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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310445918.2 (22)申请日 2013.09.27 A61K 36/90(2006.01) A61K 36/896(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A23L 1/30(2006.01) (73)专利权人 张清峰 地址 330045 江西省南昌市昌北经济开发区 志敏大道 (72)发明人 张清峰 付莹娟 郭玉显 (74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有 限公司 36115 代理人 施秀瑾 CN 1381263 A,2002.11.27, 权利要求 1-5. C。
2、N 102068589 A,2011.05.25,说明书第1页 倒数第 17 行 - 第 2 页第 5 行 . 吴占全 . 土茯苓的化学与药理研究进展 . 中 国民族医药杂志 .2008,( 第 11 期 ),71-73. 马跃平等 . 土茯苓化学成分的分离与鉴 定 .沈阳药科大学学报 .2010, 第 27 卷 ( 第 2 期 ),116-119. (54) 发明名称 土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食 品中的应用 (57) 摘要 本发明属于中药领域， 涉及土茯苓提取物在 制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。该土茯 苓提取物包含 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 落新妇苷、 异落新妇苷、 新落。
3、新妇苷、 新异落新妇苷、 花旗松 素、 黄杞苷、 异黄杞苷、 白藜芦醇。 动物实验表明土 茯苓提取物可显著减少小鼠腹腔脂肪重量， 减轻 小鼠体重， 同时降低小鼠血清中甘油三脂和总胆 固醇浓度， 效果强于落新妇苷单一成分。 本发明药 物取自天然中药， 组分间具有协同增效降脂减肥 效果， 减肥效果好， 拓展了土茯苓应用的范围。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张岩峰 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (10)授权公告号 CN 103463531 B (45)授权公告日 2015.03.11 CN 103463531 B 。
4、1/1 页 2 1. 土茯苓提取物作为唯一活性成分在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用 ； 所述 的土茯苓提取物含有 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 落新妇苷、 异落新妇苷、 新落新妇苷、 新异落新 妇苷、 花旗松素、 黄杞苷、 异黄杞苷、 白藜芦醇。 2. 如权利要求 1 所述的应用， 其特征在于所述的土茯苓提取物提取步骤包括 ： 土茯 苓药材粉碎， 乙醇超声提取， 减压回收乙醇， 离心后获得上清液 ； 往上清液中加入 - 环糊 精 - 淀粉树脂， 震荡吸附后过滤， 树脂用乙醇洗脱两次， 收集洗脱液， 回收乙醇后 4050真 空干燥， 获得土茯苓提取物。 3. 如权利要求 2 所述的应用， 其特。
5、征在于所述提取步骤 ： 土茯苓药材粉碎过 40 目筛， 用 10 倍体积 60% 乙醇超声提取， 60 减压回收提取溶剂中乙醇， 离心后获得上清液 ； 往上 清液中加入与土茯苓药材等重量的 40-60 目 - 环糊精 - 淀粉树脂， 震荡吸附 30 min 后过 滤， 树脂用 60% 乙醇洗脱两次， 收集洗脱液， 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取 物。 权 利 要 求 书 CN 103463531 B 2 1/6 页 3 土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用 技术领域 0001 本发明属于药物领域， 尤其涉及一种中药提取物在降脂减肥药物及保健食品中的 应用。 背景技术。
6、 0002 随着人民生活水平的提高， 因能量摄入过多 （高脂、 高糖膳食） 而引起的肥胖、 高血 脂等问题日益严重。 肥胖不仅影响体形， 更重要的是它与糖尿病， 高血压等疾病的发病正相 关。高血脂是造成动脉粥样硬化的主要因素， 进而可能引发血栓及心肌梗塞等多种心脑血 管疾病。 调查数据表明中国有11%的儿童及30%的成人超重， 42%的儿童至少存在一种糖脂 代谢指标异常， 中国面临心血管疾病发病率剧增风险。 因此， 研究开发出安全有效的降脂减 肥的药物或保健食品具有极为重要的社会意义。 0003 土茯苓是百合科菝葜属植物光叶菝葜 (Smilax glabra Roxb.) 的根茎， 是中国药 。
