皱纹改善剂、脂肪分解促进剂、皮肤外用组合物及饮食物组合物
技术领域
本发明关于改善随着老化，尤其在露出部位所发生的皱纹的效果优异、 具有保持皮肤于皮肤科学上及美容上健康状态的效果的皱纹改善剂，及配 合该皱纹改善剂的皮肤外用组合物。
本发明也关于由促进全身或局部的脂肪组织减少，而改善肥胖体质， 或由防止该组织的增大，而有效地抑制或防止肥胖的皮肤外用组合物及饮 食品组合物。
背景技术
以人为始的所有的生物脏器是诞生成长后，随着年龄增加而逐渐衰 退，而终至功能停止，功能停止部分到一定程度以上时就死亡。该功能逐 渐衰退的状态，称为老化。皮肤是受周围环境直接影响，虽具有维持生物 体内部环境的重要功能，因此不至于功能完全停止，但为容易显现皱纹、 黑斑、暗沈、松弛等的老化现象的脏器，在曝露于日光下的露出部位上这 些特别明显。
皮肤在老化时，对于氧化等刺激的防御能力变弱，其将成为皮肤内部 环境紊乱的原因，使老化更加速进行。尤其，因为露出部位经常曝露于由 紫外线照射等而引起的强氧化环境中，老化进行得显著。将这样得皮肤的 变化称为光老化，这样得皮肤因占据真皮大部分构成成分的胶原蛋白减 少，而于皮肤表面发生皱纹变深且大等，因此不美观。
作为对光老化进行结果所产生的皱纹具有改善效果的物质，美国虽使 用维生素A酸(retinoic acid)作为处方笺药，但副作用强，安全性也有 问题，所以至今仍未为日本所承认。另外，虽作为改善皱纹的物质提出了 被认为发挥吸收于体内后转换成维生素A酸的效果的视黄醇(维生素A)、 或具有抗氧化及促进胶原蛋白合成效果的抗坏血酸(维生素C)、抗氧化效 果强的生育酚(维生素E)等作为皱纹改善物质，但这些有不能得到充分 满足的效果的缺点。因此，至今仍无显示充分的效果而且也具有安全性的 改善皱纹的物质。
另外，传统的皱纹改善剂，大多为化学合成物，就安全性方面也有许 多问题。另一方面，关于不易发生安全性问题的天然物质，除了维生素类 以外，几乎未为人知，而且未得到充分地发挥效果者。另外，视黄醇等的 天然皱纹改善剂多为明显地欠缺光安定性，即使具有效果，也几乎都是于 制剂中迅速地分解等，而难以配合于制剂的物质。
另一方面，体内脂肪是摄取能量对于消耗能量的过剩部分作为脂肪堆 积于存在内脏周围或皮下的白色脂肪组织中而形成的。体内脂肪堆积过剩 的所谓的肥胖，不仅影响外观，也引起动脉硬化等的各种疾病，于健康上 也不适宜。最近，因过度饮食、运动不足、压力等而肥胖的人增加，减少 体内脂肪或防止堆积成为重要的问题。尤其女性具有强烈地渴望苗条的身 材的趋向。
作为防止肥胖作用的物质，已知辣椒等所含的辣椒素类与血液中的白 蛋白键结，增进使来自副肾的能量代谢得以促进的激素的分泌，活化肝脏 或脂肪细胞中的脂肪分解(参考非专利文献1)。然而，因为辣椒素类具有 强烈刺激，所以有其用途或使用量受到限制的问题。
本发明者等发现覆盆子酮(raspberry ketone)或姜酮及其衍生物促进 堆积于脂肪组织的脂肪的分解，有效地抑制肥胖或改善肥胖体质(参考专 利文献1)。然而，因为覆盆子酮或姜酮具有特有的芳香，就配合量或广效 性方面，并不能满足。
另一方面，姜科植物的非洲豆蔻(Aframomum melegueta)是自然生 长于以西非为中心的热带地方，已知“melegueta”或“天堂籽(Grains of paradise)”等的名称，作为香辛料使用。非洲豆蔻虽然作为添加料理风 味或香料使用，但未曾研究过关于使用其萃取物的皱纹改善剂或皮肤外用 组合物
报告指出豆蔻液(Parador)[1-(4’-羟基-3’-甲氧基苯基) -3-癸酮]是上述非洲豆蔻种子萃取物的特定分离部分中所含的成分，其 化学式为：
(参考专利文献2)。专利文献2中，虽提出豆蔻液与其它类似化合物共同 作为白蚁防除剂，但未记载有关皱纹改善效果、脂肪分解促进效果或瘦身 效果等，至今也未研究它们的效果。
至今有关姜萃取物中的姜酮、姜烯酚，提出以这些作为有效成分的角 层修复促进剂(参考专利文献3)。然而，本发明中的豆蔻液是如上所述， 为特定的姜科植物所含的成分，一般的姜几乎不含有，所以未提出作为一 般姜的有效成分。
于上述情况，要求开发一种因老化尤其在露出部位明显存在的皱纹的 改善效果优异，美容上保持健康皮肤的效果也优异，安全性或安定性也优 异的皱纹改善剂及皮肤外用组合物。另外，要求开发一种具有有效的脂肪 分解促进效果，而且不具有刺激或特有的芳香，自由设定配合量或用途的 脂肪分解促进剂、及脂肪分解效果优异，在香味或芳香等的嗜好性方面也 优异的皮肤外用组合物及饮食物组合物。
专利文献1：特开2000-169325号公报
专利文献2：特开平10-152404号公报
