技术领域
本发明涉及一种以中药为原料的药物组合物，特别涉及一种治疗肝病的 中药组合物；本发明还涉及该中药组合物的制备方法。
背景技术
当前治疗肝病的药品洋洋洒洒达数百种之多，但治疗的效果却并不尽如 人意。无数患者因此而耗费了大量的钱财，最终仍然走向死亡的深渊。西医采 用放疗或者化疗方法治疗肝癌、肝硬化，具有相当大的副作用，在杀灭癌细 胞的同时，也把人体正常的细胞歼灭了。其不仅治愈率低，易复发，价格高， 至目前为止，还没有能够有效治愈上述重症肝病的确效药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种配比合理， 安全方便，提高肝功能、增强免疫力之功效，能消除病邪有害反应，使癌肿 瘤体积缩小或消失或退行性改变的治疗肝病的中药组合物。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供了如上所述的治疗肝病的中药 组合物的制备方法与用途。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的，本发明是 一种治疗肝病的中药组合物，其特点是，制成中药组合物的主要有效成份原 料的重量配比组成包括：丹参、丹皮(牡丹皮)、鸡骨草、赤芍、金钱草、蒲公 英、山豆根、板蓝根、麦芽、茵陈(茵陈蒿)、龙胆草、人参、佛手柑、熟地、茯苓、 猪苓、当归、三七、柴胡、枳壳、香附各50-70，且各原料的重量配比均优选为 55－65，进一步优选为60。
本发明所述的一种治疗肝病的中药组合物，进一步优选的技术方案是： 制成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：金银花、贯叶连翅、 虎杖、栀子、青黛、元胡索(延胡索)、姜黄、白术、玄参、黄芪、三棱、青矾、莪术、白 矾、佛甲草、芦荟、灵芝、人工牛黄、草决明各70-90。所述原料金银花、贯叶连 翅等的重量配比各优选为75－85，进一步优选为80。
本发明所述的治疗肝病的中药组合物，进一步优选的技术方案是：制成 中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参、党参、山慈姑 (光慈姑)、半枝莲、白花蛇舌草、仙鹤草、芦笋、溪黄草各90-110。所述原料 西洋参、党参等的重量配比各优选为95－105，进一步优选为100。
本发明所述的一种治疗肝病的中药组合物，最优选的技术方案是：制成 中药组合物的主要有效成份原料的重量配比组成包括：
(1)丹参、丹皮、鸡骨草、赤芍、金钱草、蒲公英、山豆根、板蓝根、麦芽、茵陈、 龙胆草、人参、佛手柑、熟地、茯苓、猪苓、当归、三七、柴胡、枳壳、香附各为 60；
(2)原料金银花、贯叶连翅、虎杖、栀子、青黛、元胡索、姜黄、白术、玄参、黄 芪、三棱、青矾、莪术、白矾、佛甲草、芦荟、灵芝、人工牛黄、草决明的重量配比 各为80；
(3)西洋参、党参、山慈姑、半枝莲、白花蛇舌草、仙鹤草、芦笋、溪黄草的重 量配比各为100。
本发明所述的治疗肝病的中药组合物可以按照现有技术的常规方法进 行制备。所制成的中药组合物的剂型可以是现有技术中所公开的任何一种临 床上可以接受的剂型。优选的本发明中药组成物的制备方法是：将上述重量 配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均匀，制成散剂、片剂或胶 囊剂，即得。另一种优选的本发明所述的治疗肝病的中药组合物的制备方法 是：按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉状后与人 工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒，与其余 原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混合物与 第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
以下是发明人所做的药效作用实验。
实验一：本发明药物治疗肝癌的实验研究
1实验材料
1.1动物：昆明种小鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，♀，体重19 ～22g。BALB/C裸鼠，由南京中医药大学实验动物中心提供，体重17～ 18g。C57BL/6小鼠，由BK公司提供，雌性，体重18～20g。
1.2药物：
中药A组：丹参、丹皮、鸡骨草、赤芍、金钱草、蒲公英、山豆根、板蓝根、麦 芽、茵陈、龙胆草、人参、佛手柑、熟地、茯苓、猪苓、当归、三七、柴胡、枳壳、香附， 按各60克进行配制；
中药B组：金银花、贯叶连翅、虎杖、栀子、青黛、元胡索、姜黄、白术、玄参、 黄芪、三棱、青矾、莪术、白矾、佛甲草、芦荟、灵芝、人工牛黄、草决明，各按80 克进行配制；
中药C组：西洋参、党参、山慈姑、半枝莲、白花蛇舌草、仙鹤草、芦笋、溪黄 草，各按100克进行配制。
本发明药物A为采用上述中药A组的原料配方的药物；本发明药物 A+B为采用上述中药A组和中药B组的原料配方的药物；本发明药物 A+B+C为采用上述中药A组、中药B组和中药C组的原料配方的药物(实验 二、三同)。
本发明药物A，含量为3g生药/mL；本发明药物A+B，含量为3g生 药/mL；本发明药物A+B+C，含量为3g生药/mL。环磷酰胺(CTX)，华联 制药公司生产，批号940106。香菇多糖，江苏康缘药业股份有限公司生产， 批号911026，每毫升含香菇多糖2mg。
1.3细胞株及动物移植性肿瘤：YAC-1细胞，小鼠肝癌HAC，人体肝癌 QGY。
