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1、(10)申请公布号 CN 102550407 A (43)申请公布日 2012.07.11 CN 102550407 A *CN102550407A* (21)申请号 201110442505.X (22)申请日 2011.12.26 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 溧阳市澳谷信息科技有限公司 地址 213300 江苏省常州市溧阳市溧城镇南 环西路 98 号 B-5 (72)发明人 杜春林 (54) 发明名称 地钱的无性繁育方法 (57) 摘要 本发明提供了一种新的地钱繁育方法。所述 的方法是利用液体培养基对地钱进行繁育。在液 体培养基中设置塑料支架， 使地钱的组织块不浸。
2、 没在培养基中。并且对地钱组织块长出假根之前 和之后分别管理， 从而达到快速高效繁育地钱的 目的。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种地钱的无性繁育方法， 其特种在于该方法包括以下步骤 ： (1) 配制 MS 或 B5 液体培养基 ； (2) 获取培养组织块 将地钱的叶状体剪碎， 剪碎的叶状体组织块的大小控制在22mm-33mm。 利用粗眼的 土壤筛可以将过小的组织块筛选掉 ； (3) 组织块的消毒 首先用自来水将剪碎的。
3、组织块洗干净， 然后在超净台上用 70的酒精浸泡 1 分钟， 再 用 0.1的升汞溶液杀菌 5 分钟， 然后使用无菌水冲洗 5 次， 然后用无菌吸水纸洗干 ； (4) 假根的诱导 将步骤 (1) 中所配置的液体培养基倒入大培养皿， 将塑料支架的高度调节至与培养基 高度相同， 然后将塑料支架放置于培养皿中， 将步骤 (3) 中所获得的无菌组织块放置于塑 料支架上， 让组织块的底部能接触到培养基， 并且保证组织块没有被浸没在培养基中， 温度 控制在 20 22左右， 培养 4 6 天， 所培养的组织块从碎片边缘一方面长出叶状体带有 生长点的顶端部分， 另一方面长出假根组织 ； (5) 叶状体的增殖。
4、 当地钱的组织块长出假根组织后， 将塑料支架略微调高， 使假根浸没在培养基中， 使叶 状体的其他部分不接触培养基， 这样能使叶状体的茎和叶更好地呼吸， 更有效率地利用假 根从培养基中吸收的养分， 更重要的是， 这样能避免叶状体发生腐烂死亡的现象， 将温度控 制在 20 25， 培养 8 10 天， 待叶状体的宽度达到 1 厘米， 即可收获。 2. 权利要求 1 中所述的地钱的无性繁育方法， 其特种在于步骤 (2) 中使用的地钱可以 是地钱 (M.polymorpha)， 裂托地钱 (M.cuneiloba) 和风兜地钱 (M.diptera)。 3. 权利要求 1 或 2 中所述的地钱的无性繁。
5、育方法， 其特种在于其中所述的塑料支架的 平面上密集地设置孔洞， 孔洞的大小为直径 0.5 毫米到 1 毫米。 4. 权利要求 1 或 2 或 3 中所述的地钱的无性繁育方法， 其特种在于其中所述的塑料支 架的支撑腿具有内外两层结构， 内层与外层可以相对活动， 内外层依靠相互之间的摩擦力 定位。 权 利 要 求 书 CN 102550407 A 2 1/4 页 3 地钱的无性繁育方法 技术领域 0001 本发明涉及一种地钱的繁育方法， 特别涉及一种地钱的无性繁育方法。 背景技术 0002 地钱属于苔藓类植物， 从植物分类学的角度属于苔藓植物门， 苔纲， 地钱目， 地钱 科， 地钱属。 0003。
