说明书新型二环苯基-吡啶/吡嗪用于治疗癌症
本发明涉及有机化合物，其用于哺乳动物治疗，且特别是抑制过表达CDK8或细胞周期蛋白C的细胞的增殖并诱导细胞周期停滞和凋亡，用于治疗癌症。
发明领域
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)复合物是高度保守的Ser/Thr激酶家族，且已显示其通过结合调节伴侣(通常为细胞周期蛋白)而被活化。基于序列和功能相似性，共有20个CDK家族成员以及5个CDK样蛋白。CDK调节细胞周期的各种关键转变并在转录、凋亡和神经元功能调节中发挥重要作用。
已将CDK的失调关联至病理事件以及增殖性和非增殖性疾病，包括癌症、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病、中风/局部缺血、疼痛、外伤性脑损伤、肾病、炎症疾病、2型糖尿病、病毒感染(HSV、HCMV、HPV、HIV)。
CDK8是一种细胞周期蛋白C-依赖性CDK家族激酶并用作转录调节因子。已确认了CDK8的数个磷酸化靶点，包括RNA聚合物II(RNAPII)C-末端结构域(CTD)、组蛋白H3、通用转录因子(GTF)亚单位和某些反式激活因子。CDK8还已被描述为致瘤信号通路中的转录辅激活物，所述通路包括β-连环蛋白通路、血清反应网络、肿瘤生长因子TGFβ信号通路、p53通路以及甲状腺激素-依赖性转录。CDK8和细胞周期蛋白C的共定位还报道在神经变性疾病例如AD中。发现CDK8在各种人类癌症中频繁异常调节，所述癌症例如结肠癌、胃癌和黑素瘤。通过短发夹RNA(shRNA)抑制CDK8抑制了体外和体内模型中的癌症细胞增殖，并诱导细胞周期停滞和凋亡。虽然水飞蓟宾(分离自奶蓟草(水飞蓟)的水飞蓟素的主要活性成分)已显示出在结肠癌中通过下调CDK8表达的强大细胞生长抑制，但没有处于临床发展下的已知的CDK8直接抑制剂。因此，具有发展用于癌症患者的CDK8抑制剂的巨大的未满足的医疗需求。
发明概要
本发明的目标是式I新化合物，它们的制造，基于根据本发明的化合物的药物和它们的产品，以及式I化合物用于治疗癌症的用途。
发明详述
定义
如本文使用的，术语“C1-6烷基”单独或组合表示含有1-6个，特别是1-4个碳原子的饱和的、直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、1-丁基、2-丁基、叔丁基等。特别的“C1-6烷基”是甲基、乙基、异丙基和叔丁基。
术语“C1-6烷氧基”单独或组合表示基团C1-6烷基-O-，其中“C1-6烷基”如上所定义；例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基等。特别的“C1-6烷氧基”是甲氧基和乙氧基，且更特别的是甲氧基。
术语“CxH2x”单独或组合表示含有1-6个，特别是1-4个碳原子的饱和的、直链或支链烷基。
术语“CyH2y”单独或组合表示含有2-6个，特别是2-4个碳原子的饱和的、直链或支链烷基。
术语“环烷基”单独或组合表示含有3-7个碳原子，特别是3-6个碳原子的饱和碳环，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。特别的“环烷基”是环丙基、环戊基和环己基。
术语“氨基”单独或组合表示伯(-NH2)、仲(-NH-)或叔氨基
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。卤素特别是氟或氯。
术语“羟基”单独或组合表示基团-OH。
术语“羰基”单独或组合表示基团-C(O)-。
术语“硫基”单独或组合表示基团-S-。
术语“磺酰基”单独或组合表示基团-S(O)2-。
根据本发明的化合物可以它们的药学上可接受的盐的形式存在。术语“药学上可接受的盐”是指保持式I化合物的生物有效性和特性并形成自适当的无毒有机或无机酸或者有机或无机碱的常规酸加成盐或碱加成盐。酸加成盐包括例如衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些，以及衍生自有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲基磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些。碱加成盐包括衍 生自氢氧化铵、钾、钠和季铵，例如，氢氧化四甲铵，的那些。将药物化合物化学修饰为盐是药物化学家众所周知的为获得改善的化合物物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性的技术。其例如描述在Bastin R.J.等人，Organic Process Research&Development 2000，4，427-435；或者Ansel，H.等人，In:Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第6版(1995)，pp.196和1456-1457中。特别是式I化合物的钠盐。
含有一或多个手性中心的通式I化合物可呈现为外消旋体、非对映混合物或光学活性单一异构体。外消旋体可根据已知方法分离为对映异构体。特别地，可通过结晶分离的非对映盐形成自外消旋混合物，通过与光学活性酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应。
CDK8或细胞周期蛋白C抑制剂
本发明提供了(i)具有通式I的新化合物：
其中
R1选自
R2是氨基羰基、C1-6烷氧基-CyH2y-氨基-CxH2x-、C1-6烷氧基-CxH2x-磺酰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基羰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基磺酰基氨基-CxH2x-、环烷基羰基氨基-CxH2x-、环烷基磺酰基氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-、羟基-CyH2y-氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-羰基氨基-CxH2x-或苯基羰基氨基-CxH2x-；
R3是苯基，其是未取代的或被卤素取代；
R4是氢、C1-6烷基或卤素；
R5是氢、C1-6烷基或卤素；
或者R4和R5与它们相连的碳原子一起形成环烷基；
R6是氢或卤素；
R7是氢、C1-6烷基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基磺酰基、氨基或卤素；
x是1-6；
y是2-6；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一实施方式是(ii)式I化合物，其中
R1选自
R2是氨基羰基、C1-6烷氧基-CyH2y-氨基-CxH2x-、C1-6烷氧基-CxH2x-磺酰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基羰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基磺酰基氨基-CxH2x-、环烷基羰基氨基-CxH2x-、环烷基磺酰基氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-、羟基-CyH2y-氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-羰基氨基-CxH2x-或苯基羰基氨基-CxH2x-；
