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1、10申请公布号CN104054583A43申请公布日20140924CN104054583A21申请号201410331177X22申请日20140714A01H4/0020060171申请人西北农林科技大学地址712100陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号72发明人韩明玉王超张东邢利博韩静赵彩平74专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所普通合伙11350代理人汤东凤54发明名称一种苹果砧木T337快速繁殖的方法57摘要本发明公开了一种苹果砧木T337快速繁殖的方法，该苹果砧木T337快速繁殖的方法，通过采用培养基为MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L的培养基初代培养、采用M。
2、SNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L处理的继代培养、采用生根培养基1/2MSIBA09MG/L的生根培养、用纯锯末的炼苗移栽；实现了苹果砧木T337快速的繁殖，不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。51INTCL权利要求书1页说明书7页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书7页附图1页10申请公布号CN104054583ACN104054583A1/1页21一种苹果砧木T337快速繁殖的方法，其特征在于，苹果砧木T337在组培技术下能够进行快速繁殖，具体。
3、方法包括以下步骤步骤一，以苹果砧木T337为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，水培为每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN；步骤二，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯吡咯烷酮500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；步骤三，将获得的无菌外植体接种到NH4075MG/L，。
4、K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，T337的最优培养处理为M14处理，即每升附加30G蔗糖，8G琼脂；步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM的植株，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MSIBA09MG/L生根培养基中进行生根培养，每升加蔗糖30G/L，琼脂8G/L；步骤五，当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养。
5、钵中。2如权利要求1所述的苹果砧木快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤五中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气；待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。权利要求书CN104054583A1/7页3一种苹果砧木T337快速繁殖的方法技术领域0001本发明属于苹果苗木栽培技术领域，尤其涉及一种苹果砧木T337快速繁殖的方法。背景技术0002苹果产业在中国农业经济中占有非常重要的地位，2013年中国苹果种植面积2253万公顷，产量为3170万吨。占世界总产量的1/2。目前，我国的苹果生产模式由传统低效郁闭果。
6、园模式逐步的转变为现代化矮砧密植集约高效生产栽培模式、并由世界苹果生产大国逐步的转变为苹果产业强国。苹果苗木是苹果生产栽培的基础，苗木的质量直接影响着苹果树体的生长、开花、结果以及抗逆性、抗病能力和寿命。苗木受到病毒的侵染之后，树体正常的细胞增殖，就会受到破坏，严重的话会影响果树的生长势、果实品质和产量等正常生理机制，这成为中国苹果产业发展的隐患。今后一段时期是我国苹果大规模更新换代的关键时期，如何从苗木方面提供支持和保障便成为一个值得高度重视的问题。目前，我国矮化苹果苗木市场供不应求，限制苗木产业发展的关键在于，一方面缺乏适应性广优良矮化砧木，另一方面对现有矮化砧木繁育技术尚未取得突破。苹果。
7、砧木T337是由M9选育出来的脱毒矮化砧木优系，其具有结果早、适应性广、干性强、易成花、结果大小均匀、丰产性好等特点，目前已成为世界各国应用最广泛的脱毒矮化砧木，其特别适宜于矮砧集约栽培模式下的高纺锤形树形。本发明建立一种苹果砧木T337快速繁殖的方法，对于生产优质矮化无病毒苗木，具有重要意义，市场前景广阔。发明内容0003本发明实施例的目的在于提供一种苹果砧木T337快速繁殖的方法，旨在为我国苹果苗木的栽培提供一种快速繁殖的方法，以加快我国苹果大规模更新换代。0004本发明实施例是这样实现的，一种苹果砧木T337快速繁殖的方法，该苹果砧木T337快速繁殖的方法包括以下步骤0005步骤一，以苹。
8、果砧木T337为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN；0006步骤二，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MGPVP聚乙烯吡咯烷酮500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；0007步骤三，将获得。
