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1、10申请公布号CN104072458A43申请公布日20141001CN104072458A21申请号201410266272622申请日20140616C07D307/92200601A61P35/0020060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤（1）取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，用醇类溶液进行连续逆流超声提取；（2）提取液通过膜分。
2、离系统，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化，其两相溶剂系统为石油醚乙酸乙酯甲醇水，收集长尖紫玉盘内酯组分；（4）将长尖紫玉盘内酯组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85甲醇回流溶解，放置重结晶。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度长尖紫玉盘内酯的生产。长尖紫玉盘内酯具有抗肿瘤作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104072458ACN104072458A1/1页21一种长尖紫玉盘内酯的制备方法，其特征在于包括。
3、以下步骤（1）取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，加512倍6090乙醇溶液在2045的温度下进行连续逆流超声提取30100MIN，过滤，得到提取液；（2）提取液通过截留分子量为10003000的超滤膜超滤和截留分子量为100500的纳滤膜浓缩，操作压力为0528MPA，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的长尖紫玉盘内酯，其两相溶剂系统为石油醚乙酸乙酯甲醇水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集长尖紫玉盘内酯组分；（4）将长尖紫玉盘内酯组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85甲醇。
4、回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得长尖紫玉盘内酯。2根据权利要求1所述的长尖紫玉盘内酯的制备方法，其特征在于步骤（1）中超声频率为3560KHZ。3根据权利要求1所述的长尖紫玉盘内酯的制备方法，其特征在于步骤（3）中石油醚乙酸乙酯甲醇水溶剂系统的体积比为57244713。4根据权利要求13所述方法制备的长尖紫玉盘内酯，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。5根据权利要求4所述的长尖紫玉盘内酯，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。权利要求书CN104072458A1/2页3一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用技术领域0001本发明公开。
5、了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用。背景技术0002长尖紫玉盘内酯（ACUMINOLIDE），分子式C20H30O5；分子量35046，CAS登录号161016984，分子结构式如下长尖紫玉盘内酯为天然化合物，是一种二萜类化合物，具有细胞毒活性，对人型癌细胞具有广的细胞毒作用，对黑色素瘤（MEL2）最有效，ED50为07G/ML。长尖紫玉盘内酯来源于番荔枝科ANNONACEAE长尖紫玉盘NEOUVARIAACUMINATISSIMAMIQAIRYSHAW茎皮。0003通过文献检索，现有活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行分乙醇提回流提取，。
6、硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得率低，不适合长尖紫玉盘内酯的工业化制备。发明内容0004为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种长尖紫玉盘内酯的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，加512倍6090乙醇溶液在2045的温度下进行连续逆流超声提取30100MIN，过滤，得到提取液；（2）提取液通过截留分子量为10003000的超滤膜超滤和截留分子量为100500的纳滤膜浓缩，操作压力为0528MPA，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物。
7、；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的长尖紫玉盘内酯，其两相溶剂系统为石油醚乙酸乙酯甲醇水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集长尖紫玉盘内酯组分；（4）将长尖紫玉盘内酯组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得长尖紫玉盘内酯。0006步骤（1）中超声频率为3560KHZ。0007步骤（3）中石油醚乙酸乙酯甲醇水溶剂系统的体积比为57244713。说明书CN104072458A2/2页40008所述制备的长尖紫玉盘内酯，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪。
8、酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0009采用本法制备长尖紫玉盘内酯，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0010下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式0011实施例1长尖紫玉盘内酯的制备取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，称取1KG，加12倍60乙醇溶液在20的温度下进行连续逆流超声提取100MIN，超声频率为35KHZ，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为18MPA，膜浓缩液减压浓缩干燥，得。
9、粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的长尖紫玉盘内酯，以体积比7372石油醚乙酸乙酯甲醇水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集长尖紫玉盘内酯组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得长尖紫玉盘内酯，含量974。0012实施例2长尖紫玉盘内酯的抗肿瘤应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0013细胞株SARCOMA180腹水型瘤株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。00142、方法取50只小鼠，每只小。
10、鼠左腋下接种S180瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组、长尖紫玉盘内酯低剂量组（1MG/KG）、中剂量组（2MG/KG）、高剂量组（4MG/KG）。接种24H后长尖紫玉盘内酯给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24H后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。00153、结果本发明植物提取物对小鼠S180皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为70867721，结果见表1。0016抑瘤率（）（1治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）表1本发明植物提取物对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（N10，S）组别给药剂量（MG/KG）试验前体重（G）试验后体重（G）瘤重（G）抑瘤率（）空白对照组20205522656312215028阳性对照组30202013024883180890495861长尖紫玉盘内酯低剂量组1202070927094281351153721长尖紫玉盘内酯中剂量组2202090227542950950525581长尖紫玉盘内酯高剂量组4202016727283220490297721注与阳性对照组相比，P001。说明书CN104072458A。