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1、10申请公布号CN104069365A43申请公布日20141001CN104069365A21申请号201310104997022申请日20130328A61K36/8984200601A61K31/05200601A61P1/16200601A61P3/10200601A23L1/29200601A23L2/52200601A23G3/48200601A21D13/0820060171申请人东海大学地址中国台湾台中市72发明人谢长奇吴晋东陈婕妤李宜洁蔡新声74专利代理机构北京北新智诚知识产权代理有限公司11100代理人胡福恒54发明名称石斛多酚于保肝、治疗/预防糖尿病的用途57摘要本发明提。
2、供一种石斛多酚于保肝、治疗/预防糖尿病的用途。所述石斛多酚至少包含一石斛酚，如下式I所示本发明所揭的石斛多酚为萃取自药用植物中的活性成分，具有对抗如肝脏纤维化、肝脏脂肪堆积、肝脏发炎等肝脏病变、调控血糖以及降低体重的功效，可用以制造作为治疗肝脏疾病或是糖尿病的医药组合物，或是作为一保健食品而具有保肝或是调控血糖的功效。51INTCL权利要求书2页说明书5页附图8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书5页附图8页10申请公布号CN104069365ACN104069365A1/2页21一种使用石斛多酚用于制造治疗肝脏疾病的医药组合物的用途。2根据权利要求1所述的用。
3、途，其特征在于，所述石斛多酚至少包含一石斛酚，如下式I所示3根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述石斛多酚萃取自石斛属植物。4根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述石斛属植物为黄花石斛。5根据权利要求1、2、3或4所述的用途，其特征在于，所述肝脏疾病选自于脂肪肝、肝硬化、肝纤维化及肝炎所组成的群。6一种使用石斛多酚用于制造治疗糖尿病的医药组合物的用途。7根据权利要求6所述的用途，其特征在于，该石斛多酚至少包含一石斛酚，如下式I所示8根据权利要求6或7所述的用途，其特征在于，所述石斛多酚萃取自一石斛属植物。9根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述石斛属植物为黄花石斛。10一种石斛多酚。
4、作为食品的用途。11根据权利要求10所述的用途，其特征在于，该石斛多酚至少包含一石斛酚，如下式I所示权利要求书CN104069365A2/2页312根据权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述石斛多酚萃取自一石斛属植物。13根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述石斛属植物为黄花石斛。14根据权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述食品为保肝食品。15根据权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述食品为用以调控血糖的食品。权利要求书CN104069365A1/5页4石斛多酚于保肝、治疗/预防糖尿病的用途技术领域0001本发明有关于植物中的活性成分，特别指一种石斛多酚于保肝、。
