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1、(10)申请公布号 CN 102183632 A (43)申请公布日 2011.09.14 CN 102183632 A *CN102183632A* (21)申请号 201110022579.8 (22)申请日 2011.01.17 2010-008143 2010.01.18 JP 2010-288654 2010.12.24 JP G01N 33/50(2006.01) C07C 233/18(2006.01) C08G 65/48(2006.01) (71)申请人 精工爱普生株式会社 地址 日本东京 (72)发明人 福岛均 花冈幸弘 (74)专利代理机构 中科专利商标代理有限责任 公司。
2、 11021 代理人 李贵亮 (54) 发明名称 喷出用液体、 生物试样的喷出方法及化合物 (57) 摘要 本发明的课题在于， 得到一种可以在不降低 生物分子的生理活性的情况下从微细的喷出口稳 定地喷出的包含生物试样的喷出用液体。本发明 的喷出用液体的特征在于， 含有生物试样和至少 一种式(1)所示的化合物， 且在式(1)中， m8且 6 n 20。 (30)优先权数据 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 3 页 CN 102183636 A1/1 页 2 1. 一种喷出用液体， 其特征在于， 包含生物试。
3、样和至少一种式 (1) 所示的化合物， 在所述式 (1) 中， m 8 且 6 n 20， 2.如权利要求1所述的喷出用液体， 其特征在于， 含有所述生物试样的2重量以上的 所述化合物。 3. 如权利要求 1 或权利要求 2 所述的喷出用液体， 其特征在于， 所述式 (1) 中， m 16 且 n 8。 4. 如权利要求 1 3 中任一项所述的喷出用液体， 其特征在于， 所述生物试样包含血 清。 5. 一种生物试样的喷出方法， 其特征在于， 在生物试样中添加至少一种式 (1) 所示的 化合物， 并使用喷墨法喷出， 式 (1) 中， m 8 且 6 n 20。 6. 一种化合物， 其特征在于， 。
4、以式 (1) 表示， 且用于添加在生物试样中并使用喷墨法喷 出， 式 (1) 中， m 8、 且 6 n 20。 权 利 要 求 书 CN 102183632 A CN 102183636 A1/5 页 3 喷出用液体、 生物试样的喷出方法及化合物 技术领域 0001 本发明涉及一种喷出用液体、 生物试样的喷出方法及化合物等。 背景技术 0002 为了检查血液中包含的数十种生物分子， 现状是需要数十 cc 的血液。因此， 需要 使检查所需的血液量大量减少的检测技术。 0003 作为正确且有效地分配注射微量的液体的方法， 考虑利用喷射(Ink jet)技术。 例 如， 在专利文献 1 中记载有通。
5、过利用热能的喷射方式喷出含有蛋白质及肽中的至少一种的 溶液的例子。 0004 专利文献 1 ： 日本特开 2008-137967 号公报 发明内容 0005 在血液等生物试样中， 含有较多类似例如蛋白质那样的容易非特异性吸附在喷头 的喷出口附近或流路的表面的分子。 因此， 存在因附着这些分子而使喷出口或流路堵塞， 从 而不能稳定喷出的情况。 另外， 为了对喷出的生物试样实施生化检查， 还需要维持所含的生 物分子的生理活性。但是， 在专利文献 1 中并没有记载这样的课题的具体解决方法。 0006 本发明是鉴于上述情况而完成的， 其目的之一在于， 得到一种可以在不降低生物 分子的生理活性的情况下从。
6、微细的喷出口稳定喷出的包含生物试样的喷出用液体。 具体实施方式 0007 本发明的喷出用液体的特征在于， 包含生物试样和至少一种式 (1) 所示的化合 物， 在式 (1) 中， m 8 且 6 n 20。 0008 0009 由此， 可以防止生物试样中所含的蛋白质等分子附着在喷头的喷出口附近或流路 的表面而使喷出口或流路堵塞， 可以稳定地喷出。另外， 即使在生物试样中添加这些化合 物， 也可以不使生物试样中所含的生物分子的生理活性降低地得到高的生化反应重现性。 0010 优选包含生物试样的 2 重量以上的化合物。 0011 由此， 在喷头中填充喷出用液体后即使经过较长时间， 也可以得到充分的喷。
7、出稳 定性。 0012 在式 (1) 中， 优选 m 16 且 n 8。 0013 由此， 在喷头中填充喷出用液体后即使经过较长时间， 也可以得到充分的喷出稳 定性。 0014 生物试样优选包含血清。 说 明 书 CN 102183632 A CN 102183636 A2/5 页 4 0015 由此， 可以大幅减少检查所需的采血量。 0016 本发明的生物试样的喷出方法在生物试样中添加至少一种式 (1) 所示的化合物， 并使用喷射法喷出。 0017 0018 ( 式 (1) 中， m 8、 且 6 n 20。) 0019 由此， 可以防止生物试样中所含的蛋白质等分子附着在喷头的喷出口附近或流。
