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1、(10)申请公布号 CN 103884800 A (43)申请公布日 2014.06.25 CN 103884800 A (21)申请号 201410135112.8 (22)申请日 2014.04.04 G01N 30/06(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 贵阳新天药业股份有限公司 地址 550018 贵州省国家高新技术产业开发 区新添大道 114 号 (72)发明人 董大伦 (74)专利代理机构 贵阳东圣专利商标事务有限 公司 52002 代理人 袁庆云 (54) 发明名称 一种当归益血口服液的质量检测方法 (57) 摘要 本发明公开了一种当归益血。
2、口服液的质量检 测方法， 包括如下步骤 ： 色谱条件与系统适应性 试验 ： 色谱柱为 C18 ； 异丙醇 - 水 - 冰醋酸为流动 相 ； 检测波长为 230nm。理论塔板数按芍药苷峰 计算应不低于 2000 ； 流速 ： 1.5ml/min ； 对照品溶 液的制备 ： 取芍药苷对照品适量， 精密称定， 加甲 醇制成每 1ml 含 40g 的溶液， 即得 ； 供试品溶液 的制备 ： 精密量取本品10ml， 置25ml容量瓶中， 加 入甲醇定容， 密塞， 摇匀， 称定重量， 超声 30 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 低速离心10min， 取上清液以0.45m微孔滤。
3、膜滤 过， 取续滤液， 即得 ； 分别精密吸取对照品溶液和 供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定。本 发明简便、 准确、 重现性好、 专属性强。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103884800 A CN 103884800 A 1/1 页 2 1. 一种当归益血口服液的质量检测方法， 包括如下步骤 ： （1） 色谱条件与系统适应性试验 ： 色谱柱为 C18 ； 异丙醇 - 水 - 冰醋酸的体积比 =4.8 ： 95 ： 0.2 为流动相 ；。
4、 检测波长为 230nm ； 理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于 2000 ； 流速 ： 1.5ml/min ； （2） 对照品溶液的制备 ： 取芍药苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1ml含40g的 溶液， 即得 ； （3） 供试品溶液的制备 ： 精密量取本品 10ml， 置 25ml 容量瓶中， 加入甲醇定容， 密塞， 摇匀， 称定重量， 超声 30 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 低速离心 10min， 取上清液以 0.45m 微孔滤膜滤过， 取续滤液， 即得 ； （4） 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定。
5、。 2. 如权利要求 1 所述的一种当归益血口服液的质量检测方法， 其中 ： 本品每支以芍药 苷计， 不得少于 0.9mg。 权 利 要 求 书 CN 103884800 A 2 1/4 页 3 一种当归益血口服液的质量检测方法 技术领域 0001 本发明属于中药技术领域， 特别涉及当归益血口服液的质量检测方法。 0002 背景技术 0003 当归益血口服液是在当归益血膏的基础上进行的改变剂型产品， 是一种中药纯制 剂。将其制成的口服液， 既保留了原剂型吸收快， 奏效迅速的特点 ； 同时具有口感好， 易为 患者接受 ； 成品中加适宜的防腐剂， 并经灭菌处理， 密封包装， 质量稳定 ； 制成单剂。
6、量的口 服液， 服用方便， 剂量准确， 同时便于携带等诸多优点。当归益血口服液由当归、 白芍 （酒 制） 、 川芎 （酒制） 、 党参、 黄芪 （蜜炙） 、 阿胶、 茯苓、 甘草经水提取浓缩后， 加入蔗糖、 苯甲酸钠 配制， 灌装而成。具有滋补气血的功效， 用于贫血， 头晕， 心悸健忘， 月经不调， 产后血虚、 体 弱。本品原质量标准中含量测定， 是检测处方中当归、 川芎药材所含的阿魏酸， 但在实际生 产、 储存中发现， 以阿魏酸作为含测指标， 对产品质量控制有以下几点不足之处 ： 1、 阿魏酸 在本产品中极不稳定， 易分解。该产品长期留样观察发现， 产品含量下降快， 同时对比芍药 苷加速试验。