5、治疗/预防糖尿病的用途。背景技术0002近年来由于生活型态的改变，大多数人的饮食习惯由在家用餐变更为至少两餐皆以外食为主，而长期外食的结果常会发生蔬菜摄取较少，肉类摄取量偏高等现象，除了会造成摄取营养不均的后果，更因为大多外食食物的油脂、糖份、盐分含量高，例如炸鸡、含糖饮料等，导致外食者摄取过多热量，会产生肥胖或是代谢症候群等生理问题。而肥胖对于人类的影响除了外在美观外，更会使身体内生理作用产生异常，导致非传染性疾病的罹病率及死亡率的增加，损害生活品质，例如造成肝脏累积过多脂肪，使得肝脏无法发挥正常的脂肪代谢功能，无法处理过剩的脂肪，因而造成脂肪肝；抑或胰岛素的分泌不正常，造成体内脂肪代谢异常。
6、，因而直接或是间接地导致如二型糖尿病的疾病产生。0003更进一步而言，所谓脂肪肝，是指肝内脂肪占肝脏重量超过10。轻度脂肪肝虽对于人体无立即性的重大危害，但是，长期性脂肪浸润肝脏，将使肝细胞慢性发炎，而提高肝脏病变的风险，如肝硬化、肝癌等；此外，脂肪肝患者的肝脏合成高密度脂蛋白减少，低密度脂蛋白及极低密度脂蛋白增加，而得引起高血脂症，并增加罹患中风或心脏病的可能性。而糖尿病是目前常见慢性病之一，大多数患者初期认为其症状不明显而忽略治疗，然长期观之，糖尿病会引发许多慢性并发症，如肾脏病变、视网膜病变，也是动脉硬化的危险因子，会加速心血管疾病的发生。再者，据统计大约半数的脂肪肝患者合并有糖尿病，而。
7、约半数糖尿病患者患有脂肪肝，其主因在于肥胖的糖尿病患者大多存在高胰岛素血症及胰岛素抗性，而诱使肝脏三酸甘油酯合成增加，并堆积于肝脏。目前临床上并无能完全治愈该二种疾病的药物，仅能针对病征而投予适当药物，配合改变生活习惯，减缓症状及控制病情。0004为了改善西药所产生的副作用，以及民众对于日常保健观念的提升，因此，目前许多相关研究以中草药为研究对象，例如石斛DENDROBIUMSPECIES。详言之，石斛为一种生长于热带及亚热带地区的兰科植物，多用于观赏的切花CUTFLOWERS及盆花POTTEDORCHIDS。石斛属DENDROBIUMGENUS植物包含约1600种，其中15种在台湾被发现。而。
8、于中医治疗应用上，经干燥的石斛或是新鲜的石斛茎部为一种名贵的中草药DENDROBIUMSPP；HERBADENDROBII，可用以退烧、眼科或是滋补身体。近期的研究中更指出石斛内含有许多活性物质，如菲基PHENANTHRENES、双苄BIBENZYLS、茐酮FIUORENONES和倍半萜SESQUITERPENES、生物碱ALKALOIDS而得分别具有不同活性，如消炎ANTIFLAMMATORY、抗氧化剂ANTIOXIDANT或抗过敏ANTIALLERGIC等。0005由此可知石斛属植物确为一种珍贵且对于人体健康有助益的植物，但是，过去研究未将石斛属植物用于肝脏疾病或是糖尿病，因此，本发明的发。
9、明人致力研究石斛属植物的活性成分，希望其能用于改善糖尿病或是肝脏疾病。说明书CN104069365A2/5页5发明内容0006本发明的主要目的在于提供一种使用石斛多酚用于制造治疗肝脏疾病的医药组合物的用途，其中0007该石斛多酚为萃取自石斛属植物的非多醣混合物，如黄花石斛植物，而至少包含一石斛酚，如下式I所示00080009该肝脏疾病为脂肪肝、肝硬化、肝纤维化或肝炎。0010本发明的另一目的在于提供一种使用石斛多酚于制造治疗糖尿病的医药组合物的用途，其中0011该石斛多酚萃取自石斛属植物非多醣混合物，如黄花石斛植物，而至少包含一石斛酚，如上式I所示。0012本发明的次一目的在于提供一种石斛多酚。
