粒、来源方便和价格低廉。目前市场上常见颗粒剂产品的载体主要是硅藻土、草炭、凹凸棒土、白炭黑、膨润土、粘土、滑石、叶腊石、石膏、砂粒、砖渣等、常见颗粒剂的化学成分都附在载体的表面上,这样的颗粒剂产品施用到土壤中后,遇水分和温度就快速分解,快速释放药力。这些传统农药剂型中各种助剂基本上不能满足微生物制剂在土壤中的存活、生长和繁殖所需的条件,因此传统农药剂型的载体并不完全适用于微生物剂型的开发。

蚕沙是蚕蛾科昆虫家蚕(Bombyx mori Linnaeus)幼虫的干燥粪便,是一种富含粗蛋白及碳水化合物的多组分物质,是一种全生态的农业资源。蚕沙干品中含粗蛋白15.4%、粗脂肪3.9%、无氮浸出物36.2%、粗纤维19.6%,含有钙、镁、铜、铁、锌等中微量元素,并富含叶绿素、果胶、黄酮、生物碱和类肾上腺皮质激素等。目前对蚕沙再利用的研究主要集中于各种有效成分的提取,如叶绿素和果胶。由于蚕沙中还含有一定数量的植物生长激素吲哚乙酸类似物,因此以蚕沙为原料,通过生物发酵制成蚕沙有机肥,土壤施用蚕沙有机肥可显著提高土壤pH值,降低土壤酸度,显著增加土壤速效养分和有机质含量,增加土壤磷酸酶、脲酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性,从而改善了土壤质量,提高土壤肥力。开发养分丰富的有机肥料技术也成为了行业热点。不难看出,蚕沙是一种成本低廉,环保友好,极具开发价值的资源,目前未见其作为生物农药菌剂生长基质和剂型载体中应用的报道。

发明内容

本发明目的是提供一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制备方法,这种厚垣孢普可尼亚菌颗粒剂包衣量大,减少农药用量,强化防治效果,加速了防治效率,节省了防治成本,改善土壤条件。采用的原料属于农业废弃物资源,其成本低廉,设备投资少,工艺易控制,产品重量稳定,能够连续生产,适合于工业化规模生产。

本发明的目的是这样实现的:

本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,含有按重量百分比的下述成分:母粉10%-20%;粘结剂0.6%-2.7%;载体颗粒77.3%-89.4%。

本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,所述的母粉由以下成分按重量百分比构成:84%-98.8%孢子粉;0.5%-5%抗结剂;0.1%-5%分散剂;0.1%-5%润湿剂;0.5%~1%保护剂。

本发明的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,所述的粘结剂,为羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、壳聚糖、聚乙烯醇、海藻酸钠或黄原胶中的任何两种或两种以上的混合物。

本发明的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,所述的载体颗粒是蚕沙,为蚕蛾科昆虫家蚕(Bombyx mori Linnaeus)幼虫的干燥粪便,收集后晒干或烘干,水分低于10%,簸净泥土及桑叶碎屑,过筛收集长2~5毫米,直径1.5~3.0毫米的颗粒。

本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,所述的孢子粉是厚垣孢轮枝孢普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia = Verticilliumchlamydosporium)CGMCC 14131产生的活孢子粉,该菌株已于2017年6月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的任何一项的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂,所述的抗结剂,是磷酸三钙、磷酸二钙、微晶纤维素、硅酸钙、碳酸钙镁、硬脂酸钙或硬脂酸镁中的任何一种或几种的混合物;

所述的分散剂,为聚乙二醇200或400、聚乙烯蜡、液体石蜡、微晶石蜡、脂肪酸类、脂肪族酰胺类或酯类中的任何一种或几种的混合物;

所述的润湿剂,为蔗糖酯、失水山梨醇脂肪酸酯、聚山梨酯中的任何一种或多种的混合物;

所述的保护剂,为海藻糖和丁基羟基茴香醚、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基羟基甲苯中的一种或几种混合而成的复合保护剂。