专利文献3：特许第3164455号说明书
非专利文献1：岩井和夫及中谷延二著，「香辛料成分的食品功能」， 97页，1989年
本发明者等有鉴于上述情况，努力进行研究的结果，发现自姜科植物 的非洲豆蔻(Aframomum melegueta)，尤其自其种子所得的萃取物及其酰 化处理物，以及作为该萃取物所含成分的豆蔻液及其酰化衍生物是对于随 着老化，尤其在露出部位所发生的皱纹的改善效果优异，具有使皮肤在皮 肤科学上及美容上保持健康状态的效果，以及安全性或安定性也优异，并 且，由促进全身或局部的脂肪组织减少而改善肥胖体质，或由防止该组织 的增大而有效地抑制或防止肥胖，并且抑制损害嗜好性的刺激或芳香的优 异素材，而完成本发明。
发明内容
也即，本发明是关于以下述通式(1)
[式中，R是氢原子或碳原子数为2至20个的酰基]
所表示的化合物为有效成分的皱纹改善剂，以及以由非洲豆蔻得到的萃取 物及/或该萃取物的酰化处理物为有效成分的皱纹改善剂。
本发明又关于以上述通式(1)所表示的化合物为有效成分的脂肪分 解促进剂，以及以得自非洲豆蔻的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物为 有效成分的脂肪分解促进剂。
本发明又关于含有上述通式(1)所表示的化合物的皮肤外用组合物， 以及含有得自非洲豆蔻的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物的皮肤外用 组合物。
本发明又关于含有上述通式(1)所表示的化合物的饮食品组合物， 以及含有得自非洲豆蔻的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物的饮食品组 合物。
本发明的皱纹改善剂及皮肤外用组合物是对于随着老化，尤其在露出 部位所发生的皱纹的改善效果优异，具有皮肤科学上及美容上保持皮肤健 康状态的效果，同时安全性或安定性也优异。另外，本发明的脂肪分解促 进剂、皮肤外用组合物及饮食品组合物是由促进全身或局部的脂肪组织减 少而改善肥胖体质，或由防止该组织的增大而有效地抑制或防止肥胖，并 且因为抑制损害嗜好性的刺激或芳香，不仅瘦身效果优异，就使用感或嗜 好性方面也明显地优异。另外，本发明中所使用的豆蔻液，因为可容易自 非洲豆蔻等的天然物材料萃取精制，所以也可得到安全性方面上也优异的 组合物。
附图说明
图1是精制豆蔻液的质谱图。
图2是表示精制豆蔻液的13C-NMR(核磁共振)光谱(100MHz，CDCl3) 的图。
具体实施方式
详细说明本发明如下。本发明所使用的作为姜科植物的非洲豆蔻 (Aframomum melegueta)是自长于以西非为中心的热带地方，以 「melegueta」或「天堂籽(Grains of paradise)」等的名称被人们所知， 作为香辛料使用。本发明中所使用的萃取物是以非洲豆蔻的植物体，尤其 以种子作为萃取材料，可由已知的方法萃取而得的萃取物。作为萃取所使 用的溶剂虽无特别的限制，可使用如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等 的低级醇或含水低级醇、或1，3-丁二醇等的多元醇或含水多元醇，或丙 酮、醋酸乙酯、己烷等的各种有机溶剂。
作为萃取材料所使用的植物体部位虽无特别的限制，但为更有效率地 得到目的的萃取物，以使用种子为宜。
所得的萃取物是可直接使用，也可因应需要，由浓缩或干固，或利用 稀释等的操作，作成所需形态或性状。
另外，萃取物的酰化处理物是将萃取物酰化而得到的，所以可使用如 后述通式(1)所示化合物的制法中所记载的酰化反应，从非洲豆蔻萃取 物中获得。
本发明所使用的上述通式(1)所示的化合物中的R是氢原子的化合 物即，豆蔻液[1-(4’-羟基-3’-甲氧基苯基)-3-癸酮]是如上述， 用式：
所示的化合物，为非洲豆蔻萃取物所含的成分。本发明所使用的豆蔻液是 使用一般有机合成法自姜酮合成以外，也可由氢化姜烯酚而得的(东化理 科报I，16，589，1927)，关于合成方法并无特别的限制。
另外，豆蔻液是以非洲豆蔻，尤其以其种子作为萃取材料，由已知的 方法萃取、精制而可得的。如上所述，非洲豆蔻是自生于以西非为中心的 热带地方，可作为香辛料而取得。作为萃取溶剂是与上述同样地，可使用 有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等的低级醇或含水低级醇、 或1，3-丁二醇等的多元醇或含水多元醇，或丙酮、醋酸乙酯、己烷等的 各种有机溶剂。尤其为提升萃取物中的豆蔻液浓度，以使用低极性溶剂， 例如己烷、庚烷、辛烷等为宜。
