技术领域
本发明涉及农业防治技术领域,具体是一种土壤杀菌剂，用于防治农业上的土传病害。
背景技术
土传病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害。土地的连作,复种指数的提高,及施肥的不合理使得土传病害近年来不断加剧的原因。猝倒病、根腐病、立枯病是作物苗期的主要病害，一般使得少数幼苗死亡，造成缺行断垄，甚至造成幼苗成片倒伏死亡的严重后果。
土传病害的病原菌在作物种植前就已经存在于土壤中,目前人们还没有形成用药预防的习惯,一般是病害发生后才使用药剂兑水喷雾防治,但兑水喷施比较麻烦,并且药效不佳,由于病害得不到及时的防治,造成部分幼苗死亡的巨大损失。因此急需一种土壤病害杀菌剂，能在作物播种期、移栽期、病害发生初期及时施用，是解决上述技术问题的主要途径。
发明内容
本发明的目的在于，针对以上技术问题，提供一种土壤杀菌剂，能有效的防治土传病害。
本发明所采取的技术方案是：一种土壤杀菌剂，包括活性成分和辅助剂，其中活性成分由烯丙苯噻唑、腐植酸和枯草芽孢杆菌组成。
(1)烯丙苯噻唑，英文名称：probenazole，是日本明治制果药业株式会社开发的一种诱导免疫型杀菌剂，通过激发植物本身对病害的免疫(抗性)反应来实现防病效果，通过植物根部吸收，并较迅速地渗透传导至植物体各部分。
(2)枯草芽孢杆菌，英文名称：bacillus subtilis，是一种微生物杀菌剂，通过有效成分枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质和位点竞争、诱导抗性的作用方式，杀灭和控制病原菌，从而达到防治病害的目的。
(3)腐植酸，是一种天然的有机高分子化合物，结构复杂，具有离子交换、螯合、絮凝和溶胶等功能，在农业上具有改良土壤、刺激生长、增强抗逆、改善品质的作用。
所述的土壤杀菌剂，以含量为10000亿芽孢/克的枯草芽孢杆菌原药为100％原药，烯丙苯噻唑、腐植酸和枯草芽孢杆菌的重量比为20-50:20-50：1,优选的，烯丙苯噻唑、腐植酸和枯草芽孢杆菌的重量比为20:50:1或30:50:1。
所述的土壤杀菌剂，烯丙苯噻唑的重量百分比为2.0％-5.0％，腐植酸的重量百分比为2.0％-5.0％，枯草芽孢杆菌的重量百分比为0.05-0.1％，即枯草芽孢杆菌在杀菌剂中的含量为5亿孢子/克～10亿孢子/克。
所述的土壤杀菌剂，依照本领域技术人员所公知的方法，加入相应的辅助成分，制备成农业上可接受的颗粒剂。
所述的辅助成分包括填料、分散剂、润湿剂、粘结剂、稳定剂或其它有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的物质，都是农药制剂中常用或允许使用的各种成分。
本发明具有以下优点和显著的技术效果：
(1)本发明的3个活性成分的作用机理不同，相互混配协同增效明显，能够大幅提高药效，降低农药使用量和用药成本；有利于延缓现有病菌对单一药剂潜在的抗性风险，延长药剂的使用周期。
(2)本发明的土壤杀菌剂，制备成颗粒剂，使用方便，无需兑水，省时省工。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的技术方案和技术效果作进一步说明，本发明所述的百分比均为重量百分比。
一、室内联合毒力测定试验
实施例1：烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混剂对水稻立枯病的室内毒力测定(1)试验对象：水稻立枯病(Rhizoctonia solani)，由田间采集，经室内分离纯化。