本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂的制备方法,具体包括以下步骤:

第一步,制备母粉:按重量比取厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84%-98.8%、抗结剂0.5%-5%、分散剂0.1%-5%、润湿剂0.1%-5%和保护剂0.5%~1%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步,制备粘结浆料:按照重量比取5%-10%粘结剂置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步,制备成品:按重量比取60%-80%载体颗粒置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入10%-20%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入10%-20%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于30~42℃流化床或真空干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

与现有技术相比,本发明具有以下效果:

1、包衣量大。蚕沙含有大量的植物纤维,具有一定强度和较大的比表面积,是一种优良的包衣制粒载体。

2、增强防效。蚕沙营养均衡,能够满足厚垣孢普可尼亚菌生长繁殖,所以吸附在蚕沙中的厚垣孢普可尼亚菌可利用蚕沙进行大量生长繁殖,减少农药用量,强化防治效果,加速了防治效率,节省了防治成本。

3、改善土壤条件。蚕沙能中和土壤的酸碱度,使土质疏松透气、渗水性强、能保持水分、排水性能好,使得植物根系更容易生长和获得养分;而且蚕沙降解后,可作为植物的有机肥料。

4、本发明采用的原料属于农业废弃物资源,来源丰富,成本低廉,为农林废弃物资源化利用开辟了一条新的途径。本发明设备投资少,工艺易控制,产品重量稳定,能够连续生产,适合于工业化规模生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84%、磷酸三钙1.5%、磷酸二钙1%、硅酸钙1%、硬脂酸钙2%、为聚乙二醇200 5%、蔗糖酯5%、海藻糖0.49%和丁基羟基茴香醚0.01%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取壳聚糖1%、黄原胶4%,置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取80%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入10%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入10%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于42℃真空干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为27.6亿个/ 克,活孢率为90.3%,干燥减量为9%。

实施例2

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉88%、碳酸钙镁2%、硬脂酸镁1.4%、聚乙烯蜡1%、液体石蜡3%、微晶石蜡1%、失水山梨醇脂肪酸酯3%、海藻糖0.58%和抗坏血酸棕榈酸酯0.02%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取壳聚糖2%、海藻酸钠2%、黄原胶2%置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取76%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入12%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入12%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于40℃流化床干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为35.5亿个/ 克,活孢率为92.8%,干燥减量为9.2%。

实施例3

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉91%、磷酸三钙0.1%、磷酸二钙0.2%、硅酸钙0.3%、碳酸钙镁0.4%、硬脂酸钙1.0%、硬脂酸镁1.6%、脂肪酸1%、脂肪族酰胺1.7%、聚山梨酯2%、海藻糖0.66%和二丁基羟基甲苯0.04%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取壳聚糖3%、聚乙烯醇1%、海藻酸钠 2%和黄原胶%1置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取72%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入14%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入14%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于38℃真空干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为43.6亿个/ 克,活孢率为93.9%,干燥减量为9.5%。

实施例4

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉94%、磷酸三钙0.1%、磷酸二钙0.4%、微晶纤维素0.8%、硅酸钙0.1%、硬脂酸钙0.6%、聚乙二醇200 0.5%、聚乙烯蜡0.3%、液体石蜡0.4%、微晶石蜡0.8%、蔗糖酯 0.5%、失水山梨醇脂肪酸酯0.7%、海藻糖0.72%、丁基羟基茴香醚0.03%和抗坏血酸棕榈酸酯0.05%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取羟丙基甲基纤维素1%、壳聚糖2.5%、聚乙烯醇3%、海藻酸钠1%和黄原胶0.5%置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取68%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入16%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入16%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于36℃流化床干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为52.5亿个/ 克,活孢率为95.5%,干燥减量为9.7%。

