技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种水飞蓟宾注射剂及其制备方法。
背景技术
水飞蓟宾(Silybin)是从菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取所得的一种 黄酮化合物，黄酮类化合物水溶性与脂溶性均较差。其结构式如下：
水飞蓟宾具有明显的保肝作用，对四氯化碳、硫代乙酰胺、毒蕈碱、鬼笔碱、 猪屎豆碱等肝脏毒物引起的各种类型肝损伤具有不同程度的保护和治疗作用，并 对四氯化碳所引起的丙氨酸氨基转移酶的升高有一定的阻止作用。水飞蓟宾作为 理想的肝损伤修复药物，临床上广泛用于治疗急慢性肝炎、肝纤维化和早期肝硬 化等肝病。由于药效高，毒性低(于乐成，顾长海.水飞蓟素药理学效应研究进 展[J].中国医院药学杂志，2001,21(8)：493-494.)，水飞蓟宾从发现至今一直备 受关注。
目前，国内上市的制剂有水飞蓟宾葡甲胺片(批准文号：国药准字 H32026233；厂家：江苏中兴药业有限公司；批准文号：国药准字H33022182； 厂家：浙江东日药业有限公司)以及水飞蓟宾胶囊(商品名：水林佳；批准文号： 国药准字H20040299；厂家：天津天士力制药股份有限公司)，该制剂均属口服 制剂。但由于水飞蓟宾水溶性与脂溶性均较差(王鸿辰.水飞蓟素溶解性能的研 究[J].药学通报，1983,19(12)：23-25.)，导致其口服生物利用度低，有较大的 首过效应。据报道，水飞蓟宾经口服给药后的绝对生物利用度仅为0.95％(WuJW, etal.Analysisofsilibinininratplasmaandbileforhepatobiliaryexcretionandoral bioavailabilityapplication[J].JPharmBiomedAnal,2007,45(4):635–641.)，严重削 弱了水飞蓟宾口服制剂药效的发挥。为此，人们拟通过提高水飞蓟宾的生物利用 度，使其药效得到进一步发挥。
广大医药工作者采用成盐、增溶、固体分散体等技术，拟提高水飞蓟宾的溶 出度，从而提高其口服吸收率，但均未取得良好的效果。另外，天津天士力制药 股份有限公司开发了一种水飞蓟宾的磷脂复合物(通用名：水飞蓟宾胶囊；商品 名：水林佳；批准文号：国药准字H20040299)，已上市销售。研究表明，其溶 出度及生物利用度均较普通水飞蓟宾口服制剂明显提高，生物利用度提高了3～ 5倍(FilburnCR,etal.Bioavailabilityofsilybin-phosphatidylcholinecomplexin dogs[J].JVetPharmccolTher,2007,30(2):132-138.silybin-phosphatidylcholine complex[M].AlternMedRev,ID:ThorneResearch,Inc.2009,14(4):385-390.)，但 其生物利用度仍然不够理想。为此，人们考虑将水飞蓟宾开发成注射剂，从根本 上解决口服生物利用度低的问题。
宋贇梅等(宋贇梅等.水飞蓟宾纳米乳的制备及家兔体内药动学[J].中国药科 大学学报，2005，36(5)：427.)，研制了水飞蓟宾纳米乳，由于水飞蓟宾溶解 度较差，处方中添加了大量的聚氧乙烯蓖麻油(CremophorRH)，该材料具有严 重的过敏反应与溶血性，安全性较差；另外，由于水飞蓟宾在碱性条件下溶于水， 故有科研工作者研制了水飞蓟宾葡甲氨盐注射剂，但水飞蓟宾在碱性环境下极不 稳定，致使该注射液长期储存稳定性较差，极易发生降解；故又有人将水飞蓟宾 的葡甲胺溶液制备成冻干粉针，虽然可以解决其放置稳定性问题，但是水飞蓟宾 葡甲氨盐水溶液的pH值在11左右，注射时局部刺激性较大，不良反应较多。 根据近年来水飞蓟宾的临床使用证实，水飞蓟宾疗效确切且本身毒性极低，而且 水飞蓟宾临床应用极其广泛，若能开发一种安全、可注射的水飞蓟宾制剂，提高 其生物利用度，充分发挥其药理作用，从而大大提高药效，必将产生极大的经济 和社会效益。
环糊精包合物，是将药物分子包裹在环糊精分子的空穴结构中，以此来解决 水难溶性药物的溶解问题。但我们知道，传统的环糊精类材料具有明显的溶血性 或肾脏毒性，如β-环糊精、羟丙基-β-环糊精等。中国专利申请CN200410041364.0， 发明名称为“一种水飞蓟提取物环糊精包合物的制备方法及其药物制剂”，公开号 为CN159351A，其核心技术特征是将水飞蓟提取物与环糊精用乙醇或异丙醇一 起溶解，再减压蒸发去除乙醇或异丙醇，然后添加一些赋形剂制备成口服制剂或 直接分装成注射用无菌粉末。其权利要求以及说明书中记载的环糊精种类为：β- 环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、葡萄糖基-β-环糊 精、磺酸基-β-环糊精，这些环糊精依然是毒副作用较大的传统环糊精，无法真 正意义上得到可供静脉注射的制剂，故整个实施例以口服制剂为主，且未进一步 对上述环糊精进行匹配性研究。试验证明，该专利所明确的环糊精种类均不能制 备出稳定的水飞蓟宾注射液(见本发明实施例1)；中国专利申请CN02125823.6， 发明名称为“含环糊精或其衍生物的水飞蓟素注射液”，公开号为CN1391894A， 根据其说明书记载的实施方案，其核心技术特征是将水飞蓟素投入在含环糊精的 水溶液中，然后用氢氧化钠调节溶液pH为碱性，使水飞蓟宾溶解，再用盐酸调 节pH值为6.0-6.5，即得水飞蓟素的环糊精包合物，其中环糊精种类与上述专利 (中国专利申请CN200410041364.0)申请完全相同。通过试验验证发现，水飞 蓟宾溶解在氢氧化钠的碱性水溶液过程中，溶液颜色逐渐加深，最后变为黄绿色 溶液，通过全波长扫描，除原有的287.5nm处有较大吸收外，在326.0nm处又出 现了更大的吸收峰，说明氢氧化钠对水飞蓟素的结构有明显的破坏作用，故该专 利申请所制备的水飞蓟素环糊精包合物质量存在一定的问题，可能会影响安全性 与有效性。同时，按该实施方案制备的冻干粉针剂，冻干后无法完全复溶(见本 发明实施例33)。另外，其权利要求以及说明书中记载的环糊精种类依然是毒副 作用大的传统环糊精，存在溶血性或肾毒性的安全隐患。
磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)是美国Cydex公司开发的一种离子化β- 环糊精(β-CD)，与上述传统的环糊精类材料相比，具有水溶性好、无肾毒性、 无溶血性的优点。为此，本发明结合水飞蓟宾的理化特性，率先用磺丁基醚-β- 环糊精(SBE-β-CD)来解决水飞蓟宾的溶解问题。通过大量试验研究，成功开 发了一种水飞蓟宾的磺丁基醚-β-环糊精包合物，是一种安全的、稳定的水飞蓟 宾注射剂，从根本上解决了水飞蓟宾口服生物利用度低的不足，为临床研究与应 用提供了新的制剂。