R3是苯基，其是未取代的或被卤素取代一次；
R4是氢、C1-6烷基或卤素；
R5是氢、C1-6烷基或卤素；
或者R4和R5与它们相连的碳原子一起形成环烷基；
R6是氢或卤素；
R7是氢、C1-6烷基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基磺酰基、氨基或卤素；
x是1-6；
y是2-6；
或其药学上可接受的盐。
本发明进一步的实施方式是(iii)式I化合物，其中
R1选自
R2是氨基羰基、甲氧基乙基氨基甲基、甲氧基乙基磺酰基氨基甲基、甲基羰基氨基甲基、乙基羰基氨基甲基、异丙基羰基氨基甲基、甲基磺酰基氨基甲基、环己基羰基氨基甲基、环丙基磺酰基氨基甲基、羟基甲基、羟基乙基氨基甲基、羟基甲基羰基氨基甲基或苯基羰基氨基甲基；
R3是苯基或氯苯基；
R4是氢、甲基或氟；
R5是氢、甲基或氟；
或者R4和R5与它们相连的碳原子一起形成环丙基；
R6是氢或氟；
R7是氢、甲基、乙基、甲基硫基、甲基磺酰基、氨基、氟或氯；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一实施方式是(iv)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基、C1-6烷基羰基氨基-CxH2x-或羟基-CxH2x-；
R3是苯基、其是未取代的或被卤素取代一次；
R4是氢、C1-6烷基或卤素；
R5是氢、C1-6烷基或卤素；
或者R4和R5与它们相连的碳原子一起形成环烷基；
R6是氢或卤素；
x是1-6。
本发明进一步的实施方式是(v)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基、甲基羰基氨基甲基或羟基甲基；
R3是苯基或氯苯基；
R4是氢、甲基或氟；
R5是氢、甲基或氟；
或者R4和R5与它们相连的碳原子一起形成环丙基；
R6是氢或氟。
本发明的另一实施方式是(vi)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基、C1-6烷氧基-CyH2y-氨基-CxH2x-、C1-6烷氧基-CxH2x-磺酰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基羰基氨基-CxH2x-、C1-6烷基磺酰基氨基-CxH2x-、环烷基羰基氨基-CxH2x-、环烷基磺酰基氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-、羟基-CyH2y-氨基-CxH2x-、羟基-CxH2x-羰基氨基-CxH2x-或苯基羰基氨基-CxH2x-；
R3是苯基；
R7是氢、C1-6烷基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基磺酰基、氨基或卤素；
x是1-6；
y是2-6。
本发明进一步的实施方式是(vii)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基、甲氧基乙基氨基甲基、甲氧基乙基磺酰基氨基甲基、甲基羰基氨基甲基、乙基羰基氨基甲基、异丙基羰基氨基甲基、甲基磺酰基氨基甲基、环己基羰基氨基甲基、环丙基磺酰基氨基甲基、羟基甲基、羟基乙基氨基甲基、羟基甲基羰基氨基甲基或苯基羰基氨基甲基；
R3是苯基；
R7是氢、甲基、乙基、甲基硫基、甲基磺酰基、氨基、氟或氯。
本发明的另一实施方式是(viii)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基或羟基-CxH2x-；
R3是苯基；
x是1-6。
本发明进一步的实施方式是(ix)式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1是
R2是氨基羰基或羟基甲基；
R3是苯基。
式I的特定化合物，包括它们的活性数据、NMR数据和MS数据，汇总在下表1、2和3中。
表1:特定化合物的结构、名称和活性数据
表2:特定化合物的NMR和MS数据
表3:特定化合物对于HCT116、SW-837或AGS的IC50
更特别的式I化合物包括以下：
5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮；
5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮；
(R)-5’-(5-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)-螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮；
6-氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮；
6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噁唑-2-酮(6-[5-((R)-2-Hydroxy-1-phenyl-ethylamino)-pyridin-3-yl]-3H-benzooxazol-2-one)；
6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噻唑-2-酮；
(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-氨基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-乙基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-甲基硫基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-[5-(3-甲基磺酰基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇；
(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇；
(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇；
(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇；
2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
2-[5-(7-氟-2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺；
N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺；
2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-丙酰胺；
