一种甲状腺球蛋白(TG)测试试剂盒及其测试方法技术领域
本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中甲状腺球蛋
白含量的试剂盒及其测试方法。
背景技术
甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)，是甲状腺滤泡上皮分泌的660ku糖蛋白，每个
TG约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解
TG表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的TG也释放入血，部分TG经甲状腺淋巴管分泌入
血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。血清TG的改变较多见于甲状腺部位的恶性肿瘤，
如TG在甲状腺滤泡状癌、甲状腺乳头状癌和间变癌都可出现不同程度的升高；而甲状腺髓
样癌血TG可正常或降低。前者主要是因为甲状腺的破坏以及肿瘤组织分泌一定量的TG，而
致血中TG升高；后者的肿瘤组织来源于甲状腺C细胞，而非甲状腺上皮细胞，故其血清TG并
不升高。甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲
状腺疾病都可出现血中TG水平升高。从检测的角度上来说，目前临床上用于测定TG的方法
主要放免法、ELISA法、化学发光法等。
过去以放免为代表的甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和
抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场；酶联免疫法(ELISA)作为定性
检测的方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，其灵敏度、特异
性均较好，且经济实惠，所以是应用得最广、最多的方法。化学发光法其灵敏度高，从化学角
度和自动化程度看，化学发光法优于酶联免疫法。这些方法虽然都有很多优点，但在检测的
灵敏度、特异性、稳定性、检测用时等方面还有待进一步提高。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种特
异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果稳定可靠的甲状腺球
蛋白(TG)的测试试剂盒及其测试方法。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，
质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人
TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓
度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓
度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一
定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250
(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗
浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：
金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂4％-6％，试
剂R16％-8％，试剂R26％-8％，标准品4％-6％，质控品1％-3％，校准品2％-4％，清洗浓缩液
15％-30％，稀释液10％-25％，发光底物25％-40％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％，试剂R16％，试剂R26％，
标准品4％，质控品1％，校准品4％，清洗浓缩液15％，稀释液25％，发光底物35％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4.76％，试剂R17.14％，试
剂R27.14％，标准品4.76％，质控品1.59％，校准品3.17％，清洗浓缩液23.82％，稀释液
15.87％，发光底物31.75％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂6％，试剂R18％，试剂R28％，
标准品6％，质控品3％，校准品2％，清洗浓缩液30％，稀释液10％，发光底物27％。
所述试剂盒中各组分按照如下制备方法制得：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中
加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入
上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间
即符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、磁分离试剂的配制：
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取
2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其
中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速
冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用
试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将
步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加
0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去
上清，重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的TG磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试
剂盒中磁分离试剂。
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g
于烧瓶中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心
大约20分钟，浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后
立即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于
少量0.15MPH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除
铵离子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1M
Mgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物
稀释液以1：2000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步：试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于
1L烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上
述1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4M
NaOH调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)1.8g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用
0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第四步：标准品、质控品和校准品的配制：
(1)甲状腺球蛋白(TG)定量测定试剂盒TG标准品原料配制成浓度点为0，2，10，
100，250，500ng/ml；质控品配制的浓度点为6，250ng/ml，校准品的浓度点为10,250ng/ml；
(2)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，
倒入上述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用
0.2um滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第六步：稀释液配制过程：
(1)称取900g小牛血清于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取1ml倒入上述1L的容器中；
(3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8
℃冷库贮存；
第七步：发光底物配制
发光底物配制操作规程：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4M
NaOH调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤；过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
一种甲状腺球蛋白的测试方法，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内校准品(选)进行曲线校正，并用质控品进行质量控
制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加TG标准品、质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂R1至每一试管中；
(4)加试剂R2至每一试管中；
(5)加磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分
钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓
慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器
底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混
匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数
用稀释液对样品进行稀释。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的
反应体系，与现有技术相比，在出结果时间上较传统酶联免疫法少10-20分钟，同时抗体的
用量降低了20％左右，在提高产品性能的同时，大大降低了产品成本。
(2)本发明公开了一种新的专用试剂R2，使得反应过程更加稳定可靠，具有更高的
检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数。
(3)试剂盒中的磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液、
稀释液以及发光底物的配比均是反应体系下的最优配方，给该试剂盒的使用有效期及检测
性能提供了有力保障。
(4)本发明试剂盒的精确度、灵敏度以及稳定性均优于市场同类产品，并且成本低
廉，操作简单，应用前景广阔。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1:
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，
质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人
TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓
度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓
度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一
定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250
(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗
浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：
金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂
4％，试剂R16％，试剂R26％，标准品4％，质控品1％，校准品4％，清洗浓缩液15％，稀释液
25％，发光底物35％。
本发明上述甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒的制备方法，其具体步骤如下：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：配方见表1，以配制1L为例：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中
加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入
上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间
即符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
磁珠缓冲液(表1)
二、磁分离试剂的配制
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取
2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其
中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速
冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用
试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将
步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加
0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去
上清，重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的TG磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试
剂盒中磁分离试剂。
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：配方见表2，以配制1L为例：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g