7、典收录的常用中药， 也是卫生部允许在保健食品中使用的中草药之一。化学成分研究表明 土茯苓主要含有落新妇苷、 黄杞苷等黄酮物质 ； 另外， 它也含有白藜芦醇、 莽草酸、 5-O- 咖 啡酰莽草酸等芪类及酚酸类物质。 但目前， 尚未有土茯苓提取物降脂减肥方面的研究报道。 我们研究发现土茯苓提取物可以显著减少小鼠腹腔脂肪重量， 减轻小鼠体重， 同时降低小 鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度， 具有很好的降脂减肥作用， 在降血脂及减肥药物和保 健食品方面具有重要的应用价值。 发明内容 0004 本发明目的在于提供土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。 0005 具体包括如下技术方案 ： 000。
8、6 土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。 0007 所述土茯苓提取物中包含 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 落新妇苷、 异落新妇苷、 新落新 妇苷、 新异落新妇苷、 花旗松素、 黄杞苷、 异黄杞苷、 白藜芦醇 ； 0008 所述的土茯苓提取物提取步骤包括 ： 土茯苓药材粉碎， 乙醇超声提取， 减压回收乙 醇， 离心后获得上清液 ； 往上清液中加入-环糊精-淀粉树脂， 震荡吸附后过滤， 树脂用乙 醇洗脱两次， 收集洗脱液， 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取物。 0009 提取步骤优选为 ： 土茯苓药材粉碎过 40 目筛， 用 10 倍体积 60% 乙醇超声提取， 60 减。
9、压回收提取溶剂中乙醇， 离心后获得上清液 ； 往上清液中加入与土茯苓药材等重量的 40-60 目 - 环糊精 - 淀粉树脂， 震荡吸附 30 min 后过滤， 树脂用 60% 乙醇洗脱两次， 收集 洗脱液， 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取物。 0010 该降脂减肥药物还包括药学上可接受的辅料， 如淀粉、 环糊精等。 可依照剂型需要 添加常用辅料。 0011 该降脂减肥保健品可以依照保健品的制备需要加入常用的辅料， 做成各种剂型。 这是常规技术， 不再赘述。 说 明 书 CN 103463531 B 3 2/6 页 4 0012 本发明的有益效果是 ：（1） 原料采用天然中药原料。
10、， 更为安全。 （2） 本土茯苓提取 物制备的药物减肥效果好， 拓展了土茯苓的用途。 （3） 落新妇苷经动物实验表明具有降脂减 肥作用， 同时结果也表明土茯苓提取物降脂减肥作用更强， 表明落新妇苷与土茯苓提取物 中的其他成分在降脂减肥上具有协同增效作用， 具有意想不到的效果。 0013 为更好的说明本发明的实质， 下面用土茯苓提取物降脂减肥的实验及结果来进一 步说明。 0014 土茯苓提取物 ： 土茯苓粉碎过40目筛， 用10倍体积60%乙醇超声提取， 60 oC减压 回收提取溶剂中乙醇， 离心后获得上清液。往上清液中加入与土茯苓药材等重量的 40-60 目-环糊精-淀粉树脂， 震荡吸附30 。
11、min后过滤， 树脂用60%乙醇洗脱两次， 收集洗脱液， 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取物。 0015 图1为该土茯苓提取物的高效液相色谱图 （HPLC） 。 所用HPLC系统为Waters 600， 配备双波长检测器及在线脱气系统。色谱柱为 Agilent Zorbax SB C18 柱 (250 mm4.6 mm i.d., 5 m)。流动相为乙腈 （A） 及 0.1% 醋酸水溶液 （B） 。线性梯度程序为 015min, 1621% A; 1540 min, 2140% A。流速为 1 mL/min。 进样量为 10 L， 检测波长为 291 nm。图中峰 1 为 5-O。
12、- 咖啡酰基莽草酸， 峰 3 为落新妇苷， 峰 2、 5、 6 为落新妇苷异构体 （异落新妇苷、 新落新妇苷、 新异落新妇苷） ， 峰 4 为花旗松素， 峰 7、 8 为黄杞苷和异黄杞苷， 峰 9 为白藜芦醇， 各化合物分子结构见图 2。峰 2,3,4,5,6,7,8 为黄酮化合物， 将它们峰面 积之和代入落新妇苷标准曲线， 计算得到提取物中总黄酮含量 （以落新妇苷计） 。分析结果 表明提取物中落新妇苷所占比例很大， 约为 50%。 0016 其降脂减肥效果实验如下 ： 0017 落新妇苷 ： 纯度 98%， 购自上海同田生物技术有限公司。 0018 取土茯苓提取物 1 份， 加入 - 环糊精。