发明内容
本发明的目的是开发一种安全的、稳定的水飞蓟宾注射剂。针对水飞蓟宾固 有的理化特性以及现有制剂存在的不足，优选出了与之匹配的处方，从而成功开 发了水飞蓟宾的注射剂。
本发明提供了一种水飞蓟宾注射剂，其特征是含有水飞蓟宾、磺丁基醚-β- 环糊精、注射用有机溶媒。其中注射用有机溶媒是用来溶解水飞蓟宾的，将水飞 蓟宾制备成分子型溶液，然后将该溶液与磺丁基醚-β-环糊精的水溶液混合，方 可将水飞蓟宾分子包裹在磺丁基醚-β-环糊精分子中，从而形成水飞蓟宾的磺丁 基醚-β-环糊精包合物。如果处方组分中不含注射用有机溶媒，按照常规的环糊 精包合物的制备方法(将药物粉末直接投在环糊精的水溶液中搅拌至澄清)将无 法得到水飞蓟宾包合物(见本发明实施例2)。故本发明将注射用有机溶媒与磺 丁基醚-β-环糊精合用，是制备水飞蓟宾包合物的必需条件之一，也是本发明的 核心特征。
本发明提供了的水飞蓟宾注射剂，进一步还可以含有助溶剂。其中助溶剂， 一方面是可进一步提高水飞蓟宾的包合率，另一方面是有助于冻干后样品快速良 好的复溶。助溶剂使本发明所制备的水飞蓟宾注射剂质量更加可靠。故助溶剂也 是本发明的一项重要技术特征(见本发明实施例3)。
本发明提供了一种水飞蓟宾注射剂，其特征是由下列组分配制而成(重量体 积比)：
本发明提供了一种水飞蓟宾注射剂，其特征是由下列组分配制而成(重量体 积比)：
本发明提供了一种水飞蓟宾注射剂，其特征是由下列组分配制而成(重量体 积比)：
本发明的水飞蓟宾注射剂，其各种组分的百分含量均为重量体积比，即单位 体积的液体所含的溶质的含量，例如，包括但不限于克/毫升，千克/升等，可进 行同比的放大或缩小，比值不变。
所述的水飞蓟宾注射剂，其中，所述的注射用有机溶媒选自聚乙二醇200、 聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、无水乙醇、丙二醇中的一种或多 种；优选聚乙二醇400。
所述的助溶剂选自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000 (DSPE-MPEG5000)、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油(EL35)、泊洛沙姆188中的一 种或多种；优选二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-MPEG2000)。
所述的冻干支撑剂选自甘露醇、乳糖、右旋糖酐20、右旋糖酐40、右旋糖 酐70、蔗糖、木糖醇、山梨醇、海藻糖中的一种或多种；优选甘露醇、乳糖、 右旋糖酐40。
所述的pH调节剂选自枸橼酸、盐酸、冰醋酸、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二 氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、枸橼酸二钠、枸橼酸三钠、醋酸钠中的一种或 多种；调节pH值至2-8，优选调节pH值至2-7；再优选调节pH值至2.5-6.0。
本发明的一种水飞蓟宾注射剂，其特征是一种水飞蓟宾注射溶液。
本发明的一种水飞蓟宾注射剂，其特征是一种注射用水飞蓟宾冻干粉针。
本发明的一种水飞蓟宾注射剂，溶液型是无色澄清液体，冻干粉针剂是白色 固体。
本发明的水飞蓟宾注射溶液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：称取配 方量的水飞蓟宾、注射用有机溶媒，必要时含有助溶剂，混合，在40－70℃下 加热搅拌，使溶解，得有机相；称取配方量的磺丁基醚-β-环糊精，置于适量注 射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定 容至全量，得药物溶液；用pH调节剂调节药物溶液的pH值至2-8；加入重量体 积百分含量为0.05％－0.5％的针用活性炭，吸附15－60分钟，然后将料液通过 1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、封口，即得水飞蓟宾注射溶液。
本发明的水飞蓟宾注射溶液的制备方法，优选包括如下步骤：称取配方量的 水飞蓟宾、注射用有机溶媒，必要时含有助溶剂，混合，在50－60℃下加热搅 拌，使溶解，得有机相；称取配方量的磺丁基醚-β-环糊精，置于适量注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至全 量，得药物溶液；用pH调节剂调节药物溶液的pH值至2.5-6.0；加入重量体积 百分含量为0.1％－0.3％的针用活性炭，吸附30－45分钟，然后将料液通过1μm 钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、封口，即得水飞蓟宾注射溶液。
本发明的注射用水飞蓟宾冻干粉针的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 称取配方量的水飞蓟宾、注射用有机溶媒，必要时含有助溶剂，混合，在40－ 70℃下加热搅拌，使溶解，得有机相；称取配方量的磺丁基醚-β-环糊精、冻干 支撑剂，置于适量注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀， 然后用注射用水定容至全量，得药物溶液；用pH调节剂调节药物溶液的pH值 至2-8；加入重量体积百分含量为0.05％－0.5％的针用活性炭，吸附15－60分 钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口， 即得水飞蓟宾冻干粉针。
本发明的注射用水飞蓟宾冻干粉针的制备方法，优选包括如下步骤：称取配 方量的水飞蓟宾、注射用有机溶媒，必要时含有助溶剂，混合，在50－60℃下 加热搅拌，使溶解，得有机相；称取配方量的磺丁基醚-β-环糊精、冻干支撑剂， 置于适量注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用 注射用水定容至全量，得药物溶液；用pH调节剂调节药物溶液的pH值至2.5-6.0； 加入重量体积百分含量为0.1％－0.3％的针用活性炭，吸附30－45分钟，然后 将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水 飞蓟宾冻干粉针。