N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-异丁酰胺；
(R)-N1-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-N2-(2-甲氧基-乙基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺；
N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-羟基-乙酰胺；
2-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇；
(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
(S)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；
N-{2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺；
环丙烷磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺；
N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺；
2-甲氧基-乙磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺；
2-羟基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺；
(R)-N2-(2-甲氧基-乙基)-N1-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-1-苯基-乙烷-1,2-二胺；
2-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇；
环己羧酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺；
N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-苯甲酰胺；
(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺；和
(S)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。
合成
本发明化合物的制备可通过任意常规方法。用于合成这些化合物的适当方法以及它们的起始原料提供在以下图示和实施例中。所有取代基，特别是R1、R2和R3为如上所定义，除非另外指明。此外，以及除非另外明确规定，否则所有反应、反应条件、缩略语和标志具有有机化学领域普通技术人员众所周知的含义。
中间体的一般合成路线(图示1)
图示1
R’是C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基或C1-6烷氧基羰基。
可根据图示1制备中间体II-1至II-7。
对于方法a)，3,5-二溴-吡啶和氨基醇之间的偶联得到中间体II-1。所述反应可在存在铜催化剂，以及配体例如二甲基氨基乙酸或L-脯氨酸，以及适当的碱例如K2CO3或Cs2CO3的情况下，在适当的溶剂例如DMSO或二噁烷(1,4-dioxane)中进行。
中间体III可通过化合物II-1和异吲哚-1,3-二酮之间的光延反应(Mitsunobu reaction)合成。所述反应可在存在DEAD和PPh3的情况下在THF中进行。中间体III的氨解得到化合物II-2。连接化合物II-2和C1-6烷基磺酰氯，C1-6烷基或C1-6烷基酸得到中间体II-3。
对于方法b)，3,5-二溴-吡啶和氨基乙酸之间的偶联得到中间体II-4。所述反应可在存在铜催化剂，以及适当的配体例如二甲基氨基乙酸或L-脯氨酸，以及适当的碱例如K2CO3或Cs2CO3的情况下，在适当的溶剂例如DMSO或二噁烷中进行。在存在HATU和DIPEA的情况下连接化合物II-4和氨溶液得到中间体II-5。
式Ia的一般合成路线(图示2)
图示2
X为氯、溴或碘
可根据图示2制备式Ia化合物。
通过方法1，化合物II和硼酸或硼酸酯之间的偶联得到Ia。所述反应可在存在Pd催化剂例如Pd(PPh3)4或PdCl2(PPh3)2，以及适当的碱例如K3PO4、Na2CO3、K2CO3或Cs2CO3的情况下，在适当的溶剂例如DME/H2O、二噁烷/H2O或DMF/H2O中进行。
通过方法2，硼酸IV可通过中间体II和双(频哪醇合)二硼在存在Pd催化剂的情况下的反应以及之后的水解反应制备。然后偶联中间体IV和卤化物得到化合物Ia。
通过方法3，化合物Ia可通过一锅法反应(one-pot reaction)制备。化合物II与双(频哪醇合)二硼反应，且存在Pd催化剂例如三(二亚苄基丙酮)二钯和配体例如正丁基二(1-金刚烷基)膦，然后加入卤化物R1-X并在100℃微波下搅拌混合物数小时以得到化合物Ia。
式Ib和Ic的一般合成路线(图示3)
图示3
可根据图示3制备式Ib和Ic化合物。中间体V可通过将碘引入吲唑的3-位来合成。化合物VI可通过中间体V和MeSNa溶液在CuI存在下的反应来制备。如图示2方法3中所述的一锅法反应得到化合物Ib。在oxone(过硫酸氢钾复合物)存在下在DMF中氧化化合物Ib得到化合物Ic。
式Id和Ie的一般合成路线(图示4)
图示4
R”是C1-6烷基或C1-6烷氧基-CH2-。
可根据图示4制备式Ie化合物。在BH3存在下在THF中，于80℃过夜还原酰胺Id得到Ie。
本发明还涉及制备式I化合物的方法，其包括以下反应：
(a)在催化剂和碱存在下，式(A)化合物
与的反应；
(b)在催化剂和碱存在下，式(B)化合物
与R1-X的反应；
(c)微波下在催化剂和配体存在下，式(A)化合物
与双(频哪醇合)二硼和R1-X的反应；
(d)在催化剂存在下，式(C)化合物的反应
(e)在oxone(过硫酸氢钾复合物)存在下，式(D)化合物的反应
(f)在BH3存在下，式(E)化合物的反应
其中R1、R2和R3如上所定义，除非另外指明；X是氯、溴、或碘；R”是C1-6烷基或C1-6烷氧基-CH2-。
在步骤(a)中，催化剂可为例如Pd(PPh3)4、PdCl2(PPh3)2，碱可为例如K3PO4、Na2CO3、K2CO3或Cs2CO3；
在步骤(b)中，催化剂可为例如Pd(PPh3)4，碱可为例如K2CO3；
在步骤(c)中，催化剂可为例如三(二亚苄基丙酮)二钯，配体可为例如正丁基二(1-金刚烷基)膦；
在步骤(d)中，催化剂可为例如Pd(dppf)Cl2。
当根据以上方法制造时的式I化合物也是本发明的目标。
药物组合物和给药
本发明还涉及式I化合物，用作治疗活性物质。
另一实施方式提供了药物组合物或药物，其含有本发明化合物以及治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂，以及使用本发明化合物以制备此组合物或药物的方法。在一个实例中，式I化合物的配制可通过在环境温度、适当pH以及希望的纯净度下混合生理学上可接受的载体，即，在盖伦给药形式中使用的剂量和浓度下对于接受者无毒的载体。制剂的pH主要取决于化合物的特定用途和浓度，但任何地方的特别范围为约3至约8。在一个实例中，在pH5的乙酸盐缓冲液中配制式I化合物。在另一实施方式中，式I化合物是无菌的。该化合物可贮存为例如，固体或无定形组合物，冻干制剂或水溶液。
