技术领域
本发明属于化工领域,尤其涉及一种化妆品,具体来说是一种中草药美白膏及其制备方法。
背景技术
从20世纪70年代借助物理性的遮盖美白向黑色素还原的生理性美白转变,人们对皮肤美白的观念发生着根本性的变化。美白作用与黑色素是密不可分的,黑色素首先在表皮基底层生成,然后沿黑色素细胞的树突传递至角化细胞,随角化细胞的新陈代谢逐渐堆积于表皮,造成黑色素沉积,因此可以通过抑制黑色素生成,抑制黑色素传递,击碎黑色素和清理皮层实现美白。利用生物制剂、中草药开发能抑制酪氨酸酶的活性,防止黑色素形成,安全而有效的去除皮肤色斑的生理性美白化妆品,是21世纪美容科学的重要领域。
传统的化妆品常含有酸、碱、盐、表面活性剂等化学性成分。这些化学性物质作用于皮肤、器官的黏膜等后经常引起刺激性皮肤病变,成为刺激性接触皮炎,引起皮肤损害,也使皮肤局部迅速出现炎症。
中草药是我国古代医家留给后人的一个重要宝库,中国是传统中医中药的发源地,对中草药在保健美容方面的应用己有三千多年的历史,在历代医学经典著作,如战国时期的《山海经》、秦汉三国时期的《神农本草经》、唐代孙思遂的《千金翼方》、宋代陈昭遇、王怀隐等编著的《太平圣惠方》、明代著名药学家李时珍的《本草纲目》、清朝张璐的《千金方衍义》、赵学敏的《本草纲日拾遗》等都设有美容专篇,从理论到实践都有深刻的阐述,并辑录了大量中药美容养颜的实例和配方。古代医书中中药美容内容浩瀚广博,是祖先遗留给现代人的宝贵财富。
中草药可以通过下调酪氨酸酶基因表达、酶蛋白合成、氧化活性等环节,达到减少黑素合成的效果。现在很多研究工作多围绕着酪氨酸酶这个中心靶点展开,也有学者已注意到色素代谢的其它环节。
发明内容
针对现有技术中的上述技术问题,本发明提供了一种中草药美白膏及其制备方法,所述的这种中草药美白膏及其制备方法解决了现有技术中的化妆品经常引起刺激性皮肤病变,成为刺激性接触皮炎,引起皮肤损害,也使皮肤局部迅速出现炎症的技术问题。
本发明一种中草药美白膏,包括用于抑制黑色素生成的中草药提取液、表面活性剂、丙二醇、硬脂酸甘油脂、凡士林和水,中草药提取液、表面活性剂、丙二醇、硬脂酸甘油脂、凡士林和水的质量比为10~15:20~30:30~50:20~30:40~60:100~150,所述中草药提取液的原料药包括鸡血藤、苍术、五倍子、卷柏、沙棘、菟丝子、黄精、薏苡仁、狗肝菜、红景天、白芷、鸡筋参、紫草、绵萆薢、飞扬草、沉香、蒲黄、竹茹、路路通和南沙参,所述鸡血藤、苍术、五倍子、卷柏、沙棘、菟丝子、黄精、薏苡仁、狗肝菜、红景天、白芷、鸡筋参、紫草、绵萆薢、飞扬草、沉香、蒲黄、竹茹、路路通和南沙参的重量比为30~40:10~20:15~25:10~20:10~20:20~30:25~35:10~20:10~20:15~25:45~55:15~25:10~20、:15~25:10~20:10~20:25~35:15~25:5~15:10~20。
进一步的,所述鸡血藤、苍术、五倍子、卷柏、沙棘、菟丝子、黄精、薏苡仁、狗肝菜、红景天、白芷、鸡筋参、紫草、绵萆薢、飞扬草、沉香、蒲黄、竹茹、路路通和南沙参的重量比为33~37:13~17:18~22:13~17:13~17:23~27:28~32:13~17:13~17:18~22:48~52:18~22:13~17:18~22:13~17:13~17:28~32:18~22:8~12:13~17。