13、两份， 混匀后提高其水溶性。取落新妇苷 1 份， 加入 - 环糊精两份， 混匀。 0019 70 只 4 周龄雌性 ICR 小鼠随机分为 7 组 ( 、 、 、 、 、 VI 和 VII 组 )， 每组 10 只。其中， 组为基础对照组， 喂食基础饲料 ； 组为高脂对照组， 喂食高脂饲料 ； 、 和喂食高脂饲料， 并且在饮用水中添加土茯苓提取物， 以其中总黄酮计， 总黄酮浓度分别 为 1 mg/ml（组） 、 2 mg/ml（组） 和 4 mg/ml（组 ) ； VI 和 VII 组喂食高脂饲料， 并且 在饮用水中添加落新妇苷， 浓度分别为 1 mg/ml（VI 组） 、 2 mg/ml（VI。
14、I 组） 。所述高脂饲料 组成为 85% 基础饲料 +10% 猪油 +5% 蔗糖。所有小鼠自由采食和饮水， 饲养 8 周， 每周称体 重。 实验结束后， 从心脏采血， 分离血清， 分析小鼠血清中甘油三酯和胆固醇浓度 ； 解剖动物 采集小鼠腹腔内脂肪组织、 脾、 肾、 肝脏等组织并称重。 0020 表一为不同处理组小鼠体重与饲养时间关系。由表一知， 高脂对照组小鼠体重增 加显著快于基础饲料对照组， 体重差异有统计学意义 （p0.05） 。 表二为不同处理组小鼠在第三周和第七周的平均摄食量和饮水 量。 由表二可知， 与高脂对照组相比， 在饮用水中添加土茯苓提取物或落新妇苷不会减少小 鼠的摄食量和饮。
15、水量， 说明各组小鼠体重增加不同不是由摄食量引起的。 0021 小鼠解剖后， 取腹腔脂肪、 肝脏、 肾脏及脾脏称重， 统计结果见表三。实验结果表 说 明 书 CN 103463531 B 4 3/6 页 5 明， 与基础饲料组相比， 高脂对照组小鼠腹腔脂肪重量显著增加 （p0.05） 。肝脏、 肾 脏及脾脏称重结果表明各组之间无显著差异， 说明土茯苓提取物和落新妇苷均对小鼠器脏 无影响， 不影响小鼠健康。 0022 血清中甘油三脂和总胆固醇指标测定结果表明 （表四） ， 与基础饲料组相比， 高脂 对照组小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度显著升高 （p0.05） 。 0023 以上实验结果表明， 。
16、土茯苓提取物可以显著减少小鼠腹腔脂肪重量， 减轻小鼠体 重， 同时降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度， 差异具有统计学意义 （p0.05） 。 0024 HPLC 分析结果表明土茯苓提取物中， 除主要含有落新妇苷外， 还含有落新妇苷异 构体、 花旗松素、 黄杞苷和异黄杞苷等黄酮成分， 另外也含有 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 白藜芦 醇等酚酸和芪类成分。这些成分中落新妇苷经动物实验表明具有降脂减肥作用， 同时结果 也表明土茯苓提取物降脂减肥作用更强， 表明落新妇苷与土茯苓提取物中的其他成分在降 脂减肥上具有协同增效作用， 赋予土茯苓提取物更好的降脂减肥作用， 效果强于其中主要 成分落新妇苷单一。
17、组分。土茯苓是国家卫生部允许在保健食品中使用的中草药之一， 因此 土茯苓提取物在降脂减肥保健品及药品方面具有广阔的应用前景。 0025 表一 不同饲养时间小鼠体重表 （平均值 SE, n=10） 0026 说 明 书 CN 103463531 B 5 4/6 页 6 0027 I 组为基础对照组， II 组为高脂对照组， III、 IV 和 V 分别添加土茯苓提取物 1 mg/ ml（III） 、 2 mg/ml（IV） 和 4 mg/ml（V) ； VI 和 VII 组分别添加落新妇苷 1 mg/ml（VI） 和 2 mg/ml（VII） 。 0028 a 与基础对照组相比有显著差异 （p0。
18、.05） ； b 与高脂对照组相比有显著差异 （p0.05） 。 0029 表二 小鼠平均摄食量及饮水量 （平均值 SD, n=7） 0030 0031 I 组为基础对照组， II 组为高脂对照组， III、 IV 和 V 分别添加土茯苓提取物 1 mg/ ml（III） 、 2 mg/ml（IV） 和 4 mg/ml（V) ； VI 和 VII 组分别添加落新妇苷 1 mg/ml（VI） 和 2 mg/ml（VII） 。 0032 a 与基础对照组相比有显著差异 （p0.05） ； b 与高脂对照组相比有显著差异 （p0.05） 。 0033 表三 小鼠腹腔脂肪及器脏指标 （平均值 SE, 。