1.4其它材料：培养基：RPMI1640内含15％NBS、巯基乙醇等。3H-TdR：上 海原子核研究所，放射性浓度37MBq/mL。ConA(刀豆球蛋白)：Sigma产 品，配成50mg/mL。
2方法与结果
2.1本发明药物抗肿瘤作用
2.1.1对小鼠肝癌HAC的作用：取生长良好的昆明种小鼠肝癌HAC腹水， 用生理盐水1：4稀释后，每只小鼠腋皮下接种0.2mL，随机分组，设生理盐 水对照组和CTX阳性对照组〔100mg/kg，ip×3(1，3，5d)〕，本发明药物设 3个剂量组，均为75g生药/kg体重，ig×7，给药体积为0.5毫升/只。次日起给 药，连续ig7d。接种后10d脱颈处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组瘤重之 大小。根据以下公式判定结果：
肿瘤抑制率(％)＝(空白对照组平均瘤重—给药组平均瘤重)/对照组平均 瘤重×100％
试验结果表明，本发明药物对小鼠肝癌HAC均有一定的抑制作用，本 发明药物A+B+C抑瘤率达75.21％，效果最好，试验结果见表1。
表1 本发明药物液对小鼠肝癌HAC的作用
与生理盐水组比较：**P<0.01
2.1.2对接种于裸鼠的人体肝癌QGY的作用：取生长旺盛的裸鼠人体肝癌QGY瘤组织， 用生理盐水匀浆制备成1：4稀释的细胞悬液，每只BALB/C裸鼠右腋部皮下接种 0.2mL，接种后次日随机分组并开始给药，接种后30d解剖动物，取瘤称重，计算瘤重抑 制率。
试验结果表明，本发明药物对移植于裸鼠的人体肝癌QGY均有一定的抑制作用，其中 本发明药物A+B+C抑瘤率达80.12％，效果最佳。结果见表2。
表2 本发明药物对小鼠肝癌QGY的疗效
与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01
2.2本发明药物对免疫功能的影响
2.2.1对小鼠体内自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响：取C57BL/6小鼠，随机分为本 发明药物A组、本发明药物A+B组、本发明药物A+B+C组、生理盐水对照组和香菇多糖阳 性对照组(0.2mL/20g体重，即20mg/kg)，每日给药1次，共7次后处死动物。按文献方 法(章崇杰，吴慧君.华西医大学学报.1987.18(2):126)略有改进，以脾细胞作为效应细胞， YAC-1细胞为靶细胞，以靶：效之比为1：100的细胞加入96孔细胞培养板内，加入3H- TdR18.5kBq/孔，37℃，5％CO2条件下培养24h，多头细胞收集器收集细胞，液闪仪上测 定cpm值，计算特性掺入抑制率(Pi)作为NK细胞的活性。
Pi＝(1—给药组cpm值/对照组cpm值)×100％
试验结果表明，本发明药物连续给药7d后能明显增强小鼠体内NK细胞的活性。与生理 盐水组相比有显著性差异，以本发明药物A+B+C组最为明显，该组与香菇多糖组相比无 显著性差异(P>0.05)，结果见表3。
表3 本发明药物对小鼠体内自然杀伤细胞(N细胞)活性的影响
与生理盐水组比较：**P<0.01
2.2.2对小鼠体内脾淋巴细胞增殖的影响：取C57BL/6小鼠，随机分为本发明药物A组、 本发明药物A+B组、本发明药物A+B+C组、生理盐水对照组和香菇多糖阳性对照组，每日 给药1次，共7次后处死动物，按文献方法(徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理实验方法 学.北京:人民卫生出版社.1991:1226)稍作改进，用RPMI1640培养基调整脾细胞悬液细 胞浓度为1×107个/毫升，在96孔细胞培养板上每孔加细胞，ConA及培养基， 37℃，5％CO2条件下培养48h后加入3H-TdR，18.5kBq/孔，再培养18h，用多头细胞收 集器收集细胞，液闪仪上测定cpm值，以对照组与给药组的cpm值进行比较。
实验结果表明，本发明药物连续给药7d后能明显促进小鼠脾淋巴细胞的增殖，与生理 盐水组相比有显著性差异，以本发明药物A+B+C组对小鼠体内脾淋巴细胞活性影响最大， 该组与香菇多糖组相比无显著性差异(P>0.05)，实验结果见表4。
表4 本发明药物对小鼠体内脾淋巴细胞增殖的影响
与生理盐水组比较：**P<0.01
2.2.3对小鼠体内IL-2的影响：取C57BL/6小鼠，随机分为本发明药物A组、本发明药 物A+B组、本发明药物A+B+C组、空白对照组及香菇多糖阳性对照组，空白对照组给生理 盐水，连续给药7d后，制备脾细胞悬液，调整细胞浓度为1×107/mL，24孔板上每孔加 2mL细胞及ConA5μg/mL，37℃，5％CO2条件下培养24h收集上清液，应用小鼠胸腺细 胞增殖法测定IL-2活性，即无菌条件下取胸腺，制备细胞悬液，调整细胞浓度为2×106 个/毫升，ConA3μg/mL及收集的上清液分别加在96孔细胞培养板上，37℃，5％CO2条件 下培养48h，培养结束前6h加入3H-TdR 18.5kBq/孔，细胞收集仪上收集细胞，液闪仪上 测定cpm值，并以对照组及给药组比较之。实验结果表明，本发明药物对IL-2活性均产生 了激活作用，见表5。
表5 本发明药物对小鼠产生IL-2的影响
与生理盐水组比较：**P<0.01
3结论
本实验表明，本发明药物对肝癌有一定的抑瘤效果，免疫学研究也表明，本发明药 物有明显的促进免疫功能的作用。实验结果显示，本发明药物无明显毒性。
实验二：本发明药物治疗中晚期肝癌临床研究
1资料与方法
1.1一般资料