7、及长期稳定性试验， 阿魏酸每月平均降解率达 10%， 而芍药苷较稳定， 降解率小 于 5%。同时， 近期大量的文献资料也报道， 用水或甲醇 （乙醇） 配制的阿魏酸溶液不稳定， 受 光、 热、 pH、 金属离子等的影响， 极易分解， 从而降低检验准确性 ； 2、 以阿魏酸作为含测指标， 成品中阿魏酸的转移率很低， 成品含量标准仅为 0.3mg/ 支。由于含量很低， 因而不利于控 制当归益血口服液质量。 0004 发明内容 0005 本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种简便、 准确、 重现性好、 专属性强当 归益血口服液的质量检测方法。 0006 本发明的一种当归益血口服液的质量检测方法， 包。
8、括如下步骤 ： （1）色谱条件与系统适应性试验 ： 色谱柱为 C18（250 mm4.6 mm， 5 m） ； 异丙 醇 - 水 - 冰醋酸 （4.8 ： 95 ： 0.2） 为流动相 ； 检测波长为 230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于 2000 ； 流速 ： 1.5ml/min ； （2） 对照品溶液的制备 ： 取芍药苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1ml含40g的 溶液， 即得 ； （3） 供试品溶液的制备 ： 精密量取本品 10ml， 置 25ml 容量瓶中， 加入甲醇定容， 密塞， 摇匀， 称定重量， 超声 30 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量，。
9、 摇匀， 低速离心 10min， 取上清液以 0.45m 微孔滤膜滤过， 取续滤液， 即得 ； （4） 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定。 0007 上述的一种当归益血口服液的质量检测方法， 其中 ： 本品每支以芍药苷计， 不得少 于 0.9mg。 说 明 书 CN 103884800 A 3 2/4 页 4 0008 本发明与现有技术相比， 具有明显的有益效果， 由以上技术方案可知 ： 本发明以芍 药苷作为含量测定指标， 其成品中芍药苷转移率较高， 达到 56% 左右， 选择含量标准不得少 于 0.9mg/ 支， 高于阿魏酸含量限度标准 ； 。
10、且芍药苷具有较强的药理活性和良好的理化稳定 性， 能有效地控制产品质量。 为了保证检测方法真实性， 反映产品质量， 有效控制产品质量。 具体实施方式 0009 以下通过具体实验例来进一步说明本发明方法的有益效果。 0010 实验例 ： 1 仪器与试药 高效液相色谱仪 （泵 ： LC-20AD， 检测器 ： SPD-M20A） ； 工作站 ： LC Solution。当归益血口 服液 （贵阳新天药业股份有限公司） ， 芍药苷对照品 （供含量测定用， 中国药品生物制品检定 所， 批号 ： 110736-200934， 含量以 95.7% 计） ； 水为重蒸水， 冰醋酸、 磷酸为分析纯， 甲醇、 乙。
11、 腈、 异丙醇为色谱纯。 0011 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为C18 （250 mm4.6 mm， 5 m） , 以异丙醇-水-冰醋酸 （4.8 ： 95 ： 0.2） 为流动相 ； 检测波长为 230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于 2000。流速 ： 1.5ml/min。 0012 2.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1 ml 含 40g 的溶液。 0013 2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品 10ml， 置 25ml 容量瓶中， 加入甲醇定容， 密塞， 摇匀， 称定重量， 超声 30 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足。
12、减失的重量， 摇匀， 低速 离心 10min， 取上清液以 0.45m 微孔滤膜滤过， 取续滤液， 即得。 0014 2.4 阴性对照溶液的制备 取除去白芍药材的其他药材按处方比例照生产工艺 制备方法制备空白样品， 按 “2.3” 项下方法制成阴性对照品溶液。 0015 2.5 系统适用性试验 精密吸取供试品溶液、 对照品溶液、 阴性对照溶液， 按 2.1 项下色谱条件进样 10 l， 记录色谱图， 结果供试品与芍药苷对照品在对应的位置出现色 谱峰， 且分离度良好 ； 阴性对照在该位置无色谱峰出现。 0016 2.6 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品 16.56mg（批号 110736-20。
