灭活疫苗的油佐剂.pdf

本发明涉及灭活疫苗的油佐剂。由注射白油和甘露醇油酸脂按90∶10～100∶8的体积份混合而成。其优点是：1)使用方便，简化了灭活疫苗的制作过程，由目前三步制作灭活疫苗减为一步制作，也降低了疫苗成本；2)几乎无毒性，本发明使用的白油芳烃含量低，小于50ppm。疫苗注射到动物体内后，红斑很小，不会影响肉的质量和外观；3)粘度低，用于动物防疫注射时推针时阻力较小；便于注射。

1.  灭活疫苗油佐剂，其特征在于由注射白油和甘露醇油酸脂按85：10～95：10的体积份混合而成。

2.  根据权利要求1所述的灭活疫苗的油佐剂，其特征在于所述注射白油按下列步骤制得：
1)原料制取采用蒸馏方法对石蜡基或中间基原油进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料；
2)原料去杂将氢气和所述原料按500～1000的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，其压力控制在15.5～16.5MPa、体积空速为0.5～1.0h^-1，反应温度在230～290℃，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油；
3)深度脱芳将氢气和所述去杂原料按300～500的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，其压力控制在4.5～10MPa，优选为5.5～6.50MPa、反应温度在150～290℃，优选为160～260℃，体积空速为0.1～0.5h^-1优选为0.20～0.30h^-1，得到脱芳白油；
4)吸附精制将脱芳白油在常压、温度为115～125℃、体积空速为0.5～1.0h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，精制得到有如下特性的注射白油：
粘度3～6(40℃)mm²/s；        密度807～835(20℃)Kg/m³；
芳烃含量<50ppm；             总硫<1.0mg/kg；
含铅<1.00mg/k；              含砷<1.00mg/k；
含重金属<1.00mg/k；          闪点(闭口)>130℃；
赛波特色号+30；              凝固点<—6℃。

3.  根据权利要求1所述的灭活疫苗的油佐剂，其特征在于所述甘露醇油酸脂按下列方法制得：取一定量甘露醇在氮气保护下，于190-200℃的条件下脱水0.4～0.6小时，然后分别缓慢加入1.5～2.5倍和1/220～1/180倍于所述甘露醇重量的油酸和氢氧化钠，恒温脂化2.5～3.5小时，所得产品为甘露醇油酸脂，其结构式为：