62例患者，诊断均按《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中肝癌所制定的标准(中华人民共 和国卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤治疗规范，第二分册：原发性肝癌[M].北京： 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991：54-55)，其中肝区疼痛，伴消瘦51 例，黄疸43例，胸、腹水36例，门静脉系统癌栓者38例，发热13例，远处转移者9例； 所有患者均为无手术及TACE指征或不愿接受手术及TACE治疗的确诊为中晚期原发性肝 癌的患者。
将62例患者按照配对设计随机分成两组：
治疗组32例，其中男27例，女5例；年龄22～70岁，平均52岁；病程2～40d，平 均14.2d；Karnofsky评分为60～80分，平均(70±10)分；按Egge病理分型：巨块型15 例，结节型10例，弥漫型7例；肝功能Child分级：A级10例，B级22例。
对照组30例，其中男27例，女3例；年龄22～68岁，平均49岁；病程3～37d，平 均13.8d；Karnofsky评分为60～80分，平均(70±10)分；病理分型：巨块型16例，结 节型9例，弥漫型5例；肝功能Child分级：A级11例，B级19例。
两组病例资料经统计学处理差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。
1.2治疗方法
两组患者均采用相同的西药疗法，即保肝对症支持疗法，给予人血白蛋白、肝泰乐、维 生素C、联苯双酯、西米替丁、洛赛克、维生素K4、肌苷；阿片类药物缓解患者疼痛及针对腹 胀纳呆、胃肠道出血等对症处理。
治疗组：在对照组用药的基础上加用本发明药物A；吐血或便血患者在本发明药物A 基础上加药物B，即使用本发明药物A+B；低热、腹胀、肢肿、小便黄患者在本发明药物A 基础上加药物B和C，即使用本发明药物A+B+C；每日早晚分2次服。
所有患者从确诊后开始治疗，未接受其他抗癌药物治疗。两组均为30d为1个疗程， 统计疗效；生存者继续用药，用药不到30d者删除。
1.3统计学方法
两组样本均数的比较用t检验，半年生存率比较用χ2检验。
1.4疗效评价标准
两组患者均在第1个周期治疗前及治疗后15d检查记录生存质量、实体瘤大小及部分实 验室指标的变化。
1.5生存期
以寿命表法进行计算(Ⅱ期患者随访：每90d 1次；Ⅲ期患者随访：每60d 1次)。
2结果
生存时间：指从开始治疗之日算到死亡日期或未次随访日期。62例患者完成30d以上的 治疗，其中治疗组32例，对照组30例。生存时间治疗组最长时间为0.97a，最短时间 33d；半年生存率为37.5％(12/32例)。对照组生存最长时间为0.78a，最短时间36.5d； 半年生存率为16.7％(5/30例)。两组半年生存率比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
生活质量：采用Karnofsky计分法。治疗后治疗组Karnofsky评分下降14例(43.7％)， 对照组下降20例(66.7％)。两组治疗前后生活质量评分变化见表6。两组治疗后比较，差 异有统计学意义(P＜0.05)。
表6 两组治疗前后Karnofsky生活质量评分变化结果
组别 n 治疗前 治疗后 治疗组 32 59.90±0.85 61.68±7.98 对照组 30 60.65±1.43 58.26±1.27*
注：与治疗组治疗后比较，*P＜0.05。
3讨论与结论
迄今为止，对于已无手术及TACE指征或不愿接受手术及TACE治疗的中晚期原发性肝 癌患者，尚无很好的治疗方法。应用一般的治疗方案虽然可部分减轻患者的痛苦，延长其 生存时间，但其临床疗效远不能令人满意。在肝癌治疗方面中医药也确实有其独特之处， 某些中药虽然对缩小肿块作用不是十分理想，但却能协助现代治疗方法取得更好的疗效。 这一点已为大量临床实践所证实，也是我国在肝癌防治研究领域的最大特色和优势。
临床结果表明，本发明药物配合西药对症支持治疗可增加中晚期肝癌的免疫功能， 增强机体抗病能力，对损伤的肝脏有保护作用；提高生活质量，延长生存期，均有一定 的临床意义。
实验三：本发明药物治疗肝硬化的实验研究
1材料
1.1动物
SD品系大鼠，雌体重为137～159g，雄172～196g，由南京中医药大学实验动物中心提 供，动物由专职饲养员饲养，饲料由实验中心提供，动物室室温25～28℃，相对湿度 75％。
1.2药物
本发明药物A、本发明药物A+B、本发明药物A+B+C，置冰箱保存，临用前用蒸馏水配 制成所需浓度。乙肝养阴活血颗粒，辽宁华润本溪三药有限公司生产，国药准字 Z10910044。
四氯化碳(CCL4)，上海试剂一厂，AR级；脱色菜子油，市售；羟脯氢酸，Sigma Chemical Company，USA；氯胺T，AR级，上海余山化工厂；过氯酸，AR级，上海桃浦 化工厂；乙酸，AR级，江苏金城试剂厂；甲醇，HPLC级，上海吴泾化工厂；对二氨基 苯甲醛，AR级，上海试剂三厂；柠檬酸，CR级，上海试剂一厂；无水乙酸钠，AR级， 上海化学试剂采购供应站经销；氢氧化钠，AR级，苏州医药站经销；盐酸，AR级，苏 州瓶窑化学试剂厂；氨基酸10B，上海生化试剂厂；巴比妥钠，AR级，上海试剂二厂； 巴比妥，AR级，上海试剂二厂；肝功能测定试剂，进口分装。
13仪器
生化自动分析仪，Monarch1000，Instrumentation Lab Co.，USA分光光度计721型，上 海分析仪器三厂。电泳仪，BZ-900，北京分析仪器厂。显微镜，Olympus Japan。
2方法
