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1、(10)授权公告号 CN 102885786 B (45)授权公告日 2014.04.02 CN 102885786 B (21)申请号 201210364524.X (22)申请日 2012.09.26 A61K 9/19(2006.01) A61K 31/337(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (73)专利权人 山东大学 地址 250014 山东省济南市历下区文化西路 44 号 (72)发明人 邵伟 徐洪燕 (74)专利代理机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 37221 代理人 彭成 CN 101317816 A,2008。
2、.12.10,说明书第3页 第 3-4 段、 第 4 页第 1 段和第 5 页第 2、 4-5 段 . CN 101732234 A,2010.06.16,说明书第3页 实施例 3. CN 101972480 A,2011.02.16,权利要求1和 6. CN 101773480 A,2010.07.14,说明书第5页 实施例 11. US 20120225017 A1,2012.09.06, 全文 . US 2010178305 A1,2010.07.15, 全文 . (54) 发明名称 一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂及其制 备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种载多西他赛的混合胶束冻 。
3、干制剂， 是通过以下制备方法制备得到的 ： 将多 西他赛、 Pluronic 类表面活性剂及二嵌段共聚物 共同溶解于有机溶剂中， 在水浴条件下减压旋转 蒸发除去有机溶剂， 真空放置， 得干燥透明的药 膜 ； 将药膜水浴加热， 固体骨架融化后， 加同温度 的水水化， 冷却至室温， 得透明的多西他赛混合胶 束溶液 ； 向多西他赛混合胶束溶液中加入冻干保 护剂， 微孔滤膜除菌， 冷冻干燥， 即得多西他赛的 混合胶束冻干制剂， 其平均粒径在 17 25nm。本 发明的载多西他赛的混合胶束冻干制剂， 大大提 高了多西他赛的溶解度， 且制备的胶束粒径小， 包 封率高， 稳定性好， 具有被动靶向和长循环等特。
4、 点， 有很好的应用前景。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 朱晓 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102885786 B CN 102885786 B 1/1 页 2 1. 一种载多西他赛的混合胶束制剂， 其特征在于 ： 是通过以下制备方法制备得到的 ： 精密称取多西他赛 5.0mg， PEG-PLA62.5mg， 普朗尼克 P123 137.5mg， 用 15ml 乙腈充分溶解 混匀后， 40水浴旋转蒸发除去有机溶剂， 真空干燥 12h，。
5、 得干燥透明的药膜， 水浴加热至 40， 使固体骨架融化后， 加 6mL 同温度水， 1,000rpm 恒速搅拌 1h， 冷却至室温， 过 0.22m 微孔滤膜， 得透明的多西他赛混合胶束溶液。 2. 一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂， 其特征在于 ： 是通过以下制备方法制备得到 的 ： 精密称取多西他赛5.0mg， PEG-PLA62.5mg， 普朗尼克P123 137.5mg， 用15ml乙腈充分溶 解混匀后， 40水浴旋转蒸发除去有机溶剂， 真空干燥 8h， 得干燥透明的药膜， 水浴加热至 60， 使固体骨架融化后， 加 12mL 同温度水， 1,000rpm 恒速搅拌 1h， 冷却至室。
6、温， 得透明的 多西他赛混合胶束溶液 ； 加入2%甘露醇作为冻干保护剂， 过0.22m微孔滤膜除菌， 将溶液 分装于无菌西林瓶中， 每瓶 3mL， 冷冻干燥后得白色疏松状多西他赛混合胶束冻干制剂。 权 利 要 求 书 CN 102885786 B 2 1/4 页 3 一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂及其制备方法。 背景技术 0002 多西他赛是一种从欧洲红豆杉中提取的天然前体药物， 再经半合成得到的第二代 紫杉烷类抗肿瘤化合物。它的作用机制与紫杉醇类似， 是对多种肿瘤细胞株有细胞毒性作 用的广谱抗肿瘤药物， 其主要是通。
