一种IgM抗体检测用吸附剂及其制备方法技术领域
本发明涉及抗体检测领域，具体为一种IgM抗体检测用吸附剂及其制备方法。
背景技术
IgM抗体是体液免疫中最早出现的特异性抗体，当病原体感染人体时，IgM抗体的
检测对传染病的早期诊断具有重要意义。目前市场上应用最广的方法包括捕获法和间接
法，已应用于Elisa、胶体金、化学发光等检测平台。捕获法测定IgM时，部分临床样本中含有
浓度不等的抗自身变性IgG的类风湿因子，其中存在IgM型抗体，会与抗人IgM抗体反应，造
成假阳。而间接法测定IgM，影响则更加明显，因为针对某些指标的特异性IgM抗体常和特异
性的IgG同时存在，但IgG与抗原的亲和力更强，造成阴性样本升高，干扰IgM的测定。故临床
上对血清样本进行IgM检测时，捕获法或间接法都不同程度的受到IgG的干扰，造成结果的
背景高，结果不准确。
现有技术中常采用蛋白A吸附、RF吸附剂处理样本去除IgG等因素的影响，降低检
测结果的背景。但蛋白A液体状态下不稳定，易失活，而RF吸附剂多为进口，价格较贵，会提
高检测成本。因此，在临床检测中，需要制备一种特异性好、性能稳定、价格便宜的吸附剂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中IgM检测时，捕获法或间接法都不同
程度的受到IgG的干扰，造成结果的背景高，结果不准确的缺陷，提供一种IgM抗体检测用吸
附剂及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
一种IgM抗体检测用吸附剂，以10mM PB、150mM NaCl的pH7.2～7.4的磷酸盐缓冲
液为基础，添加终浓度为6wt％的聚乙二醇6000、1mg/mL抗人IgG抗体、10mg/mL的BSA和
1wt‰proclin 300。
该吸附剂的制备方法，包括以下步骤：
1)、10mM PB、150mM NaCl的磷酸盐缓冲液，调节pH在7.2～7.4之间；
2)、向缓冲液中加入聚乙二醇6000，使其质量浓度为6％，室温搅拌至完全溶解后，
调整pH7.2～7.4；
3)、再加入抗人IgG抗体、BSA和proclin 300，使其终浓度分别为1mg/mL、10mg/mL
和1wt‰。
进一步的，在配制前对抗人IgG抗体做透析处理：配制pH7.2～7.4的10mM PB、
150mM NaCl的磷酸盐缓冲液，采用截留分子量10KD的透析袋处理抗人IgG，4℃下透析24h，
中间换液3次。
活性采用人IgG包被测定，抗体效价不低于1:300000。添加抗人IgG的作用是抗人
IgG可与临床样本中IgG形成免疫复合物，因不同中抗体的活性有差异，使这种复合物在聚
合物存在下析出完全。BSA的存在可保持缓冲液中抗体的活性，一般认为蛋白浓度越高，蛋
白越趋向于稳定。
PEG终浓度浓度约在3％可使免疫复合物析出。原因可能是PEG4000可与生物大分
子发生共沉淀作用，因聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀，而且其与生
物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，可在重力作用下形成沉淀析出。
本发明组成试剂简单，主要功能性成分包括抗人IgG和PEG6000，这两种试剂目前
在市面上很成熟，价格便宜；本发明反应温和，吸附剂缓冲体系pH偏中性、离子强度适合，对
于抗原抗体的免疫反应影响不大，适合多数试剂盒；本发明具有较好的灵敏度和特异性，对
特异性的IgG和RF因子都具有较好的吸附作用，针对大多数IgM检测试剂，特别是间接法测
定IgM有良好的应用范围，显著降低影响检测IgM抗体结果的样本背景，提高检测准确性。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用
于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1弓形虫IgM(TOX IgM)抗体检测试剂(磁微粒化学发光法)
样本来源：临床筛选弓形虫IgM抗体阳性5例、阴性5例，弓形虫IgG购自厂家2，RF购
自厂家3。
不同类型和不同浓度PEG比较的比较：
吸附剂A(PEG2000)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇2000(PEG2000)。
吸附剂B(PEG4000)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇4000(PEG4000)。
吸附剂C(PEG6000)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000(PEG6000)。
吸附剂D(PEG20000)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇20000
(PEG20000)。
将TOX IgG及RF因子分别添加到阴性样本中，各不同种类的PEG分别与同一批次试
剂反应，对TOX IgM进行检测。
检测步骤：
(1)将样本1:100稀释后，取30ul稀释后的样本与30ul吸附剂混合，混匀后，37℃反
应5min。
(2)加入30ul TOX-FITC，混匀，37℃反应15min。
(3)加入30ul偶联有FITC抗体的磁珠，混匀，37℃反应5min。
(4)用10mM PBS清洗3次，拍干。
(5)加入60ul AP标记的抗人IgM，37℃反应15min。
(6)用10mM PBS清洗3次，拍干。