将大鼠分成6组，即正常对照组、肝硬化对照组、本发明药物A组、本发明药物A+B组、 本发明药物A+B+C组、乙肝养阴活血颗粒组(阳性药物对照组)。除正常对照组外，其余 各组每周2次皮下注射40％CCL4，油剂5ml/kg持续14周(100d)。受试物从CCL4注射后 的第40d起开始灌胃给药(1g)，每日1次，持续60d，肝硬化对照组用等量生理盐水， 乙肝养阴活血颗粒1g/kg，给药方法和时间同本发明药物，实验14周后处死大鼠。取肝脏 左叶固定于10％甲醛作苏木素-伊红染色(HE)及胶原纤维染色；其余肝脏留作羟脯氨酸 测定，以求胶原蛋白含量。同时取大鼠血清进行ALT、AST、血清总蛋白(TP)、血清白蛋 白(A)、血清球蛋白(G)及蛋白电泳分析。
2.1ALT、AST、TP、A/G的测定：用Monarch1000型生化自动分析仪分析。
2.2蛋白电泳的测定：取5μl血清点于醋酸纤维薄膜上，置电泳槽阴极侧支持板上静置 10min，10v/cm、0.5MA/cm通电1h，取薄膜于染色缸内10min，漂洗净后吸干，按区域界 限剪下蛋白质各色带，分置各试管内，加0.4mol/L NaOH 3mL，室温放置1h，等染料完 全脱下，用721型分光光度计OD580nm，以0.4mol/L调零，读出光密度，计算出各蛋白 质含量的％。
2.3羟脯氨酸的测定：将肝组织用95％乙醇脱脂12h，再用丙酮脱脂48h，用滤纸吸干， 将肝磨成极细粉，置60℃烘箱48h烘干。称取肝粉放入磨口试管内，加3mL 6mol/LHCl， 加盖，于100℃水浴水解24h，取出后加6mol/L NaOH调pH至6.0，稀释至50ml，过滤。 吸取稀释液1ml放入试管，加柠檬酸缓冲液1mL，加0.05mol/L氯氨T1ml摇匀，室温放 置10min，加3.15mol/L过氨酸1mL，5min后加10％二氨基苯甲醛1mL，100℃水浴 2min，显玫瑰红色，冷却后在580nm波长处比色。
制作标准曲线：吸取标准羟脯氨酸0.5、1、2、4、6、8μg同上法作出标准曲线。计算：按光 密度查标准曲线所得μg数×9.325＝1g干肝粉所含胶原蛋白的mg数(mg/g干肝)，其中 9.325来自7.46(羟脯氨酸换算为胶原蛋白量)×50(稀释倍数)÷40(称取肝粉的mg 数)。
2.4肝脏的病理切片观察：按肝脏的不同病理变化程度，分—，+，++，+++四级，再按 累计积分÷动物数＝平均分值。—：无明显病理改变；+：轻中度脂肪肝；++：中、重度脂肪 肝；+++：完全纤维化。
3结果
3.1本发明药物对肝硬化大鼠血清ALT和AST升高的抑制作用
本发明药物与乙肝养阴活血颗粒均能明显抑制CCL4引起的ALT和AST升高，本发明 药物A组抑制率分别为37.85％和30.51％(P<0.05)，本发明药物A+B+C组分别为 48.31％和44.37％(P<0.01)，乙肝养阴活血颗粒组分别为40.96％和35.64％(P<0.05)， 结果见表7。
表7 本发明药物对CCL4引起的大鼠血清ALT和AST升高的抑制作用
组别 n 剂量(g/kg) ALT(IU/L) AST(IU/L) 空白 18 — 42.57±3.1 50.73±4.1 模型对照 10 等量 393.33±52.9# 297.42±35.7# 乙肝养阴活血颗粒组 8 10.00 232.24±79.3* 191.42±56.8* 本发明药物A 14 5.00 346.10±41.6* 203.07±28.9* 本发明药物A+B 12 5.00 244.44±55.9* 206.67±46.1* 本发明药物A+B+C 10 5.00 203.32±44.9** 165.46±29.3**
Dunnnett′s Method统计处理，与空白对照组比较#P<0.001；与模型对照组比较 *P<0.05，**P<0.01
3.2本发明药物对肝硬化大鼠A/G比例的作用
本发明药物和乙肝养阴活血颗粒均能明显升高CCL4所致大鼠肝硬化的A/G比例下降 (P<0.05)，结果见表8。
表8 本发明药物对大鼠肝硬化A/G比例下降的影响
Dunnnett′s Method统计处理，与模型对照组比较*P<0.05
3.3本发明药物对肝硬化大鼠γ-球蛋白的影响
本发明药物组和乙肝养阴活血颗粒组均能明显降低CCL4所致大鼠肝硬化的γ-球蛋白 升高，P值分别<0.05，见表9。
3.4本发明药物对肝硬化大鼠肝胶原蛋白的影响
本发明药物组均能降低肝硬化大鼠肝脏胶原蛋白含量(P值均<0.05)，而乙肝养阴活 血颗粒组则无明显作用(P>0.05)，显示本发明药物的作用优于乙肝养阴活血颗粒，结果 见表9。
表9 本发明药物对血清γ-球蛋白和肝脏胶原蛋白含量的影响
与模型对照组比较*P<0.05
3.5本发明药物对肝硬化大鼠组织学变化的影响
从表4可见，本发明药物组及乙肝养阴活血颗粒组与对照组比较明显减轻了肝纤维化的 程度，空白对照组重度纤维化的动物数占60％，而本发明药物组占20％(P<0.05)，肝纤 维化面积本发明药物组与对照组和生理盐水组比较均为明显缩小，P值分别P<0.05，见表 10。
表10 本发明药物对肝硬变程度的影响
Dunnnett′s Method统计处理，与空白对照组比较#P<0.001；与生理盐水组比较*P<0.05
4讨论与结论
