《一种失忆性贝毒分子印迹整体柱及其应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种失忆性贝毒分子印迹整体柱及其应用.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103884802 A (43)申请公布日 2014.06.25 CN 103884802 A (21)申请号 201210554663.9 (22)申请日 2012.12.19 G01N 30/56(2006.01) (71)申请人 中国科学院大连化学物理研究所 地址 116023 辽宁省大连市中山路 457 号 (72)发明人 张丽华 张晓林 杨开广 黄大亮 张玉奎 (74)专利代理机构 沈阳科苑专利商标代理有限 公司 21002 代理人 马驰 (54) 发明名称 一种失忆性贝毒分子印迹整体柱及其应用 (57) 摘要 本发明涉及一种失忆性贝毒分子印迹整体柱 的制备。
2、方法和应用。 将适当配比的模板分子、 功能 单体、 交联剂、 致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇） 溶解 于二甲基亚砜中， 超声混合 5 分钟、 静置 20 分钟， 加入引发剂 （偶氮二异丁腈） 占单体总量的 0.5 1%， 充氮除氧 5 分钟， 将此溶液充满石英毛细管， 封端， 6070恒温聚合1214小时， 将毛细管 连接到高效液相色谱输液泵上， 清洗除去模板分 子和致孔剂， 最后得到具有良好分离效果的毛细 管整体柱。本发明制备的分子印迹整体柱具有良 好的选择识别性和小的传质阻力， 作为高效液相 色谱微柱， 可实现对贝类样品中软骨藻酸的分离、 富集与检测。 (51)Int.Cl. 权利要。
3、求书 1 页 说明书 2 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103884802 A CN 103884802 A 1/1 页 2 1. 一种失忆性贝毒分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 所述分子印迹整体柱是以软骨藻酸为模板分子， 甲基丙烯酰胺和 / 或甲基丙烯酸为 复合功能单体， 十二醇和 / 或 1,4- 丁二醇为致孔剂， 二甲亚砜为溶剂， 偶氮二异丁腈为引 发剂， 超声溶解混匀， 通氮除氧， 灌注在经过 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅烷修饰的 25 250m 内径的石英毛细管中。
4、， 封端 ； 60 70水浴中聚合 12-16 小时 ； 聚合反应完成后冲洗去除未反应的功能单体和模板分子。 2. 根据权利要求 1 所述分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 模板分子占功能单体总质量的 1-20% ； 功能单体与致孔剂的质量比为 1-10% 二甲亚砜溶剂与致孔剂的溶剂体积比例为 0.1-1.2 ； 偶氮二异丁腈占混合溶液总质量的 0.5% 5%。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 甲基丙烯酸与甲基丙烯酰胺的摩尔比例为 10:0 至 0:10 ； 十二醇和 1,4- 丁二醇的质量比为 10:0 至 0:10。 4. 根据权利要求 1 所述分子印迹。
5、整体柱， 其特征在于 ： 甲基丙烯酸与甲基丙烯酰胺的摩尔比例为 10:0、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 5:5、 4:6、 3:7、 2:8、 1:9: 或 0:10 ； 模板分子占功能单体总质量的 1%、 2%、 5%、 10% 或 20% ； 十二醇和 1,4- 丁二醇的质量比为 10:0、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 5:5、 4:6、 3:7、 2:8、 1:9: 或 0:10。 5. 根据权利要求 1 所述分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 分子印迹整体柱在内径 25-250m 的经 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅烷修饰的 石英毛细管柱中， 在 60 7。
6、0水浴内制制备而成， 印迹整体柱长度 5cm-10cm。 6. 根据权利要求 1 所述分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 所述的经 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅烷修饰的石英毛细管柱的制备过程为 ： 首先， 采用 0.05-0.5mol/l 氢氧化钠水溶液冲洗毛细管 1-15 分钟 ； 然后用蒸馏水冲洗 3-15 分钟 ； 然后用 0.05-0.5mol/l 盐酸水溶液冲洗毛细管 1-15 分钟， 然后用蒸馏水冲洗毛细管 3-15 分钟， 然后用氮气吹毛细管 10-60 分钟， 灌注 0.1% 的 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧 基硅烷甲醇溶液至毛细管内充满为止， 并在毛细管两段封口。
7、， 60-90水浴聚合 3-8 小时 , 然后用甲醇冲洗毛细管 30 分钟， 然后用 50氮气吹吹毛细管 10-60 分钟， 待用。 7. 根据权利要求 1 所述分子印迹整体柱， 其特征在于 ： 聚合反应完成后， 将制备的印迹 整体柱连接到高效液相色谱中， 采用高压液相色谱泵冲洗未反应的功能单体和模板分子。 8. 一种权利要求 1 所述分子印迹整体柱的应用， 制备的印迹整体柱用于贝类样品中失 忆类贝毒的萃取或富集。 9. 根据权利要求 8 所述应用， 其特征在于 ： 将制备的印迹整体柱连接到高效液相色谱 中， 并在液相色谱中实现失忆类贝毒的分离、 富集与检测。 10. 根据权利要求 8 或 9。
8、 所述应用， 其特征在于 ： 所述失忆类贝毒为软骨藻酸。 权 利 要 求 书 CN 103884802 A 2 1/2 页 3 一种失忆性贝毒分子印迹整体柱及其应用 技术领域 0001 本发明属于高分子材料制备技术及其在贝类毒素分离分析中的应用， 具体的说涉 及一种新型贝类毒素的分子印迹整体柱。 背景技术 0002 分子印迹技术是指对特定目标分子(模板分子)及其结构类似物具有特异性识别 的聚合物的制备与应用技术。分子印迹聚合物 (Molecularly imprinted polymers， MIPs) 的制备一般采用本体聚合法， 得到的聚合产物经研磨、 过筛后在一定的溶剂条件下充分洗 涤除去。