以符合良好医疗实践的方式配制、定量和给药组合物。在此上下文中考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、病症的原因、试剂的递送位点、给药方法、给药安排以及医师已知的其它因素。待给药化合物的“有效量”将通过这些考量而被管理，且为抑制CDK8活性所需的最小量。例如，此量可低于对正常细胞或哺乳动物整体有毒的量。
在一个实例中，单位剂量肠胃外给药的本发明化合物的药学有效量范围将为约0.1至50mg/患者体重kg/天，其中化合物的典型初始范围为约0.3至约15mg/kg/天。在另一实施方式中，口服单位剂型，例如片剂和胶囊，优选含有约5mg至约500mg本发明化合物。
本发明化合物的给药可通过任意适当手段，包括口服、局部(包括口腔和舌下)、直肠、阴道、透皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内以及硬膜外和鼻内，以及病灶内给药(若想要局部治疗)。胃肠外灌注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。
本发明化合物可以任何常规给药形式给药，例如，片剂、粉剂、胶囊、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。这些组合物可含有药物制剂中常规的成分，例如，稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、膨胀剂、以及进一步的活性剂。
典型制剂通过混合本发明化合物和载体或赋形剂来制备。适当的载体和 赋形剂是本领域技术人员众所周知的且详细描述在例如，Ansel，Howard C.等人，Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott，Williams&Wilkins，2004；Gennaro，Alfonso R.等人Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott，Williams&Wilkins，2000；以及Rowe，Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago，Pharmaceutical Press，2005中。该制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、混悬剂、防腐剂、抗氧化剂、避光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稀释剂以及其它已知添加剂以提供药物(即，本发明化合物或其药物组合物)的高雅呈现或有助于制造药物制品(即，药剂)。
适当口服剂型的一个实例是片剂，其含有约5mg至500mg本发明化合物，混合约90mg至30mg无水乳糖、约5mg至40mg交联羧甲基纤维素钠、约5mg至30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30以及约1mg至10mg硬脂酸镁。首先将粉末化成分混合在一起，然后将其与PVP溶液混合。所得组合物可干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规仪器压制成片剂形式。气溶胶制剂实例的制备可通过溶解本发明化合物，例如5mg至400mg，至适当的缓冲溶液，例如磷酸盐缓冲液中，若需要的话，添加张力调节剂(tonicifier)例如盐例如氯化钠。该溶液可被过滤，例如使用0.2微米滤器，以移除杂质和污染物。
因此，一个实施方式包括药物组合物，其包含式I化合物，或其立体异构体或药学上可接受的盐。在进一步的实施方式中包括药物组合物，其包含I化合物，或其立体异构体或药学上可接受的盐，连同药学上可接受的载体或赋形剂。
另一实施方式包括包含式I化合物的药物组合物，其用于治疗过度增生性疾病。另一实施方式包括包含式I化合物的药物组合物，其用于治疗癌症。
适应症和治疗方法
本发明化合物抑制蛋白激酶活性。因此，本发明化合物用于在特定癌细胞中抑制细胞增殖并诱导细胞周期停滞和凋亡。
本发明化合物用于在过表达CDK8或细胞周期蛋白C的细胞中抑制细胞增殖、诱导细胞周期停滞和凋亡。
或者，本发明化合物用于在凋亡通路中断或增殖通路过表达/或永生化(immortalized)(例如通过CDK8或细胞周期蛋白C反常)的细胞中抑制细胞增 殖、诱导细胞周期停滞和凋亡。
本发明化合物用作CDK8或细胞周期蛋白C抑制剂。
本发明的一个实施方式包括化合物用于治疗癌症，特别是膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌(stomach)、卵巢癌(ovary)、结肠癌、肺癌、脑癌、喉癌、淋巴系统癌、肝癌、皮肤癌、造血系统癌、泌尿生殖道癌、胃肠癌、卵巢癌(ovarian)、前列腺癌、胃癌(gastric)、骨癌、小细胞肺癌、胶质瘤、结肠直肠癌和胰腺癌的用途。本发明的进一步的实施方式包括化合物用于治疗胃癌或结肠直肠癌的用途。
本发明的另一实施方式包括化合物用于制备治疗癌症，特别是治疗膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、脑癌、喉癌、淋巴系统癌、肝癌、皮肤癌、造血系统癌、泌尿生殖道癌、胃肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、骨癌、小细胞肺癌、胶质瘤、结肠直肠癌和胰腺癌的药物的用途。
本发明的进一步的实施方式包括化合物用于制备治疗胃癌或结肠直肠癌的药物的用途。
本发明的另一实施方式涉及式I化合物，其用于治疗癌症，特别是治疗膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、脑癌、喉癌、淋巴系统癌、肝癌、皮肤癌、造血系统癌、泌尿生殖道癌、胃肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、骨癌、小细胞肺癌、胶质瘤、结肠直肠癌和胰腺癌。
本发明的进一步的实施方式涉及式I化合物，其用于治疗胃癌或结肠直肠癌。
另一实施方式包括在有此治疗需求的哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，其中该方法包括给药至所述哺乳动物治疗有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐。用于治疗或预防的特别癌症包括膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、脑癌、喉癌、淋巴系统癌、肝癌、皮肤癌、造血系统癌、泌尿生殖道癌、胃肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌、骨癌、小细胞肺癌、胶质瘤、结肠直肠癌和胰腺癌。更特别地，本发明涉及在有此治疗需求的哺乳动物中治疗或预防胃癌或结肠直肠癌的方法，其中该方法包括给药至所述哺乳动物治疗有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐。另一实施方式包括在有此治疗需求的哺乳动物中治疗或预防神经变性疾病的方法，其中该 方法包括给药至所述哺乳动物治疗有效量的式I化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐。用于治疗的特定神经变性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿氏病和肌萎缩侧索硬化(ALS)。