实施例5

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉96%、微晶纤维素1%、碳酸钙镁0.3%、硬脂酸镁0.6%、聚乙烯蜡0.2%、液体石蜡 0.2%、微晶石蜡0.1%、脂肪酸0.1%、脂肪族酰胺0.1%、失水山梨醇脂肪酸酯0.1%、聚山梨酯0.4%、海藻糖0.78%、抗坏血酸棕榈酸酯0.05%和二丁基羟基甲苯0.07%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取羧甲基纤维素1.5%、壳聚糖3%、聚乙烯醇2.5%、海藻酸钠1%和黄原胶1%置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取64%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入18%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入18%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于33℃真空干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为61.7亿个/ 克,活孢率为96.8%,干燥减量为9.3%。

实施例6

第一步制备母粉:按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉 98.8%、微晶纤维素0.3%、硬脂酸镁0.2%、聚乙二醇400 0.02%、液体石蜡 0.05%、脂肪酸0.02%、脂肪族酰胺0.01%、蔗糖酯0.03%、聚山梨酯0.07%、海藻糖0.3%、丁基羟基茴香醚0.1%和二丁基羟基甲苯0.1%,置于无重力混合机进行失重混合,得到母粉,备用;

第二步制备粘结浆料:按照重量比取10%(羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、壳聚糖、聚乙烯醇、海藻酸钠或黄原胶)置于带搅拌和加热的容器内,补足水,在90℃下搅拌至均相,冷却至30℃左右,备用;

第三步制备成品:按重量比取60%蚕沙置于混合包衣机内,搅拌的状态下加入15%粘合浆料,继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面;再加入20%母粉,直到母粉在颗粒表面形成药膜,得到成品的湿料。再将湿料置于30℃流化床干燥,得到包衣法颗粒剂成品。

测定结果表明,厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为72.05亿个/ 克,活孢率为98.2%,干燥减量为10%。

按上述不同实施例实施后,按照GB/T 1605-2001中5.3.3“固体制剂采样”方法进行采样,按GB/T 30361-2003中规定的农药干燥减量法测定干燥减量。测定厚垣孢普可尼亚菌颗粒剂的分生孢子数和活孢率(%)。分生孢子采用血球计数板计数法,活孢率采用0.5%麦芽浸膏培养基上孢子萌发率方法。

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711177708.4 (22)申请日 2017.11.23 (83)生物保藏信息 CGMCC No.14131 2017.06.07 (71)申请人 云南微态源生物科技有限公司 地址 655600 云南省曲靖市北坛路121号 (72)发明人 李文鹏 陈芬玲 朱芳乐 朱云九 (74)专利代理机构 昆明今威专利商标代理有限 公司 53115 代理人 赛晓刚 (51)Int.Cl. A01N 25/26(2006.01) A01N 63/04(2006.01) C09K 17/。

2、32(2006.01) A01P 5/00(2006.01) C09K 101/00(2006.01) C09K 109/00(2006.01) (54)发明名称 一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其 制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法 颗粒剂, 该颗粒剂含有按重量百分比的下述成 分: 10-20母粉, 0 .6-2 .7粘结剂, 77.3-89.4载体。 本发明还涉及上述厚垣孢 普可尼亚菌颗粒剂的包衣成型制备方法。 本发明 的厚垣孢普可尼亚菌颗粒剂包衣量大, 减少农药 用量, 强化防治效果, 加速了防治效率, 节省了防 治成本, 改善土壤条件。 本发明的制备方法采用。

3、 的原料属于农业废弃物资源, 成本低廉, 设备投 资少, 工艺易控制, 产品重量稳定, 能够连续生 产, 适合于工业化规模生产。 权利要求书1页 说明书6页 CN 108013031 A 2018.05.11 CN 108013031 A 1.一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 该颗粒剂含有按重量百分比的 下述成分: 母粉10-20; 粘结剂0.6-2.7; 载体颗粒77.3-89.4。 2.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 所述的母 粉由以下成分按重量百分比构成: 84-98.8孢子粉; 0.5-5抗结剂; 0.1-5分散 剂; 0.1-5润。