8、路 的表面而使喷出口或流路堵塞， 可以稳定地喷出。另外， 即使在生物试样中添加这些化合 物， 也可以不使生物试样中所含的生物分子的生理活性降低地得到高的生化反应重现性。 0020 本发明的化合物为式(1)所示的且添加于生物试样中使用喷射法喷出的化合物。 0021 0022 ( 式 (1) 中， m 8 且 6 n 20。) 0023 通过在生物试样中添加式 (1) 所示的化合物， 可以防止生物试样中所含的蛋白质 等分子附着在喷头的喷出口附近或流路的表面而使喷出口或流路堵塞， 可以稳定地喷出。 另外， 即使在生物试样中添加该化合物， 也可以不使生物试样中所含的生物分子的生理活 性降低地得到高的生。
9、化反应重现性。 附图说明 0024 图 1 是表示本发明的实施方式的喷出用液体中所含的血清蛋白质分子的生化学 反应活性的测定结果的表。 0025 图 2 是表示本发明的实施方式的喷出用液体中所含的血清蛋白质分子的生化学 反应活性的测定结果的表。 图 3 是表示改变化合物的添加量时喷出后的血清蛋白质分子的生化学反应活性的测 定结果的表。 具体实施方式 0026 下面， 对本发明的实施方式进行说明。 0027 本发明的实施方式的喷出用液体通过在生物试样中添加化合物而得到。 添加的化 合物是以下式 (1) 所示的化合物。化合物 (1) 为在以乙二醇链为 E、 肽键链 (CONH) 为 P、 烷 基链。
10、为 K 时具有 E-P-K 所示的直链结构的乙二醇系表面活性剂。 0028 说 明 书 CN 102183632 A CN 102183636 A3/5 页 5 0029 化合物(1)含有链长m的乙二醇链和链长n的烷基链。 在此， m8且6n20， 特别优选 m 16 且 n 8。 0030 生物试样为血液、 血清等。在此， 使用人血清样本 CRPII( 在人血清中添加 C 反应 性蛋白质并使其达到一定浓度而得的物质 )。 0031 表 1 中， 表示化合物 (1) 的例子。 0032 表 1 0033 化合物名称 来源 详细结构 C8P19 Polypuren 8， m 19 C12P19 。
11、Polypuren 12， m 19 C16P19 Polypuren 16， m 19 0034 然后， 对化合物 (1) 的合成方法的例子进行说明。 0035 使 10mmol 的脂肪酸氯化物溶解在 50ml 的二氯甲烷中， 并加入 12mmol 的 N- 羟基 琥珀酰亚胺进行搅拌。进而添加 2ml 三乙胺， 然后在室温下搅拌 30 分钟 ( 式 2)。然后， 一 次性加入 11.1mmol 的单氨基 PEG19( 分子量 ： 898.1、 Polypure 制 ) 进一步搅拌。用 HPLC 等确认添加的单氨基PEG19被消耗约90后， 以相对于50ml HCl， 反应混合物为5的方式 混。
12、合并进行短时间搅拌。 萃取过程中， 用水多次清洗有机层， 然后真空浓缩有机层除去二氯 甲烷。 在剩余物中加入乙醚， 进行多次倾析(decantation)， 然后使其干燥， 得到白色固体物 质 ( 式 3)。化合物 (1) 的收率为 75 90。 0036 0037 其中， R 表示烷基链。 0038 接着， 对本实施方式的喷出用液体的制造方法进行说明。 在此， 以使用血清作为生 物试样的情况为例进行说明。 0039 首先， 在人血清样本CRPII(在人血清中添加CRP蛋白质并使其达到一定浓度而获 得的物质 ) 中添加化合物 (1)， 并尽可能在不振摇的情况下使 其溶解在血清中。添加的量 优选。
13、为血清液体的 2 重量以上。在室温下进行溶解。另外， 也可以使容器浸渍在 35的 温水中， 边轻微摇动边使其溶解。由此， 可以提高溶解速度。 0040 溶解后， 除去析出沉降的不溶部分， 将溶解液在 5下保存半天。 说 明 书 CN 102183632 A CN 102183636 A4/5 页 6 0041 接着， 在喷头中填充本发明的喷出用液体进行喷出。 0042 图 1、 2 是表示喷出后的血清蛋白质分子的生化学反应活性的测定结果的表。图 1、 2 示出了作为参考测定数据 (ref) 的仅测定血清样本时的测定值和在血清中分别添加 C12P19、 C8P19、 C16P19、 P25(P1。