(7)加入底物，读数。
(8)结果与临界值对比，得出比值，S/Co≥1为阳性，S/Co＜1为阴性。
结果如表1所示。
表1不同不同类型和不同浓度PEG对结果的影响
实验结果表明，采用PEG6000，浓度在6％，对样本中特异性IgG和RF因子吸附效果
最理想，结果准确性最理想。
2.不同pH值吸附剂比较：
吸附剂A(pH5.0)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000(PEG6000)、
2mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂B(pH6.0)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000(PEG6000)、
2mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂C(pH7.2-7.4)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000
(PEG6000)、2mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂D(pH8.5)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000(PEG6000)、
2mg/mL抗人IgG抗体。
以上各不同pH的吸附剂分别与同一批次试剂反应，测试方法同上，对TOX IgM临床
样本进行检测。结果如表2所示。
表2不同pH值吸附剂对结果的影响
结果表明，pH在中性区间7.2-7.4间，结果符合率100％。考虑到抗原抗体反应最适
合就是在pH7.2-7.4间，所以配制吸附剂的最适pH在7.2-7.4间。
3不同抗人IgG浓度对结果的影响：
吸附剂A(pH7.2-7.4)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000
(PEG6000)、0.25mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂B(pH7.2-7.4)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000
(PEG6000)、0.5mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂C(pH7.2-7.4)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000
(PEG6000)、1mg/mL抗人IgG抗体。
吸附剂D(pH7.2-7.4：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙二醇6000
(PEG6000)、2mg/mL抗人IgG抗体。
以上各不同pH的吸附剂分别与同一批次试剂反应，对TOX IgM临床样本进行检测。
结果如表3所示。
表3不同抗人IgG浓度对结果的影响
结果表明，吸附剂：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的PEG6000中添加2mg/mL以上
浓度的抗人IgG时，结果符合要求。但考虑到试剂成本，优先选择吸附剂中添加1mg/mL的抗
人IgG抗体，达到临床要求。
现有吸附剂条件：吸附剂C(pH7.2-7.4)：10mM PB缓冲液、150mM NaCl、6％的聚乙
二醇6000、1mg/mL抗人IgG抗体，但考虑到长期稳定性，需要在吸附剂中添加10mg/mL的BSA，
混匀后放置于2-8℃长期保存。
应用于试剂中的防腐剂通常包括各种抗生素、叠氮钠、硫柳汞等，但不同防腐剂对
不同应用平台的酶的活性影响不一，需要找到一种光谱的防腐剂，一直微生物生长，
proclin300是新一代广谱抗菌剂，能在较低的使用浓度下抑制细菌、真菌和酵母菌的生长，
同时对酶的活性影响小。
实施例2-巨细胞病毒IgM(CMV IgM)抗体检测试剂(磁微粒化学发光法)
样本来源：临床筛选CMV IgM抗体阳性5例、阴性5例，巨细胞IgG购自厂家2，RF购自
厂家3。
检测步骤：
(1)将样本1:100稀释后，取30ul稀释后的样本与30ul吸附剂混合，混匀后，37℃反
应5min。
(2)加入30ul CMV-FITC，混匀，37℃反应15min。
(3)加入30ul偶联有FITC抗体的磁珠，混匀，37℃反应5min。
(4)用10mM PBS清洗3次，拍干。
(5)加入60ul AP标记的抗人IgM，37℃反应15min。
(6)用10mM PBS清洗3次，拍干。
(7)加入底物，读数。
(8)结果与临界值对比，得出比值，S/Co≥1为阳性，S/Co＜1为阴性。
结果如表4所示。
表4巨细胞病毒IgM抗体检测试剂
鉴于本发明实施例众多，不适合逐一列举说明，但各实施例所需验证内容和最终
结论均接近，故此处不对各个实施例的验证内容逐一说明，仅以弓形虫IgM和巨细胞病毒
IgM检测试剂为代表进行说明。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可
以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。
凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的
保护范围之内。