10、作为食品的用途，其中0013该石斛多酚萃取自一石斛属植物的非多醣混合物，如黄花石斛植物，而至少包含一石斛酚，如上式I所示。0014该食品为保肝食品或是用以调控血糖的食品。0015本发明的优点在于0016本发明所揭的石斛多酚为萃取自药用植物中的活性成分，具有对抗如肝脏纤维化、肝脏脂肪堆积、肝脏发炎等肝脏病变、调控血糖以及降低体重的功效，得用以制造作为治疗肝脏疾病或是糖尿病的医药组合物，或是作为一食品，用以保肝或是调控血糖。附图说明0017图1为石斛多酚以高效能液相层析仪分析所得的图谱。0018图2为石斛酚标准品以高效能液相层析仪分析所得的图谱。0019图3为石斛酚标准品以高效能液相层析仪测量所得。
11、的线性回归检量线。0020图4为测量各组小鼠体重的结果。0021图5为测量各组小鼠血清中转氨酶含量的结果。0022图6为测量各组小鼠肝脏中三酸甘油酯含量的结果。0023图7为各组小鼠肝脏组织切片以苏木紫/伊红染色的结果，其中，A为第一组，B为第二组，C为第三组，D为第四组。0024图8为各组小鼠经口服葡萄糖耐受性试验后于不同时间所测得的血糖值。说明书CN104069365A3/5页60025图9为测量各组小鼠血清中转氨酶含量的结果。0026图10为测量各组小鼠肝脏中IL6的结果。0027图11为测量各组小鼠肝脏中羟脯氨酸的结果。0028图12为各组小鼠肝脏组织切片以苏木紫/伊红染色的结果，其中。
12、，A为第一组，B为第二组，C为第三组，D为第四组。0029图13为各组小鼠肝脏组织切片以胶原蛋白专一性染剂染色的结果，其中，A为第一组，B为第二组，C为第三组，D为第四组。具体实施方式0030以下，将列举本发明若干实施例并配合附图作更进一步说明如后。0031本发明所揭的石斛多酚是由一石斛属植物所萃取的非多醣混合物，由于石斛属植物种类众多，因而在以下的实施例中将仅以黄花石斛为例，特此叙明。0032实施例一制备石斛多酚0033取一黄花石斛茎部，以常温干燥后研磨成粉，而称取约30克的粉末溶于300毫升的甲醇METHANOL中，并以超音波震荡器震荡10分钟，而获得一石斛/甲醇萃取物。将该石斛/甲醇萃取。
13、物依序以正己烷NHEXANE萃取三次，再以乙酸乙酯ETHYLACETATE，EA萃取三次，去除滤液而得到一石斛多酚。0034更进一步，将该石斛多酚以高效能液相层析仪HIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY以一预定条件下进行分析，结果如图1所示。0035实施例二石斛多酚含有石斛酚0036取一石斛酚标准品以高效能液相层析仪以一预定条件下进行分析，结果如图2所示。再将该石斛酚标准品制备为浓度分别为625MG/L、125MG/L、25MG/L、50MG/L、100MG/L、200MG/L，而经高效能液相层析仪测量，制作而得一线性回归检量线，公式为Y32363X1003R2。
14、09999，如图3所示。0037由图2可知石斛酚于管柱内的滞留时间约为22分钟处，而比对图1及图2的结果，可知该图1可知于滞留时间约为22分钟处具有一明显波峰，显示本发明所揭的石斛多酚至少具有石斛酚。0038更进一步，将该石斛多酚中对应该石斛酚标准品的积分面积带入该线性同归检量线的公式，而测得该石斛多酚中所含有的石斛酚量为10026185G/G。0039实施例三制备脂肪肝模式小鼠0040取复数只C57BL/6小鼠而分为四组，各该组小鼠先经一周适应环境后而分别以不同条件饲养八周，其中，第一组为正常小鼠；第二组为喂食浓度30的果糖水，以诱发脂肪肝发生；第三组同时喂食浓度30的糖水及本发明所揭的石斛。