灭活疫苗的油佐剂
技术领域
本发明涉及用于动物灭活疫苗的中间制剂，尤其涉及灭活疫苗的油佐剂。
背景技术
目前灭活疫苗生产工艺一般需要三步：第一步是将注射白油与油溶性乳化剂混合均匀，第二步是抗原液与水溶性乳化剂混合均匀，第三步是将上述两步均匀溶液放入一起进行乳化，制备出均匀稳定的油包水灭活疫苗。该方法工艺繁琐，流程较长，能耗高，生产效率低。其主要原因是油溶性乳化剂不溶于水，水溶性乳化剂不溶于油，因此乳化工艺必须分三步完成。在三步法生产工艺中必须使用油溶性和水溶性两种乳化剂。目前在我国油溶性乳化剂一般用司本-80(又称span-80或司盘-80)，水溶性乳化剂一般用吐温80(Tween-80)。吐温80是一种细胞毒性的表面活性剂，用在生产牛白蛋白抗原疫苗时，经观察没有起到增强免疫活性的作用。
因此，目前灭活疫苗生产存在着工艺步骤较复杂、生产成本高，不便疫苗快速及时制取的缺陷。
目前单一使用的油溶性乳化剂是注射白油，我国目前主要由10号食品级白油代替，40℃粘度一般在7.9～13mm²/s，芳烃含量一般在170ppm左右，碳数分布也较广，因此用它配制的灭活疫苗(油包水)往往粘稠度较大，造成给动物注射困难，毒副反应较强(过敏)，引起注射部位红肿、化脓等，动物注射部位的红斑无法消除，宰杀后影响肉的质量和外观，甚至会出现食品安全问题。因此目前有实力的生物厂家大都采用进口白油作为注射白油，具有典型代表进口注射白油芳烃含量一般在60ppm，粘度一般在7～10mm²/s，性能比较稳定，用它制备的灭活疫苗在粘度和使用效果方面都有了显著提高。
注射白油中主要由链烷烃、环烷烃和微量芳烃构成。烃类中芳烃的毒性最大，环烷烃次之，链烷烃最小。芳烃为毒性物质，重质芳烃不仅是强蓄积、中等致敏性物质，且有致癌、致突变性。欧盟食品安全局认为，PAHs(多环芳烃化合物)具有遗传毒性及致癌性，因此芳烃对人类健康构成严重威胁。脂环烃的毒性大于相应的直链烷烃。脂环烃是麻醉剂和中枢神经系统抑制剂，但急性毒性低。链烷烃多属于低毒和微毒类，其毒性随碳原子数的增加而增强。因此从食品安全角度来说，注射白油必须使芳烃降到越低越好，碳原子数要越低越好。但碳原子数太少，油品粘度太低，在疫苗制备过程容易破乳而使得产品性能不稳定，因此碳数分布一定要较为合理。
目前我国一般生产生产注射白油方法都采用相应粘度的润滑油基础油进行酸碱或深度加氢而制得，而目前润滑油基础油基本都是按一定的粘度、闪点等物性指标调合而成，因此用它制备出的注射白油性能稳定性较差，造成生产的疫苗性能也不稳定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方便灭活疫苗及时快速制取且性能稳定、毒性极小、生产工艺步骤简洁、成本低的一种灭活疫苗的油佐剂，制取灭活疫苗时只要将该油佐剂按一定的比例与抗原液混合就可制得所需疫苗，该油佐剂由以下技术方案予以实施：
由注射白油和甘露醇油酸脂按85：10～95：10的体积份混合而成。
所述注射白油按下列步骤制得：
1)原料制取采用蒸馏方法对石蜡基或中间基原油进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料；
2)原料去杂将氢气和所述原料按500～1000的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，其压力控制在15.5～16.5MPa、体积空速为0.5～1.0h^-1，反应温度在230～290℃，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3)深度脱芳将氢气和所述去杂原料按300～500的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，其压力控制在4.5～10MPa，优选为5.5～6.50MPa、反应温度在150～290℃，优选为160～260℃，体积空速为0.1-0.5h^-1优选为0.20-0.30h^-1，得到芳烃含量<50ppm的脱芳白油。
4)吸附精制将脱芳白油在常压、温度为115～125℃、体积空速为0.5～1.0h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，精制得到有如下特性的注射白油：
粘度3～6(40℃)mm²/s；   密度807～835(20℃)Kg/m³；
芳烃含量<50ppm；        总硫<1.0mg/kg；
含铅<1.00mg/k；         含砷<1.00mg/k；
含重金属<1.00mg/k；     闪点(闭口)>130℃；
赛波特色号+30；         凝固点<—6℃。
所述甘露醇油酸脂按下列方法制得：取一定量甘露醇在氮气保护下，于190-200℃的条件下脱水0.4～0.6小时，然后分别缓慢加入1.5～2.5倍和1/220～1/180倍于所述甘露醇重量的油酸和氢氧化钠，恒温脂化2.5～3.5小时，所得产品为甘露醇油酸脂，其结构式为：

本发明将以前的油性和水性二种乳化剂才能配成的佐剂通过本发明制成油水合一的佐剂，为灭活疫苗的及时快速制取提供了一种中间制剂，在制取灭活疫苗时，只要将其与灭活抗原液按一定比例混合就能及时快速制得灭活疫苗。由于组成油佐剂的乳化剂是甘露醇在氮气保护下进行恒温脂化反应所获得的甘露醇油酸脂，具有增强免疫活性的作用，而油佐剂的另一组分——注射白油是通过窄馏程分馏且用两步加氢和吸附精制制得，组分相对单一、低芳低粘，性能稳定，从而使本发明的油佐剂具备这样的优点：1)使用方便，简化了灭活疫苗的制作过程，由目前三步制作灭活疫苗减为一步制作，也降低了疫苗成本；2)几乎无毒性，本发明使用的白油芳烃含量低，小于50ppm。疫苗注射到动物体内后，红斑很小，不会影响肉的质量和外观；3)粘度低，用于动物防疫注射时推针时阻力较小；便于注射。
具体实施方式
实施例1
一、首先制取甘露醇油酸脂
取40g甘露醇在氮气保护下，于195℃的条件下脱水0.50小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的2.0倍和1/200倍的80g油酸和0.20g氢氧化钠NaOH，恒温脂化3小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式为：