9、的T337无菌外植体接种最优培养基处理M14，即MSNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂；说明书CN104054583A2/7页40008步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L生根培养基中进行生根培养；0009步骤五，当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶。
10、液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。0010进一步，在步骤五中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。0011本发明提供的苹果砧木T337快速繁殖的方法，通过采用培养基为MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L的培养基初代培养、采用MSNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L处理的继代培养、采用生根培养基1/2MSIBA09MG/L的生根培养、用纯锯末。
11、进行炼苗移栽；实现了苹果砧木T337快速的繁殖，不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。附图说明0012图1是本发明实施例提供的苹果砧木T337快速繁殖的方法流程图。具体实施方式0013为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。0014下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。0015如图1所示，本发明实施例的苹果砧木T337快速繁殖的方法包括以下步骤0016S101以苹果砧木T337为材料，选择。
12、生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN；0017S102进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MGPVP聚乙烯吡咯烷酮500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；0018S103将获得的T337无菌外植体接种最。
13、优培养基处理M14，即MSNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂；0019S104选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L生根培养基中进行生根培养；0020S105当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培说明书CN104054583A3/7页5养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部。
14、多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。0021在步骤S105中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。0022本发明的具体步骤如下0023步骤一，初代培养0024苹果砧木T337为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升。
15、汞处理7MIN，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MG/L不同浓度处理0、03、05、07、10G/L的聚乙烯吡咯烷酮PVP的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，每个三角瓶接3个芽，每处理15瓶，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养，14D后分别调查污染率、褐化率、成活率，得出T337的初代培养是最适宜的培养基为MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L；0025步骤二，继代培养0026将获得的无菌外植体接种到含有不同6BA。
16、、琼脂、激素、NH4和K与NO3离子浓度、光照的MS培养基中进行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂，每瓶3株，每个处理10瓶，重复3次，T337的最优培养处理为M14处理，即MSNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX；0027步骤三，生根培养0028选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM的植株，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MS不同浓度IBA处理0、08、09、10、11MG/L的生根培养中进行生根培养，每瓶接种3个，每个处理10瓶，重复3次，得到T337最适宜的生根培养基为1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G。
17、/L，琼脂8G/L；0029步骤四，炼苗移栽0030当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后移栽到容量相同的不同基质处理纯锯末、锯末基质、纯基质、基质珍珠岩的营养钵中，移栽苗的管理方式为将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。于14天后统计炼苗移栽成活率，得出用纯锯末的炼苗移栽成活率最好。0031通过以下的实验和数据对本发明的原理做进。