6、 地钱整体入药， 味淡性凉， 入脾肺经。有祛热、 收敛、 益气、 清补、 明目等功效。可以 治疗火眼夜盲、 烫伤烧伤、 肺热咳嗽和久痢脱肛。以色列魏茨曼研究的科学家研究发现， 地 钱所含的一种成分可以抑制人大脑中的乙酰胆碱酯酶的活性， 从而能对老年痴呆症产生疗 效。 0004 作为食物时， 其又具有显著的食疗作用 ： 0005 1.降脂明目。 地耳是一种很好的低脂肪营养保健菜， 能降脂减肥， 同时， 对目赤、 夜 盲、 脱肛等病症也有一定疗效。 0006 2.清热降火。 地钱性寒而滑， 具有清热解毒的功效， 内服外用， 可辅助治疗烧伤、 烫 伤及疮疡肿毒。 0007 3. 补充营养。地钱含有丰。
7、富的蛋白质、 钙、 磷、 铁等， 可为人体提供多种营养成分， 具有补虚益气， 滋养肝肾的作用。因此地钱具有良好的市场价值。 0008 目前的地钱繁育技术多采用花盆土壤组织块培养方法。 这种方法由于需要准备花 盆、 土壤等， 一方面占用空间大， 移动起来比较麻烦， 另一方面繁育效率不高。 发明内容 0009 鉴于背景技术中提到的目前地钱繁育技术的缺点， 本发明提供了一种新的地钱繁 育方法。 0010 众所周知， 地钱属于苔类植物， 其整个生命周期中包含孢子体和配子体两大阶段， 而具有经济价值的是配子体 ( 又称叶状体 )。地钱的配子体具有茎、 叶结构， 但是不具备植 物学意义上的根。 配子体的茎。
8、在成长过程中慢慢形成类似根状结构， 该结构被称为假根。 配 子体就是通过假根来吸收生长所需的养分。由于配子体的茎叶均无法在水中呼吸， 因此到 目前为止对地钱的繁育均使用土壤栽培或者固体培养基培养的方法。 0011 本发明所述的方法则是利用液体培养基对地钱进行繁育。具体的繁育方法如下 ： 0012 (1) 配制 MS 或 B5 液体培养基。具体配方如下 ： 0013 MS 液体培养基 ： 硝酸钾 1900mg/l， 硝酸铵 1650mg/l， 磷酸二氢钾 170mg/l， 硫酸镁 370mg/l， 氯化钙440mg/l， 碘化钾0.83mg/l， 硼酸6.2mg/l， 硫酸锰22.3mg/l， 。
9、硫酸锌8.6mg/ l， 钼酸钠0.25mg/l， 硫酸铜0.025mg/l， 氯化钴0.025mg/l， 乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l， 硫 酸亚铁 27.8mg/l， 肌醇 100mg/l， 甘氨酸 2mg/l， 盐酸硫胺素 0.1mg/l， 盐酸吡哆醇 0.5mg/l， 烟酸 0.5mg/l。 0014 B5 液体培养基 ： 硝酸钾 2500mg/l， 硫酸镁 250mg/l， 氯化钙 150mg/l， 硫酸铵 说 明 书 CN 102550407 A 3 2/4 页 4 134mg/l， 碘化钾 0.75mg/l， 硼酸 3.0mg/l， 硫酸锰 10mg/l， 硫酸锌 2.0mg。
10、/l， 钼酸钠 0.25mg/ l， 氯化钴0.025mg/l， 硫酸铜0.025mg/l， 乙二胺四乙酸二钠37.3mg/l， 硫酸亚铁27.8mg/l， 肌醇 100mg/l， 烟酸 1.0mg/l， 盐酸吡哆醇 1.0mg/l， 盐酸硫铵 10mg/l， 0015 (2) 获取培养组织块 0016 取 材 可 以 是 地 钱 (M.polymorpha)， 裂 托 地 钱 (M.cuneiloba) 和 风 兜 地 钱 (M.diptera)等。 将地钱的叶状体剪碎， 剪碎的叶状体组织块的大小控制在22mm-33mm。 利用粗眼的土壤筛可以将过小的组织块筛选掉。 0017 (3) 组织块。