二、制取注射白油
1.原料制取
采用蒸馏方法对石蜡基进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料。
2.原料去杂
将氢气和白油原料按500的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，氢气经过氢反应器中的反应床由高压分离器分离出来进行循环使用。加氢反应中采用典型的Ni-Mo-W加氢催化剂，其压力控制在15.5MPa、温度控制在230℃，体积空速为1.0h^-1，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3.深度脱芳
将氢气和上述去杂白油按300的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，同样氢气经通过对应高压分离器进行分离，以得到循环使用。反应中采用典型的Ni加氢催化剂，反应器中压力控制在5.5MPa、温度控制在160℃，体积空速为0.20h^-1，得到脱芳白油，其芳烃含量降到10ppm以下。
4.吸附精制
将脱芳原料在常压、温度为115℃、体积空速为1.0h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，得到有如下特性的注射白油：
粘度4.640℃)mm²/s；     密度806(20℃)Kg/m³；
芳烃含量2.6ppm；        总硫0.5mg/kg；
含铅0.03mg/k；       含砷0.02mg/k；
含重金属0.06mg/k；   闪点(闭口)137℃；
赛波特色号+30；      凝固点-8℃。
三、制取油佐剂
将上述的注射白油和甘露醇油酸脂按85：10体积份送入乳化泵，乳化泵以10000转/分对其进行搅拌混合，制得油佐剂。
实施例2
一、首先制取甘露醇油酸脂
同样取40g甘露醇在氮气保护下，于190℃的条件下脱水0.40小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的1.5倍和1/220倍的60g油酸和0.18g氢氧化钠NaOH，恒温脂化2.5小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式同上述实施例。
二、制取注射白油
1.原料制取
采用蒸馏方法对中间基原油基进行蒸馏，蒸馏出279～312℃的馏分作为注射白油原料。
2.原料去杂
将氢气和白油原料按750的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，氢气经过氢反应器中的反应床由高压分离器分离出来进行循环使用。反应中采用典型的Ni-Mo-W加氢催化剂，加氢反应中压力控制在16.0MPa、温度控制在260℃，体积空速为0.8h^-1，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3.深度脱芳
将氢气和上述去杂原料按400的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，反应中采用典型的Ni加氢催化剂，其压力控制在6.0MPa温度控制在210℃、体积空速为0.2h^-1，得到脱芳白油，其芳烃含量降到10ppm以下。
4.吸附精制
将脱芳原料在常压、温度为120℃、体积空速为0.7h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，得到有如下特性的注射白油：
粘度3.4(40℃)mm2/s；      密度805(20℃)Kg/m3；
芳烃含量2.4ppm；          总硫0.4mg/kg；
含铅0.03mg/k；            含砷0.02mg/k；
含重金属0.05mg/k；        闪点(闭口)138℃；
赛波特色号+30；           凝固点-8℃。
三、制取油佐剂
将上述的注射白油和甘露醇油酸脂按90：10体积份送入乳化泵，乳化泵以10000转/分对其进行搅拌混合，制得油佐剂。
实施例3
一、首先制取甘露醇油酸脂
同样取40g甘露醇在氮还是取40g甘露醇在氮气保护下，于200℃的条件下脱水0.60小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的2.5倍和1/180倍的100g油酸和0.22g氢氧化钠NaOH，恒温脂化3.5小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式与实施例1相同。
二、制取注射白油
1.原料制取
采用蒸馏方法对石蜡基油品进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料。
2.原料去杂
将氢气和白油原料按1000的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，氢气经过氢反应器中的反应床由高压分离器分离出来进行循环使用。反应中采用典型的Ni-Mo-W加氢催化剂，加氢反应中压力控制在16.5MPa，温度控制在290℃，体积空速为0.5h^-1，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3.深度脱芳
