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1、10申请公布号CN104208106A43申请公布日20141217CN104208106A21申请号201410400980422申请日20140814A61K36/07200601A23L1/28200601A23L1/29200601A23L1/09200601A61P37/0420060171申请人吉林大学地址130012吉林省长春市前进大街2699号72发明人王迪刘燕隔滕利荣孟庆繁宋佳逯家辉刘艳王贞佐周毓麟刘春刚程瑛琨权宇彤74专利代理机构长春吉大专利代理有限责任公司22201代理人张景林王恩远54发明名称一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物及其应用57摘要一种具有增强人体免疫功能。
2、的牛樟芝提取物及其在作为保健食品方面的应用，属于保健食品技术领域。是将牛樟芝菌种ATCC200183经发酵罐发酵，发酵液离心，弃上清，收集沉淀并以3050冻干6072小时，得到牛樟芝菌粉；再将牛樟芝菌粉水提23次，固液质量比14060，温度为7090，合并多次水提液，200300目过滤得到过滤液，将过滤液减压浓缩至相对密度1051157080，将浓缩液以3050冻干6072小时，即得牛樟芝提取物。经实验证明，牛樟芝水提物具有提高机体抗免疫能力的功能，因而可以在作为保健食品方面得到应用。51INTCL权利要求书1页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页。
3、10申请公布号CN104208106ACN104208106A1/1页21一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物，其特征在于是由如下方法制备得到，将牛樟芝菌种ATCC200183经发酵罐发酵，发酵液以40005000转/分钟离心510分钟，弃上清，收集沉淀并以3050冻干6072小时，得到牛樟芝菌粉；再将牛樟芝菌粉水提23次，固液质量比14060，温度为7090，第一次水提的时间为34小时，第2次水提的时间为13小时，第3次水提的时间为13小时，合并多次水提液，200300目过滤得到过滤液，将过滤液减压浓缩至7080下相对密度105115，将浓缩液以3050冻干6072小时，即得牛樟芝提取物。。
4、2如权利要求1所述的一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物，其特征在于牛樟芝菌种发酵条件为培养基组分蛋白胨1020G/L，蔗糖1525G/L，硫酸镁24G/L，磷酸二氢钾24G/L，发酵条件为装液量为6080升，接种量V/V25，发酵温度2527摄氏度，发酵罐转速150300转/分钟，发酵时间35天。3权利要求1或2所述的一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物在作为保健食品方面的应用。权利要求书CN104208106A1/5页3一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物及其应用技术领域0001本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提取物及其在作为保健食品方面的应用。背。
5、景技术0002现代人群不良的生活方式和习惯精神紧张、营养不良、缺乏运动或睡眠不足、滥用酒精和吸烟等，都可抑制免疫系统，降低机体免疫力。其他因素环境中的有毒物质、某些药物、放射治疗以及过量的抗生素也都会抑制免疫系统。随着生活水平的提高，服用安全和有效的保健食品更是人们乐于接受的一种增强免疫力的手段。0003市场对许多药用真菌产品需求量的提升，传统的药用真菌培养方式已不能满足市场对药用真菌产品的需求，液体发酵技术在药品行业的应用应运而生。近年来，药用真菌发酵技术在改进发酵条件、提高产物质量、降低发酵成本等方面得到越来越广泛的应用，是目前液体发酵的研究重点。本发明考察了经液体发酵后的药用真菌其在增强。