进一步的,所述鸡血藤、苍术、五倍子、卷柏、沙棘、菟丝子、黄精、薏苡仁、狗肝菜、红景天、白芷、鸡筋参、紫草、绵萆薢、飞扬草、沉香、蒲黄、竹茹、路路通和南沙参的重量比为35:15:20:15:15:25:30:15:15:20:50:20:15:20:15:15:30:20:10:15。
进一步的,所述表面活性剂为双子表面活性剂,其疏水基部分由环氧树脂链段形成,聚合物具有以下通式:
x,y,z为从1到5的整数,R为甲基、乙基或苄基,E代表环氧树脂,其结构可表
示为:
m为从1到5的整数。
进一步的,所述的环氧树脂为E51。
进一步的,所述第一有机溶剂是C1~C3醇中的一种或几种的组合,所述的环氧树脂与有机溶剂的重量比为2.0:1~4.0:1。
进一步的,所述的多胺为乙二胺,二乙烯三胺,三乙烯四胺、或者四乙烯五胺,所述的第二有机溶剂是C1~C3醇中的一种或几种,多胺与第二有机溶剂的重量比为1.0:1~2.0:1。
进一步的,所述环氧树脂中环氧的摩尔数与多胺的摩尔数之比为1:1.2~1.8。
进一步的,所述的亚磷酸与多胺中氮原子的摩尔比为1.1~1.5:1,甲醛与亚磷酸的摩尔比为1.2~1.8:1,盐酸与亚磷酸的摩尔比为1.0~3.0:1,氢氧化钠与多胺中氮原子的摩尔比为1.0:1。
进一步的,所述的双子表面活性剂的制备方法包括以下步骤:
第一步,一个制备环氧树脂多胺聚合物的步骤,将环氧树脂加到一个反应器中,加入第一有机溶剂溶解,获得环氧树脂溶液,将多胺溶解于第二有机溶剂中,将获得的多胺溶液再滴加到环氧树脂中,滴加完毕,搅拌1-2小时后减压蒸去溶剂,得到环氧树脂多胺聚合物;
第二步,一个制备磷酸盐双子表面活性剂的步骤,往环氧树脂多胺聚合物中加入亚磷酸和盐酸,升温至70~80℃,往体系中滴加甲醛溶液,搅拌1~2小时后冷却,有不溶物析出,倒出清液,在剧烈搅拌下,往体系里面滴加氢氧化钠溶液,体系渐渐澄清得到磷酸盐双子表面活性剂溶液。
本发明还提供了上述的一种中草药美白膏的制备方法,包括以下步骤:
第一步,制备所述中草药提取液;
第二步,按照重量比称取各物质,将凡士林、硬脂酸甘油酯、表面活性剂置于一个容器中,加热至熔融,温度保持在85-95℃,获得油相;
第三步,将中草药提取液分散于丙二醇中,加入水,并搅拌使之分散,然后加热至60~70℃,搅拌溶解30~60min至透明澄清状,静置以去除表面气泡;降温至30~40℃,待溶解的透明液粘度增大开始呈乳液状,加入第二步获得的油相,继续搅拌30~45min,静置12~24h后即得膏状成品。
进一步的,所述中草药提取液的制备方法包括以下步骤:
第一步,将原料药分别粉碎,放入一个容器内进行混合,得到混合物,加入8~10倍混合物质量的蒸馏水,浸泡5~6h后,加热煮沸3~4h,过滤,获得第一次过滤液;
第二步,在过滤获得的滤渣中再次加入6~8倍混合物的质量的蒸馏水,加热煮沸2~3h,第二次过滤,获得第二次过滤液;
第三步,在第二次过滤获得的滤渣中再加入4~6倍混合物的质量的蒸馏水,加热煮沸1~2h,第三次过滤,获得第三次过滤液;
第四步,合并上述三次过滤液,再次过滤,得滤液,浓缩得到中草药提取液。
各原料药药理如下:
鸡血藤:拉丁名spatholobi caulis,味苦、甘,性温,归肝、肾经,具有扩张血管,补血活血,调经,舒筋活络的功效,主治血虚有淤之月经不调,四肢疼痛不仁,腰膝酸软、疼痛等证。