本实验的结果显示，CCL4所致大鼠肝硬化的生理生化和组织形态学变化基本接近于 临床病人的表现，出现了ALT和AST升高，A/G比例下降，γ-球蛋白升高，肝脏胶原蛋 白合成增加，组织学观察发现肝脂肪变性，成纤维细胞增生，肝假小叶和结节形成。在肝 硬变的第二期纤维增生期开始应用本发明药物治疗，结果证明本发明药物明显抑制血清 ALT和AST活动，根据实验观察，血清ALT和AST活力增高的程度，大体反映了肝细胞 坏死的程度，肝脏的气球样变和弥漫性脂变均反映出血清ALT和AST明显升高。有证据 表明血清的ALT和AST升高时，肝脏组织ALT和AST活力下降，从而肝细胞代谢发生 一系列障碍。由此可见，本发明药物组肝脏的组织学变化趋于减轻及血清ALT和AST活 力的明显下降，表明肝细胞结构的修复与代谢障碍明显减轻。在肝硬化的早期和中期，肝 脏合成血清白蛋白的能力就开始减弱，而合成血清球蛋白能力的减弱相对较轻，这样就 造成了A/G比例的下降，本发明药物组可使血清A/G比例保持于一定水平，这一作用是 由于本发明药物改善了肝脏的合成功能还是本发明药物的蛋白成份直接被吸收所致尚需 进一步研究。蛋白电泳分析，本发明药物组明显降低了血清γ-球蛋白，而使γ1和γ2-球蛋 白相对趋于升高，但对白蛋白和β-球蛋白无影响，肝硬变主要是γ-球蛋白的升高，γ1和 γ2-球蛋白在肝硬变中的作用尚不清楚，肝硬化的生化机理虽然很复杂，但基本上是肝炎 过程中由成纤维细胞及其他间叶细胞内形成的可溶性胶原蛋白扩散到细胞外，在粘多糖 与单胺氧化酶的作用下，进行交叉结合而成熟，转化为不溶性胶原蛋白，正常肝细胞酶 体在单胺氧化酶的作用下，可使胶原蛋白或结缔组织的基质部分分解为粘多糖，而损伤 了的肝细胞溶酶体减少或消失，因此不溶性胶原蛋白含量增加，肝细胞周围易产生胶原 纤维。本发明药物组明显降低肝胶原蛋白含量，从而使肝纤维化程度减轻，这从病理组织 切片也能现察到，本发明药物可明显阻止肝硬化的形成。
实验四：本发明药物联合乙肝养阴活血颗粒辨证治疗肝硬化的临床研究
根据中医辨证论治将肝硬化患者分为了痰结毒瘀、湿热壅滞、气滞血瘀、肝肾阴亏型4类， 应用本发明药物，联合乙肝养阴活血颗粒，治疗无腹水型肝硬化30例，收到了较好效果， 报告如下。
1资料与方法
1.1临床资料
选择2010年4月至2013年4月本院住院及门诊收治的肝硬化患者57例，其中脂肪 肝后肝硬化15例、酒精性肝硬化18例、肝炎后肝硬化24例。肝硬化程度按Child-Pugh分级 评定(叶任高.内科学[M].第5版.北京:人民卫生出版社,2002.460-468)。将患者随机分为 治疗组30例，其中男性20例，女性10例；对照组27例，其中男性15例，女性12例。两 组以青壮年居多，其中30～50岁37例，＞50岁13例，＜30岁7例。患者多有较长的肝 病史、饮酒史、嗜食肥甘厚味史。肝硬化病史以1年者居多，30例，2～6年者20例，6年以 上者7例。Child-Pugh分级：A级7例，B级40例，C级10例。两组临床资料差异无统计 学意义，具有可比性。全部病例均从病史、症状、体征、肝脏和脾脏超声、实验室检查等方面 佐证。诊断标准依据1993年卫生部颁发的《中医药临床研究标准》。
1.2治疗方法
对照组：单纯服用乙肝养阴活血颗粒治疗。
治疗组：在对照组辨证论治基础上，口服本发明药物，贯彻治疗始终；痰结毒瘀型 用本发明药物A；湿热壅滞型用本发明药物A+B；肝肾阴亏、气滞血瘀型用本发明药物 A+B+C；每次3片，每日3次，3个月为1个疗程，一般需服用2～3个疗程。
注意事项：治疗期间，两组饮食均以清淡而富于营养易消化的食物为主。忌酒、肥肉 及鸡、羊肉等辛辣食品。治疗期间慎用或不用西药。需悦情志、树信心、忌房事，注意保精养 神固气，注意培育元气。
1.3观察指标在治疗前及治疗期间每3个月观察患者的临床症状，体征，肝功能指标变 化并对肝脏和脾脏超声结果进行评价。
1.4疗效标准依据1993年卫生部《中医药临床研究标准》进行判定。临床治愈：症状消 失、肝功能正常、超声及实验室检查正常，停药后无复发。显效：症状消失、肝功能明显改 善、超声示肝脏形态改善，肝脏肿大恢复或明显缩小。好转：主要症状明显好转，肿大的 肝脏和脾脏状态稳定，肝功指标恢复50％以上。无效：未达好转指标及恶化者。
总有效率＝(临床治愈例数+显效例数+好转例数)/总例数×100％。
1.5统计学方法计量结果用均数±标准差(x±s)表示，两组间率的比较用四格表χ2检 验。
2结果
2.1疗效：治疗组总有效率优于对照组，两组显效率差异有统计学意义(P＜0.05)， 见表11。
2.2治疗后肝功能的改善情况：与对照组比较，治疗组ALT、AST肝功能复常率均高于 对照组，P＜0.05，见表12。
2.3肝脏和脾脏超声检查复常情况：治疗后，超声影像学显示治疗组肝脏和脾脏的复常 率均高于对照组，P＜0.05，见表13。
表11 两组患者治疗后疗效比较[例(％)]
注：与对照组比较*P＜0.05
表12 两组患者肝功能复常率的比较
注：与对照组比较*P＜0.05
表13 两组患者超声检查肝脏和脾脏复常率的比较
注：与对照组比较*P＜0.05
3讨论与结论
研究证实，本发明药物在治疗肝硬化、改善肝硬化临床症状等方面取得了肯定的成效， 其调节机体免疫，重建免疫功能，诱生干扰素，防止肝组织新生物产生的巨大功能，也 显示了其防癌抗癌作用。本发明药物治疗肝硬化、预防肝癌有着良好的适用前景。需要说明 的是，以上提供的本发明实验中虽然是以佳的原料重量配比配制成而成的药物，但是发 明人也做了其它在本发明技术方案组方中的原料配比的药物的相关实验，实验结果也证 明它有治疗肝硬化、改善肝硬化的作用。
本发明中药组合物配方合理，具有清热解毒、养血理气、攻坚破积、健脾 养肾、扶正祛邪、强筋壮骨，提高肝功能、增强免疫力之功效，消除病邪有害 反应，使癌肿瘤体积缩小或消失或退行性改变<变性>。各原料各具功效而又 相互辅佐，药物可以直接进入血液循环系统，杀死和清除HBγ，有效地保护 了肝细胞，阻断恶变过程，能促使肝脾回缩变软，促进受损肝细胞修复与再 生，调节蛋白倒置，恢复肝功能，降低门脉高压，快速驱除黄疸，安全可靠， 服用方便，高效而无药副作用，从而最终战胜肝病。本发明中药组合物可以 用来治疗肝病，包括肝癌、肝硬化、肝囊肿、肝血管瘤、脂肪肝、慢迁肝、乙肝、 黄疸肝炎等肝病，特别适用于治疗肝癌或者肝硬化。