自所得的非洲豆蔻萃取物精制豆蔻液的方法，使用已知的精制方法即 可，例如可使用硅胶层析法等而精制。
另外，上述通式(1)所示的化合物中的R是碳原子数为2至20个的 酰基的化合物中，所谓碳原子数为2至20个的酰基是指R′-CO-基，在 此，R′是表示可具有不饱和键的碳原子数为1至19个的直链或支链的烷 基、或苯基、萘基等的芳基，或含有选自氮原子、硫原子及氧原子的杂原 子为环原子的吡啶基、咪唑基、噻嗯基、呋喃基等的杂芳基。这些基也可 为具有氨基等的官能基。作为碳原子数为2至20个的酰基，具体上可举 例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、己酰基、月桂酰基、 棕榈酰基、油酰基等，以乙酰基尤佳。像这样的R是碳原子数为2至20 个的酰基的式(1)的化合物，可使用已知方法酰化苯酚化合物而合成。 例如由如上述的方法所得的豆蔻液[1-(4’-羟基-3’-甲氧基苯基) -3-癸酮]与具有所需酰基的酸氯化物或酸酐，于吡啶中反应，而可容易 得到。另外，也可于存在催化剂量的碱下，与羧酸反应。
进而，利用已知的方法将豆蔻液衍生物化后得到的物质，例如于芳香 环的第4位的羟基部分糖苷化后得到的物质、将酮基还原后得到的物质等 也属于豆蔻液，可于本发明中使用。
本发明中，上述通式(1)所示的化合物以及得自非洲豆蔻，尤其其 种子的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物，可作为皱纹改善剂使用。使 用萃取物时，可直接使用，也可因应需要，由浓缩或干固，或稀释等的操 作，作成所需形态或性状。
在本发明中的以通式(1)所示的化合物以及得自非洲豆蔻，尤其其 种子的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物，作为皱纹改善剂配合于皮肤 外用组合物时，其配合量是以皮肤外用组合物的总量为基准，换算成豆蔻 液时的配合量是以0.001至10.0质量％(以下仅记为％)为宜，以0.01 至8.0％尤佳，以0.05至5％更好，以0.1至3％最好。当配合量小于0.001 ％时，本发明预期的效果不足，另一方面，配合量超过10.0％时，未提升 相对其增加部分的效果，所以不适宜。
另外，在作为皱纹改善剂配合于皮肤外用组合物时，若并用已知具有 改善皱纹效果的视黄醇、抗坏血酸、生育酚等的成分时，互补改善皱纹效 果，或可期待协同效果，所以适宜。
本发明中，上述通式(1)所示的化合物以及得自非洲豆蔻尤其其种 子的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物，可作为促进脂肪分解的脂肪分 解促进剂配合于皮肤外用组合物或饮食品组合物中。
通式(1)所示的化合物以及得自非洲豆蔻尤其其种子的萃取物及/或 该萃取物的酰化处理物，作为促进脂肪分解剂配合于皮肤外用组合物及饮 食品组合物时，其配合量虽依制剂的形态，而有各种不同，不能一致地规 定，但例如以该组合物的总量为基准时，换算成豆蔻液，是以0.001至10.0 质量％(以下仅记为％)为宜，以0.01至8.0％尤佳，以0.05至5％更 好，以0.1至3％最好。小于0.001质量％的配合量，有时不能达成本发 明的效果，超过10.0质量％配合时，刺激感变强，将损及官能特性或嗜 好性。另外，尤其于饮食品组合物，每位成人的摄取量，换算成豆蔻液为 20至1000mg，以100至200mg为宜。
另外，作为本发明的脂肪分解促进剂的皮肤外用组合物或饮食品组合 物，也可适当地组合其它的作为具有抑制或防止肥胖作用的成分的覆盆子 酮、姜酮、4-(3’，4’-二羟基苯基)-2-丁酮、欣乐芬素(synephrine) 等而配合，增强或补强其效果等。
另外，作为本发明的脂肪分解促进剂的皮肤外用组合物及饮食品组合 物，也可配合butopamine、isoproterenol等的β肾上腺素作用兴奋剂， 育亨宾(Yohimbine)、麦角毒碱(Ergotoxine)等的α2肾上腺素作用抑制 剂，茶碱(Theophylline)、咖啡因等的黄嘌呤衍生物，Milrinone、Amrinone 等的联二吡啶衍生物等。
进而，于本发明的皮肤外用组合物及饮食品组合物，因应需要，于不 损及本发明的效果的范围，可配合通常所使用的各种成分。皮肤外用组合 物时，可配合例如油分、颜料、香料、表面活性剂、保湿剂、紫外线吸收 剂、抗炎症剂、杀菌剂、色素、防腐剂、抗氧化剂等的通常配合于皮肤外 用组合物的成分，饮食品组合物时，可配合例如赋形剂、结合剂、增黏剂、 乳化剂、着色剂、香料、食品添加物、调味料等的成分。