苍术:味辛、苦,性温,入脾、胃、肝经,有燥湿健脾,祛风胜湿,明目的作用,主要用于湿阻中焦之腹痛泻痢,脾胃不和之腹胀疼痛,呕吐纳呆;肝胃不和之腹胁胀痛、呕吐泛酸;以及寒湿外郁经络之风寒湿痹等证。
五倍子:拉丁名Galla Chinensis,味酸,涩,性寒,归肺、大肠、肾经,具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效,主治:肺虚久咳;自汗盗汗;久痢久泻;脱肛;遗精;白浊;各种出血;痈肿疮苍术疖等证。
卷柏:拉丁名Selaginellae Herba,为卷柏科植物卷柏或垫状卷柏的干燥全草,味辛,性平,归肝、心经,具有活血通经的功效,用于经闭痛经,癓瘕痞块,跌扑损伤,吐血,崩漏,便血,脱肛等证。
沙棘:味酸;涩;性温,具有止咳化痰;健胃消食;活血散瘀的功效。主治咳嗽痰多;肺脓肿;消化不良;食积腹痛;胃痛;肠炎;闭经;跌打瘀肿等证。
菟丝子:味甘、辛,性平,入肝、肾、脾经,有补肾益精,养肝明目的功效,主治肾阳不足之阳痿,遗精早泄,小便频数,头晕耳鸣,肾虚腰疼,妇人带下,胎气不固,肝肾两亏、肝血不足之双目昏花、视物不清,脾肾两虚之便溏腹痛,完谷不化等证。
黄精:拉丁名Polygonati Rhizoma,味甘,性平,入肺、脾、肾经,具有养气养阴,健脾润肺,益肾填精的功效,用于脾胃气阴亏虚,食少无力,阴虚肺燥,干咳少痰,阴虚内热之消渴,肾虚精亏、阳痿遗精、头晕耳鸣、目昏眼花等证。
薏苡仁:性凉,味甘、淡,归脾、胃、肺经。具有健脾渗湿、清热排脓、除痹、利水的功能,用于脾胃虚弱,便溏腹泻,或妇女带下病,脾虚湿盛水肿,小便不利,或脚气肿痛;湿热痹痛,手足拘挛,酸楚疼痛;肺痈咳唾脓痰,或肠痛拘急腹痛。
狗肝菜:为爵床科狗肝菜属植物狗肝菜的全草,味甘,微苦,性寒,归心、肝、肺经,具有清热,凉血,利湿,解毒的功效,主治感冒发热,热病发斑,便血,尿血,崩漏,肺热咳嗽,咽喉肿痛,肝热目赤,小儿惊风,小便淋沥,带下,蛇犬咬伤等证。
鸡筋参:为茜草科虎刺属植物长叶数珠树的根,味微苦、甘,性平,具有补养气血,收敛止血的功效,主治妇女雪崩,肠风下血,体弱血虚等证。
热痱草:味辛、苦,性微温,具有发表祛暑,利湿和中,散风止痒的功效,主治风寒感冒,阴暑头痛,恶心腕痛,痢疾,水肿,痔血,阴痒湿疹,外伤出血,蛇虫咬伤等证。
紫草:性寒,味甘、咸,归心、肝经,具有凉血活血,解毒透疹的功效。用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤。清热凉血,用于麻疹,热病癍疹,湿疹,尿血,血淋,血痢,疮疡,丹毒,烧伤,热结便秘等证。
绵萆薢:拉丁名Dioscoreae Spongiosae Rhizoma,性平,味苦,归肾、胃经,具有利湿去浊,祛风通痹的功效,用于淋病白浊、白带过多、湿热疮毒、腰膝痹痛等证。
飞扬草:拉丁名Euphorbiae Hirate Herba,味微苦、微酸,性凉,具有清热解毒,利湿止痒的功效,用于细菌性痢疾,阿米巴痢疾,肠炎,肠道滴虫,消化不良,支气管炎,肾盂肾炎;外用治湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等证。
沉香:味辛、苦,性温,归脾、胃、肾、肺经,具有降气温中,暖肾纳气的功效,主治气逆喘息,呕吐呃逆,脘腹胀痛,腰膝虚冷,大肠虚秘,小便气淋,男子精冷等证。