联合疗法
本发明化合物可与小分子抑制剂例如酪氨酸激酶抑制剂，丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，脂质激酶抑制剂，蛋白质-蛋白质抑制剂等，用于治疗癌症的细胞毒性剂，放射疗法，抗体和癌症疫苗联合使用。
实施例
通过参考以下实施例将更加充分地理解本发明。然而，它们不应当被理解为限制本发明的范围。
本发明使用的缩略语如下：
μL: 微升
μm: 微米
μM: 微摩尔/升
AcOK: 乙酸钾
AcOH: 乙酸
Ar: 氩气
BSA: 牛血清白蛋白
CCK-8: 细胞计数试剂盒-8
DCM: 二氯甲烷
DEAD: 偶氮二甲酸二乙酯
DIPEA: N,N-二异丙基乙胺
DME: 1,2-二甲氧基乙烷
DMF: 二甲基甲酰胺
DMSO-d6: 氘化二甲亚砜
DTT: 二硫苏糖醇
EtOAc: 乙酸乙酯
EGTA: 乙二醇四乙酸
g: 克
IC50: 半数最大抑制浓度
HATU: 2-(7-偶氮-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HCMV: 人巨细胞病毒
HIV: 人免疫缺陷病
HSV: 单纯疱疹病毒
HPV: 人乳头瘤病毒
HPLC: 高效液相色谱
LC/MS: 液相色谱/质谱
MeOH: 甲醇
甲醇-d4: 全氘甲醇
M: 摩尔浓度
mg: 毫克
MHz: 兆赫
min: 分钟
mins: 分钟
mL: 毫升
mM: 毫摩尔/升
mm: 毫米
mmol: 毫摩尔
MS(ESI): 质谱(电喷雾电离)
nM: 纳摩尔/升
nm: 纳米
NMR: 核磁共振
N2: 氮气
obsd.: 观测的
OD: 光学密度
Pd(PPh3)4: 四(三苯基膦)钯
Pd(PPh3)2Cl2:双(三苯膦基)氯化钯(II)
Pd(dppf)Cl2:[1,1'-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)
PE或Pet: 石油醚
Prep HPLC: 制备性高效液相色谱
SFC: 超临界流体色谱
TEA: 三乙胺
THF: 四氢呋喃
TLC: 薄层色谱
TR-FRET: 时间分辨-荧光共振能量转移
δ: 化学位移
一般实验条件
中间体和最终化合物的纯化是通过快速色谱(flash chromatography)，使用以下一种仪器：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25盒式模块。ii)ISCO combi-flash色谱仪。硅胶品牌和孔径:i)KP-SIL粒径:40-60μM；ii)CAS登记号:硅胶:63231-67-4，粒径:47-60微米硅胶；iii)来自Qingdao Haiyang Chemical Co.，Ltd的ZCX，孔:200-300或300-400。
中间体和最终化合物的纯化是通过反相柱上的制备性HPLC，使用X BridgeTM Perp C18(5μm，OBDTM 30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm，OBDTM 30×100mm)柱。
LC/MS谱的获得是使用MicroMass Plateform LC(WatersTM alliance 2795-ZQ2000)。标准LC/MS条件如下(运行时间6分钟)：酸性条件:A:H2O中0.1％甲酸；B:乙腈中0.1％甲酸；
碱性条件:A:H2O中0.01％NH3·H2O；B:乙腈；
中性条件:A:H2O；B:乙腈。
质谱(MS):通常仅报道指示母体质量的离子，且除非另外规定，否则引用的质量离子是阳性质量离子(M+H)+。
微波辅助的反应是在Biotage Initiator Sixty中进行。
NMR谱的获得是使用Bruker Avance 400MHz。
涉及空气敏感性试剂的所有反应在氩气氛下进行。除非另外注明，否则试剂以接受自供应商的原样使用而未经进一步纯化。
以下实施例的制备是通过以上图示中概述的一般方法。它们意图阐明本发明的含义，而决不应当表示本发明含义内的限制。
制备实施例
实施例1:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
步骤1:(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，将3,5-二溴吡啶(8g，33.8mmol)、D-(-)-α-苯甘氨醇(7.41g，54mmol)、碘化铜(I)(0.64g，3.38mmol)、L-脯氨酸(0.78g，6.7mmol)和碳酸钾(9.32g，67mmol)在DMSO(200mL)中的混合物在100℃加热12小时。用H2O稀释该混合物并接着过滤以移除催化剂。用EtOAc萃取水层，并用盐水洗涤有机层，然后经Na2SO4干燥并接着浓缩。通过层析柱纯化残留物以得到黄色固体状的(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(8.9g)。
步骤2:(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸的制备
在氩(Ar)气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(3g，10.27mmol)、双(频哪醇合)二硼(5.22g，20.55mmol)、[1,1-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.84g，1.027mmol)和AcOK(2.01g，20.5mmol)在二噁烷中的混合物在120℃暴露至微波辐射2小时。然后加入饱和Na2CO3水溶液并在100℃加热反应混合物1小时。冷却至室温后，用EtOAc萃取水层两次并接着通过缓慢添加6N HCl溶液调节至PH 3.0-4.0。然后用EtOAc萃取水层，接着干燥经合并有机层并浓缩。将残留物溶于乙醚中并搅拌过夜。收集残留物以得到(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(1g)。
步骤3:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(50mg，0.2mmol)、5-溴吲哚酮(45mg，0.2mmol)、四(三苯基膦)钯(12mg)和碳酸钾(26mg，0.4mmol)在DME/H2O(5:1，2mL)中的混合物在90℃微波下加热40分钟。然后在EtOAc和盐水间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-[5-((R)-2-羟基 -1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮(12mg)。