本发明的一种水飞蓟宾注射剂，其特征是结合水飞蓟宾固有的理化性质，优 选出了与之匹配的处方组成与用量，从而成功开发了水飞蓟宾的注射剂，具有安 全的、稳定的、载药量高的特性，从根本上克服了水飞蓟宾现有口服制剂制剂生 物利用度低的不足，有望进一步最大化的发挥水飞蓟宾的药理作用，为水飞蓟宾 的临床应用与研究奠定了基础。
附图说明：
图1：原料对照溶液-紫外扫描曲线图
图2：原料对照溶液-紫外扫描吸光度列表图
图3：本发明供试品溶液-紫外扫描曲线图
图4：本发明供试品溶液-紫外扫描吸光度列表图
图5：对比专利供试品溶液-紫外扫描曲线图
图6：对比专利供试品溶液-紫外扫描吸光度列表图
具体实施方式
现结合实施例对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
实施例1：环糊精种类的对比研究
在中国专利申请CN200410041364.0中，所记载的环糊精种类为：β-环糊精、 羟丙基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、葡萄糖基-β-环糊精以及磺 酸基-β-环糊精。而本发明所选用的环糊精是磺丁基醚-β-环糊精，是本发明的特 定包合材料。在对比试验时，用同样的处方组成、处方用量以及制备工艺，分别 制备含不同环糊精种类的水飞蓟宾注射液。室温放置一周，随时间观察注射液的 包合稳定性，即以析出药物沉淀的时间为考察指标，对环糊精种类进行筛选。 (1)试验方案
称取水飞蓟宾20g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)1g、200g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；分别称取上述环糊精50g，置于1000ml注射用水中，搅拌溶解， 得不同种类环糊精的水溶液，作为水相(按该比例配制时，其中β-环糊精不能完 全溶于水，故对β-环糊精予以舍弃)；将有机相与水相搅拌混合，使成约2mg/ml 的包合液，用0.22μm滤芯除菌过滤；将滤液分装成5ml/瓶，得到6种不同环糊 精种类的水飞蓟宾注射液。
将该注射液至于室温下放置一周，分别随时间观察水飞蓟宾注射液的包合稳 定性，即考察不同环糊精种类对水飞蓟宾的包裹稳定性的影响。
(2)实验结果
表1不同环糊精种类对水飞蓟宾的包裹稳定性考察结果
环糊精种类 1天 2天 3天 4天 5天 7天 羟丙基-β-环糊精 澄明液体 澄明液体 略显浑浊 浑浊明显 浑浊明显 析出沉淀 羟乙基-β-环糊精 澄明液体 澄明液体 澄明液体 略显浑浊 浑浊明显 析出沉淀 甲基-β-环糊精 澄明液体 略显浑浊 浑浊明显 析出沉淀 析出沉淀 析出沉淀 葡萄糖基-β-环糊精 澄明液体 澄明液体 澄明液体 略显浑浊 浑浊明显 析出沉淀 磺酸基-β-环糊精 澄明液体 澄明液体 澄明液体 略显浑浊 浑浊明显 浑浊明显 磺丁基醚-β-环糊精 澄明液体 澄明液体 澄明液体 澄明液体 澄明液体 澄明液体
结果分析：
在同样的制备工艺以及同样的处方用量下，所制备的不同环糊精种类的水飞 蓟宾注射液，在室温下稳定性截然不同。中国专利申请CN200410041364.0中所 记载的环糊精种类均不能制备出稳定的水飞蓟宾包合物溶液，稳定时间只能维持 2-4天，但用磺丁基醚-β-环糊精制备的水飞蓟宾包合物溶液，至少在一周内未见 有明显变化，事实上该溶液在室温下是相当稳定的。经过大量试验验证，可见， 磺丁基醚-β-环糊精对水飞蓟宾而言，是相对最优的包合材料，故本发明选用磺 丁基醚-β-环糊精对水飞蓟宾进行匹配性包合，将是最佳的选择。
实施例2注射用有机溶媒对水飞蓟宾注射剂质量的影响
(1)不含注射用有机溶媒对水飞蓟宾注射剂质量的影响
分别称取磺丁基醚-β-环糊精100g、200g、300g、400g、500g，分别用注射 用水溶解至1000ml，得到含磺丁基醚-β-环糊精10％、20％、30％、40％、50％的 水溶液；然后分别称取1g水飞蓟宾，投入上述系列不同磺丁基醚-β-环糊精含量 的水溶液中，搅拌，随时间观察溶液状态。以外观、性状为指标，判断不含注射 用有机溶媒时水飞蓟宾在磺丁基醚-β-环糊精中的包合情况，结果见表2。
表2不含注射用有机溶媒对水飞蓟宾注射剂质量的影响
结果分析：
通过常规方法，直接将水飞蓟宾投入磺丁基醚-β-环糊精溶液中搅拌使溶解。 结果显示，当磺丁基醚-β-环糊精浓度在10％-50％的范围内时、载药量仅为1mg/ml 时，搅拌24小时，溶液依然浑浊，没有任何溶解的迹象。可见，水飞蓟宾的理 化性质较为特殊，无法通过直接加入法制备成环糊精包合物。
(2)含注射用有机溶媒对水飞蓟宾注射剂质量的影响
分别称取磺丁基醚-β-环糊精100g、200g、300g、400g、500g，分别用注射 用水溶解至1000ml，得到含磺丁基醚-β-环糊精10％、20％、30％、40％、50％的 水溶液；称取水飞蓟宾6g、120g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使 溶解，得有机相；分别取有机相21g，分别注入上述系列不同磺丁基醚-β-环糊精 含量的水溶液中，并搅拌，随时间观察溶液状态。以外观、性状为指标，判断含 注射用有机溶媒时水飞蓟宾在磺丁基醚-β-环糊精中的包合情况，结果见表3。
表3含注射用有机溶媒对水飞蓟宾注射剂质量的影响
结果分析：
将水飞蓟宾溶解在注射用有机溶媒中，然后注入磺丁基醚-β-环糊精溶液制 备包合物，所达到的料液状态，与不含注射用有机溶媒时的严重浑浊相比，澄清 度显著增大。可见，处方中的注射用有机溶媒可较好的将水飞蓟宾包裹在磺丁基 醚-β-环糊精分子中，显著的提高了包裹效果。虽然料液中有极少量药物未被包 裹，但通过添加适量的助溶剂予以解决(见实施例3)。故处方中的有注射用有 机溶媒是结合水飞蓟宾特定的理化性质所必须匹配的，是本发明的重要技术特征 之一，否则将无法进行包裹。
实施例3：助溶剂对水飞蓟宾注射剂制备的影响
处方中的助溶剂，一方面是用来解决制备包合物时包裹不完全的问题，即实 施例2中所提到的料液出现个别细小微粒悬浮的现象；另一方面是助溶剂的加入 可保证冻干后样品具有良好的复溶性。故助溶剂使本发明所制备的水飞蓟宾注射 剂质量更加可靠。对比试验时，在相同的处方组成与用量下，考察加助溶剂与不 加助溶剂对水飞蓟宾注射剂的质量影响，以助溶剂二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙 二醇2000(DSPE-MPEG2000)为例予以说明。