蒲黄:味甘,性平,入肝、心包经,具有止血,化瘀,通淋的功效。用于吐血,衄血,咯血,崩漏,外伤出血,经闭痛经,脘腹刺痛,跌扑肿痛,血淋涩痛等证。
竹茹:性微寒,味甘,归肺、胃经,具有清热化痰,除烦止呕的功效,用于痰热咳嗽、胆火挟痰、烦热呕吐、惊悸失眠、中风痰迷、舌强不语、胃热呕吐、妊娠恶阻、胎动不安等证。
路路通:拉丁名Liquidambaris Fructus,味苦,性平,归肝,肾经,具有祛风活络,利水通经的功效,用于关节痹痛,麻木拘挛,水肿胀满,乳少经闭等证。
南沙参:味甘、微苦,性微寒,入肺、胃经,有润肺止咳,养胃生津的作用,主要用于阴虚肺燥、干咳少痰、劳嗽痰血,胃阴不足、口感咽燥、大便秘结、舌红少苔等证,可提高细胞免疫和非特异性免疫力,抑制体液免疫,具有调节免疫平衡的功能。
本发明和已有技术相比,其技术进步是显著的。本发明利用中医理论,提出一种中草药美白膏,实现抑制黑色素的生成,同时,采用中草药美白,对皮肤护理温顺,不会产生强刺激,损害皮肤本身。
附图说明
图1:表面活性剂的红外谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种中草药美白膏,其包括中草药提取液、表面活性剂、丙二醇、硬脂酸甘油脂、凡士林、水。所述中草药美白膏中各原料的重量分别为中草药提取液10g~15g、表面活性剂20g~30g、丙二醇30g~50g、硬脂酸甘油脂20g~30g、凡士林40g~60g、水100g~150g。
优选的,所述中草药美白膏中各原料的重量分别为中草药提取液12g、表面活性剂25g、丙二醇40g、硬脂酸甘油脂25g、凡士林50g、水120g。
本发明还提供了上述中草药美白膏的制备方法,其包括:
第一步,制备所述中草药提取液;
第二步,按重量称取凡士林、硬脂酸甘油酯、表面活性剂置于容器中,加热至熔融,温度保持在90℃,获得油相;
第三步,按重量将中草药提取液分散于丙二醇,进一步加入水,并搅拌使之分散,然后加热至60~70℃,搅拌溶解30~60min至透明澄清状,稍静置以去除表面气泡;降温至30~40℃,待溶解的透明液粘度增大开始呈乳液状,加入第二步获得的油相,继续搅拌30~45min,静置12~24h后即得膏状成品。
具体的,所述中草药提取液的原料药包括鸡血藤、苍术、五倍子、卷柏、沙棘、菟丝子、黄精、薏苡仁、狗肝菜、红景天、白芷、鸡筋参、紫草、绵萆薢、飞扬草、沉香、蒲黄、竹茹、路路通和南沙参,所述中草药提取液仅由上述原料药构成。
所述中草药提取液中各原料药的重量分别为鸡血藤30g~40g、苍术10g~20g、五倍子15g~25g、卷柏10g~20g、沙棘10g~20g、菟丝子20g~30g、黄精25g~35g、薏苡仁10g~20g、狗肝菜10g~20g、红景天15g~25g、白芷45g~55g、鸡筋参15g~25g、紫草10g~20g、绵萆薢15g~25g、飞扬草10g~20g、沉香10g~20g、蒲黄25g~35g、竹茹15g~25g、路路通5g~15g和南沙参10g~20g。
优选的,所述中草药提取液中各原料药的重量分别为鸡血藤33g~37g、苍术13g~17g、五倍子18g~22g、卷柏13g~17g、沙棘13g~17g、菟丝子23g~27g、黄精28g~32g、薏苡仁13g~17g、狗肝菜13g~17g、红景天18g~22g、白芷48g~52g、鸡筋参18g~22g、紫草13g~17g、绵萆薢18g~22g、飞扬草13g~17g、沉香13g~17g、蒲黄28g~32g、竹茹18g~22g、路路通8g~12g和南沙参13g~17g。
