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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510443466.3 (22)申请日 2015.07.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105104187 A (43)申请公布日 2015.12.02 (73)专利权人 浙江省嘉兴市农业科学研究院 （所） 地址 314016 浙江省嘉兴市秀洲区王江泾 镇双桥 (72)发明人 李军 李白 高广春 (74)专利代理机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 代理人 沈自军 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) 审查员 吴涛 。
2、(54)发明名称 一种西红花组培球茎壮球生根培养基及组 培方法 (57)摘要 本发明公开了一种西红花组培球茎壮球生 根培养基及组培方法， 所述培养基以LS培养基为 基础培养基， 每升培养基中含有： 卡拉胶6-8g、 白 糖40-60g、 活性炭0.1-0.5g、 香蕉肉20-40g、 马铃 薯泥10-30g、 萘乙酸0.1-1mg、 吲哚丁酸1-5mg、 多 效唑1-5mg， pH值5.8-6.0。 该培养基能够促进西 红花组培球茎壮球生根， 不易翘根， 提高了移栽 成活率。 所述的组培方法， 包括以下步骤： (1)取 西红花丛生芽， 接种至诱导培养基中， 诱导培养 获得球茎； (2)将所述球。
3、茎接种上述培养基中， 培 养至球茎直径不小于10mm。 通过该方法培育的西 红花组培球茎直径约为不使用壮球培养基的2.2 倍， 提高了组培球茎的质量， 缩短了球茎的大田 生长周期。 权利要求书1页 说明书4页 CN 105104187 B 2017.04.12 CN 105104187 B 1.一种西红花组培球茎壮球生根培养基， 其特征在于， 所述培养基以LS培养基为基础 培养基， 每升培养基中含有： 卡拉胶7g、 白糖50g、 活性炭0.2g、 香蕉肉30g、 马铃薯泥20g、 萘 乙酸0.5mg、 吲哚丁酸3mg、 多效唑2mg， pH值5.8-6.0。 2.一种西红花的组培方法， 包括以。
4、下步骤： (1)取西红花丛生芽， 接种至诱导培养基中， 诱导培养获得球茎； (2)将所述球茎接种至权利要求1所述的培养基中， 培养至球茎直径不小于10mm； 所述诱导培养基以LS培养基为基础培养基， 每升诱导培养基含有： 萘乙酸0.1-1mg、 白 糖40-60g、 琼脂粉6-8g， pH值为5.8； 步骤(1)中， 诱导培养的条件为： 温度202， 每天12h光照， 光照强度1500lux； 步骤(2)中， 培养条件为： 温度202， 每天12h光照， 光照强度1500lux； 步骤(1)中， 诱导培养至球茎不大于5mm。 3.如权利要求2所述的西红花的组培方法， 其特征在于， 每升诱导培养。
5、基含有： 萘乙酸 0.5mg、 白糖50g、 琼脂粉7g。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105104187 B 2 一种西红花组培球茎壮球生根培养基及组培方法 技术领域 0001 本发明属于植物组织培养领域， 具体涉及一种西红花组培球茎壮球生根培养基及 组培方法。 背景技术 0002 西红花(Crocus sativus L.)别名藏红花、 番红花， 是鸢尾科番红花属的多年生植 物， 也是一种常见的香料。 主要分布在欧洲、 地中海及中亚等地， 中国北京、 山东、 浙江及四 川等地有栽培。 西红花是一种名贵中药材， 以雌蕊上部具有三根红色柱头入药， 柱头含有西 红花苷、 西红花醛和。