4、湿剂; 0.51保护剂。 3.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 所述的粘 结剂, 为羟丙基甲基纤维素、 羧甲基纤维素、 壳聚糖、 聚乙烯醇、 海藻酸钠或黄原胶中的任何 两种或两种以上的混合物。 4.根据权利要求1所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 所述的载 体颗粒是蚕沙, 为蚕蛾科昆虫家蚕(Bombyx mori Linnaeus)幼虫的干燥粪便, 收集后晒干 或烘干, 水分低于10, 簸净泥土及桑叶碎屑, 过筛收集长25毫米, 直径1.53.0毫米的 颗粒。 5.根据权利要求2所述的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 所述。

5、的孢 子粉是厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chamydosporiaVerticillium chlamydosporium) CGMCC 14131产生的活孢子粉, 该菌株已于2017年6月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心。 6.根据权利要求2所述的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 其特征在于, 所述的抗结剂, 是磷酸三钙、 磷酸二钙、 微晶纤维素、 硅酸钙、 碳酸钙镁、 硬脂酸钙或硬 脂酸镁中的任何一种或几种的混合物; 所述的分散剂, 为聚乙二醇200或400、 聚乙烯蜡、 液体石蜡、 微晶石蜡、 脂肪酸类、 脂肪 族酰胺类或酯类中的任何一种或几种的混合物; 所述。

6、的润湿剂, 为蔗糖酯、 失水山梨醇脂肪酸酯、 聚山梨酯中的任何一种或多种的混合 物; 所述的保护剂, 为海藻糖和丁基羟基茴香醚、 抗坏血酸棕榈酸酯、 二丁基羟基甲苯中的 一种或几种混合而成的复合保护剂。 7.一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂的制备方法, 其特征在于, 包括以下步骤: 第一步, 制备母粉: 按重量比取厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84-98.8、 抗结剂 0.5-5、 分散剂0.1-5、 润湿剂0.1-5和保护剂0.51, 置于无重力混合机 进行失重混合, 得到母粉; 第二步, 制备粘结浆料: 按照重量比取5-10粘结剂置于带搅拌和加热的容器内, 补 足水, 在90下搅拌至均相, 冷却。

7、至30左右; 第三步, 制备成品: 按重量比取60-80载体颗粒置于混合包衣机内, 搅拌的状态下 加入10-20粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入10- 20母粉, 直到母粉在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料, 再将湿料置于3042流化床 或真空干燥, 得到包衣法颗粒剂成品。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108013031 A 2 一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域, 特别涉及一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制 备方法。 背景技术 0002 植物寄生线虫是重要的植物病原物之一, 在全世界普遍发。

8、生, 其寄主范围广, 为害 严重。 另外 , 线虫还是诱发植物真菌和细菌病害的重要原因之一。 其中根结线虫 Meloidogyne spp.和孢囊线虫Heterodera spp.是为害最为严重的植物寄生线虫, 因其分 布广、 寄主多, 成为威胁农业生产的重要病原物。 目前防治植物寄生线虫仍以化学药剂为 主, 但其毒性大、 污染环境, 对人畜健康存在潜在威胁, 随着越来越多化学药剂被禁止使用, 急需找到环境友好的替代防治方法。 0003 生物防治作为一种安全有效手段在植物病原线虫防治中得到了广泛的研究和应 用。 厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporiaVerticill。

9、ium chlamydosporium)是 孢囊线虫Heterodera spp.、 球孢囊线虫Globodera spp.、 根结线虫Meloidogyne spp.、 珍 珠线虫Nacobbus spp.和肾状线虫 Rotylenchulus spp.卵及雌虫寄生菌, 分布广泛, 易于 培养且能够产生抗逆性很强的厚垣孢子, 容易在土壤中定殖, 是最具开发价值的生防真菌 之一。 该菌不仅可以产生几丁质酶和碱性蛋白酶, 促进线虫卵的孵化, 提高线虫的死亡率, 而且还可以产生抗生素、 植物促生物质和对线虫具有很强毒杀活性的金轮霉素和基点霉内 酯。 在植物寄生线虫防治方面, 该菌剂具有杀虫活性高,。