15、多酚，剂量为10MG/KG；第四组同时喂食浓度30的糖水及本发明所揭的石斛多酚，剂量为50MG/KG。0041实施例四石斛多酚具有降低体重的功效0042分别测量实施例三中各该组小鼠的体重，结果如图4所示，可知第二组小鼠的体重显著高于第一组小鼠，显示喂食高浓度果糖水确实会造成体重增加，而得诱导形成脂肪肝模式小鼠；而相较于第二组小鼠，第三组及第四组的体重分别有显著降低，显示喂食高剂量或低剂量的石斛多酚具有体重降低的功效。说明书CN104069365A4/5页70043实施例五石斛多酚具有降低血清中转氨酶含量的功效0044转氨酶ALANINEAMINOTRANSFERASE；ALT为肝脏内的一种酵素。
16、，一般用以作为检测肝功能的指标，当血清中的血清转氨酶含量高于正常值时，表示肝脏有损伤或是发炎的现象产生。0045因此，于本实施例中分别检测实施例三中各该组小鼠血清中转氨酶的含量，结果如图5所示，可知第二组小鼠血清中转氨酶的含量显著高于第一组小鼠，显示喂食高浓度糖水确实会造成血清中转氨酶的含量，推知高浓度果糖水应会造成肝损伤；而相较于第二组小鼠，第三组及第四组小鼠血清中的转氨酶含量分别有显著降低，显示喂食高剂量或低剂量的石斛多酚皆具有降低血清中转氨酶含量的功效。0046实施例六石斛多酚具有抑制脂肪肝的功效0047于本实施例中分别检测实施例三中各该组小鼠肝脏中三酸甘油酯的含量，结果如图6所示，可知。
17、第二组小鼠肝脏中三酸甘油酯的含量显著高于第一组，显示喂食高浓度果糖水会造成肝脏中三酸甘油酯增加，而形成脂肪肝；而比对第二组的结果，第三组与第四组的小鼠肝脏中三酸甘油酯含量分别具显著降低，显示喂食本发明所揭石斛多酚，不论高剂量或低剂量，分别皆可有效降低肝脏中三酸甘油酯的含量，而抑制脂肪肝形成。0048更进一步，将各该组小鼠的肝脏组织分别以福马林固定，再以石蜡包埋切片后，以苏木紫/伊红染色，经脱水封片后，于光学显微镜下观察拍照，结果如图7所示，其中，图7A为第一组；图7B为第二组；图7C为第三组；图7D为第四组。0049由图7的结果可知由于第二组小鼠为高果糖所诱导的脂肪肝模式小鼠，肝脏内脂肪组织较。
18、多，肝脏内脂肪空泡明显；而相较于第二组，第三组或第四组的脂肪组织形成较少，脂肪组织空泡也较不明显，显示喂食本发明所揭的石斛多酚具有抑制脂肪肝形成的作用。0050实施例七石斛多酚具有调控血糖的作用0051必须先加以说明，胰岛素阻抗性是指特定胰岛素浓度所引起的降血糖反应不如正常状态，而造成血液中糖份含量偏高。胰岛素阻抗为造成第二型糖尿病的基本病因，大多数第二型糖尿病病患有胰岛素阻抗性。0052于本实施例中先分别测量实施例三的各该组小鼠于空副食的血糖值，而后口服给予各该组小鼠剂量为20G/KG的葡萄糖，再分别测量各该组小鼠于喂食后30、60、90及120分钟的血糖值，结果如图8所示。并进一步通过各该。
19、组小鼠口服葡萄糖耐受性试验评估其胰岛素阻抗性。而由图8的结果可知第二组小鼠的血糖升高，而与第一组具有显著差异，并推得第二组小鼠具胰岛素阻抗性；第三组及第四组的小属于口服葡萄糖后能分别于30、60、120分钟使血糖降低，而与第二组间具有显著差异，即第三组及第四组小鼠不具有胰岛素阻抗性，显示本发明所揭的石斛多酚，于高剂量或是低剂量下，皆能减少胰岛素阻抗的情形发生，并有效地调控血糖。0053实施例八制备肝炎模式小鼠0054取复数只ICR小鼠而分为四组，各该组小鼠先经一周适应环境后，再分别以不同条件处理而饲养八周，其中，第一组未经任何处理，为正常小鼠；第二组以硫代乙酰胺THIOACETAMIDE，TA。