于烧瓶中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R1稀释液(表2)
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)标记的小鼠抗人TG单克隆抗体)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心
大约20分钟，浓缩至1毫升。
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜。
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后
立即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时。
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜。
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于
少量0.15MPH7.4的PBS中。
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除
铵离子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1M
Mgcl2溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与TG单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物
稀释液以1：2000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1。
第三步：试剂R2的制备
试剂R2配制操作规程：配方见(表3)，以配制1L为例：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于
1L烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上
述1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4M
NaOH调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)1.8g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用
0.2um滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R2的配制(表3)
第四步：标准品、质控品和校准品的配制：
(1)最高点：最高浓度点为X，目标点浓度为A,B,C,D,E,F，配制V体积的溶液时，需
加入原料的体积为分别为：(表4)
浓度
加入标准品稀释液体积
加入X体积
A
V-A*V/X
A*V/X
B
V-B*V/X
B*V/X
C
V-C*V/X
C*V/X
D
V-D*V/X
D*V/X
浓度
加入标准品稀释液体积
加入X体积
E
V-E*V/X
E*V/X
F
V-F*V/X
F*V/X
(2)甲状腺球蛋白(TG)定量测定试剂盒TG标准品原料配制成浓度点为0，2，10，
100，250，500ng/ml；质控品配制的浓度点为6，250ng/ml，校准品的浓度点为10,250ng/ml；
(3)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：配方见(表5)，以配制1L为例：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，
倒入上述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用
0.2um滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
清洗浓缩液的配制(表5)
第六步：稀释液配方见(表6)，以配制1L为例：
(1)称取900g小牛血清于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取1ml倒入上述1L的容器中；
(3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8
℃冷库贮存；
稀释液的配制(表6)
第七步：发光底物配制操作规程：配方见(表7)，以配制1L为例：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯
中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4M
NaOH调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器
过滤；过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
发光底物的配制(表7)
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内4μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl质控品进行质
量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂6μlR1至每一试管中；
(4)加试剂6μlR2至每一试管中；
(5)加4μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分
钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓
慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器
底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将15μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管
中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀
要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加35μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检
测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数
用25μl稀释液对样品进行稀释。
实施例2：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，
质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人
TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓
度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓
度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一
定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250
(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗
浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：
金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂
4.76％，试剂R17.14％，试剂R27.14％，标准品4.76％，质控品1.59％，校准品3.17％，清洗
浓缩液23.82％，稀释液15.87％，发光底物31.75％。
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内3.17μl校准品(选)进行曲线校正，并用X(X<1.59μl)
质控品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4.76μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂7.14μlR1至每一试管中；
(4)加试剂7.14μlR2至每一试管中；
(5)加4.76μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分
钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓
慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器
底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将23.82μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试
管中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混
匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加31.75μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行
检测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数
用15.87μl稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
实施例3：
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，
质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗人
TG的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓
度为167μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的TG抗体，所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓
度为0.3μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校准品：含有一
定量TG抗原的小牛血清溶液，所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250
(S4)、500(S5)ng/ml，所述质控品浓度为6,250ng/ml，所述校准品浓度为10,250ng/ml；清洗
浓缩液：含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有小牛血清的溶液；发光底物：
金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种甲状腺球蛋白测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂
6％，试剂R18％，试剂R28％，标准品6％，质控品3％，校准品2％，清洗浓缩液30％，稀释液
10％，发光底物27％。
本发明一种甲状腺球蛋白(TG)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内2μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl(X<3μl)质控
品进行质量控制。测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加6μlTG标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂8μlR1至每一试管中；
(4)加试剂8μlR2至每一试管中；
(5)加6μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴30分
钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓
慢的倒转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器
底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将30μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管
中，置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s。加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出。混匀
要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加27μl发光底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检
测。
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数
用10μl稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
临床试验：
1、检测数据
标本采自1000例正常体检、供血者。样本体检结果均无肝、脑、肾、消化道疾病，半
年内无输血和大手术史，妇女不在妊娠期和哺乳期。将测值进行统计学分析，得出正常血清
参考范围：2-50ng/ml；
本数据仅供参考，不同地区、不同个体以及采用不同方法进行检测，所测得的TG水
平也会有所不同，建议各实验室建立自己的正常值范围。不可仅凭本方法得出的TG值作出
诊断，仅作为中间数据参考作用，应结合临床其他资料分析结果，包括病人的具体情况和治
疗状况。通过其他方法得到的样品中的TG浓度值与本试剂盒测定结果不具有直接的可比
性。超出试剂盒测定范围的样本，系统将无法给出确切的数值。如欲测定其确切的结果，建
议稀释后再进行测定。本试剂盒的检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例
的依据，为达到诊断目的，此检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。本品可
用于血清样本的测定，用于其他体液样本中TG浓度测定的可靠性未得到充分确认。
2、本发明试剂盒性能指标
分析灵敏度定义为：对20次零标准品的测定，取其2倍的平均偏差，其在标准曲线
上所对应的浓度即为分析灵敏度；分析灵敏度：0.5ng/ml；精密性：批内变异CV％≦10.0％；
批间变异CV％≦15.0％；线性系数：r≥0.9900；线性范围：0.5-500ng/ml：
与主要类似物的交叉反应情况：
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通
过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在
形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。