7、过与微管蛋白结合， 促进微管蛋白聚合形成稳定的微管 并抑制微管分拆， 从而干扰肿瘤细胞的有丝分裂， 抑制肿瘤细胞的分化。 目前多西他赛已经 成为能有效治疗实体瘤如乳腺癌、 非小细胞肺癌、 卵巢癌等的一线治疗药物。 0003 多西他赛分子式 ： C43H53NO14， 分子量为 807.88， 结构式如下 ： 0004 0005 多西他赛水溶性较差， 目前临床上唯一应用的剂型是含 40mgmL-1多西他赛及高 浓度的非离子型表面活性剂吐温 -80 和乙醇 （50 ： 50， v/v） 的注射剂， 商品名为泰索帝。但 药物或溶剂都会产生较多不良反应， 如药物本身可导致神经毒性、 骨骼肌毒性、 以及。
8、中性粒 细胞减少等症状 ； 而溶剂系统则会导致超敏反应、 体液潴留等严重不良反应。因此， 需要研 究一种新的药物剂型， 使药物在肿瘤部位达到有效治疗浓度的同时可以降低由于药物非特 异性传输导致的不良反应。 0006 聚合物胶束为一种稳定的胶体分散体系， 其亲水链与疏水链可在水溶液中自发形 成核 - 壳结构的胶束。疏水内核可作为疏水性药物的储库， 而亲水性的外壳不仅能起增溶 作用， 还能起到缓解药物释放的目的。胶束系统粒径一般在 20 100nm 之间， 因此， 较大的 表面积 / 体积比值能增强药物对肿瘤组织血管壁的渗透， 使药物通过 EPR 效应被动富集到 实体瘤组织且肿瘤处的浓度可提高数倍。
9、。 混合胶束为两种或多种载体材料按一定比例混合 共同制备的胶体分散体系， 其可集合各单一胶束的优点。 0007 PEG-PLA为两亲性嵌段共聚物， 其易形成胶束且有良好的载药能力和释放行为。 其 中聚乳酸 （PLA） 为生物可降解材料， 其最终代谢产物为二氧化碳和水， 中间代谢产物乳酸也 是体内正常代谢产物的一种， 因此不会在体内产生蓄积。 而聚乙二醇 （PEG） 无免疫原性且具 有良好的生物相容性， 分子量小于 5000 时可经肾脏排出体外。PEG 在胶束表面可形成 “亲 说 明 书 CN 102885786 B 3 2/4 页 4 水性云团” ， 使胶束内药物 “隐身” ， 避免了血中蛋白。
10、质的吸附和调理素的作用及药物被网状 内皮系统及肝、 脾、 肾等器官识别捕获的机会， 具有较长的血液循环时间， 提高了药物的安 全性。同时还可以通过改变嵌段共聚物的分子量来控制所形成胶束的粒径， 从而更好的实 现对肿瘤组织的被动靶向性。有研究报道， 用 PEG-PLA 制备的聚合物胶束给药系统具有逆 转肿瘤 MDR 的作用。 0008 Pluronic 为三嵌段共聚物 （PEO-PPO-PEO） ， 其无毒、 无刺激、 无免疫原性， 且已商 品化， 胶束的亲水性外壳 PEO 能阻止血小板的聚集。同时， Pluronic 嵌段共聚物具有显著 克服多药耐药的效果， 包封于其中的药物可避免 P-gp 。
11、的识别、 结合及外排， 从而增加药物 在细胞内的蓄积， 但又不会显著改变药物的体内处置过程。但 Pluronic 由于疏水链段比例 较小， 因此对疏水性药物的包封率低， 且形成的胶束稳定性差， 药物极易泄露， 造成失活。 发明内容 0009 针对上述现有技术， 本发明提供了一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂及其制备 方法。 0010 本发明是通过以下技术方案实现的 ： 0011 一种载多西他赛的混合胶束冻干制剂， 是通过以下制备方法制备得到的 ： 0012 将 3 7mg 的多西他赛、 25 175mg 的 Pluronic 类表面活性剂及 25 175mg 的 二嵌段共聚物共同溶解于15ml有。
12、机溶剂中， 溶解并充分混匀后， 在4060水浴条件下减 压旋转蒸发除去有机溶剂， 真空放置 8 12h， 以除去残留有机溶剂， 得干燥透明的药膜 ； 将 药膜水浴加热至4070， 固体骨架融化后， 加315ml的同温度的水水化， 冷却至室温， 得透明的多西他赛混合胶束溶液 ； 向多西他赛混合胶束溶液中加入 2%（单位 g/ml） 的冻干 保护剂， 微孔滤膜除菌， 冷冻干燥， 即得多西他赛的混合胶束冻干制剂， 其平均粒径在 17 25nm。 0013 所述 Pluronic 类表面活性剂为 PluronicP123。 0014 所述二嵌段共聚物为 PEG-PLA。 0015 所述有机溶剂为乙腈。。