(2)试验方法：经预试确定各药剂有效抑制浓度范围后，将烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混配剂按有效成分含量梯度系列稀释5个浓度，用无菌水作对照。参照《中华人民共和国农业行业标准NY/T1156.2-2006》进行，采用菌丝生长速率法测定。将不同浓度药剂加入灭菌培养皿中，每皿1mL，再加入灭菌熔化的PDA培养基10mL，充分混合制成平板，再将扩培的菌落打成＝0.8cm的菌碟，每皿1片，每处理4次重复，置于25℃恒温箱中培养，每24h用十字交叉法测量菌落直径1次，计算各处理净生长量、菌丝生长抑制率。
将菌丝生长抑制率换算成机率值(y)，药液浓度(μg/mL)转换成对数值(x)，以最小二乘法求得毒力回归方程(y＝a+bx)，并由此计算出每种药剂的EC50值，依孙云沛法计算药剂的毒力指数及共毒系数(CTC)，评价药剂混用的增效作用，即当共毒系数(CTC)≥120时，组合物表现为增效作用；当CTC≤80时，组合物表现为拮抗作用；当80＜CTC＜120时，组合物表现为相加作用。
试验结果见表1。
表1 烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混剂对水稻立枯病的毒力测定统计表
室内联合毒力测定结果表明，当烯丙苯噻唑、腐植酸、枯草芽孢杆菌的重量比为20-50:20-50：1时,共毒系数(CTC)均大于120，具有明显的增效作用；当烯丙苯噻唑、腐植酸、枯草芽孢杆菌的重量比为20:50:1时，共毒系数(CTC)系数最大，增效最为显著，在田间试验中有很好的应用价值。
实施例2：烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混剂对西瓜枯萎病的室内毒力测定
(1)试验对象：西瓜枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.niveum.)，由田间采集，经室内分离纯化。
(2)试验方法：经预试确定各药剂有效抑制浓度范围后，将烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混剂按有效成分含量梯度系列稀释5个浓度，用无菌水作对照。参照《中华人民共和国农业行业标准NY/T1156.2-2006》进行，采用菌丝生长速率法测定。在无菌条件下，取配置好的药液5mL与75mL培养基混合均匀，制成4个含药平板，以等量无菌水与培养基混合作为对照。将培养好的西瓜枯萎病在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器自边缘切取菌饼。用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝下，置于25℃培养箱中。视空白对照生长情况调查结果，每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次，取其平均值。计算菌丝生长抑制率，求出毒力回归式，计算EC50。
以孙云沛法的共毒系数法(CTC)来评价药剂混用的增效作用，即CTC≤80为拮抗作用，80<CTC<120为相加作用，CTC≥120为增效作用。
毒力测定结果见表2。
表2 烯丙苯噻唑、枯草芽孢杆菌、腐植酸及其混配对西瓜枯萎病的室内毒力测定表
表2结果表明，混配剂防治西瓜枯萎病，当烯丙苯噻唑、腐植酸、枯草芽孢杆菌的重量比为20-50:20-50：1时,共毒系数(CTC)均大于120，具有明显的增效作用；当烯丙苯噻唑、腐植酸、枯草芽孢杆菌的重量比为20:50:1时，共毒系数(CTC)系数最大，在田间试验中有很好的应用价值。
二、制备实施例
实施例1：2.0％烯丙苯噻唑·5.0％腐殖酸·10亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂
配方：依据烯丙苯噻唑、腐殖酸与枯草芽孢杆菌与的重量比为20：50:1，按量称取烯丙苯噻唑2.0％，腐殖酸5.0％，枯草芽孢杆菌0.1％，木质素磺酸钠3.5％(分散剂)，十二烷基硫酸钠2.5％(润湿剂)，聚乙烯醇4.2％(粘结剂)，白炭黑10％(填料)，硅藻土(填料)补足至100％。