作为本发明的皮肤外用组合物，皮肤化妆料是当然的，也包含医药品 或入浴剂。剂型并非特别限定，但于皮肤外用组合物时，可举例如化妆水 (lotion)、皮肤涂布用、浴用或洗净用等的乳霜、乳液、凝胶、面膜、 条状物、薄片、糊、粉末、液体、颗粒等。饮食品组合物时，可举例如锭 剂、锭果、丸剂、糖衣锭、粉末状、颗粒状、茶状、茶包状、硬胶囊、软 胶囊、口香糖、巧克力、糖果、软糖、饮料、汤、冰淇淋、面类、烘焙食 品等。
实施例
以下是基于实施例及比较例而详细地说明本发明，本发明并不局限于 这些实施例。另外，实施例中的％，除非特别例外，全为质量％。 制造例1(制造非洲豆蔻萃取物)
以搅拌器粉碎2g的非洲豆蔻(Aframomum melegueta)的干燥种子后， 浸渍于20ml的丙酮，萃取24小时。于减压下浓缩、干固所得的萃取液， 得到0.1g得自非洲豆蔻种子的萃取物。以下称本萃取物为「非洲豆蔻萃 取物」。由HPLC分析的结果，此非洲豆蔻萃取物含有55％的豆蔻液。
制造例2(制造豆蔻液)
以搅拌器粉碎100g的非洲豆蔻(Aframomum melegueta)的干燥种子 后，浸渍于2L的己烷24小时。于减压下浓缩、干固所得的萃取液，得到 2.0g的萃取物。再将萃取物，由使用关东化学社制硅胶60N(100-210μ m)的硅胶层析仪(己烷/醋酸乙酯(9∶1))分离，而得约500mg的精制 豆蔻液。
(豆蔻液的鉴定)
精制豆蔻液是由GC-MS(气相层析质谱分析仪)及13C-NMR(核磁共 振)(100MHz，CDCl3)确认，得到如下结果。
由GC-MS，确认分子离子峰(M+)[m/z；278](参考图1)。由13C- NMR检测出下述信号[δ(ppm)；14.0、22.5、23.7、29.1、29.4、31.2、 43.0、44.5、55.7、111.1、114.3、120.6、133.0、143.8、146.4、210.7] (参考图2)。
制造例3(制造乙酰化非洲豆蔻萃取物)
混合1.0g的制造例1所得的非洲豆蔻萃取物、1.0ml的吡啶及30ml 的醋酸酐，于室温下搅拌24小时。然后，加水后，用醋酸乙酯萃取，而 得1.2g的乙酰化处理萃取物。以下称本处理物为「乙酰化非洲豆蔻萃取 物」。
制造例4(制造豆蔻液)
将10g(6.5mmol)的香草醛与9.3g(6.5 mmol)的2-壬酮于30ml 的己烷、20ml的二乙醚中搅拌、溶解。再加入3.9g的醋酸后，加入4.6ml (6.5mmol)的哌啶，搅拌6小时。反应结束后，用碳酸氢钠水溶液除去 未反应的香草醛，用二乙醚萃取。用无水硫酸镁干燥后，馏去溶剂，而得 20.2g的粗生成物。将粗生成物用柱层析仪(SiO2/CHCl3)精制，得到(E) -1-(4’-羟基-3’-甲氧基-苯基)癸-1-烯-3-酮(17.94g， 产率为90％)。
进而，溶解10g(36mmol)所得的(E)-1-(4’-羟基-3’-甲 氧基-苯基)癸-1-烯-3-酮于100mL的乙醇中，向该溶液加入1g的 碳钯(5％的钯)，于氢气氛下(常压)，在常温下搅拌一夜。过滤不溶解 物后，将滤液以减压浓缩，得到9.8g的粗产物。粗产物以柱层析仪 (SiO2/CHCl3)精制，得到1-(4’-羟基-3’-甲氧基苯基)-3-癸 酮(5.6g，收率为58％)。
实施例1至3(非洲豆蔻萃取物、豆蔻液、乙酰化非洲豆蔻萃取物的皱纹 改善效果)
将制造例1至3所得的非洲豆蔻萃取物、豆蔻液或乙酰化非洲豆蔻萃 取物，以50％乙醇水溶液为基剂，分别调制各配合1.0％的试样(实施例 1、2或3)，由以下试验方法调查对光老化皮肤的皱纹改善效果。
(试验方法)
1、试验动物
试验开始时，使用10周龄大的裸鼠1组10只。
2、皱纹改善效果的评估方法
2-1、光老化条件
照射UVA及UVB，1日1次，每周5次，共8周，诱发光老化。照射 量是UVA为20J/cm2、25J/cm2、30J/cm2，UVB为20J/cm2、30J/cm2、40J/cm2， 每1周增加照射量，第3周以后，照射最大量。
2-2、评估方法
由皱纹评分及真皮胶原蛋白量评估皱纹改善效果。皱纹评分是依据 Bissett等人的方法(Photochem Photobiol，46:367-378，1987)评分。也 即，用肉眼综合性评估皱纹的大小及深浅，以「可确认大且深的皱纹」为 3，「可确认皱纹」为2，「不能确认皱纹」为1，「观察到正常纹理」为0 的4个水平评分。真皮胶原蛋白量是采取全层皮肤，以POLYTRON均质机 (KINEMATICA社制)粉碎后，萃取胶原蛋白分离部分，酸解后，使用氨基 酸分析装置(日本分光制)，由定量羟基脯氨酸含量而测定。以每1cm2的羟基脯氨酸量作为真皮胶原蛋白量的相对指标。