18、一步的说明00321、参考表1不同浓度PVP处理对外植体生长的影响；0033表1不同浓度PVP处理对外植体生长的影响说明书CN104054583A4/7页6003400350036注同列数相同字母表示差异不显著P005，不同字母表示差异显著P005。数据为MEANSE平均值标准误；下同。00372、不同6BA浓度处理对T337继代培养的影响0038表2不同6BA浓度对T337继代培养的影响0039基本培养基6BAMG/LIBAMG/L扩繁系数MS001123004CMS0301102005CMS0401236034BMS0501531009AMS0601538011A00403、不同IBA浓度。
19、处理T337生根的影响0041表3不同IBA浓度处理T337生根的影响004200434不同炼苗基质对生根苗生长的影响说明书CN104054583A5/7页70044表4不同栽培基质处理对移栽苗生长的影响0045基质处理T337移栽成活率锯末9250433A锯末基质8250342BC基质8500520B基质珍珠岩8000630C00465、苹果砧木T337增殖培养基的筛选0047将T337的组培苗接种在含有不同6BA浓度激素的MS培养基蔗糖浓度30G/L，琼脂浓度7G/L，PH58中，观察不同浓度激素下的扩繁系数，玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。00486、琼脂浓度对T337组。
20、培苗玻璃化的影响0049观察方法的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对较好的继代培养基作为对照，研究琼脂浓度对组培苗玻璃化的影响。将T337的组培苗接种含有不同的琼脂浓度70、80、90G/L，观察不同浓度琼脂下组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。00507、IBA对T337组培苗玻璃化的影响0051观察方法的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对合适的继代培养基，并以此作对照，研究6BA与不同浓度IBA配比对玻璃化程度的影响。观察组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。00528、NH4与K离子浓度对T337组。
21、培苗玻璃化的影响0053观察方法的试验结果，以挑选较为理想的继代培养基并以之作对照，研究NH4与K离子浓度对T337组培苗玻璃化的影响。以MS培养基大量元素中的NH4NO3165G/L和KNO319G/L浓度为对照，其它成份不变，调整培养基中NH4NO3和KNO3浓度，观察组培苗的分化系数、玻璃程度及生长情况，每个组合30瓶，每瓶3株。00549、光照对T337组培苗玻璃化的影响0055根据组培苗的分化系数和玻璃化程度，以方法中选出的最佳继代培养基为对照，研究光照对组培苗玻璃化的影响。在光照培养箱中设定稳定的光照，观察在不同光照条件下组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个组合30瓶，每瓶。
22、3株。005610结果与分析0057101苹果砧木T337增殖培养基的筛选0058如表5所示，M4处理培养基即MSBA06MG/LIBA01MG/L中T337组培苗扩繁系数最高为353，玻璃化率为321。各个处理的玻璃化程度直接无显著差异，但都比较高。以扩繁系数为指标来筛选，则M4处理培养基是较好的增殖培养基。0059表5T337增殖培养基筛选结果统计0060说明书CN104054583A6/7页80061102琼脂浓度对T337组培苗玻璃化的影响0062如表6所示，以M4处理培养基为对照得出，提高琼脂浓度对组培苗玻璃化有一定的抑制作用，并一定程度上提高了扩繁系数，但是差异无显著性差异。综合考。
23、虑，M7处理培养基要优于其它处理，其扩繁系数为358，玻璃化率为31。0063表6琼脂浓度对T337组培苗的影响0064编号琼脂浓度G/L扩繁系数玻璃化程度M473530321M78358031M8935703130065103IBA对T337组培苗玻璃化的影响0066以M7处理培养基为对照，研究不同IBA浓度对T337组培苗玻璃化的影响，如表7所示，提过IBA浓度可以对扩繁系数有较大影响，处理M10、M11、M12与对照M7有显著差异，并且提高IBA浓度能够明显的降低玻璃化程度，其中处理组合M10、M11与对照有显著性差异，但玻璃化程度仍比较高，综合考虑M10为较优培养基。0067表7IBA。
24、对T337组培苗玻璃化的影响0068编号IBAMG/L6BAMG/L扩繁系数玻璃化程度M70601341031M906033710306M100605410233M110607381025M1206093802650069104NH4与K离子浓度对T337组培苗玻璃化的影响0070以M10处理培养基作为对照，研究NH4与K离子浓度对T337组培苗玻璃化的影说明书CN104054583A7/7页9响，如表8所示，通过提高K浓度，降低NH4浓度可以显著的降低玻璃化程度，各个处理与对照M10都有显著差异，M14、M15与对照有显著性差异，玻璃化降低到5，可以满足组培苗扩繁需求。M14处理扩繁系数为4。
25、71，玻璃化率为5，都要优于其它组合，因此综合考虑M14处理为较优培养基。0071表8NH4与K离子浓度对T337组培苗玻璃化的影响00720073105光照对T337组培苗玻璃化的影响0074以M14作为对照研究在不同的光照条件下对T337组培苗玻璃化的影响，如表9所示，随着培养光照的增强，T337组培苗的扩繁系数提高，玻璃化程度降低，在光照强度大于2000LUX时T337组培苗的扩繁系数和玻璃化程度没有显著差异，因此，T337的最优培养处理为M14处理，即MSNH4075MG/L，K22MG/L6BA06MG/LIBA05MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX。0075表9光照对T337组培苗玻璃化的影响00760077以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书CN104054583A1/1页10图1说明书附图CN104054583A10。