实施例2：3.0％烯丙苯噻唑·5.0％腐殖酸·10亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂
配方：依据烯丙苯噻唑、腐殖酸与枯草芽孢杆菌的重量比为30：50:1，按量称取烯丙苯噻唑3.0％，腐殖酸5.0％，枯草芽孢杆菌0.1％，萘磺酸盐甲醛缩合物2.5％(分散剂)，十二烷基硫酸钠2.5％(润湿剂)，聚乙烯醇5.0％(粘结剂)，白炭黑15％(填料)，膨润土(填料)补足至100％。
实施例3：2.0％烯丙苯噻唑·2.0％腐殖酸·5.0亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂
配方：依据烯丙苯噻唑、腐殖酸与枯草芽孢杆菌的重量比为20：20:1时，按量称取烯丙苯噻唑2.0％，腐殖酸2.0％，枯草芽孢杆菌0.05％，羧甲基纤维素3.5％(分散剂)，十二烷基硫酸钠2.0％(润湿剂)，聚乙烯醇3.5％(粘结剂)，高岭土(填料)补足至100％。
实施例4：5.0％烯丙苯噻唑·3.0％腐殖酸·10.0亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂
配方:依据烯丙苯噻唑、腐殖酸与枯草芽孢杆菌的重量比为50：30:1时。按量称取烯丙苯噻唑5.0％，腐殖酸3.0％，枯草芽孢杆菌0.1％，羧甲基纤维素5％(分散剂)，十二烷基苯磺酸钠3.5％(润湿剂)，聚乙烯醇4.2％(粘结剂)，白炭黑(填料)10％，高岭土(填料)补足至100％。
制备实施例1-4的制备方法：按配方比例将各组分充分混合，粉碎，加水润湿后再充分搅拌均匀，再用螺杆挤压造粒机造粒，干燥后过筛，即得含有烯丙苯噻唑·腐殖酸·枯草芽孢杆菌的杀菌剂产品，剂型为颗粒剂。
二、田间试验实施例
实施例1：制备实施例1所得制剂防治水稻立枯病的田间试验。
(1)试验设计:试验参照NY/T 1464.14-2007《农药田间药效试验准则杀菌剂防治水稻立枯病》。在水稻立枯病发病初期，依照各处理对应的药剂及用量对秧苗均匀撒施，每个小区面积为2.5㎡，4次重复。施药前调查病情基数，药后14d(移栽前)调查防治效果，每个小区对角线五点取样，每点调查0.1㎡，记录调查总株数、病株数，计算防效。试验结果见表3。
表3：制备实施例1所得制剂防治水稻立枯病的田间药效试验统计表。
试验设置 药剂 用量(g/㎡) 防效(％) 处理1# 制备实施例1所得制剂 15 92.4 处理2# 5.0％烯丙苯噻唑颗粒剂 20 78.2 处理3# 10％腐殖酸颗粒剂 30 42.6 处理4# 100亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂 30 63.5
从表3看出，制备实施例1所得制剂(2.0％烯丙苯噻唑·5.0％腐殖酸·10亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂)防治水稻立枯病，各成分间协同增效明显，显著提高药效，降低了各单剂用药量。
实施例2：制备实施例2所得的制剂应用于防治辣椒猝倒病的田间试验
试验设计：选择连作辣椒猝倒病严重的地块,于辣椒出齐苗后发病初期，依照各处理对应的药剂及用量对各小区均匀施药，小区面积2.0m2，4次重复，各小区中保持苗床环境一致。药后14d调查结果，计算防效。
试验结果见表4。
表4 制备实施例2所得的制剂应用于防治辣椒猝倒病的田间试验统计表
试验设置 药剂 用量(g/㎡) 防效(％) 处理1# 制备实施例2所得制剂 15 95.6 处理2# 5.0％烯丙苯噻唑颗粒剂 20 83.2 处理3# 10％腐殖酸颗粒剂 60 53.2 处理4# 100亿cfu/克枯草芽孢杆菌颗粒剂 35 67.9
从表4看出，烯丙苯噻唑、腐殖酸与枯草芽孢杆菌混配，对辣椒猝倒病增效作用明显，既减少有效成分的使用量，又表现出了优于单剂的田间效果。