13、 0016 所述冻干保护剂为甘露醇。 0017 所述微孔滤膜为 0.22m 滤膜。 0018 所述载多西他赛的混合胶束冻干制剂的制备方法， 同上。 0019 本发明采用了无毒、 无免疫原性并可生物降解的 Pluronic 和 PEG-PLA 嵌段共聚 物， 通过大量实验， 筛选出了制备载多西他赛混合胶束的最优制备工艺， 该工艺简单， 可以 现实工业化生产。 0020 本发明的载多西他赛的混合胶束冻干制剂， 大大提高了多西他赛的溶解度， 且制 备的胶束粒径小， 包封率高， 稳定性好， 具有被动靶向和长循环等特点， 其中 Pluronic 和 PEG-PLA 嵌段共聚物都具有克服多药耐药的效果， 。
14、制备成的混合胶束能显著增加药物在细 胞内的蓄积， 可应用在逆转肿瘤多要耐药领域， 有很好的应用前景。 附图说明 0021 图 1 ： 实施例 1 制备的多西他赛混合胶束制剂的电镜照片 （100， 000） 。 说 明 书 CN 102885786 B 4 3/4 页 5 具体实施方式 0022 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。 0023 实施例 1 ： 制备多西他赛混合胶束制剂 0024 精密称取多西他赛 5.0mg， PEG-PLA62.5mg， 普朗尼克 P123 137.5mg， 用 15ml 乙腈 充分溶解混匀后， 40水浴旋转蒸发除去有机溶剂， 真空干燥 12h， 得干燥透明的。
15、药膜， 水 浴加热至 40， 使固体骨架融化后， 加 6mL 同温度水， 1,000rpm 恒速搅拌 1h， 冷却至室温， 过 0.22m 微孔滤膜， 得透明的多西他赛混合胶束溶液， 其平均粒径为 19.9nm， 分散系数为 0.102。 0025 实施例 2 ： 制备多西他赛混合胶束冻干制剂 0026 精密称取多西他赛 6.0mg， PEG-PLA25mg， 普朗尼克 P123 175mg， 用 15ml 乙腈充分 溶解混匀后， 40水浴旋转蒸发除去有机溶剂， 真空干燥 10h， 得干燥透明的药膜， 水浴加热 至50， 使固体骨架融化后， 加9mL同温度水， 1,000rpm恒速搅拌1h， 。
16、冷却至室温， 得透明的 多西他赛混合胶束溶液。加入 2% 甘露醇作为冻干保护剂， 过 0.22m 微孔滤膜除菌， 将溶 液分装于无菌西林瓶中， 每瓶 3mL， 冷冻干燥后得白色疏松状多西他赛混合胶束冻干制剂。 取冻干制剂适量， 用双蒸水复溶， 于透射电镜下观察， 如图 1 所示， 为圆整的球形颗粒， 粒径 为 22.0nm， 多分散系数为 0.145。 0027 实施例 3 ： 制备多西他赛混合胶束冻干制剂 0028 精密称取多西他赛5.0mg， PEG-PLA62.5mg， 普朗尼克P123137.5mg， 用15ml乙腈充 分溶解混匀后， 40水浴旋转蒸发除去有机溶剂， 真空干燥 8h， 。
17、得干燥透明的药膜， 水浴加 热至 60， 使固体骨架融化后， 加 12mL 同温度水， 1,000rpm 恒速搅拌 1h， 冷却至室温， 得透 明的多西他赛混合胶束溶液。加入 2% 甘露醇作为冻干保护剂， 过 0.22m 微孔滤膜除菌， 将溶液分装于无菌西林瓶中， 每瓶 3mL， 冷冻干燥后得白色疏松状多西他赛混合胶束冻干制 剂。室温干燥储存 3 个月后， 于冻干制剂中加入 2mL 双蒸水， 轻轻震摇后迅速复溶， 得澄清 透明的胶束溶液， 粒径为 22.4nm， 多分散系数为 0.212。 0029 实施例 4 ： 包封率测定实验 0030 采用 HPLC 测定混合胶束溶液中多西他赛的含量， 。
18、色谱条件 ： 色谱柱为 Hypersil ODS 柱 （4.6mm250mm） ； 流动相为乙腈 - 水 （65 ： 35） ； 进样量为 20L ； 流速为 1mLmin-1； 检测波长为 230nm。以多西他赛峰面积 （A） 为横坐标， 溶液浓度 （C） 为纵坐标进行线性拟 合， 得标准曲线为 ： A=7.02455+23.50745C， R=0.99982， 多西他赛在 5 50gmL-1内线性 关系良好。 0031 精密吸取混合胶束溶液 0.1mL， 加入 1.9mL 乙腈破坏并稀释胶束。涡旋 1min， 超声 15min， 12000rpm 离心 20min， 取上清液， 进样， 以 HPLC 法测定混合胶束溶液中药物的含量。 包封率按下式计算 ：（式中 ： W1为胶束中的含药量， W2为投药总量） 。实 验结果见表 1。 0032 表 1 包封率测定结果 0033 说 明 书 CN 102885786 B 5 4/4 页 6 说 明 书 CN 102885786 B 6 1/1 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 102885786 B 7 。