13、0934, 含 量以 95.7% 计） ， 置于 100ml 容量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 即得每 1ml 含 158.48g 的母液。精密量取该母液 5ml， 置 20ml 容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 即得每 1ml 含 39.62g 的对照品溶液。照上述色谱条件以对照品溶液 3l、 5l、 10l、 15l、 20l、 25l 进样， 测定峰面积， 以峰面积为纵坐标， 芍药苷进样量为横坐标绘制标准曲线， 拟合直 线方程为 ： Y=9114.47X-976.8 ； 拟合过原点的直线方程为 y = 9100.6x R2=0.9995295 响 应值相对标准偏差 （RFRSD。
14、） =1.62459 ， 由此确定 11.886g 99.049g 范围内芍药苷对 照品的进样量与峰面积值呈良好的线性关系。 0017 2.7 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液， 按上述色谱条件重复进样 6 次， 记录色谱， 结果芍药苷对照品峰面积 RSD=1.08%。 0018 2.8 重现性试验 取同一批样品， 按 “2.3” 项下的制备方法制得 6 份供试品溶液， 分别进样， 记录色谱， 计算， 结果 RSD=1.28%。 说 明 书 CN 103884800 A 4 3/4 页 5 0019 2.9 稳定性度试验 将供试品溶液放置 0、 2、 4、 6、 8、 12 小时后， 分别。
15、精密吸取放 置不同时间点的供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 记录色谱图， 结果供试品溶液中芍 药苷在 12 h 内峰面积无明显变化， 结果 RSD=1.72%。 0020 2.10 加样回收率试验 精密吸取已测定含量的样品 （111001） 9 份， 每份 5ml （含量 ： 1.2mg/ 支） ， 其中 1、 2、 3 号三份各加对照品 495.89g， 4、 5、 6 号三份各加对照品 644.20g， 7、 8、 9 号三份各加对照品 726.98g， ， 按 “2.3” 项下的制备方法制备溶液， 分别 进样， 记录色谱， 计算回收率。结果见表 1。 0021 2.11 样品含量。
16、测定 取当归益血口服液， 按 “2.3” 项下的制备方法制得供试品溶 液， 按本文色谱条件测定， 记录色谱， 计算含量。结果见表 2。 0022 2.12 含量限度的确定 统计样品及所使用的药材含量， 计算平均转移率为 55.58% 说 明 书 CN 103884800 A 5 4/4 页 6 根据 中国药典 2010 版一部中白芍药材芍药苷的含量限度， 结合本品中白芍药材处方 量及上表中芍药苷转移率， 按下式计算得出本品的含量限度 ： 根据上述计算公式计算结果为 0.91mg/ 支， 因此规定本品每支含白芍以芍药苷 （C23H28O11） 计， 不得少于 0.9mg/ 支。 0023 3 讨。
17、论 本方中当归为主药， 阿魏酸为当归中主要有效成分， 但阿魏酸不稳定， 易分解， 故选择 白芍中芍药苷作为本法控制的成分。 0024 参照 中国药典 2010 年版一部白芍药材中芍药苷含量测定， 波长为 230nm ； 芍药 苷对照品紫外扫描最大吸收波长为 231.40nm。故拟定检测波长为 230nm。 0025 在供试品溶液制备中， 对回流提取和超声进行了比较， 结果回流提取和超声提取 没有显著差异， 在此选用超声提取。对超声提取时间 10 40 min 进行了比较， 结果表明提 取 30 min 后， 样品中芍药苷基本提取完全， 故在此超声提取 30 min。 0026 由于本品未经醇沉。
18、， 经超声处理的样品以 0.45m 微孔滤膜滤过时发现较难过 滤， 故超声处理后低速离心 10min， 去除沉淀， 便于用微孔滤膜滤过。 0027 实施例 ： 一种当归益血口服液的质量检测方法， 包括如下步骤 ： （1）色谱条件与系统适应性试验 ： 色谱柱为 C18（250 mm4.6 mm， 5 m） ； 异丙 醇 - 水 - 冰醋酸 （4.8 ： 95 ： 0.2） 为流动相 ； 检测波长为 230nm。理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于 2000 ； 流速 ： 1.5ml/min ； （2） 对照品溶液的制备 ： 取芍药苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1ml含40g的 溶液， 即得 ； （3） 供试品溶液的制备 ： 精密量取本品 10ml， 置 25ml 容量瓶中， 加入甲醇定容， 密塞， 摇匀， 称定重量， 超声 30 分钟， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补足减失的重量， 摇匀， 低速离心 10min， 取上清液以 0.45m 微孔滤膜滤过， 取续滤液， 即得 ； （4） 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l， 注入液相色谱仪， 测定， 本品每支含白芍以芍药苷计， 不得少于 0.9mg。 说 明 书 CN 103884800 A 6 。