19、n=10） 0034 说 明 书 CN 103463531 B 6 5/6 页 7 0035 I 组为基础对照组， II 组为高脂对照组， III、 IV 和 V 分别添加土茯苓提取物 1 mg/ ml（III） 、 2 mg/ml（IV） 和 4 mg/ml（V) ； VI 和 VII 组分别添加落新妇苷 1 mg/ml（VI） 和 2 mg/ml（VII） 。 0036 a 与基础对照组相比有显著差异 （p0.05） ； b 与高脂对照组相比有显著差异 （p0.05） 。 0037 表四 小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度 （平均值 SE, n=10） 0038 0039 I 组为基础对照组。
20、， II 组为高脂对照组， III、 IV 和 V 分别添加土茯苓提取物 1 mg/ ml（III） 、 2 mg/ml（IV） 和 4 mg/ml（V) ； VI 和 VII 组分别添加落新妇苷 1 mg/ml（VI） 和 2 mg/ml（VII） 。 0040 a 与基础对照组相比有显著差异 （p0.05） ； b 与高脂对照组相比有显著差异 （p0.05） 。 附图说明 0041 图 1 土茯苓提取物高效液相色谱图 0042 图 2 土茯苓提取物中各色谱峰分子结构。 具体实施方式 0043 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明， 但本发明不限于这些实施例。 0044 实施例 1 004。
21、5 土茯苓降脂减肥胶囊， 通过如下步骤制备 ： 0046 （1） 土茯苓提取物 ： 土茯苓粉碎过40目筛， 用10倍体积60%乙醇超声提取， 60 oC减 压回收提取溶剂中乙醇， 离心后获得上清液。 往上清液中加入与土茯苓药材等重量的40-60 目-环糊精-淀粉树脂， 震荡吸附30 min后过滤， 树脂用60%乙醇洗脱两次， 收集洗脱液， 说 明 书 CN 103463531 B 7 6/6 页 8 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取物。 0047 （2） 经高效液相色谱检测， 含有 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 落新妇苷、 异落新妇苷、 新 落新妇苷、 新异落新妇苷、 花旗松素、 。
22、黄杞苷、 异黄杞苷、 白藜芦醇。 提取物中总黄酮含量 （以 落新妇苷计） 为 76.6%。 0048 （3） 取土茯苓提取物 500 克， 粉碎后过 60 目筛 ； 另取 - 环糊精 2000g， 混匀。 0049 （4） 灭菌处理后， 在湿度为 20-40% 环境下造粒， 粒度在 2040 目之间。 0050 （5） 在湿度为 50% 以内环境中装胶囊， 每粒重约 0.5 g。 0051 实施例 2 0052 土茯苓降脂减肥冲剂， 通过如下方法制备 ： 0053 （1） 土茯苓提取物 ： 土茯苓粉碎过40目筛， 用10倍体积60%乙醇超声提取， 60 oC减 压回收提取溶剂中乙醇， 离心后获。
23、得上清液。 往上清液中加入与土茯苓药材等重量的40-60 目-环糊精-淀粉树脂， 震荡吸附30 min后过滤， 树脂用60%乙醇洗脱两次， 收集洗脱液， 回收乙醇后 4050真空干燥， 获得土茯苓提取物。 0054 （2） 经高效液相色谱检测， 含有 5-O- 咖啡酰基莽草酸、 落新妇苷、 异落新妇苷、 新 落新妇苷、 新异落新妇苷、 花旗松素、 黄杞苷、 异黄杞苷、 白藜芦醇。 提取物中总黄酮含量 （以 落新妇苷计） 为 76.6%。 0055 （3） 取土茯苓提取物 500 克， 粉碎后过 60 目筛 ； 另取 - 环糊精 2000g， 速溶绿茶 粉 500 克， 阿斯巴甜 40 克， 混。
24、匀。 0056 （4） 灭菌处理后， 在湿度为 20-40% 环境下造粒， 粒度在 2040 目之间。 0057 （5） 在湿度为 50% 以内环境中装袋， 每袋重 3.6 g。 0058 实施例 3 0059 制备的降脂减肥冲剂的功效观察 0060 取实施例2降脂减肥冲剂经8名志愿者试用， 6女2男， 体重为60-80kg。 每天两袋， 试用 15 天， 期间询问志愿者食欲、 精神、 睡眠、 大小便等情况， 记录志愿者体重变化情况。8 名志愿者均反馈试用期间不影响食欲、 精神、 睡眠、 大小便等， 体重称量结果全部反映有效， 体重减轻范围为 0.5-2 kg。典型例子 ： 0061 袁， 女， 30岁， 试用前体重为65.4 kg， 试用15天后体重减为64.2 kg ； 后停药10 天， 体重维持为 64.2 kg ； 再服用冲剂 15 天， 体重减至 63.2 kg， 停药后体重维持未反弹。 说 明 书 CN 103463531 B 8 1/1 页 9 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103463531 B 9 。