10、 广谱、 长效、 安全、 无污染、 无残留、 土壤适应力好, 抗抗逆性强的特点, 可明显刺激植物生长。 0004 目前厚垣孢普可尼亚菌在多个国家已生产成商品制剂, 古巴以厚垣孢普可尼亚菌 为活性成分制成了Klamic颗粒剂。 我国也用厚垣孢普可尼亚菌制成了 “厚孢轮枝菌” 微粒 剂, 田间防效较好。 但是目前市场上商品化的厚垣孢普可尼亚菌制剂存在剂型少、 制剂价格 偏高、 外界环境对菌剂的影响比较大和防治效果不稳定的问题。 如何降低制剂成本、 稳定制 剂效果是厚垣孢普可尼亚菌生物农药推广的关键所在。 0005 厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)属于真菌界, 子囊。

11、菌门, 子囊菌亚 门, 粪壳菌纲, 肉座菌目, 麦角菌科, 普可尼亚属。 厚垣孢普可尼亚菌是兼性寄生菌, 在没有 线虫寄主的情况下, 可以在根际周围及土壤中营腐生生活。 在有线虫寄主存在时, 厚垣孢普 可尼亚菌通过与寄主线虫的相互识别, 吸附或粘着于雌虫体表或卵上, 同时在几丁质酶和 碱性蛋白酶作用下, 菌丝穿透体壁将卵壳消解, 侵染其中的卵及幼虫, 并繁殖菌体。 0006 厚垣孢普可尼亚菌施入土壤以后, 其存活率和活性的大小受土壤生态因子 (微生 物、 线虫寄主、 水分、 有机质含量和pH等)以及菌剂自身质量的影响。 如何将活性厚垣孢普可 尼亚菌集中、 固定在制剂中, 保持菌剂的活性, 保证。

12、施入土壤以后菌体的存活率和繁殖, 是 开发该菌生物农药制剂的突破口和关键之处。 0007 农药载体是指农药制剂中荷载或者稀释农药的惰性物质。 载体为受药体, 其理化 性质往往会对药剂性能产生深刻影响, 要求它对药剂为惰性、 具有较大的比表面积、 吸附力 说 明 书 1/6 页 3 CN 108013031 A 3 适度, 还要求易造粒、 来源方便和价格低廉。 目前市场上常见颗粒剂产品的载体主要是硅藻 土、 草炭、 凹凸棒土、 白炭黑、 膨润土、 粘土、 滑石、 叶腊石、 石膏、 砂粒、 砖渣等、 常见颗粒剂的 化学成分都附在载体的表面上, 这样的颗粒剂产品施用到土壤中后, 遇水分和温度就快速 。

13、分解, 快速释放药力。 这些传统农药剂型中各种助剂基本上不能满足微生物制剂在土壤中 的存活、 生长和繁殖所需的条件, 因此传统农药剂型的载体并不完全适用于微生物剂型的 开发。 0008 蚕沙是蚕蛾科昆虫家蚕(Bombyx mori Linnaeus)幼虫的干燥粪便, 是一种富含粗 蛋白及碳水化合物的多组分物质, 是一种全生态的农业资源。 蚕沙干品中含粗蛋白15.4、 粗脂肪3.9、 无氮浸出物36.2、 粗纤维19.6, 含有钙、 镁、 铜、 铁、 锌等中微量元素, 并富 含叶绿素、 果胶、 黄酮、 生物碱和类肾上腺皮质激素等。 目前对蚕沙再利用的研究主要集中 于各种有效成分的提取, 如叶绿素。