最优选的,所述中草药提取液中各原料药的重量分别为鸡血藤35g、苍术15g、五倍子20g、卷柏15g、沙棘15g、菟丝子25g、黄精30g、薏苡仁15g、狗肝菜15g、红景天20g、白芷50g、鸡筋参20g、紫草15g、绵萆薢20g、飞扬草15g、沉香15g、蒲黄30g、竹茹20g、路路通10g和南沙参15g。
所述中草药提取液的制备方法具体为:
第一步,将各原料药分别粉碎,放入容器内进行混合,得到混合物,加入8~10倍混合物的质量的蒸馏水,浸泡5~6h后,加热煮沸3~4h,过滤,获得第一次过滤液;
第二步,在过滤获得的滤渣中再次加入6~8倍混合物的质量的蒸馏水,加热煮沸2~3h,第二次过滤,获得第二次过滤液;
第三步,在第二次过滤获得的滤渣中再加入4~6倍混合物的质量的蒸馏水,加热煮沸1~2h,第三次过滤,获得第三次过滤液;
第四步,合并上述三次过滤液,再次过滤,得滤液,浓缩成0.5g/ml的提取液。
所述表面活性剂为新型双子表面活性剂,其特征为,其疏水基部分由环氧树脂链段形成,聚合物具有以下通式:
x,y,z为从1到5的整数,R为甲基、乙基或苄基。
其中,E代表环氧树脂,其结构可表示为:
m为从1到5的整数,环氧树脂为E51。
本发明解决的第二个技术问题为上述新型双子表面活性剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
第一步,环氧树脂多胺聚合物的制备,将环氧树脂加到反应器中,加入有机溶剂溶解,获得环氧树脂溶液,将多胺溶解于一定的有机溶剂中,将获得的多胺溶液再滴加到环氧树脂中,滴加完毕,搅拌1-2小时后减压蒸去溶剂,得到环氧树脂多胺聚合物;
第二步,磷酸盐双子表面活性剂的制备,往环氧树脂多胺聚合物中加入亚磷酸和盐酸,升温至70~80℃,往体系中滴加36%甲醛溶液,搅拌1~2小时后冷却,有不溶物析出,倒出清液,在剧烈搅拌下,往体系里面滴加10%氢氧化钠溶液,体系渐渐澄清得到磷酸盐双子表面活性剂溶液。
所述第一步中溶解环氧树脂的有机溶剂是C1~C3醇中的一种或几种,作为优选,所述有机溶剂是指甲醇或乙醇或者是两者以任意比例的混合物;环氧树脂与有机溶剂的比例是重量比为2.0:1~4.0:1。
所述第一步中多胺可以为乙二胺,二乙烯三胺,三乙烯四胺,四乙烯五胺,优选乙二胺,溶解多胺的有机溶剂是C1~C3醇中的一种或几种,作为优选,所述有机溶剂是指甲醇或乙醇或者是两者以任意比例的混合物,多胺与有机溶剂的比例是重量比为1.0:1~2.0:1。
所述第一步步中环氧树脂与多胺的比例为环氧树脂中环氧的摩尔数与多胺的摩尔数之比为1:1.2~1.8,优选1:1.5;反应温度为30~80℃,优选60-80℃。
所述第二步中,环氧树脂多胺聚合物先通过Mannich反应,再用氢氧化钠中和得到磷酸盐双子表面活性剂,可以先和卤代乙酸反应,再用氢氧化钠中和得到羧酸盐双子表面活性剂,可以和烷基化试剂反应得到季铵盐双子表面活性剂。
所述第二步中的亚磷酸与环氧树脂多胺聚合物的量为:亚磷酸与多胺中氮原子的摩尔比为1.1~1.5:1,优选1.2:1;甲醛与亚磷酸的摩尔比为1.2~1.8:1,优选1.5:1;盐酸与亚磷酸的摩尔比为1.0~3.0:1,优选2.0:1;氢氧化钠与多胺中氮原子的摩尔比为1.0:1。