6、免疫功能等方面的作用，结果显示，除免疫器官脏器指数、细胞免疫、体液免疫、自然杀伤细胞等方面，该药用真菌对白细胞介素、干扰素等细胞因子水平的影响，它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。为此，利用大型真菌液体深层发酵技术制备一种具有显著增强人体免疫力功能的保健食品具有重要的意义。0004樟芝，又名牛樟芝或牛樟菇，属于担子菌纲、非褶菌目、多孔科、多年生担子菌，只生长在台湾地区的牛樟树腐朽树干的内壁。樟芝子实体味苦，具有强烈的樟树香气，外形为板状或钟状，无柄。子实体初期新鲜时呈现橘红色、橘褐色，老熟时会渐渐转变为棕褐色，之后变为黑色。从近年的研究报告发现。
7、，牛樟芝含有许多复杂成分，如精油、多糖体，其主要化学成分为PD葡聚糖、三菇类化合物如樟萜酸A、B、E、K等、超氧歧化酶、核酸类腺苷等物质、麦角固醇、蛋白质含免疫蛋白、维生素、氨基酸、凝聚素及一些微量元素等。这些有效成分中以三萜类化合物最特别，高达200种以上单一品系的灵芝约2050种，不同品系灵芝总合约200多种，含量为1045灵芝为13，是其他菇菌无法相比的；多糖体含量为1313灵芝为2。基于多糖具有抗疲劳、抗肿瘤、提高免疫力、降血糖、保肝、抗氧化等多种生物活性，因此本发明提供牛樟芝水提物作为原料提高机体免疫调节能力的作用。发明内容0005本发明的目的是提供一种具有增强人体免疫功能的牛樟芝提。
8、取物及其在作为保健食品方面的应用。0006本发明所述的具有增强人体免疫力功能的牛樟芝提取物，其由如下方法制备得到将牛樟芝菌种ATCC200183经发酵罐发酵，发酵液以40005000转/分钟离心510分钟，弃上清，收集沉淀并以3050冻干6072小时，得到牛樟芝菌粉；再将牛樟芝菌粉水提23次，固液质量比14060，温度为7090，第一次水提的时间为34说明书CN104208106A2/5页4小时，第2次水提的时间为13小时，第3次水提的时间为13小时，合并多次水提液，200300目过滤得到过滤液，将过滤液减压浓缩至相对密度1051157080，将浓缩液以3050冻干6072小时，即得牛樟芝提取。
9、物。0007牛樟芝菌种发酵条件为培养基组分蛋白胨1020G/L，蔗糖1525G/L，硫酸镁24G/L，磷酸二氢钾24G/L，发酵条件为装液量为6080升，接种量V/V25，发酵温度2527摄氏度，发酵罐转速150300转/分钟，发酵时间35天。0008经动物实验证明详见实施例，本发明牛樟芝水提物具有提高机体抗免疫能力的功能，因而可以在作为保健食品方面得到应用。其主要的功效学作用如下昆明小鼠在服用本发明的牛樟芝保健食品即牛樟芝提取物一个月后，其T淋巴细胞转化率增高，NK细胞活性增强，迟发型变态反应增强，完全符合保健食品检验与评价技术规范2003版中对免疫调节保健食品的评价要求。特别的，昆明小鼠在。
10、服用本品一个月后，血清中IL10、IL12、IL12R、IFN等细胞因子的水平显著提高，且IFN的上调水平明显优于各单组份单独作用之和，复方的合理配比可能产生协同作用机制。0009本发明工艺制得的牛樟芝提取物安全、无副作用，具有显著保健功效，可长期服用，且各主要原料可通过深层液体发酵生产，降低了工业化成本、有很好的市场开发前景。0010具体实施例方式0011下面结合实施例对本发明作进一步描述，但本发明不受具体实施例限制。0012实施例10013将牛樟芝菌种ATCC200183经百升发酵罐发酵培养基组分蛋白胨15G/L，蔗糖20G/L，硫酸镁3G/L，磷酸二氢钾3G/L，发酵条件为装液量为70升。
11、，接种量V/V3，发酵温度26摄氏度，发酵罐转速250转/分钟，发酵时间4天，发酵终止后得发酵液68升，以4000转/分钟离心10分钟，弃去上清，收集沉淀并40冻干66小时，得到牛樟芝菌粉924克，再将菌粉用去离子水提2次，固液质量比为140，温度为90，第一次3小时，第2次1小时，合并两次水提液，用200目过滤布，过滤后得到过滤液，将过滤液减压浓缩至相对密度为11080，将浓缩液以45冻干72小时得牛樟芝提取物108克。0014为进一步验证本发明的效果，进行如下实验00151、动物分组及饲养0016本试验例用于说明本发明的牛樟芝保健食品即牛樟芝提取物对小鼠免疫力的影响。准备健康昆明小鼠240。