14、和果胶。 由于蚕沙中还含有一定数量的植物生长激素吲 哚乙酸类似物, 因此以蚕沙为原料, 通过生物发酵制成蚕沙有机肥, 土壤施用蚕沙有机肥可 显著提高土壤pH值, 降低土壤酸度, 显著增加土壤速效养分和有机质含量, 增加土壤磷酸 酶、 脲酶、 蔗糖酶和过氧化氢酶活性, 从而改善了土壤质量, 提高土壤肥力。 开发养分丰富的 有机肥料技术也成为了行业热点。 不难看出, 蚕沙是一种成本低廉, 环保友好, 极具开发价 值的资源, 目前未见其作为生物农药菌剂生长基质和剂型载体中应用的报道。 发明内容 0009 本发明目的是提供一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂及其制备方法, 这种厚垣 孢普可尼亚菌颗粒剂包衣。

15、量大, 减少农药用量, 强化防治效果, 加速了防治效率, 节省了防 治成本, 改善土壤条件。 采用的原料属于农业废弃物资源, 其成本低廉, 设备投资少, 工艺易 控制, 产品重量稳定, 能够连续生产, 适合于工业化规模生产。 0010 本发明的目的是这样实现的: 0011 本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 含有按重量百分比的下述成分: 母粉 10-20; 粘结剂0.6-2.7; 载体颗粒77.3-89.4。 0012 本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 所述的母粉由以下成分按重量百分比 构成: 84-98.8孢子粉; 0.5-5抗结剂; 0.1-5分散剂; 0.1-5润湿剂; 0.5。

16、 1保护剂。 0013 本发明的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 所述的粘结剂, 为羟丙基甲基纤 维素、 羧甲基纤维素、 壳聚糖、 聚乙烯醇、 海藻酸钠或黄原胶中的任何两种或两种以上的混 合物。 0014 本发明的一种厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 所述的载体颗粒是蚕沙, 为蚕蛾 科昆虫家蚕(Bombyx mori Linnaeus)幼虫的干燥粪便, 收集后晒干或烘干, 水分低于10, 簸净泥土及桑叶碎屑, 过筛收集长25毫米, 直径1.53.0毫米的颗粒。 0015 本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 所述的孢子粉是厚垣孢轮枝孢普可尼 亚菌 (Pochoniachamydosporia。

17、 = Verticilliumchlamydosporium) CGMCC 14131产生的活 孢子粉, 该菌株已于2017年6月7日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心, 保藏单位地址: 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 0016 本发明的任何一项的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂, 所述的抗结剂, 是磷酸三 说 明 书 2/6 页 4 CN 108013031 A 4 钙、 磷酸二钙、 微晶纤维素、 硅酸钙、 碳酸钙镁、 硬脂酸钙或硬脂酸镁中的任何一种或几种的 混合物; 0017 所述的分散剂, 为聚乙二醇200或400、 聚乙烯蜡、 液体石蜡、 微晶石蜡、 脂肪酸类、 脂肪族酰。

18、胺类或酯类中的任何一种或几种的混合物; 0018 所述的润湿剂, 为蔗糖酯、 失水山梨醇脂肪酸酯、 聚山梨酯中的任何一种或多种的 混合物; 0019 所述的保护剂, 为海藻糖和丁基羟基茴香醚、 抗坏血酸棕榈酸酯、 二丁基羟基甲苯 中的一种或几种混合而成的复合保护剂。 0020 本发明的厚垣孢普可尼亚菌包衣法颗粒剂的制备方法, 具体包括以下步骤: 0021 第一步, 制备母粉: 按重量比取厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84-98.8、 抗结剂 0.5-5、 分散剂0.1-5、 润湿剂0.1-5和保护剂0.51, 置于无重力混合机 进行失重混合, 得到母粉, 备用; 0022 第二步, 制备粘结浆料: 。

19、按照重量比取5-10粘结剂置于带搅拌和加热的容器 内, 补足水, 在90下搅拌至均相, 冷却至30左右, 备用; 0023 第三步, 制备成品: 按重量比取60-80载体颗粒置于混合包衣机内, 搅拌的状 态下加入10-20粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入 10-20母粉, 直到母粉在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于3042 流化床或真空干燥, 得到包衣法颗粒剂成品。 0024 与现有技术相比, 本发明具有以下效果: 0025 1、 包衣量大。 蚕沙含有大量的植物纤维, 具有一定强度和较大的比表面积, 是一种 优良的包衣制粒载体。 0026 2、 。