6、西红花苦素三种类胡萝 卜素衍生物， 具有抗癌、 抗氧化及降血脂等多种 功效， 还具有很好的增强免疫力和抗肿瘤活性。 0003 西红花在我国多采用 “二段式” 栽培方法， 即当年5月份将种球从地里挖起， 进行室 内培育及采花， 11月份将采花后的种球种植到地里。 西红花通过分球繁殖， 繁殖系数低， 在 1.5左右。 西红花球茎一般在8g以上才能开花， 球茎越大， 开花越多， 球茎越小， 开花越少， 甚 至不开花， 但小球茎通过种植技术逐年种植可使之变成能开花的大球茎。 据统计1g以下小 球茎经3年逐年种植才能达到6g重种球茎标准； 1g重的小球茎要两年； 3-5年重的要1年达此 标准。 另外， 。
7、我国种植藏红花面积仅5000亩左右， 占市场需求量的20左右， 大部分还是依 赖进口。 因此， 采用组培快繁的方式繁殖西红花球茎， 进而生产高品质西红花花丝可解决国 内市场需求量供应不足的问题。 0004 通过组培快繁繁殖西红花球茎还可以结合脱毒技术， 解决西红花种植过程中病毒 积累造成的产量及品质下降问题。 国内外关于西红花组培快繁的研究已有部分报道， 但是 组培球茎的壮球生根培养一直是制约组培球茎质量及移栽成活率的关键。 现有的西红花组 培快繁体系通过芽诱导、 继代、 壮苗、 小球茎诱导、 生根培养体系获得的组培球茎直径往往 不到0.5cm； 另外， 获得的组培球茎根系易发生翘根现象， 影。
8、响根系吸收培养基养分。 这些情 况导致组培球茎移栽成活率低， 炼苗期长， 大田生长周期长。 0005 申请公布号为CN 103733994 A的专利文献公开了一种东方百合组培苗壮苗的方 法， 包括： 取东方百合无菌苗的鳞茎， 将鳞片置于诱导培养基中进行芽诱导培养； 诱导出芽 后， 将芽接至生根壮球培养基中进行培养， 获得组培苗； 其中， 所述生根壮球培养基的组成 为： MS粉， 4-6g/L； 蔗糖， 60-70g/L； 琼脂， 6-8g/L； 多效唑， 510-4-510-3mmol/L。 该发明方 法能够促进组培苗鳞茎的膨大或/和增重， 从而可获得健壮的组培苗， 缩短生产周期， 节约 成本。
9、。 0006 西红花组培工厂化生产中， 如何通过优化培养基配方， 培养膨大的球茎， 从而改善 组培球茎质量、 提高移栽成活率、 缩短组培球茎在大田生长周期， 是亟待解决的技术问题。 发明内容 0007 本发明提供一种西红花组培球茎壮球生根培养基， 能促进西红花组培球茎膨大和 生根， 改善组培球茎的质量， 提高移栽成活率， 满足市场需要。 说 明 书 1/4 页 3 CN 105104187 B 3 0008 为解决上述技术问题， 本发明提供了一种西红花组培球茎壮球生根培养基， 所述 培养基以LS培养基为基础培养基， 每升培养基中含有： 卡拉胶6-8g、 白糖40-60g、 活性炭 0.1-0.。
10、5g、 香蕉肉20-40g、 马铃薯泥10-30g、 萘乙酸0.1-1mg、 吲哚丁酸1-5mg、 多效唑1-5mg， pH值5.8-6.0。 0009 本发明的西红花组培球茎壮球生根培养基采用LS(Linsmaier&Skoog)培养基作为 基础培养基， 与组培生产中使用最普遍的培养基MS(Murshige&Skoog)培养基基本成分相 比， LS培养基去掉了甘氨酸、 盐酸吡哆醇和烟酸， 适合于草本植物的组织培养。 0010 所述香蕉肉的制备方法为香蕉剥皮取其果肉， 加水用搅拌机搅成糊状。 0011 所述马铃薯泥的制备方法为把马铃薯洗净去皮， 按质量比1： 5的比例加水， 煮沸后 用搅拌机搅。
11、成糊状。 0012 萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid， NAA)是一种易溶于有机溶剂的无色固体， 是 一种植物生长素类激素， 常用于商用的发根粉或发根剂中。 0013 吲哚丁酸(3-Indolybutyric acid， IBA)是一种白色结晶固体， 易溶于乙醇等有机 溶剂， 是一种植物生长素类激素， 促进植物根系发育。 0014 多效唑(Paclobutrazol)是一种高效低毒的植物生长延缓剂， 抑制生物体内赤霉 素的合成， 可用于培养健壮的组培苗。 在百合、 马蹄莲及唐菖蒲的组培中已被证实可促进球 茎膨大。 0015 活性炭(AC)对酚类及其氧化物具有很强的吸附性。