14、777， 东京化成 ) 所得的物质的血清测定值。需要说明的是， 参考测定数据测定用的血清不进行从喷头喷出的操作， 其它的数据使用进行了从喷头喷出 的操作的物质进行测定。 图1以各2个例子表示实际的生化学反应活性的测定值， 图2表示 图 1 的各测定数据的平均值和参考测定数据的差异 ( )。与参考测定数据的差异在 10 以上时用黑体表示。 0043 P25(P1777)是以下的式(4)所示的化合物， 与化合物(1)不同， 其是具有乙二醇链 和烷基链之间的肽键链 (CONH) 缺失的结构的乙二醇系表面活性剂。 0044 0045 其中， n 12、 5 m 30。 0046 如图 2 所示可知， 。
15、添加烷基链长较短 (n 较小 ) 的化合物时， 具有更高的保持血清 中的蛋白质的生理活性的效果。特别是添加 2 重量以上的 C8P19 时， 在几乎所有的蛋白 质检查项目中均得到较高的生化学反应的重现性。 0047 另外， 对于 C12P19、 C16P19， 除去 ALT、 CRP 等一部分蛋白质也可得到较高的生化学 反应的重现性。需要说明的是， 对于 P25(P1777)， 除去一部分蛋白质， 也可得到较高的生化 学反应的重现性， 但可知 C12P19、 C8P19 及 C16P19 具有更高的保持血清中的蛋白质的生理 活性的效果。 0048 另外， 由于在血清中含有大量像蛋白质那样的容易。
16、非特异性吸附于喷头的喷出口 附近或流路的表面的分子， 这些分子的附着有时会使喷出口或流路堵塞。 另外， 经过一定时 间时血清液体干燥、 凝固也成为堵塞喷出口 或流路的原因。 本实施方式的喷出用液体通过 在血清等中添加 2 重量以上的式 (1) 所示的化合物， 可以防止血清中所含的蛋白质附着 于喷头的喷出口附近或流路的表面而堵塞喷出口或流路， 从而可以进行稳定的喷出。需要 说明的是， 添加量少于 2 重量时喷出稳定性不充分。 0049 如上所述， 本实施方式的喷出用液体通过在血清等中添加 2 重量以上的式 (1) 所示的化合物， 可以防止血清中所含的蛋白质附着于喷头的喷出口附近或流路的表面而堵 。
17、塞喷出口或流路， 从而可以进行稳定的喷出。 0050 另外， 即使在血清中添加这些化合物， 也不会降低血清中所含的生物分子的生理 活性， 而且通过除去一部分蛋白质， 可得到较高的生化学反应重现性。 0051 另外， 式(1)所示的化合物分子中所含的烷基链长越短(n小)， 保持血清中蛋白质 的生理活性的效果越高。 0052 需要说明的是， 本实施方式中， 化合物 (1) 为以乙二醇链为 E、 肽键链 (CONH) 为 P、 烷基链为 K 时具有 E-P-K 所示的直链结构的乙二醇系表面活性剂， 但是也可以为具有例如 (E-P)2-K( 与烷基链 K 的碳结合的氢被 2 个 (E-P) 取代的化合。
18、物 ) 或者 (E-P)3-K( 与烷基 链 K 的碳结合的氢被 3 个 (E-P) 取代的化合物 ) 这样的支链结构的分子。 0053 图 3 是表示改变化合物的添加量时喷出后的血清蛋白质分子的生化学反应活性 说 明 书 CN 102183632 A CN 102183636 A5/5 页 7 的测定结果的表。示出了作为参考测定数据 (ref1 及 ref2) 仅测定血清样本时的测定值和 在血清中分别添加了 2 重量及 3 重量的 C8P19、 C12P19、 C16P19 所得的物质的测定值。 参考测定数据测定用血清 ( 表面活性剂化合物的添加量 0 重量 ) 没有进行从喷头喷出的 操作。。
19、在血清中分别添加了 2 重量及 3 重量的 C8P19、 C12P19、 C16P19 的物质在进行 了从喷头喷出的操作后再分别回收了各自的血清后再进行测定。进行两次测定， 差异 ( ) 栏以百分率表示各测定数据的平均值和参考测定数据的差异。关于该差异， 通过检查各项 目的差异能否控制在 10以内， 成为判断该测定方法能否实际运用的标准。 0054 如图3所示可知， 添加了2重量及3重量的C8P19时， 各项目的差异在10 以内。因此可知， 通过添加 2 重量或 2 重量以上的 C8P19， 可以维持生物分子的生理活 性， 并且可以使用喷射技术进行微量生物体样 品的喷出以及实用的生化学检查。另外可 知， 通过添加2重量或2重量以上的各表面活性剂添加物， 可以稳定地进行基于压电喷 墨方式的喷出。 说 明 书 CN 102183632 A CN 102183636 A1/3 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102183632 A CN 102183636 A2/3 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 102183632 A CN 102183636 A3/3 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 102183632 A 。