3、试验操作
以50％乙醇水溶液为基剂，分别调制按照非洲豆蔻萃取物(制造例1)、 豆蔻液(制造例2)或乙酰化非洲豆蔻萃取物(制造例3)达到1.0％(作 为豆蔻液浓度为0.55％、0.8％，作为乙酰豆蔻液浓度为0.5％)的方式 配合的试样(实施例1、2或3)。另外，以仅基剂者为比较例。将0.1ml 的这些评估试样，以1天1次，1周5次的频率，自开始照射UV后第5 周起至照射结束后第4周，涂布于裸鼠背部皮肤(直径约为2.5cm)上。 接着，最终涂布结束后，进行皱纹评分。屠杀后，采取皮肤，测定胶原蛋 白含量(每1cm2的羟基脯氨酸量)。
(试验结果)
由皱纹评分值及真皮胶原蛋白量评估实施例1至3的皱纹改善剂的皱 纹改善效果，结果如下所述。
(皱纹评分评估结果1)
组 皱纹评分值(平均值±SE) 实施例1(非洲豆蔻萃取物) 2.45±0.09 实施例2(豆蔻液) 2.40±0.23 比较例1(仅基剂) 2.65±0.08 (皱纹评分评估结果2) 组 皱纹评分值(平均值±SE) 实施例3(乙酰化非洲豆蔻萃取物) 2.55±0.09 比较例2(仅基剂) 2.75±0.09
以实施例1至3的非洲豆蔻萃取物、豆蔻液或乙酰化非洲豆蔻萃取物 为有效成分的皱纹改善剂涂布组，与比较例1或2的仅涂布基剂的组比较， 显示低的皱纹评分值，表明本发明的皱纹改善剂是有效的。
(胶原蛋白含量评价结果)
组 羟基脯氨酸量(平均值±SE) 实施例1(非洲豆蔻萃取物) 6.49±0.41 比较例1(仅基剂) 5.64±0.35
以实施例1的非洲豆蔻萃取物为有效成分的皱纹改善剂涂布组与仅基 剂的比较例1涂布组比较，显示高胶原蛋白含量(羟基脯氨酸量)，对于 因光老化所减少的真皮胶原蛋白量，表明本发明的皱纹改善剂是有效的。
由上述试验结果表明，以实施例1至3的非洲豆蔻萃取物、豆蔻液、 乙酰化非洲豆蔻萃取物为有效成分的本发明的皱纹改善剂，具有改善因光 老化所引起的皱纹的效果。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例4评价辣味
关于制造例2所制造、精制的豆蔻液的辣味，进行感觉评估。使用辣 椒的辣味成分的辣椒素作为比较对象。以蒸馏水稀释豆蔻液及辣椒素，制 作10-8mol/L至10-3mol/L的试验液。将这些以浓度从低往高的顺序，进行 感觉评价，感到辣味的浓度为阀值。由下述结果可知，相对于辣椒素的阀 值为10-7mol/L附近，而豆蔻液为10-4mol/L，可知豆蔻液辣味是辣椒素辣 味的1/1000程度的微弱辣味。此结果显示，本发明的饮食品组合物是适 合于饮食。
评价浓度(mol/L) 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 辣椒素 +++ ++ + ± ± - 豆蔻液 + ± - - - -
(注)+++ 感到明显强烈的辣味
++ 感到相当辛辣
+ 稍感到辣味
± 感到微辣
- 未感到辣味
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例5脂肪分解促进效果
(试验方法)
将自大日本制药(股)购入的小鼠3T3-L1细胞，依据Ensler等人 的方法(Ensler K.et al.，Biochim.Biophys.Acta.， 1581：36-48(2002))，于24孔培养皿，在5％(v/v)CO2的气氛下，以37℃ 培养，将其作为成熟脂肪细胞，使用于试验。添加所定浓度的试验试样于 添加了牛血清白蛋白及降肾上腺素(最终浓度3×10-8mol/L)的DMEM培养 基(Dulbecco’s Modified Eagle Media)，调制试验培养基，使上述成熟 脂肪细胞于试验培养基中反应90分钟。反应后，对培养基中游离的甘油， 使用F试剂组·甘油(Roche社制)，由酶免疫测定法定量。
以甘油的定量值为依据，根据下式算出脂肪分解促进率，将其作为脂 肪分解促进效果的指标。
脂肪分解促进率(％)＝[A/B]×100
(A：添加试验试样时的甘油量，B：对照组(未添加试验试样)的甘油量) (试验结果)
将制造例1及2所制造的非洲豆蔻萃取物及豆蔻液的脂肪分解促进效 果，通过上述脂肪分解试验所评价的结果如下所示。使用姜酮及咖啡因作 为比较对照。
试验试样 试验浓度 (质量％) 脂肪分解促进率(％) (平均值±SE) 有意差 (相对于对照组) 非洲豆蔻 0.01 119.40±14.03 -(n.s.)