实施例2:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3,3-二甲基-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(100mg，0.4mmol)、5-溴-3,3-二甲基-1,3-二氢-吲哚-2-酮(93mg，0.4mmol)、四(三苯基膦)钯(25mg)和碳酸钾(110mg，0.8mmol)在DME/H2O(5:1，5mL)中的混合物在90℃微波下加热40分钟。然后在EtOAc和盐水间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3,3-二甲基-1,3-二氢-吲哚-2-酮(21mg)。
实施例3:5-{5-[(R)-1-(2-氯-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-吡啶-3-基}-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
步骤1:5-硼酸频那醇酯吲哚-2-酮的制备
往5-溴-2-氧化吲哚(21g，100mmol)在二噁烷(150mL)中的溶液中加入双(频哪醇合)二硼(38g，150mmol)、1,1-双(二苯基膦)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(8.2g，10mmol)和乙酸钾(20g，200mmol)。脱气所得混合物并接着在80℃、氩气氛下搅拌过夜。通过LC-MS监控反应完成后，用水(500mL)稀释该混合物并用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过柱色谱(EtOAc/Pet＝2:1)纯化残留物以得到白色固体状的5-硼酸频那醇酯吲哚-2-酮(15g)。
步骤2:5-{5-[(R)-1-(2-氯-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-吡啶-3-基}-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
往(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-(2-氯-苯基)-乙醇(327mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和5-硼酸频那醇酯吲哚-2-酮(310mg，1.2mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL) 稀释混合物并接着用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-{5-[(R)-1-(2-氯-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-吡啶-3-基}-1,3-二氢-吲哚-2-酮(5mg)。
实施例4:5-{5-[(S)-1-(2-氯-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-吡啶-3-基}-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
往(S)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-(2-氯-苯基)-乙醇(327mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和5-硼酸频那醇酯吲哚-2-酮(310mg，1.2mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-{5-[(S)-1-(2-氯-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-吡啶-3-基}-1,3-二氢-吲哚-2-酮(5mg)。
实施例5:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(300mg，1.027mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮(320.67mg，1.23mmol)、四(三苯基膦)钯(237mg，0.205mmol)和碳酸钾(283mg，2.05mmol)在DME/H2O(5:1，4.5mL)中的混合物在100℃暴露至微波辐射1小时，然后真空浓缩反应混合物。在EtOAc和盐水间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-苯并咪唑-2-酮(3mg)。
实施例6:(R)-5’-(5-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)-螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮的制备
步骤1:螺(环丙烷-1,3-吲哚啉)-2-酮-5-硼酸频哪醇酯(spiro(cyclopropane-1,3-indolin)-2-one-5-boronic acid pinacol ester)的制备
往5-溴螺(环丙烷-1,3-吲哚啉)-2-酮(2.37g，10mmol)在二噁烷(25mL)中的溶液中加入双(频哪醇合)二硼(3.8g，15mmol)、1,1-双(二苯基膦)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(0.82g，1mmol)和乙酸钾(2g，200mmol)。脱气所得混合物并接着在80℃、氩气氛下搅拌过夜。通过LC-MS监控反应完成后，用水(500mL)稀释该混合物并用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过柱色谱(EtOAc/PE＝2:1)纯化残留物以得到螺(环丙烷-1,3-吲哚啉)-2-酮-5-硼酸频哪醇酯(1.2g)。
步骤2:(R)-5’-(5-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)-螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮的制备
往(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(292mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和螺(环丙烷-1,3-吲哚啉)-2-酮-5-硼酸频哪醇酯(313mg，1.2mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-5’-(5-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)-螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮(20mg)。
实施例7:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮的制备