(1)不含助溶剂的水飞蓟宾注射剂的制备方法与结果
称取水飞蓟宾2g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g、甘露醇50g，加注射用水溶解至1000ml， 搅拌溶解，得水相；将有机相与水相搅拌混合，得包合液，用0.22μm滤芯除菌 过滤，进行中间体测定，即取样观察过滤前后的溶液状态与药物的标示百分含量； 将滤液分装成5ml/瓶、冻干、封口。冻干后加注射用水进行复溶，在灯检仪下观 察溶液状态，并将复溶液过0.22μm滤膜，测定续滤液中药物标示百分含量，结 果如表4。
表4不含助溶剂的水飞蓟宾注射剂的结果
项目 溶液状态 标示含量百分比 包合液滤前 基本澄清，有少许细微粒悬浮 99.76％ 包合液滤后 完全澄清 97.07％ 冻干复溶后 有明显微粒悬浮，显乳光 95.33％
结果分析：
不含助溶剂，在制备过程中有部分药物不能完全包裹，除菌过滤不顺畅，阻 力较大，对药物有截留，不利于批量生产，且冻干后不能完全复溶。
(2)含助溶剂的包合溶液的制备
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g、甘露醇50g，加注射用水溶解至 1000ml，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相搅拌混合，得包合液，用0.22μm 滤芯除菌过滤，进行中间体测定，即取样观察过滤前后的溶液状态与药物的标示 百分含量；将滤液分装成5ml/瓶、冻干、封口。冻干后加注射用水进行复溶，在 灯检仪下观察溶液状态，并将复溶液过0.22μm滤膜，测定续滤液中药物标示百 分含量，结果如表5。
表5含助溶剂的水飞蓟宾注射剂的结果
项目 溶液状态 标示含量百分比 包合液滤前 完全澄清 100.04％ 包合液滤后 完全澄清 99.92％ 冻干复溶后 完全澄清 99.78％
结果分析：
加助溶剂后，在制备过程中药物包裹完全，除菌过滤顺畅，过滤前后药物含 量未见明显变化，且冻干后能够完全复溶。故处方中添加助溶剂是本发明的重要 技术特征。
实施例4一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇60g，置于800ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性炭1g， 吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、 冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例5一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g，置于900ml注射用水中，搅拌溶解， 得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml，得药物 溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性炭1g，吸附30分钟， 然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、封口，即得水飞 蓟宾注射液。
实施例6一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾10g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)10g、100g聚乙二醇400，混合，在60℃下加热搅拌，使 溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精300g、木糖醇50g、山梨醇50g、甘露 醇100g，置于350ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合， 混匀，然后用注射用水定容至1000ml，得药物溶液；用磷酸二氢钾、磷酸氢二 钾调节药物溶液的pH值为8.00；加针用活性炭5g，吸附15分钟，然后将料液 通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾 冻干粉针剂。
实施例7一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾8g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)5g、50g聚乙二醇50，混合，在70℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精200g、蔗糖50g、甘露醇100g，置于550ml 注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水 定容至1000ml，得药物溶液；用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠调节药物溶液的pH值 为7.00；加针用活性炭3g，吸附20分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、 0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例8一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾5g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)3g、20g聚乙二醇400，混合，在50℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精100g、海藻糖40g、甘露醇60g，置于 700ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注 射用水定容至1000ml，得药物溶液；用盐酸、枸橼酸调节药物溶液的pH值为 2.00；加针用活性炭2g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例9一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾0.5g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.01g、5g聚乙二醇400，混合，在40℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精20g，置于950ml注射用水中，搅拌溶解， 得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml，得药物 溶液；用磷酸、磷酸氢二钾调节药物溶液的pH值为6.00；加针用活性炭0.5g， 吸附60分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、 封口，即得水飞蓟宾注射液。