萃取物 0.10 383.45±35.12 +(p＜0.001) 豆蔻液 0.10 554.68±107.62 +(p＜0.001) 姜酮 0.10 191.85±69.83 咖啡因 0.10 234.93±11.23 +(p＜0.05)
制造例1所得的非洲豆蔻萃取物及制造例2所得的豆蔻液的脂肪分解 促进率，明显地比比较例所使用的姜酮及咖啡因高，表明非洲豆蔻萃取物 及豆蔻液具有高脂肪分解促进作用。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，用 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例6抑制体重增加的试验
(试验方法)
使用2组的每1组6只ICR系小鼠(公，4周龄大)，对照组是给与如 下述配合组成的高脂肪饲料，试验组是给与配合1质量％的制造例1所得 的非洲豆蔻萃取物于高脂肪饲料中的试验试样，分别饲育6周。测定试验 开始时及开始后第6周的体重，以体重增加量为指标，评价组间的差异， 判定抑制体重增加的效果。另外，饲料及水是自由摄取。
(高脂肪饲料配合组成)
配合成分 配合量(质量％) 牛脂 40 玉米淀粉 10 砂糖 9 矿物质*1 4 维生素*2 1 酪蛋白 剩余部分
*1矿物质混合物(ICN社制)
*2维生素混合物(ICN社制)
(试验结果)
结果如下所示。
组 体重增加量(g) (平均值±SE) 有意差 (vs对照组) 对照组 26.4±5.3 试验组 14.9±1.5 +(p＜0.05)
由上述结果表明，摄取高脂肪食的体重增加量，通过在高脂肪饲料中 配合作为本发明的脂肪分解促进剂的非洲豆蔻萃取物，显示有意义地降 低。
本发明中，通过配合通式(1)所示的化合物、得自非洲豆蔻萃取物， 尤其其种子的萃取物及/或该萃取物的酰化处理物，可提供各种皮肤外用 组合物及饮食物组合物。以下虽举该例，但本发明并不局限于这些。 实施例7、8、比较例3(润肤液)
依据常法调制下述组成的润肤液，以其作为试样，由下述操作评价皱 纹改善效果。有鱼尾纹的健康者(女性，41至65岁，分别对实施例7或 实施例8各10名)作为试验者，分别将实施例7或实施例8及比较例3 的润肤液，在左右任一侧，在早上洗脸后及傍晚洗澡后的1天2次，连续 2个月(60天)，涂布约0.2ml于眼尾部分(各试样均以眼尾为中心，约 4cm2，2×2cm)。接着，在最后涂布后，回答关于左右眼尾部分皮肤(皱纹) 状态的问卷。
(组成)
原料成分 配合量(％) 实施例7 实施例8 比较例3 (1)丁二醇 30.0 30.0 30.0 (2)聚环氧乙烷(20)山梨糖醇酐单酯 0.5 0.5 0.5 单月桂酸酯 (3)丙二醇 20.0 20.0 20.0
(4)甘油 10.0 10.0 10.0 (5)对羟基苯甲酸甲酯 0.1 0.1 0. (6)乙醇 7.0 7.0 7.0 (7)非洲豆蔻萃取物(制造例1) 1.0 - - (8)豆蔻液(制造例2) - 1.0 - (9)精制水 剩余量 剩余量 剩余量
以问卷结果为根据，在关于皮肤(皱纹)状态的各评价项目，回答实 施例7或实施例8的润肤液比比较例3有效的人数如下所示。
评估项目 实施例7(人数) 实施例8(人数) 皱纹变得不明显 5 3 皮肤变得柔软 4 3 皮肤有张力 5 4 皮肤有光泽 3 5 皮肤变得明亮 4 3
由本试验结果，实施例7及实施例8的润肤液与比较例3比较，明显 地改善皱纹，进而也改善由光老化而恶化的柔软性或色调。另外，认为无 因本发明的润肤液所引起的刺激或发痒等的皮肤异常。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例9(润肤霜)
事先问卷调查因有眼尾纹的而烦恼的20名健康者(女性，50至55岁)， 使用由常法调制了配合有下述组成的非洲豆蔻萃取物及豆蔻液或乙酰化 非洲豆蔻萃取物的润肤霜，让上述健康者每1天使用约0.5g上述润肤霜1 周以上，进行问卷调查。
组成