12、， 已被广泛应用于植物组织培养 中， 在植物组织培养生根过程中可提供生根的暗环境， 防止褐变， 提高培养体内可溶性蛋白 和总糖的含量。 0016 卡拉胶(Carrageenan)是从麒麟菜、 石花菜、 鹿角菜等红藻类海草中提炼出来的亲 水性胶体， 为白色或浅褐色颗粒或粉末， 与琼脂粉(Agar)作用相同， 常被用于植物组培固体 培养基中作为支持物。 0017 白糖能支持绝大多数植物离体培养物的旺盛生长， 因此被作为植物组织培养的标 准碳源而广泛应用， 可在一定程度上减少微生物的污染。 0018 优选的方案， 每升培养基中含有： 萘乙酸0.4-0.6mg、 吲哚丁酸2-3mg、 多效唑2- 3m。
13、g。 0019 更为优选的方案， 每升培养基中含有： 卡拉胶7g、 白糖50g、 活性炭0.2g、 香蕉肉 30g、 马铃薯泥20g、 萘乙酸0.5mg、 吲哚丁酸3mg、 多效唑2mg， pH值为5.8。 0020 本发明提供了一种西红花的组培方法， 包括以下步骤： 0021 (1)取西红花丛生芽， 接种至诱导培养基中， 诱导培养获得球茎； 0022 (2)将所述球茎接种至所述的培养基中， 培养至球茎直径不小于10mm。 0023 所述诱导培养基以LS培养基为基础培养基， 每升诱导培养基含有： 萘乙酸0.1- 1mg、 白糖40-60g、 琼脂粉6-8g， pH值为5.8。 0024 优选的。
14、方案， 每升诱导培养基含有： 萘乙酸0.5mg、 白糖50g、 琼脂粉7g。 0025 步骤(1)中， 诱导培养的条件为： 温度202， 每天12h光照， 光照强度1500lux。 0026 步骤(2)中， 培养条件为： 温度202， 每天12h光照， 光照强度1500lux。 0027 步骤(1)中， 诱导培养至球茎不大于5mm。 0028 与现有技术相比， 本发明的有益效果为： 说 明 书 2/4 页 4 CN 105104187 B 4 0029 (1)本发明培养基配方中添加了促进生根的香蕉肉和促进壮苗的马铃薯， 获得的 组培球茎生根效果好、 球茎生长健壮， 而且根系发达， 不易翘根， 。
15、提高了移栽成活率。 0030 (2)本发明培养基中添加了促进球茎膨大的多效唑， 获得的组培球茎直径可达 10.5mm， 约为不使用壮球培养基的2.2倍， 提高了组培球茎的质量， 缩短了球茎的大田生长 周期。 0031 (3)本发明培养基中采用卡拉胶作为固体培养基支持物， 与常用的琼脂粉相比， 不 仅生根效果好， 而且价格便宜。 具体实施方式 0032 下面结合具体实施例进一步阐释本发明。 0033 实施例1 0034 (1)配培养基： 0035 每升小球茎诱导培养基由以下组分组成： LS+白糖50g+NAA 0.5mg+琼脂粉7g， pH 5.8。 0036 每升壮球生根培养基由以下组分组成：。
16、 LS+白糖50g+香蕉肉30g+马铃薯泥20g+多 效唑2mg+IBA 3mg+NAA 0.5mg+卡拉胶7g+活性炭0.2g， pH5.8。 0037 (2)选取生长健壮的西红花丛生芽， 切成单个芽， 接种到小球茎诱导培养基， 培养 温度202， 在光照条件下(12h/d， 光照强度1500lux)培养， 50天左右诱导出直径5mm左右 的小球茎。 0038 (3)将诱导出的小球茎接种到壮球生根培养基， 培养温度202， 在光照条件下 (12h/d， 光照强度1500lux)培养， 30天左右小球茎球茎直径增至10mm左右。 0039 实施例2 0040 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培。