实施例10一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾1g、10g聚乙二醇400，混合，在50℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精30g、甘露醇40g，置于900ml注射用水中， 搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用盐酸、枸橼酸、枸橼酸二钠调节药物溶液的pH值为2.50；加针 用活性炭1g，吸附40分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯 除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例11一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾1g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.05g、10g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使 溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精20g、乳糖20g、10g右旋糖酐70，置 于900ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用 注射用水定容至1000ml，得药物溶液；用磷酸、磷酸二氢钠调节药物溶液的pH 值为5.00；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、 0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例12一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾1g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.2g、10g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精20g、乳糖20g、10g右旋糖酐20，置于 900ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注 射用水定容至1000ml，得药物溶液；用冰醋酸、醋酸钠调节药物溶液的pH值为 4.50；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例13一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾1g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、无水乙醇20g，混合，在55℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精30g、甘露醇40g，置于900ml注射用水中， 搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性 炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例14一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾1g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、丙二醇20g，混合，在55℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精30g、甘露醇40g，置于900ml注射用水中， 搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性 炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例15一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)1g、无水乙醇40g，混合，在55℃下加热搅拌，使溶解， 得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、乳糖60g，置于800ml注射用水中，搅 拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用枸橼酸、磷酸氢二钠调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性 炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例16一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)1g、丙二醇40g，混合，在55℃下加热搅拌，使溶解，得 有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、乳糖60g，置于800ml注射用水中，搅拌 溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用枸橼酸、磷酸氢二钠调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性 炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例17一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.2g、50g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g、60g右旋糖酐40，置于800ml注射 