将氢气和上述去杂原料按500的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，反应中采用典型的Ni加氢催化剂，反应器中压力控制在6.5MPa、温度控制在260℃，体积空速为0.30h^-1，得到脱芳白油，其芳烃含量降到10ppm以下。
4.吸附精制
将脱芳原料在常压、温度为125℃、体积空速为0.5h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，得到有如下特性的注射白油：
粘度4.5(40℃)mm²/s；   密度807(20℃)Kg/m³；
芳烃含量2.5ppm；       总硫0.5mg/kg；
含铅0.03mg/k；         含砷0.03mg/k；
含重金属<0.7mg/k；     闪点(闭口)137℃；
赛波特色号+30；        凝固点-7℃。
三、制取油佐剂
将上述的注射白油和甘露醇油酸脂按95：10体积份送入乳化泵，乳化泵以10000转/分对其进行搅拌混合，制得油佐剂。
实施例4
一、首先制取甘露醇油酸脂
同样取40g甘露醇在氮还是取40g甘露醇在氮气保护下，于192℃的条件下脱水0.40小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的1.7倍和1/210倍的68g油酸和0.19g氢氧化钠NaOH，恒温脂化3.0小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式与实施例1相同。
二、制取注射白油
1.原料制取
采用蒸馏方法对石蜡基油品进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料。
2.原料去杂
将氢气和白油原料按600的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，氢气经过氢反应器中的反应床由高压分离器分离出来进行循环使用。反应中采用典型的Ni-Mo-W加氢催化剂，加氢反应中压力控制在15.8MPa，温度控制在250℃，体积空速为0.6h^-1，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3.深度脱芳
将氢气和上述去杂原料按400的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，反应中采用典型的Ni加氢催化剂，反应器中压力控制在4.5MPa、温度控制在290℃，体积空速为0.10h^-1，得到脱芳白油，其芳烃含量降到10ppm以下。
4.吸附精制
将脱芳原料在常压、温度为125℃、体积空速为0.5h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，得到有如下特性的注射白油：
粘度5.2(40℃)mm²/s；  密度815(20℃)Kg/m³；
芳烃含量3.0ppm；      总硫0.8mg/kg；
含铅0.04mg/k；        含砷0.04mg/k；
含重金属0.9mg/k；     闪点(闭口)135℃。
三、制取油佐剂
将上述的注射白油和甘露醇油酸脂按87：10体积份送入乳化泵，乳化泵以10000转/分对其进行搅拌混合，制得油佐剂。
实施例5
一、首先制取甘露醇油酸脂
同样取40g甘露醇在氮还是取40g甘露醇在氮气保护下，于198℃的条件下脱水0.50小时，然后分别缓慢加入相当于40g甘露醇重量的2.2倍和1/190倍的88g油酸和0.21g氢氧化钠NaOH，恒温脂化2.5小时，得到甘露醇油酸脂的乳化剂，该甘露醇油酸脂的结构式与实施例1相同。
二、制取注射白油
1.原料制取
采用蒸馏方法对中间基原油基进行蒸馏，蒸馏出270～320℃的馏分作为注射白油原料。
2.原料去杂
将氢气和白油原料按900的体积比同时加入加氢反应器进行第一段加氢反应，氢气经过氢反应器中的反应床由高压分离器分离出来进行循环使用。反应中采用典型的Ni-Mo-W加氢催化剂，加氢反应中压力控制在16.2MPa、温度控制在280℃，体积空速为0.7h^-1，通过该段加氢反应，所述原料中的硫、氮、烯烃、胶质、重金属和大部分芳烃等杂质被脱除，得到去杂白油。
3.深度脱芳
将氢气和上述去杂原料按350的体积比同时加入加氢反应器进行第二段加氢反应，反应中采用典型的Ni加氢催化剂，其压力控制在1.0MPa温度控制在150℃、体积空速为0.5h^-1，得到脱芳白油，其芳烃含量降到10ppm以下。
4.吸附精制
将脱芳原料在常压、温度为122℃、体积空速为0.9h^-1的条件下通过以13X为吸附剂的吸附反应器脱除异味及机械杂质，得到有如下特性的注射白油：
粘度5.8(40℃)mm2/s；     密度818(20℃)Kg/m3；
芳烃含量3.0ppm；         总硫0.7mg/kg；
含铅0.04mg/k；           含砷0.04mg/k；
含重金属0.09mg/k；       闪点(闭口)136℃；
赛波特色号+30；          凝固点—9℃
三、制取油佐剂
将上述的注射白油和甘露醇油酸脂按93：10体积份送入乳化泵，乳化泵以10000转/分对其进行搅拌混合，制得油佐剂。
将上述实施例所得的油佐剂与抗原液按一定体积份配置就可得到灭活疫苗，使目前三步制作灭活疫苗减为一步制作，简化了灭活疫苗的制作过程，使灭活疫苗的制取快速、方便，也降低了疫苗成本；同时由于本发明是通过窄馏程分馏所得的低芳烃、低粘度的白油，所以疫苗几乎无毒性，疫苗注射到动物体内后，红斑很小，不会影响肉的质量和外观，用于动物防疫注射时推针时阻力较小，便于注射。