20、A200MG/KG进行腹腔注射，用以诱发肝炎；第三组以硫代乙酰胺200MG/KG进行腹腔注射，并同时投予本发明所揭的石斛多酚，剂量为10MG/KG；第四组以硫说明书CN104069365A5/5页8代乙酰胺200MG/KG进行腹腔注射，并同时投予本发明所揭的石斛多酚，剂量为50MG/KG。0055实施例九石斛多酚具有抑制肝炎的功效0056检测实施例八中的各该组小鼠血清中转氨酶的含量及肝中IL6的含量，结果如图9及图10所示，其中，图9为各该组小鼠血清中转氨酶含量；图10为各该组小鼠肝中IL6的含量。0057由图9的结果可知第二组的转氨酶含量显著高于第一组，显示投予硫代乙酰胺确实会造成转氨酶增加。
21、；第三组或第四组与第二组相比，其转氨酶含量显著降低。0058由图10的结果可知第二组的IL6显著高于第一组，显示第二组小鼠具有肝发炎的现象；而与第二组相比，第三组或第四组的IL6量皆显著降低。0059由上结果显示注射硫代乙酰胺会诱导小鼠产生肝炎，造成血清中转氨酶含量增加，而喂食本发明所揭的石斛多酚，无论为高剂量或是低剂量，皆会抑制肝炎的发生。0060实施例十石斛多酚具有抑制肝纤维化及脂肪肝的功效0061由于肝脏内羟脯氨酸HYDROXYPROLINE含量为肝脏纤维化的重要指标，因此，于本实施例中检测实施例八中的各该组小鼠肝内羟脯氨酸含量，并更进一步将各该组小鼠的肝脏分别进行组织切片，并分别以苏木。
22、紫/伊红以及胶原蛋白专一性染剂SIRIUSRED进行染色，结果如图11至图13所示，其中，图11为各该组小鼠肝内羟脯氨酸的含量；图12为各该组小鼠肝脏组织切片以苏木紫/伊红染色的结果；图13为各该组小鼠肝脏组织切片以胶原蛋白专一性染剂染色的结果；而图12A及图13A为第一组；图12B及图13B为第二组；图12C及图13C为第三组；图12D及图13D为第四组。0062由图11结果可知第二组肝中羟脯氨酸显著高于第一组，显示投予硫代乙酰胺会造成肝中羟脯氨酸含量增加；而第三组及第四组肝中羟脯氨酸含量分别显著低于第二组。0063由图12及图13的结果可知第二组肝脏组织内脂肪空泡较明显，并纤维化组织的沉积。
23、较多，而另观第三组及第四组的肝脏组织内脂肪空泡较不明显，且纤维化组织的沉积也较少。0064由上述结果显示喂食本发明所揭的石斛多酚，不论为低剂量或高剂量，分别可以降低肝纤维化的形成以及抑制脂肪肝的形成。0065通过各该实施例的说明，本发明所揭的石斛多酚为萃取自药用植物中的活性成分，具有对抗如肝脏纤维化、肝脏脂肪堆积、肝脏发炎等肝脏病变、调控血糖以及降低体重的功效，得用以制造作为治疗肝脏疾病或是糖尿病的医药组合物，或是作为一食品，用以保肝或是调控血糖。0066而此所谓的该医药组合物是将本发明所揭的石斛多酚搭配一医药上可接受的载体及/或赋形剂制造而成，可为任何型态，如丸型、锭剂、粉状、液态、胶状、喷。
24、雾等，也可以任何方式投予，如口服、注射等，皆可达成本发明的功效。0067此外，本发明所揭的该石斛多酚，可以搭载任何一食物组成份而成为一食品，该食品可为饮品、口嚼锭、饼干、糖果或以任何形式供食用的产品，也可达成本发明的功效。0068上述说明是针对本发明的可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明技术特征所为的等效实施或是变更，均应包含于本发明的专利范围中。说明书CN104069365A1/8页9图1图2说明书附图CN104069365A2/8页10图3图4说明书附图CN104069365A103/8页11图5图6说明书附图CN104069365A114/8页12图7说明书附图CN104069365A125/8页13图8图9说明书附图CN104069365A136/8页14图10图11说明书附图CN104069365A147/8页15图12说明书附图CN104069365A158/8页16图13说明书附图CN104069365A16。