所述第二步中的反应温度为60~100℃,优选70~80℃。
将该表面活性剂应用于本发明的美白膏中,具有多个疏水基和多个亲水基。其特殊的结构使得中草药组分充分的发挥了功效。
以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式,借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题,并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
实施例1中草药提取液1
将鸡血藤35g、苍术15g、五倍子20g、卷柏15g、沙棘15g、菟丝子25g、黄精30g、薏苡仁15g、狗肝菜15g、红景天20g、白芷50g、鸡筋参20g、紫草15g、绵萆薢20g、飞扬草15g、沉香15g、蒲黄30g、竹茹20g、路路通10g和南沙参15g分别粉碎,放入容器内进行混合,得到混合物,加入3.7kg的蒸馏水,浸泡6h后,加热煮4h,过滤,获得第一次过滤液,在过滤获得的滤渣中再次加入3kg的蒸馏水,加热煮沸3h,第二次过滤,获得第二次过滤液,在第二次过滤获得的滤渣中再加入2kg的蒸馏水,加热煮沸2h,第三次过滤,获得第三次过滤液,合并上述三次过滤液,再次过滤,得滤液,浓缩成0.5g/ml的提取液1。
实施例2中草药提取液2
将鸡血藤33g、苍术13g、五倍子18g、卷柏13g、沙棘13g、菟丝子23g、黄精28g、薏苡仁13g、狗肝菜13g、红景天18g、白芷48g、鸡筋参18g、紫草13g、绵萆薢18g、飞扬草13g、沉香13g、蒲黄28g、竹茹18g、路路通8g和南沙参13g分别粉碎,放入容器内进行混合,得到混合物,加入3.7kg的蒸馏水,浸泡6h后,加热煮4h,过滤,获得第一次过滤液,在过滤获得的滤渣中再次加入3kg的蒸馏水,加热煮沸3h,第二次过滤,获得第二次过滤液,在第二次过滤获得的滤渣中再加入2kg的蒸馏水,加热煮沸2h,第三次过滤,获得第三次过滤液,合并上述三次过滤液,再次过滤,得滤液,浓缩成0.5g/ml的提取液2。
实施例3中草药提取液3
将鸡血藤37g、苍术17g、五倍子22g、卷柏17g、沙棘17g、菟丝子27g、黄精32g、薏苡仁17g、狗肝菜17g、红景天22g、白芷52g、鸡筋参22g、紫草17g、绵萆薢22g、飞扬草17g、沉香17g、蒲黄32g、竹茹22g、路路通12g和南沙参17g分别粉碎,放入容器内进行混合,得到混合物,加入3.7kg的蒸馏水,浸泡6h后,加热煮4h,过滤,获得第一次过滤液,在过滤获得的滤渣中再次加入3kg的蒸馏水,加热煮沸3h,第二次过滤,获得第二次过滤液,在第二次过滤获得的滤渣中再加入2kg的蒸馏水,加热煮沸2h,第三次过滤,获得第三次过滤液,合并上述三次过滤液,再次过滤,得滤液,浓缩成0.5g/ml的提取液3。
实施例4表面活性剂
将环氧树脂(E51)18.8g加入反应器中,加入8mL甲醇搅拌,将乙二胺8.5mL溶解在6mL甲醇中,室温下将乙二胺的甲醇溶液滴加到环氧树脂中,滴加完毕升温到80℃搅拌2小时后,冷却到室温,减压蒸去溶剂,得到环氧树脂多胺聚合物。将50%亚磷酸溶液41.8g加入体系,加入浓盐酸40mL。升温至80℃,滴加36%甲醛溶液28.7mL。30分钟内滴加完毕。滴加完毕后继续搅拌2小时,冷却,有不溶物出现。倒出上层清液,将10.2g氢氧化钠溶于91.8mL水中,再滴加到反应体系中搅拌2小时得到表面活性剂。