用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容 至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为3.50； 加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例18一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.4g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精30g、30g右旋糖酐40、乳糖20g，置于 850ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注 射用水定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.00；加 针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤 芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例19一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000 (DSPE-MPEG5000)0.1g、30g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇60g，置于850ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为3.00；加 针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤 芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例20一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000 (DSPE-MPEG5000)0.5g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇50g，置于850ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为4.00；加 针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤 芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例21一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、10g吐温80、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅 拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇70g，置于850ml 注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水 定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为 4.00；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例22一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、聚氧乙烯蓖麻油10g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃ 下加热搅拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精110g，置于850ml注 射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定 容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为4.00； 加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、封口，即得水飞蓟宾注射液。
实施例23一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、10g泊洛沙姆188、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下 加热搅拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、乳糖20g、甘露醇 40g，置于800ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀， 然后用注射用水定容至1000ml，得药物溶液；用磷酸、磷酸二氢钠调节药物溶 液的pH值为5.00；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒 过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例24一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、5g吐温80、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅 拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精450g，置于400ml注射用水中， 搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml， 得药物溶液；用磷酸、磷酸氢二钠调节药物溶液的pH值为5.00；加针用活性炭 1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分 装、封口，即得水飞蓟宾注射液。
实施例25一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、聚氧乙烯蓖麻油5g、丙二醇5g、无水乙醇15g，混合， 在55℃下加热搅拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精100g，置于850ml 注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水 定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活 性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、封口，即得水飞蓟宾注射液。
实施例26一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.2g、20g聚乙二醇200，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇60g，置于850ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.00；加针用活性炭1g， 吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、 冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例27一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、20g聚乙二醇300，混合，在60℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精40g、甘露醇50g，置于850ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸钠调节药物溶液的pH值为3.50；加针 用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯 除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例28一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、30g聚乙二醇600，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g、甘露醇60g，置于800ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性炭1g， 吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、 冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例29一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.05g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使 溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g，乳糖30g、甘露醇30g，置于850ml 注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水 定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为 3.50；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例30一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾3g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)2g、20g聚乙二醇400，混合，在60℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精80g、40g右旋糖酐40、甘露醇60g，置 于750ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用 注射用水定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50； 加针用活性炭1g，吸附50分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm 滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例31一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾3g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)3g、丙二醇25g、5g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热 搅拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精50g、甘露醇60g，置于800ml 注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水 定容至1000ml，得药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活 性炭1g，吸附40分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌； 分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例32一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾3g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)1g、30g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精60g、甘露醇60g，置于800ml注射用水 中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至 1000ml，得药物溶液；用枸橼酸、枸橼酸三钠调节药物溶液的pH值为3.50；加 针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤 芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针剂。