原料成分 配合量(％) (1)蜜蜡 2.0 (2)硬脂酸 5.0 (3)硬脂醇 5.0 (4)还原含水羊毛脂 2.0 (5)角鲨烯 20.0 (6)山梨糖醇酐单硬脂酸酯 3.0 (7)聚环氧乙烷(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯 3.0 (8)丙二醇 5.0 (9)对羟基苯甲酸丙酯 0.2 (10)精制水 剩余量 (11)非洲豆蔻萃取物(制造例1) 1.0 (12)豆蔻液(制造例2)或乙酰化非洲豆蔻萃取物(制造 1.0 例3)
问卷调查的结果如下所示。另外，结果是以各项目，与使用前比较， 使用后认为如此的人数。
评估项目 人数(名) 皱纹变得不明显 15 皱纹大小减少 16 皱纹数量减少 7 皱纹增加 0
由本试验结果显示，对实施例9的润肤霜，几乎全体试验者认为与使 用前比较，觉得皱纹变得不明显，其主要原因是与皱纹数量相比通过减轻 皱纹大小，因光老化而引起的皱纹得以改善。另外，认为无因本发明的润 肤霜所引起的刺激或发痒等的皮肤异常。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例10、11、比较例4至7(口香糖)
制造下述组成的口香糖，让20岁左右的体内脂肪率为35％以上的女 性各组30名，摄取口香糖1个月(15g/天)，体内脂肪率比原本的体内脂 肪率降低5％以上时，则评价为体内脂肪减少者。
成分 配合量(质量％) 实施例10 比较例4 比较例5 (1)口香糖基材 20 20 20 (2)麦芽糖醇 73.5 74.5 70.5 (3)还原糖稀 4 4 4 (4)苹果香料 0.5 0.5 0.5 (5)丝兰萃取物*1 1 1 5 (6)非洲豆蔻萃取物(制造例1) 1 - - 评价：体内脂肪减少者数(人) 24 9 21
成分 配合量(质量％) 实施例11 比较例6 比较例7 (1)口香糖基材 20 20 20 (2)麦芽糖醇 73.5 74.5 70.5 (3)还原糖稀 4 4 4 (4)苹果香料 0.5 0.5 0.5 (5)丝兰萃取物*1 1 1 5 (6)豆蔻液(制造例2) 1 - - 评估：体内脂肪减少者数(人) 24 10 15
*1：「丝兰皂角苷50M」(常盘植物化学研究所制)
(含有45～50质量％的皂角苷)
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例12(锭果)
制造下述组成的锭果，1天3锭(0.5g/锭)，以与上述实施例10及 11相同的条件，使试验者摄取后进行评价。
成分 配合量 (质量％) (1)山梨糖醇 85.9 (2)蔗糖脂肪酸酯 6 (3)覆盆子香料 0.1 (4)丝兰萃取物*1 3 (5)非洲豆蔻萃取物(制造例1) 5 评价：体脂肪减少者数(人) 26
成分 配合量 (质量％) (1)山梨糖醇 85.9 (2)蔗糖脂肪酸酯 6 (3)覆盆子香料 0.1 (4)丝兰萃取物*1 3 (5)豆蔻液(制造例2) 5 评价：体内脂肪减少者数(人) 23
*1：「丝兰皂角苷50M」(常盘植物化学研究所制)
(含有45～50质量％的皂角苷)
由上述评估结果表明，上述实施例的饮食品组合物(口香糖及锭果)， 显示明显的降低体内脂肪的作用。另外，本发明的饮食品组合物容易摄取， 嗜好性优异，即使长期也不厌倦，为适合连续食用的饮食品组合物。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
实施例13、14、比较例8、9(凝胶状瘦身用皮肤化妆品)
依据常法，以如下所示的组成，分别地混合溶解A、B各成分后，由 添加、搅拌B成分于A成分，调制凝胶状瘦身用皮肤化妆品。
成分 配合量(质量％) 实施例13 比较例8 A成分 (1)非洲豆蔻萃取物(制造例1) 3.0 - (2)甘油 10.0 10.0 (3)羧乙烯基聚合物 0.3 0.3 (4)依地酸二钠 0.1 0.1 (5)精制水 剩余量 剩余量 (6)二异丙醇胺 1.0 1.0 (7)三十碳烷 10.0 10.0 B成分 (8)聚环氧乙烷(60)硬化蓖麻油 0.8 0.8 (9)鹿角菜胶 3.0 3.0 (10)黄原胶 3.0 3.0 (11)聚乙烯醇 2.0 2.0 (12)乙醇 45.0 45.0 (13)薄荷醇 0.1 0.1 (14)香料 适量 适量 评价：紧实效果(人) 16 5