11、的消毒 0018 首先用自来水将剪碎的组织块洗干净， 然后在超净台上用 70的酒精浸泡 1 分 钟， 再用 0.1的升汞溶液杀菌 5 分钟， 然后使用无菌水冲洗 5 次， 然后用无菌吸水纸洗干。 0019 (4) 假根的诱导 0020 将步骤 (1) 中所配置的液体培养基倒入大培养皿， 将塑料支架的高度调节至与培 养基高度相同， 然后将塑料支架放置于培养皿中。将步骤 (3) 中所获得的无菌组织块放置 于塑料支架上， 让组织块的底部能接触到培养基。 并且保证组织块没有被浸没在培养基中。 温度控制在 20 22左右， 培养 4 6 天。所培养的组织块从碎片边缘一方面长出叶状体 带有生长点的顶端部分。
12、， 另一方面长出假根组织。 0021 (5) 叶状体的增殖 0022 当地钱的组织块长出假根组织后， 将塑料支架略微调高， 使假根浸没在培养基中， 使叶状体的其他部分不接触培养基。这样能使叶状体的茎和叶更好地呼吸， 更有效率地利 用假根从培养基中吸收的养分。更重要的是， 这样能避免叶状体发生腐烂死亡的现象。将 温度控制在 20 25， 培养 8 10 天， 待叶状体的宽度达到 1 厘米， 即可收获。 0023 其中步骤 (3) 中所述的塑料支架的作用在于解决待培养的组织块不能浸没在液 体中这一问题。所使用的塑料支架的平面上密集地设置孔洞， 孔洞的大小以直径 0.5 毫米 到 1 毫米为宜。 0。
13、024 优选地， 所述的塑料支架的支撑腿具有内外两层结构， 内层与外层可以相对活动， 内外层依靠相互之间的摩擦力定位。这样就可以方便地调节塑料支架的高度， 以满足实际 生产的需要。 0025 本发明所述的方法为地钱的无性繁育提供了一种新的方法。 利用液体培养基对地 钱进行繁育， 能够节省空间， 节约成本。而且由于没有接触土壤， 通过这种方法获得的地钱 非常干净， 在作为食材进行加工时特别省时省力。 0026 另外， 由于植物从液体培养基中吸收养分的效率要高于从土壤或固体培养基中吸 收养分， 因此使用本发明所述的方法繁育地钱， 其成熟周期比使用土壤或固体培养基进行 培育要快。根据实验数据， 本发。
14、明所述的方法繁育的地钱大约 15 天成熟， 而土壤或固体培 养基培育的地钱大约 20 天成熟， 这样一来缩短了繁育周期， 从另一方面提高了产量。 附图说明 0027 图 1 是本发明所述的方法中将塑料支架放置于培养皿的示意图。 0028 图 2 是本发明所述的方法中的塑料支架的结构示意图。 0029 其中 1 是培养皿， 2 是塑料支架， 3 是塑料支架的支撑腿。 说 明 书 CN 102550407 A 4 3/4 页 5 具体实施例 0030 实施例 1 0031 (1) 配制 MS 液体培养基。具体配方如下 ： 0032 硝酸钾 1900mg/l， 硝酸铵 1650mg/l， 磷酸二氢钾。
15、 170mg/l， 硫酸镁 370mg/l， 氯化 钙 440mg/l， 碘化钾 0.83mg/l， 硼酸 6.2mg/l， 硫酸锰 22.3mg/l， 硫酸锌 8.6mg/l， 钼酸钠 0.25mg/l， 硫酸铜 0.025mg/l， 氯化钴 0.025mg/l， 乙二胺四乙酸二钠 37.3mg/l， 硫酸亚铁 27.8mg/l， 肌醇 100mg/l， 甘氨酸 2mg/l， 盐酸硫胺素 0.1mg/l， 盐酸吡哆醇 0.5mg/l， 烟酸 0.5mg/l。 0033 (2) 获取培养组织块 0034 取材地钱 (M.polymorpha)。将地钱的叶状体剪碎为 22mm 的组织块。利用粗眼。