该表面活性剂的红外谱图见图1。
实施例5美白膏
按重量称取凡士林50g、硬脂酸甘油酯25g、实施例4制备的表面活性剂25g置于容器中,加热至熔融,温度保持在90℃,获得油相,按重量将实施例1制备的中草药提取液12g分散于丙二醇40g中,进一步加入水120g,并搅拌使之分散,然后加热至60℃,搅拌溶解60min至透明澄清状,稍静置以去除表面气泡;降温至30℃,待溶解的透明液粘度增大开始呈乳液状,加入前面获得的油相,继续搅拌45min,静置24h后即得膏状成品。
实施例6皮肤刺激试验
毒理学试验
急性毒性试验
动物:昆明种小鼠50只,体重20-22g,雌雄各半。
LD50计算:采用改良寇氏法,将小鼠随机分成5组,每组10只,雌雄各半,将实施例5所得的美白膏加蒸馏水溶解,配成浓度为2g(生药)/L的美白膏水溶液,对小鼠给药,所给剂量按生药量计算,每组依次为18g生药/kg小鼠,14.4g生药/kg小鼠,11.5g生药/kg小鼠,9.2g生药/kg小鼠,7.4g生药/kg小鼠,在动物禁食(不禁水)18小时后,一日内分两次给药(间隔半小时),每次0.5ml,观察动物死亡情况;
最大耐受剂量测定(MTD值):
取小鼠20只,雌雄各10只。将实施例5所得的美白膏加蒸馏水溶解,配成浓度2g(生药)/L的美白膏水溶液,对小鼠给药,按动物的最大耐受量,以注射灌喂器能抽动为准。在动物禁食(不禁水)18小时后,一日内分两次给药(间隔半小时),每次0.5ml(每ml含生药0.36g),总药量为18g生药/kg小鼠·d,给药后连续观察7天;
上述测定结果如下:
在LD50计算中当用最大允许浓度和最大允许容量给予小鼠时(18g生药/Kg小鼠·d),未见小鼠死亡,即未测出LD50,只可求最大耐受剂量,在7天观察期中,动物其食欲、活动、毛色、精神状态等皆正常,发育正常,未见有死亡。表明急性毒性极小,MTD>18g生药/Kg小鼠·d。
累计毒性试验
将实施例5所得的美白膏加蒸馏水溶解,对小鼠按7.69生药g/kg小鼠、19.18g生药/kg小鼠和43.21g生药/kg小鼠连续用药15周(1.0ml/100g体重,每天2次)及停药3周后,结果表明:本发明的美白膏对大鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响,脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明,用药15周及停药3周后,大鼠各脏器均无明显改变。说明本发明美白膏即便是作为内服剂型,其对大鼠长期用药后毒性小,停药后也没有异样反应,应用安全。
一次完整皮肤刺激性试验
用健康成年白色家免4只,体重2.8~3.0kg,雌雄各半。
将其脊柱两侧皮肤去毛3cm×3cm,取实施例5所得的美白膏在2.5cm×2.5cm二层纱布上,敷贴于家兔背部一侧去毛的皮肤上,用一层玻璃纸覆盖,再用无刺激性医用胶布和绷带加以固定,另一侧用蒸馏水作对照。每只试验动物敷贴4h后,去除受试物,用温水清洗敷贴部位的皮肤,分别于1、24、48h观察并记录敷贴部位的皮肤反应,按照《消毒技术规范》规定的评分标准及分级进行评分。皮肤刺激性试验表明,本发明提供的美白膏对家兔皮肤刺激反应积分为0,皮肤无红斑,属无刺激。