步骤1:5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(5-(4,4,5,5-tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)-1,3-dihydro-pyrrolo[2,3-b]pyridin-2-one)的制备
在氩气氛下，100℃加热5-溴-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(3g，14.08mmol)、双(频哪醇合)二硼(5.37g，21.1mmol)、1,1'-双(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.206g，0.28mmol)和AcOK(4.14g，42mmol)在DMF中的混合物过夜。冷却至室温后，将混合物倾入水中。用EtOAc萃取水层，然后干 燥并浓缩。通过快速柱纯化残留物以得到黄色固体状的5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(400mg)。
步骤2:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(480mg，1.644mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(468mg，1.81mmol)、双(三苯膦基)氯化钯(II)(232mg，0.328mmol)和碳酸钾(452mg，3.28mmol)在DMF/H2O(5:1，10mL)中的混合物在105℃暴露至微波辐射1小时。然后用EtOAc稀释该混合物。用EtOAc萃取水层。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(6.5mg)。
实施例8:3,3-二氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
步骤1:3,3-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
在氩气氛下，95℃加热5-溴-3,3-二氟-1,3-二氢-吲哚-2-酮(1g，4.05mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.05g，8.06mmol)、1,1'-双(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(0.331g，0.403mmol)和AcOK(1.18g，12.09mmol)在二噁烷中的混合物过夜。冷却至室温后，浓缩该混合物并通过快速柱纯化残留物以得到3,3-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮(600mg)。
步骤2:3,3-二氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(300mg，1.027mmol)、3,3-二氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮(303mg，1.027mmol)、双(三苯膦基)氯化钯(II)(144mg，0.205mmol) 和碳酸钾(425mg，3.08mmol)在DMF/H2O(5:1，10mL)中的混合物在105℃暴露至微波辐射1小时。然后用EtOAc稀释该混合物。用EtOAc萃取水层。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到3,3-二氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮(14mg)。
实施例9:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-酮的制备
步骤1:(2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)硼酸的制备
在氩气氛下，95℃加热5-溴-1,3-二氢-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-酮(300mg，1.41mmol)、双(频哪醇合)二硼(358mg，1.41mmol)、[1,1′-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(230mg，0.28mmol)和AcOK(276mg，2.82mmol)在二噁烷中的混合物过夜。冷却至室温后，浓缩该混合物并将残留物未经进一步纯化而用于下一步骤。
步骤2:5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-酮的制备
在氩气氛下，将粗(2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)硼酸(273mg)、(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(535mg，1.831mmol)、双(三苯膦基)氯化钯(II)(198mg，0.28mmol)和碳酸钾(583mg，4.21mmol)在DMF/H2O(5:1，10mL)中的混合物在100℃暴露至微波辐射1小时。然后用EtOAc稀释该混合物。用EtOAc萃取水层。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-酮(6mg)。
实施例10:6-氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
往(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(292mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和6-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮(277mg，1.0mmol)。脱气所得混合物并接着在 95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层、干燥并接着浓缩。通过制备性HPLC纯化残留物以得到6-氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮(30mg)。
实施例11:7-氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮的制备
往(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(292mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和7-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮(277mg，1.0mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到7-氟-5-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-1,3-二氢-吲哚-2-酮(5mg)。