具体实施方式
以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一 步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1，一种治疗肝病的中药组合物，制成中药组合物的主要有效成 份原料的重量配比组成包括：丹参50、丹皮65、鸡骨草70、赤芍55、金钱 草65、蒲公英55、山豆根70、板蓝根50、麦芽50、茵陈65、龙胆草50、 人参70、佛手柑55、熟地55、茯苓70、猪苓55、当归70、三七60、柴胡 65、枳壳70、香附70。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。制剂时可以按需要加入药用辅料。也可 以提取其有效成份，加入药用辅料，制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例2，一种治疗肝病的中药组合物，制成中药组合物的主要有效成 份原料的重量配比组成包括：丹参55、丹皮55、鸡骨草50、赤芍65、金钱 草70、蒲公英50、山豆根50、板蓝根65、麦芽70、茵陈53、龙胆草55、 人参65、佛手柑70、熟地65、茯苓50、猪苓50、当归65、三七55、柴胡 70、枳壳60、香附50。
实施例3，一种治疗肝病的中药组合物，制成中药组合物的主要有效成 份原料的重量配比组成包括：丹参60、丹皮70、鸡骨草55、赤芍70、金钱 草50、蒲公英65、山豆根55、板蓝根65、麦芽65、茵陈50、龙胆草70、 人参55、佛手柑50、熟地50、茯苓65、猪苓65、当归50、三七70、柴胡 50、枳壳55、香附65。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例4，一种治疗肝病的中药组合物，制成中药组合物的主要有效成 份原料的重量配比组成包括：丹参70、丹皮50、鸡骨草65、赤芍50、金钱 草67、蒲公英70、山豆根58、板蓝根70、麦芽55、茵陈70、龙胆草68、 人参50、佛手柑65、熟地70、茯苓56、猪苓70、当归59、三七50、柴胡 63、枳壳50、香附55。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例5，一种治疗肝病的中药组合物，制成中药组合物的主要有效成 份原料的重量配比组成包括：丹参、丹皮、鸡骨草、赤芍、金钱草、蒲公英、山豆 根、板蓝根、麦芽、茵陈、龙胆草、人参、佛手柑、熟地、茯苓、猪苓、当归、三七、柴 胡、枳壳、香附，各原料的重量配比均为60。制备时，将上述重量配比的中药 均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。 制剂时可以按需要加入药用辅料。也可以提取其有效成份，加入药用辅料， 制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例6，实施例1-5任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制成中 药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：金银花70、贯叶连翅90、 虎杖84、栀子90、青黛86、元胡索90、姜黄70、白术80、玄参90、黄芪85、 三棱74、青矾90、莪术85、白矾85、佛甲草90、芦荟78、灵芝79、人工牛黄 70、草决明90。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。制剂时可以按需要加入药用辅料。也可 以提取其有效成份，加入药用辅料，制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例7，实施例1-5任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制成中 药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：金银花75、贯叶连翅84、 虎杖73、栀子70、青黛74、元胡索82、姜黄85、白术71、玄参70、黄芪79、 三棱90、青矾70、莪术77、白矾79、佛甲草80、芦荟90、灵芝89、人工牛黄 71、草决明75。
制备时，按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉 状后与人工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒， 与其余原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混 合物与第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例8，实施例1-5任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制成中 药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：金银花80、贯叶连翅70、 虎杖90、栀子75、青黛70、元胡索76、姜黄90、白术90、玄参77、黄芪70、 三棱85、青矾75、莪术70、白矾90、佛甲草75、芦荟70、灵芝90、人工牛黄 80、草决明70。