实施例33一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾4g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)1g、无水乙醇10g、丙二醇10g、20g聚乙二醇400，混合， 在55℃下加热搅拌，使溶解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精80g、甘露醇 100g，置于750ml注射用水中，搅拌溶解，得水相；将有机相与水相混合，混匀， 然后用注射用水定容至1000ml，得药物溶液；用磷酸二氢钠、磷酸氢二钾调节 药物溶液的pH值为6.00；加针用活性炭1g，吸附30分钟，然后将料液通过1μm 钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、冻干、封口，即得水飞蓟宾冻干粉针 剂。
实施例34一种水飞蓟宾注射剂
称取水飞蓟宾2g、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-MPEG2000)0.1g、20g聚乙二醇400，混合，在55℃下加热搅拌，使溶 解，得有机相；称取磺丁基醚-β-环糊精500g，置于400ml注射用水中，搅拌溶 解，得水相；将有机相与水相混合，混匀，然后用注射用水定容至1000ml，得 药物溶液；用枸橼酸调节药物溶液的pH值为3.50；加针用活性炭1g，吸附30 分钟，然后将料液通过1μm钛棒过滤除炭、0.22μm滤芯除菌；分装、封口，即 得水飞蓟宾注射液。
实施例35水飞蓟宾注射剂的稀释稳定性考察
取实施例4、实施例6、实施例9、实施例13、实施例17、实施例32所制 备的水飞蓟宾注射剂，其中冻干粉针剂用生理盐水复溶成冻干前溶液的浓度。分 别将水飞蓟宾注射液以及冻干粉针剂的复溶液，用生理盐水稀释10倍，得稀释 液。将稀释液置于室温环境下，随时间变化取样，并过0.45微米滤膜，测定续 滤液中的水飞蓟宾含量随时间的变化情况，以此来考察水飞蓟宾注射剂的稀释稳 定性。
色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸(48：52：1) 为流动相；柱温为40℃；检测波长为288nm。
测定法精密量稀释液1ml，用流动相稀释至10ml，作为供试品；精密量取 10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积；以0小时峰面积为100％计，计算随时间 变化峰面积百分比的变化情况，结果如表6：
表6水飞蓟宾注射剂的稀释稳定性考察结果
样品 0小时 8小时 12小时 16小时 20小时 24小时 实施例4 100％ 100.2％ 100.4％ 99.8％ 99.6％ 98.8％ 实施例6 100％ 99.7％ 100.1％ 99.6％ 99.2％ 99.5％ 实施例9 100％ 99.9％ 99.7％ 100.3％ 100.0％ 99.2％ 实施例13 100％ 99.9％ 100.2％ 100.1％ 99.8％ 99.6％ 实施例17 100％ 101.0％ 100.3％ 100.7％ 99.7％ 100.1％ 实施例32 100％ 100.5％ 99.6％ 98.9％ 99.7％ 99.1％
结果显示，本发明的水飞蓟宾注射剂临床用药前在生理盐水中的稀释稳定 性大于24小时，完全能够满足临床用药要求。
实施例36对中国专利申请CN02125823.6记载的制备方法进行验证
中国专利申请CN02125823.6，发明名称为“含环糊精或其衍生物的水飞蓟素 注射液”，公开号为CN1391894A，根据其说明书记载的实施方案，其核心技术 特征是将水飞蓟素投入在含环糊精的水溶液中，然后用氢氧化钠调节溶液pH为 碱性，使水飞蓟宾溶解，溶解后再用盐酸调节pH值为6.0-6.5，即得水飞蓟素的 环糊精包合物。验证时，所述的水飞蓟素用水飞蓟宾来代替，并严格按照该专利 的实施例1所述的实施方案进行验证。
(1)制备方法(同原专利实施例1)
将羟丙基-β-环糊精3g溶于10ml注射用水中，加入300mg水飞蓟宾，用 1NNaOH溶液调节pH至10，搅拌使水飞蓟宾溶解，连续搅拌5小时，用1NHCl 溶液调pH至6.5，过滤除菌、分装、冻干、封口，即得对比专利的水飞蓟宾冻 干粉针剂。
(2)试验现象与结果
①变色
在用NaOH溶液调节pH至10，搅拌使水飞蓟宾溶解的过程中，发现溶液颜 色由起初的类白色混悬液，逐渐变为黄绿色，最后变为深黄色的澄清溶液。而本 发明的制备方法，在整个制备过程中均未见有变色现象。
②NaOH对水飞蓟宾的破坏性验证
用NaOH溶液调节pH至10，使水飞蓟宾溶解，所得到的溶液颜色发生明显 变化。分析原因，可能是作为强碱的NaOH，对水飞蓟宾结构有破坏，从而导致 溶液颜色发生变化。为此，我们对碱溶液进行紫外扫描，考察是否出现新的吸收 峰，以此来判断NaOH是否对水飞蓟宾有破坏。
原料对照溶液：
取水飞蓟宾原料药适量，用甲醇溶解并稀释，得原料对照溶液；
对比专利供试品溶液：
取上述用NaOH溶液调节使水飞蓟宾溶解后的药物溶液适量，用水稀释， 得对比专利供试品溶液。
本发明供试品溶液：
取本发明实施例4项下的药物溶液，用水稀释，得本发明供试品溶液。
将上述溶液，分别在190-600nm波长范围内进行扫描。结果显示，原料对 照溶液与本发明供试品溶液，均在287.5nm处有最大吸收，其余波长处几乎无吸 收(见图1-图4)；而对比专利供试品溶液除在287.5nm处有较大吸收外，还在 326.0nm处出现更大吸收峰(见图5、图6)。说明在NaOH的作用下，水飞蓟宾 结构发生了明显的变化，而本发明所制备的药物溶液质量稳定。故该专利申请所 制备的水飞蓟素环糊精包合物质量存在一定的问题，可能会影响水飞蓟宾的安全 性与有效性。
③不能完全复溶
将冻干后的样品，分别用注射用水、0.9％氯化钠注射液、5％葡萄糖注射液 复溶。结果显示，复溶液均出现明显浑浊，放置后浑浊加重，出现沉淀。而本发 明的水飞蓟宾注射剂，冻干后复溶性良好，有着明显的区别。
综上所述，中国专利申请CN02125823.6，发明名称为“含环糊精或其衍生物 的水飞蓟素注射液”，公开号为CN1391894A，其说明书记载的实施方案可行性 较差，所选用的环糊精种类对水飞蓟宾而言，不是最佳匹配(见本发明实施例1)， 故无法得到安全稳定的水飞蓟宾注射剂。