16、 的土壤筛可以将过小的组织块筛选掉。 0035 (3) 组织块的消毒 0036 首先用自来水将剪碎的组织块洗干净， 然后在超净台上用 70的酒精浸泡 1 分 钟， 再用 0.1的升汞溶液杀菌 5 分钟， 然后使用无菌水冲洗 5 次， 然后用无菌吸水纸洗干。 0037 (4) 假根的诱导 0038 将步骤 (1) 中所配置的液体培养基倒入大培养皿， 将塑料支架的高度调节至与培 养基高度相同， 然后将塑料支架放置于培养皿中。将步骤 (3) 中所获得的无菌组织块放置 于塑料支架上， 让组织块的底部能接触到培养基。 并且保证组织块没有被浸没在培养基中。 温度控制在 20左右， 培养 6 天。所培养的组。
17、织块从碎片边缘一方面长出叶状体带有生长 点的顶端部分， 另一方面长出假根组织。 0039 (5) 叶状体的增殖 0040 当地钱的组织块长出假根组织后， 将塑料支架略微调高， 使假根浸没在培养基中， 使叶状体的其他部分不接触培养基。这样能使叶状体的茎和叶更好地呼吸， 更有效率地利 用假根从培养基中吸收的养分。更重要的是， 这样能避免叶状体发生腐烂死亡的现象。将 温度控制在 25， 培养 8 天， 叶状体的宽度达到 1 厘米， 进行收获。 0041 实施例 2 0042 (1) 配制 B5 液体培养基。具体配方如下 ： 0043 硝 酸 钾 2500mg/l， 硫 酸 镁 250mg/l， 氯 。
18、化 钙 150mg/l， 硫 酸 铵 134mg/l， 碘 化 钾 0.75mg/l， 硼酸 3.0mg/l， 硫酸锰 10mg/l， 硫酸锌 2.0mg/l， 钼酸钠 0.25mg/l， 氯化钴 0.025mg/l， 硫酸铜 0.025mg/l， 乙二胺四乙酸二钠 37.3mg/l， 硫酸亚铁 27.8mg/l， 肌醇 100mg/l， 烟酸 1.0mg/l， 盐酸吡哆醇 1.0mg/l， 盐酸硫铵 10mg/l。 0044 (2) 获取培养组织块 0045 取材裂托地钱 (M.cuneiloba)。将地钱的叶状体剪碎为 22mm 的组织块。利用粗 眼的土壤筛可以将过小的组织块筛选掉。 00。
19、46 (3) 组织块的消毒 0047 首先用自来水将剪碎的组织块洗干净， 然后在超净台上用 70的酒精浸泡 1 分 钟， 再用 0.1的升汞溶液杀菌 5 分钟， 然后使用无菌水冲洗 5 次， 然后用无菌吸水纸洗干。 0048 (4) 假根的诱导 说 明 书 CN 102550407 A 5 4/4 页 6 0049 将步骤 (1) 中所配置的液体培养基倒入大培养皿， 将塑料支架的高度调节至与培 养基高度相同， 然后将塑料支架放置于培养皿中。将步骤 (3) 中所获得的无菌组织块放置 于塑料支架上， 让组织块的底部能接触到培养基。 并且保证组织块没有被浸没在培养基中。 温度控制在 22左右， 培养。
20、 6 天。所培养的组织块从碎片边缘一方面长出叶状体带有生长 点的顶端部分， 另一方面长出假根组织。 0050 (5) 叶状体的增殖 0051 当地钱的组织块长出假根组织后， 将塑料支架略微调高， 使假根浸没在培养基中， 使叶状体的其他部分不接触培养基。这样能使叶状体的茎和叶更好地呼吸， 更有效率地利 用假根从培养基中吸收的养分。更重要的是， 这样能避免叶状体发生腐烂死亡的现象。将 温度控制在 23， 培养 9 天， 叶状体的宽度达到 1 厘米， 进行收获。 0052 本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内 容作出替换或变型， 但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的， 这些替换或变型 均在本发明要求保护的权利范围内。 说 明 书 CN 102550407 A 6 1/1 页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102550407 A 7 。