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例9，实施例1-5任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制成中 药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：金银花90、贯叶连翅72、 虎杖70、栀子85、青黛90、元胡索70、姜黄75、白术70、玄参85、黄芪90、 三棱77、青矾86、莪术90、白矾70、佛甲草70、芦荟80、灵芝70、人工牛黄 70、草决明85。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例10，实施例1-5任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：原料 金银花、贯叶连翅、虎杖、栀子、青黛、元胡索、姜黄、白术、玄参、黄芪、三棱、青 矾、莪术、白矾、佛甲草、芦荟、灵芝、人工牛黄、草决明的重量配比各为80。
制备时，按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉 状后与人工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒， 与其余原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混 合物与第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例11，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制 成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参90、党参 101、山慈姑100、半枝莲94、白花蛇舌草108、仙鹤草90、芦笋95、溪黄草 110。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。制剂时可以按需要加入药用辅料。也可 以提取其有效成份，加入药用辅料，制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例12，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制 成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参95、党参90、 山慈姑95、半枝莲90、白花蛇舌草95、仙鹤草110、芦笋105、溪黄草90。
制备时，按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉 状后与人工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒， 与其余原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混 合物与第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例13，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制 成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参105、党参 110、山慈姑90、半枝莲110、白花蛇舌草90、仙鹤草95、芦笋110、溪黄草 107。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例14，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制 成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参110、党参 95、山慈姑110、半枝莲92、白花蛇舌草110、仙鹤草107、芦笋90、溪黄草 95。
制备时，按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉 状后与人工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒， 与其余原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混 合物与第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例15，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：制 成中药组合物的有效成份原料的重量配比组成还包括：西洋参92、党参 105、山慈姑95、半枝莲107、白花蛇舌草91、仙鹤草95、芦笋107、溪黄草 105。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。制剂时可以按需要加入药用辅料。也可 以提取其有效成份，加入药用辅料，制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例16，实施例6－10任何一项所述的治疗肝病的中药组合物：原 料西洋参、党参、山慈姑、半枝莲、白花蛇舌草、仙鹤草、芦笋、溪黄草的重量配 比各为100。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例17，一种治疗肝病的中药组合物：制成中药组合物的主要有效 成份原料的重量配比组成包括：