实施例7动物实验
材料:小鼠B16黑色素瘤细胞株、DMEM培养基购于上海医科大学。胰蛋白酶、L-DOPA、四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司,CO2培养箱,日本SANYO公司,黑色素检测仪,德国CK公司,酶标仪,美国BIO-RAD公司,分光光度计,日本HITACHI公司。
实验物品:实施例5制备的美白膏。
小鼠B16黑色素细胞培养:无菌条件下,将1×105个/mL的小鼠B16黑色素细胞接种于含10%(体积分数)小牛血清的DMEM培养基的培养瓶中,在37℃、5%CO2培养箱中培养,每3天用0.25%胰酶消化传代一次。
细胞增殖率的测定
待细胞生长到对数期,用0.25%胰酶消化,调整到细胞2×104个/mL,接种于96孔板中,每孔100μL。置于培养箱中培养24h后,弃上清液,添加待测物品。每一浓度设8个孔,对照组不加药物,代之同量维持液。孵育72h。药物作用72h后,每孔加入5g/L MTT溶液10μL,4h后弃上清液,每孔加入DMSO100μL,振荡10min左右,在酶标仪上检测各孔吸光度值,波长为490nm。
细胞增殖率=药物组平均吸光度值/对照组平均吸光度值×100%。
细胞内黑色素含量测定
将B16黑色素细胞以1×105个/mL的密度接种于6孔板。每孔3mL,孵育24h后,弃上清液,添加待测物品,药物作用3d后,弃上清液,PBS洗涤,每孔加入0.5mL胰酶消化细胞3min,加2mL维持液终止消化,分别计数每组细胞。细胞悬液离心弃上清,沉淀中加入1mol/L NaOH溶液,80℃加热30min。对照组不加药物,代之同量维持液。分光光度计检测475nm的吸光度。
黑色素合成抑制率=[1-(药物孔吸光度值药物孔细胞数)/(对照孔吸光度值/对照孔细胞数)]×100%
统计学处理
采用SPSS13.0统计软件,计数资料采用χ2检验,计量资料以表示,采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
本发明提供的美白膏的黑色素细胞增值率,结果见表1。
表1采用本发明提供的美白膏的黑色素细胞增值率(%,与空白对照组比)
4mg/ml 2mg/ml 1mg/ml 美白膏 37.6±3.1 53.9±6.2 75.1±9.3
从表1可以看出,采用的美白膏的浓度越大,抑制黑色素细胞的增长率越高,对细胞的增殖具有显著的抑制作用。
本发明提供的美白膏对黑色素合成的影响,结果见表2。
表2美白膏对黑色素合成的影响
抑制率% 美白膏4mg/ml 78.91% 美白膏2mg/ml 46.29% 空白对照组 0
从表2可以看出,美白膏的浓度越高,对黑色素合成的抑制越明显,P<0.01。
所有上述的首要实施这一知识产权,并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息,上述内容修改,以实现类似的执行情况。但是,所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明作其它形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。