12、只，全雄，体重1822G，饲养温度222，相对湿度4070，随机分为4个大组，分别用于淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定、迟发性变态反应实验和小鼠脾脏指数测定。将每个大组的60只小鼠再随机分成3小组，每小组20只，分别为空白组、牛樟芝提取物剂量组和金水宝胶囊阳性对照组。其中提取物剂量组和阳性对照药组按300MG/KG剂量灌胃给药，灌胃体积为02ML，空白对照组给同体积的水；每天上午灌胃1次，连续30天。00172、检测结果001821本品对小鼠体重和脾脏指数的影响0019表1本产品对小鼠体重和脾脏指数的影响0020说明书CN104208106A3/5页50021各实验组小鼠体重与空白组相比，经。
13、统计学处理，均无显著性差异P005，各实验组脾脏指数与空白组相比，经统计学处理，均无显著性差异P005。上表结果表明本产品对小鼠的体重变化无明显影响。对小鼠的主要免疫器官脾脏重量无明显影响。002222本品对小鼠细胞免疫功能的影响0023221本品对CONA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响0024表2本品对CONA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响002500260027各实验组组小鼠刺激指数SI与空白组相比，经统计学处理，均有显著性差异，且提取物剂量组与空白组相比，经统计学处理，均有显著性差异，表明本品可促进小鼠淋巴细胞转化。0028222本品对小鼠迟发型变态反应的影响0029表3本品对小鼠迟。
14、发型变态反应的影响00300031各实验组小鼠足跖肿胀度与空白组相比，经统计学处理，各组与空白组有显著性差异，表明本品可促进小鼠迟发型表态反应。0032综合表2和表3结果，本品对小鼠的细胞免疫试验结果呈阳性。003323本品对小鼠NK细胞活性的影响0034表4本品对小鼠NK细胞活性的影响0035说明书CN104208106A4/5页60036各实验组小鼠NK细胞活性与空白组相比，经统计学处理，各实验组有显著性差异，且提取物剂量组比阳性对照组略好。003724本品对小鼠血清IFN细胞因子水平的影响0038表5本品对小鼠血清IFN细胞因子水平的影响00390040各实验组小鼠血清中的各细胞因子水平。
15、与空白组相比，经统计学处理，各组的IFN有显著性差异，上调IFN水平，进而增强自然杀伤细胞NK细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用。00413结论0042综合上述，本品连续灌胃30天后，对小鼠的体重、脾脏/体重比值无明显影响，对小鼠的细胞免疫试验结果显阳性，对小鼠的NK细胞试验结果显阳性，且综合来看，本发明中的牛樟芝提取物相较于阳性对照组，可以更好地发挥增强机体免疫力的功效。依据中华人民共和国卫生部保健食品检验与评价技术规范2003年版判定本品具有免疫增强作用。0043实施例20044将牛樟芝菌种ATCC200183经百升发酵罐发酵培养基组分蛋白胨11G/L，蔗糖19G/L，。
16、硫酸镁24G/L，磷酸二氢钾27G/L，发酵条件为装液量为65升，接种量V/V2，发酵温度25摄氏度，发酵罐转速200转/分钟，发酵时间3天，发酵终止后得发酵液62升，以4000转/分钟离心10分钟，弃去上清，收集沉淀并40冻干66小时，得到牛樟芝菌粉814克，再将菌粉用去离子水提2次，固液质量比为150，温度为80，第一次3小时，第2次1小时，合并两次水提液，用200目过滤布，过滤后得到过滤液，将过滤液减压浓缩至相对密度为11180，将浓缩液以50冻干65小时得牛樟芝提取物92克。0045实施例30046将牛樟芝菌种ATCC200183经百升发酵罐发酵培养基组分蛋白胨20G/L，蔗糖25G/L，硫酸镁4G/L，磷酸二氢钾37G/L，发酵条件为装液量为78升，接种量V/V5，发酵温度26摄氏度，发酵罐转速300转/分钟，发酵时间5天，发酵终止后得发酵液75升，以4000转/分钟离心10分钟，弃去上清，收集沉淀并40冻干66小时，得到牛樟芝菌说明书CN104208106A5/5页7粉1057克，再将菌粉用去离子水提2次，固液质量比为160，温度为70，第一次3小时，第2次1小时，合并两次水提液，用200目过滤布，过滤后得到过滤液，将过滤液减压浓缩至相对密度为10780，将浓缩液以40冻干60小时得牛樟芝提取物118克。说明书CN104208106A。