(1)丹参、丹皮、鸡骨草、赤芍、金钱草、蒲公英、山豆根、板蓝根、麦芽、茵 陈、龙胆草、人参、佛手柑、熟地、茯苓、猪苓、当归、三七、柴胡、枳壳、香附各为 60；
(2)金银花、贯叶连翅、虎杖、栀子、青黛、元胡索、姜黄、白术、玄参、黄芪、 三棱、青矾、莪术、白矾、佛甲草、芦荟、灵芝、人工牛黄、草决明的重量配比各为 80；
(3)西洋参、党参、山慈姑、半枝莲、白花蛇舌草、仙鹤草、芦笋、溪黄草的 重量配比各为100。
制备时，将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均 匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。制剂时可以按需要加入药用辅料。也可 以提取其有效成份，加入药用辅料，制成临床上可接受的其它剂型的药物。
实施例18，一种治疗肝病的中药组合物：制成中药组合物的主要有效 成份原料的重量配比组成包括：
(1)丹参50、丹皮70、鸡骨草57、赤芍65、金钱草64、蒲公英68、山 豆根55、板蓝根59、麦芽57、茵陈54、龙胆草51、人参67、佛手柑61、熟地 68、茯苓58、猪苓52、当归60、三七54、柴胡64、枳壳70、香附54；
(2)金银花70、贯叶连翅81、虎杖84、栀子76、青黛90、元胡索75、 姜黄77、白术84、玄参83、黄芪90、三棱72、青矾89、莪术76、白矾81、佛 甲草89、芦荟85、灵芝76、人工牛黄77、草决明85；
(3)西洋参92、党参102、山慈姑108、半枝莲98、白花蛇舌草92、仙 鹤草90、芦笋102、溪黄草107。
将上述重量配比的中药均匀混合，干燥，粉碎成药面，搅拌均匀，制成 散剂、片剂或胶囊剂，即得。
实施例19，一种治疗肝病的中药组合物：制成中药组合物的主要有效 成份原料的重量配比组成包括：
(1)丹参67、丹皮52、鸡骨草54、赤芍70、金钱草64、蒲公英68、山 豆根53、板蓝根52、麦芽62、茵陈66、龙胆草70、人参54、佛手柑58、熟地 61、茯苓57、猪苓55、当归65、三七60、柴胡52、枳壳54、香附59；
(2)金银花73、贯叶连翅78、虎杖82、栀子88、青黛90、元胡索75、 姜黄71、白术83、玄参88、黄芪90、三棱74、青矾82、莪术80、白矾76、佛 甲草77、芦荟85、灵芝75、人工牛黄86、草决明80；
(3)西洋参98、党参105、山慈姑97、半枝莲103、白花蛇舌草108、 仙鹤草90、芦笋110、溪黄草107。
按重量配比先将原料芦荟、白矾、青矾分开干燥，单独研磨成粉状后与人 工牛黄、青黛混合均匀，制成第一粉状混合物；再将熟地剪成颗粒，与其余 原料混合均匀，干燥，粉碎，制成第二粉状混合物；再将第一粉状混合物与 第二粉状混合物混合均匀，制成散剂、片剂或胶囊剂，即得。用于治疗肝癌或 者肝硬化。
实施例20，应用实施例18所述的药物进行临床试验病例：
病例1：患者某男，年龄39岁，患急性重症肝炎，2009年2月来我专 科就诊时，人已垂危，总胆红素66.9，直接胆红素25.8，谷草转氨酶 980，谷丙转氨酶1750，HBγ-DNA定量1.17×106，服药二个疗程痊愈：总 胆红素16，直接胆红素5，谷草转氨酶32，谷丙转氨酶23，HBγ-DNA正 常值；
病例2：患者某男，年龄35岁，患多年肝硬化并淋巴结节，用了无数 中西药，一直无效。2012年2月来我专科就医，B超显示：肝硬化伴“结节 淋巴”，服药一月，淋巴结节已愈；
病例3：患者某女，年龄44岁，患多年肝硬化伴肝门部数个肿大淋巴 结，用药二月，肿大淋巴结无影踪，肝硬化缓解为慢肝；
病例4：患者某男，年龄66岁，患肝硬化，肝囊肿，多发性肝占位<肝 癌>，2011年3月就医我专科，服药一月，B超显示：囊肿愈；服药二月， 肝占位变性；
病例5：患者某女，年龄40岁，患脂肪肝，胆囊炎，2009年10月就 诊我专科，服药5月，治愈；
病例6：患者某男，年龄49岁，患肝硬化，胆囊炎伴后腰部肿块， 2009年4月来我科治疗，服药二月，肝硬化治愈，后腰部肿块愈；
病例7，患者某男，年龄20岁，患早期肝硬化伴肝门部淋巴结肿大， 胆囊炎，2011年1月来我科就医，服药三月，肿节愈，胆囊炎愈。
病例8,患者某男，年龄42岁，患原发性肝癌晚期，癌肿 6.0×5.3cm，在上海、南京、淮安、响水等地多家医院行导管介入术，放、化 疗六个月，花费二十多万元，无有任何起色，经病友介绍，于2012年11 月来我科就医，服药一疗程后，肿瘤缩小到1.8-0.8cm，服药二疗程后，拳 头大的癌肿逃遁于无形；肝癌治愈！随访至今仍健在。
病例9：患者某男，年龄65岁，患原发性肝癌晚期，伴腹水，肝硬化， 脾肿大，肿瘤已达9.05×9.11cm，在上海、南京等地多家大医院治疗无果， 于2013年3月2日来我专科诊疗，服药一疗程后，肿瘤缩小至 3.9×3.3cm，该病患在第二疗程治疗期间，因心脏病发作而亡。
本发明服用后见效标志：身体觉得有力，饭量增加，面色红润，黄疸减 退，小便变清，精神饱满，肝区疼痛减轻等等，这是身体方面的最直接感受； 肝功能指标与病毒定量及B超变化，两对半部分转阴。服药禁忌：狗肉、羊肉、 虾、蟹及一切辛辣食物、海产品、烟、酒等，晚期肝腹水患者，不能吃皮蛋、蛋 黄、生姜、含盐的食品和所有坚硬的食物；四环素、巴比妥及活血、化痰的西药 不能用。