成分 配合量(质量％) 实施例14 比较例9 A成分 (1)豆蔻液(制造例2) 3.0 - (2)甘油 10.0 10.0 (3)羧乙烯基聚合物 0.3 0.3 (4)依地酸二钠 0.1 0.1 (5)精制水 剩余量 剩余量 (6)二异丙醇胺 1.0 1.0 (7)三十碳烷 10.0 10.0 B成分 (8)聚环氧乙烷(60)硬化蓖麻油 0.8 0.8 (9)鹿角菜胶 3.0 3.0 (10)黄原胶 3.0 3.0 (11)聚乙烯醇 2.0 2.0 (12)乙醇 45.0 45.0 (13)薄荷醇 0.1 0.1 (14)香料 适量 适量 评价：紧实效果(人) 14 3
将上述凝胶状瘦身用皮肤化妆品，分别涂布于试验评价者各组20名 的腹部及大腿部约2g，1天2次，连续使用3周，对于瘦身效果，进行问 卷调查。如上述评价结果，与连续使用前相比较，回答腹部、大腿部变紧 实的人数是在使用本发明的凝胶状瘦身用皮肤化妆品的小组中明显为多。 另外，关于使用时的芳香等的嗜好性、刺激等，本发明的凝胶状瘦身用皮 肤化妆品并无特别的问题。
另外，使用制造例4所得的豆蔻液以取代制造例2所得的豆蔻液，以 与上述相同的方法进行试验时，得到相同的效果。
本实验例所使用的香料的组成如下述表1所示。
[表1]
香料处方 成分 质量‰ 成分 质量‰ 萜品醇 10.00 香草醛 2.00 乙酸萜品酯 2.00 乙基香草醛 0.10 表二氢茉莉酮酸甲酯(セピォネ一ト) 60.00 麝香酮 0.50 甲基二氢茉莉酮酸酯 250.00 乙烯基十三酸酯 42.00 吲哚 0.05 4，6，6，7，8，8-六甲基-1，3，4，6，7，8-六 氢环戊苯并吡喃 60.00 2-甲基-3-(3，4-亚甲基二氧基-苯基 )-丙醇 3.00 环十五内酯(cyclopentadecanolid) 20.00 羟基香茅醛 20.00 麝香梨内酯 1.00 羟基香茅醇 10.00 γ-十一碳酸内酯 0.40 对叔丁基-α-甲基氢化肉桂醛 35.00 γ-癸内酯 0.10 4-(4-羟基-4-甲基-戊基)-3-环己烯 -1-羧基醛 75.00 4-(4-羧基苯基)-2-丁酮 0.50 3-甲基-5-苯基戊醇 20.00 酮麝香 0.10 苯基乙醇 10.00 粪臭素 0.01 α-紫罗酮 10.00 顺式茉莉酮 0.05 β-紫罗酮 20.00 苯乙基乙酸酯 0.10 γ-甲基紫罗酮 10.00 灵猫酮 0.20 二氢-β-紫罗酮 25.00 γ-壬内酯 0.05 苄基水杨酸酯 150.00 α-檀香醇 0.20 顺式-3-己烯基水杨酸酯 30.00 β-檀香醇 0.20 丁子香酚 0.80 丁子香乙酸酯 0.10 肉桂醇 5.00 α-己基肉桂醛 20.00 肉桂醛 0.50 α-二氢大马酮 0.04 愈疮木醇醋酸酯 1.00 β-二氢大马酮 0.02 愈疮木醇 0.50 β-大马酮 0.01 乙酸柏木酯 5.00 δ-二氢大马酮 0.01 甲基柏木酮 30.00 玫瑰净油 0.50 6，7-二氢-1，1，2，3，3-五甲基-4(5H)- 茚满 2.00 玫瑰油 4.50 乙酸香根酯 10.00 檀香油 2.00 3-甲基-5-(2，3，3-三甲基-3-环戊烯 -1-基)-戊烷-2-醇 2.00 岩蔷薇净油 0.05 2-乙基-4-(2，3，3-三甲基-3-环戊烯 -1-基)-2-丁烯-1-醇 0.80 Cystabsolute(シストァブソリコ一ト) 0.01 异冰片环己醇 35.00 岩兰草油 0.50 胡椒醛 10.00 愈疮木油 0.10 香豆素 2.00 合计 1000.00
产业上利用性
由本发明提供改善随着老化，尤其在露出部位所发生的皱纹的改善效 果优异，具有使皮肤保持在皮肤科学上及美容上健康状态的效果，同时安 全性或安定性也优异的皱纹改善剂，及配合该皱纹改善剂的皮肤外用组合 物，以及促进全身或局部的脂肪组织的减少而改善肥胖体质，或由防止该 组织的增大而有效地抑制或防止肥胖，并且抑制损害嗜好性的刺激或芳香 的脂肪分解促进剂，配合了该脂肪分解促进剂的皮肤外用组合物及饮食品 组合物。