20、增强防效。 蚕沙营养均衡, 能够满足厚垣孢普可尼亚菌生长繁殖, 所以吸附在蚕 沙中的厚垣孢普可尼亚菌可利用蚕沙进行大量生长繁殖, 减少农药用量, 强化防治效果, 加 速了防治效率, 节省了防治成本。 0027 3、 改善土壤条件。 蚕沙能中和土壤的酸碱度, 使土质疏松透气、 渗水性强、 能保持 水分、 排水性能好, 使得植物根系更容易生长和获得养分; 而且蚕沙降解后, 可作为植物的 有机肥料。 0028 4、 本发明采用的原料属于农业废弃物资源, 来源丰富, 成本低廉, 为农林废弃物资 源化利用开辟了一条新的途径。 本发明设备投资少, 工艺易控制, 产品重量稳定, 能够连续 生产, 适合于工业。

21、化规模生产。 具体实施方式 0029 下面结合实施例对本发明作进一步说明。 0030 实施例1 0031 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉84、 磷酸 三钙1.5、 磷酸二钙1、 硅酸钙1、 硬脂酸钙2、 为聚乙二醇200 5、 蔗糖酯5、 海藻 糖0.49和丁基羟基茴香醚0.01, 置于无重力混合机进行失重混合, 得到母粉, 备用; 0032 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取壳聚糖1、 黄原胶4, 置于带搅拌和加热的 容器内, 补足水, 在90下搅拌至均相, 冷却至30左右, 备用; 说 明 书 3/6 页 5 CN 108013031 A 5 0033 。

22、第三步制备成品: 按重量比取80蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 10粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入10母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于42真空干燥, 得到包衣法颗粒剂成 品。 0034 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为27.6亿个/ 克, 活 孢率为90.3, 干燥减量为9。 0035 实施例2 0036 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉88、 碳酸 钙镁2、 硬脂酸镁1.4、 聚乙烯蜡1、 液体石蜡3、 微晶石蜡1、 失水山梨醇脂肪酸酯 3、 海藻糖0.5。

23、8和抗坏血酸棕榈酸酯0.02, 置于无重力混合机进行失重混合, 得到母 粉, 备用; 0037 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取壳聚糖2、 海藻酸钠2、 黄原胶2置于带 搅拌和加热的容器内, 补足水, 在90下搅拌至均相, 冷却至30左右, 备用; 0038 第三步制备成品: 按重量比取76蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 12粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入12母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于40流化床干燥, 得到包衣法颗粒剂 成品。 0039 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为35.5亿个/。

24、 克, 活 孢率为92.8, 干燥减量为9.2。 0040 实施例3 0041 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉91、 磷酸 三钙0.1、 磷酸二钙0.2、 硅酸钙0.3、 碳酸钙镁0.4、 硬脂酸钙1.0、 硬脂酸镁 1.6、 脂肪酸1、 脂肪族酰胺1.7、 聚山梨酯2、 海藻糖0.66和二丁基羟基甲苯 0.04, 置于无重力混合机进行失重混合, 得到母粉, 备用; 0042 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取壳聚糖3、 聚乙烯醇1、 海藻酸钠 2和黄 原胶1置于带搅拌和加热的容器内, 补足水, 在90下搅拌至均相, 冷却至30左右, 备 用; 0043 第。

25、三步制备成品: 按重量比取72蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 14粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入14母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于38真空干燥, 得到包衣法颗粒剂成 品。 0044 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为43.6亿个/ 克, 活 孢率为93.9, 干燥减量为9.5。 0045 实施例4 0046 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉94、 磷酸 三钙0.1、 磷酸二钙0.4、 微晶纤维素0.8、 硅酸钙0.1、 硬脂酸钙0.6、 聚乙二醇200 0.。