9、模板分子、 致孔剂和未反应的单体等物质， 进而得到对模板分子具有特殊识别作用 的聚合物材料。该聚合物在复杂的体系中能选择性地识别模板分子， 并具有抗恶劣环境能 力强、 稳定性好、 使用寿命长等优点， 已广泛用于样品前处理色谱分析。 0003 整体柱， 又称为棒状柱， 是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合 的连续床固定相。整体柱具有内部结构均匀、 渗透率高、 易改性和传质速率快等优点， 可解 决填充色谱柱空间占用率低、 传质速率慢、 柱负压高、 色谱峰拖尾严重等问题， 被誉为第 4 代色谱固定相。 0004 基于分子印迹聚合物的选择识别能力和整体柱的诸多优点， 将二者相结合制备分 子。
10、印迹整体柱 (Molecularly imprinted monolithic colunln， MIPMC) 成为必然的发展趋 势。作为一种新型的固相萃取材料和色谱固定相， 分子印迹整体柱已被广泛用于环境、 生 物、 医药分析等领域。 发明内容 0005 本发明的目的是实现失忆类贝毒的特异性富集与检测。 提供一种失忆类贝类毒素 整体柱的制备方法， 以及在高效液相色谱中失忆类贝毒的快速富集与检测。 0006 在毛细管柱内制备分子印迹整体柱， 并在液相色谱中实现了失忆类贝毒的快速富 集与检测， 该方法包括以下步骤 ： 0007 （1） 将软骨藻酸标准品溶解在二甲亚砜溶液中， 加入功能单体、 交联。
11、剂、 致孔剂， 超 声混合， 通氮除氧， 静置至少 20min 以形成稳定的复合物。 0008 （2） 加入引发剂占溶液总重量的 0.5% 5%， 超声溶解。 0009 （3） 将 （2） 灌注在经 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅烷修饰的 25 250mid 的石英毛细管中， 封端。60 70水浴中聚合 12-16 小时 0010 （4） 将印迹柱连接到高效液相色谱上， 利用溶剂冲洗致孔剂与模板分子， 便可得到 具有良好印迹效果的整体柱。 0011 （5） 通过高效液相色谱， 使用印迹柱作为捕集柱与分析柱， 实现贝类毒素的快速富 集与检测。 0012 其中 ： 0013 （1） 所述功。
12、能单体为甲基丙烯酸、 甲基丙烯酰胺的混合物， 其物质量之比为 10:0、 说 明 书 CN 103884802 A 3 2/2 页 4 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 5:5、 4:6、 3:7、 2:8、 1:9: 或 0:10。 0014 （2） 所述的致孔剂为十二醇、 1,4- 丁二醇的混合物， 其物质量之比为 10:0、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4、 5:5、 4:6、 3:7、 2:8、 1:9: 或 0:10。 0015 （3） 所述模板分子所占单体物质量的比例为 1%、 2%、 5%、 10%、 20%， 所用经经 -( 甲 基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅烷修饰。
13、的毛细管柱为 25m、 50m、 75m、 100m、 150m、 200m、 250m， 聚合温度为 60 70水浴， 印迹整体柱长度 5cm-20cm。 0016 本发明的优点在于 ： 在石英毛细管柱内制备了失忆类贝毒的分子印迹整体柱， 分 析速度快， 溶剂用量少， 分子识别性能好。 附图说明 0017 图 1 为实施例 1 整体柱扫描电镜图。 0018 图 2 为实施例 1 印迹整体柱柱压与流速关系图 （良好的线性关系说明了整体材料 内部结构均匀） 。 0019 图 3 为实施例 1 分子印迹柱 （MIP） 较非分子印迹柱 （NIP） 不仅能够更强的保留鼠 毒素中提取出的贝类毒素 （AP。
14、S） ， 还能将鼠毒素中提取出的贝类毒素 （APS） 进行手性拆分， 分离度 （R） =2.1。 具体实施方式 0020 实例 1 0021 （1）首先将模板分子软骨藻酸 0.1mol， 甲基丙烯酰胺 1.5mol， 甲基丙烯酸 0.5mol， 十二醇、 1,4- 丁二醇 17mg， 哌嗪双丙烯酰胺 1.1mol， 二甲亚砜为溶剂， 偶氮二 异丁腈 0.04mg， 超声溶解混匀， 通氮除氧， 灌注在经过 -( 甲基丙烯酰氧基 )- 三甲氧基硅 烷修饰的 25m 内径的石英毛细管中， 封端。60 70水浴中聚合 12 小时。聚合反应完 成后采用高压液相色谱泵冲洗未反应的单体和模板分子。 0022。
15、 实例 2 0023 （2） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 10:0） 其他同实施例 1， 可得 MIP2。 0024 实例 3 0025 （3） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 9:1） 其他同实施例 1， 可得 MIP3。 0026 实例 4 0027 （4） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 8:2） 其他同实施例 1， 可得 MIP4。 0028 实例 5 0029 （5） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 7:3） 其他同实施例 1， 可得 MIP5。 0030 实例 6 0031 （6） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 6:4） 其他同实施例 1， 可得 MIP6。 0032 实例 7 0033 （7） 加入致孔剂 （十二醇、 1,4- 丁二醇， 质量比 5:5） 其他同实施例 1， 可得 MIP7。 说 明 书 CN 103884802 A 4 1/2 页 5 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103884802 A 5 2/2 页 6 图 3 说 明 书 附 图 CN 103884802 A 6 。