17、养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖40g+香蕉肉30g+马铃薯泥20g+多效唑2mg+IBA 1mg+NAA 1mg+卡拉胶7g+活性炭 0.2g， pH5.8。 0041 小球茎诱导及培养条件同实施例1。 0042 实施例3 0043 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖60g+香蕉肉30g+马铃薯泥20g+多效唑3mg+IBA 2mg+NAA 0.8mg+卡拉胶7g+活性 炭0.1g， pH5.8。 0044 小球茎诱导及培养条件同实施例1。 0045 实施例4 0046 小球茎诱导培养基采用实施例1中。
18、的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖50g+香蕉肉20g+马铃薯泥20g+多效唑2mg+IBA 1mg+NAA 1mg+卡拉胶6g+活性炭 0.3g， pH5.8。 0047 小球茎诱导及培养条件同实施例1。 0048 实施例5 0049 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖50g+香蕉肉40g+马铃薯泥20g+多效唑4mg+IBA 4mg+NAA 0.3mg+卡拉胶6g+活性 说 明 书 3/4 页 5 CN 105104187 B 5 炭0.4g， pH5.8。 0050 小球茎诱导及培养条件同实施例。
19、1。 0051 实施例6 0052 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖50g+香蕉肉30g+马铃薯泥10g+多效唑2mg+IBA 5mg+NAA 0.2mg+卡拉胶8g+活性 炭0.5g， pH5.8。 0053 小球茎诱导及培养条件同实施例1。 0054 实施例7 0055 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖50g+香蕉肉30g+马铃薯泥30g+多效唑5mg+IBA 1mg+NAA 1mg+卡拉胶8g+活性炭 0.2g， pH5.8。 0056 小球茎诱导及培养条件同实。
20、施例1。 0057 实施例8 0058 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基配方如下： 以1L 计， LS+白糖40g+香蕉肉30g+马铃薯泥20g+多效唑1mg+IBA 1mg+NAA 1mg+卡拉胶7g+活性炭 0.2g， pH5.8。 0059 小球茎诱导及培养条件同实施例1。 0060 实施例9 0061 设一对照组， 小球茎诱导培养基采用实施例1中的培养基配方， 壮球生根培养基采 用文献报道的培养基配方。 壮球生根培养基配方如下： 以1L计， 1/2MS+蔗糖30g+6-BA 1.0mg +NAA 0.2mg+琼脂7g， pH5.8。 0062 小球茎诱导及培。
21、养条件同实施例1。 0063 实施结果： 0064 通过比对各实施例的数据(表1)， 表明应用本发明培养基配方在球茎直径、 生根数 及根长三个方面都能获得较好的效果， 以实施例1中的壮球生根培养基配方最优。 通过比较 实施例1和对照组实施例9， 表明本发明培养基中添加香蕉肉、 马铃薯和多效唑能促进西红 花组培球茎的生根和膨大。 0065 表1 不同实施例培养获得西红花组培球茎情况 0066 培养时间球茎直径(mm)生根数(条)根长(cm) 实例180d10.518.52.1 实例280d8.115.31.6 实例380d8.314.41.8 实例480d10.216.52.0 实例580d8.815.21.5 实例680d9.517.11.7 实例780d10.117.21.6 实例880d10.318.21.9 实例980d7.312.41.2 说 明 书 4/4 页 6 CN 105104187 B 6 。