26、5、 聚乙烯蜡0.3、 液体石蜡0.4、 微晶石蜡0.8、 蔗糖酯 0.5、 失水山梨醇脂肪酸 酯0.7、 海藻糖0.72、 丁基羟基茴香醚0.03和抗坏血酸棕榈酸酯0.05, 置于无重力 混合机进行失重混合, 得到母粉, 备用; 说 明 书 4/6 页 6 CN 108013031 A 6 0047 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取羟丙基甲基纤维素1、 壳聚糖2.5、 聚乙烯 醇3、 海藻酸钠1和黄原胶0.5置于带搅拌和加热的容器内, 补足水, 在90下搅拌至 均相, 冷却至30左右, 备用; 0048 第三步制备成品: 按重量比取68蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 16粘合浆料。

27、, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入16母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于36流化床干燥, 得到包衣法颗粒剂 成品。 0049 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为52.5亿个/ 克, 活 孢率为95.5, 干燥减量为9.7。 0050 实施例5 0051 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉96、 微晶 纤维素1、 碳酸钙镁0.3、 硬脂酸镁0.6、 聚乙烯蜡0.2、 液体石蜡 0.2、 微晶石蜡 0.1、 脂肪酸0.1、 脂肪族酰胺0.1、 失水山梨醇脂肪酸酯0.1、 聚山梨酯0.4、 。

28、海藻 糖0.78、 抗坏血酸棕榈酸酯0.05和二丁基羟基甲苯0.07, 置于无重力混合机进行失 重混合, 得到母粉, 备用; 0052 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取羧甲基纤维素1.5、 壳聚糖3、 聚乙烯醇 2.5、 海藻酸钠1和黄原胶1置于带搅拌和加热的容器内, 补足水, 在90下搅拌至均 相, 冷却至30左右, 备用; 0053 第三步制备成品: 按重量比取64蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 18粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入18母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于33真空干燥, 得到包衣法颗粒剂成 品。 0。

29、054 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为61.7亿个/ 克, 活 孢率为96.8, 干燥减量为9.3。 0055 实施例6 0056 第一步制备母粉: 按重量比取300亿/克的厚垣孢普可尼亚菌活孢子粉 98.8、 微 晶纤维素0.3、 硬脂酸镁0.2、 聚乙二醇400 0.02、 液体石蜡 0.05、 脂肪酸0.02、 脂肪族酰胺0.01、 蔗糖酯0.03、 聚山梨酯0.07、 海藻糖0.3、 丁基羟基茴香醚0.1 和二丁基羟基甲苯0.1, 置于无重力混合机进行失重混合, 得到母粉, 备用; 0057 第二步制备粘结浆料: 按照重量比取10(羟丙基甲基纤维素、 羧甲基纤。

30、维素、 壳 聚糖、 聚乙烯醇、 海藻酸钠或黄原胶)置于带搅拌和加热的容器内, 补足水, 在90下搅拌至 均相, 冷却至30左右, 备用; 0058 第三步制备成品: 按重量比取60蚕沙置于混合包衣机内, 搅拌的状态下加入 15粘合浆料, 继续搅拌至粘合浆料均匀润湿分布于颗粒表面; 再加入20母粉, 直到母粉 在颗粒表面形成药膜, 得到成品的湿料。 再将湿料置于30流化床干燥, 得到包衣法颗粒剂 成品。 0059 测定结果表明, 厚垣孢普可尼亚菌包衣颗粒剂的分生孢子数为72.05亿个/ 克, 活 孢率为98.2, 干燥减量为10。 0060 按上述不同实施例实施后, 按照GB/T 1605-2001中5.3.3 “固体制剂采样” 方法进 说 明 书 5/6 页 7 CN 108013031 A 7 行采样, 按GB/T 30361-2003中规定的农药干燥减量法测定干燥减量。 测定厚垣孢普可尼亚 菌颗粒剂的分生孢子数和活孢率()。 分生孢子采用血球计数板计数法, 活孢率采用0.5 麦芽浸膏培养基上孢子萌发率方法。 说 明 书 6/6 页 8 CN 108013031 A 8 。

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