实施例12:6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噁唑-2-酮的制备
将6-溴-3H-苯并噁唑-2-酮(428mg，2.0mmol)、双(频哪醇合)二硼(508mg，2.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(55mg，0.06mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(65mg，0.18mmol)、乙酸钾(588mg，6.0mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入乙酸异丙酯(1.5mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(467mg，1.6mmol)、碳酸钾(662mg，4.8mmol)、乙酸异丙酯(2mL)和H2O(0.5mL)加入以上混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(25mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤经合并有机层，并接着经无水硫酸钠干燥，浓缩以得到粗标题化合物。通过制备性HPLC纯化粗标题化合物以得到6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噁唑-2-酮(15mg)。
实施例13:6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噻唑-2-酮的制备
步骤1:6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3H-苯并噻唑-2- 酮的制备
在氩气氛下，65℃加热6-溴-3H-苯并噻唑-2-酮(1g，4.35mmol)，双(频哪醇合)二硼(1.1g，4.35mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.119g，0.013mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(0.14g，0.039mmol)和AcOK(1.28g，1.30mmol)在DME中的混合物过夜。冷却至室温后，浓缩该混合物并通过快速柱纯化残留物以得到6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3H-苯并噻唑-2-酮(300mg)。
步骤2:6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噻唑-2-酮的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(300mg，1.027mmol)、6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3H-苯并噻唑-2-酮(284mg，1.027mmol)、四(三苯基膦)钯(59mg，0.051mmol)和碳酸钾(425mg，3.08mmol)在DME/H2O(5:1，10mL)中的混合物在100℃暴露至微波辐射5小时，然后真空浓缩。在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到6-[5-((R)-2-羟基-1-苯基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噻唑-2-酮(39mg)。
实施例14:(R)-2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇的制备
将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(59mg，0.2mmol)、3,4-亚甲基二氧苯基硼酸(43mg，0.26mmol)、四(三苯基膦)钯(11mg，0.01mmol)和碳酸钾(81mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)和H2O(0.2mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将所得混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的(R)-2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-吡啶-3-基 氨基)-2-苯基-乙醇(20mg)。
实施例15:(R)-2-[5-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇((R)-2-[5-(2,3-Dihydro-benzo[1,4]dioxin-6-yl)-pyridin-3-ylamino]-2-phenyl-ethanol)的制备
将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(59mg，0.2mmol)、1,4-苯并二氧六环-6-硼酸(1,4-benzodioxane-6-boronic acid)(47mg，0.26mmol)、四(三苯基膦)钯(11mg，0.01mmol)和碳酸钾(81mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)和H2O(0.2mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将所得混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的(R)-2-[5-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(25mg)。
实施例16:(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(50mg，0.2mmol)、5-溴-1H-吲唑(65mg，0.2mmol)、四(三苯基膦)钯(25mg)和碳酸钾(70mg，0.5mmol)在DME/H2O(5:1，5mL)中的混合物40分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(4mg)。
实施例17:(R)-2-[5-(1H-吲哚-4-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(50mg，0.2mmol)、4-溴吲哚(40mg，0.2mmol)、四(三苯基膦)钯(12mg)和碳酸钾(26mg，0.4mmol)在DME/H2O(5:1，2mL)中的混合物40分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(1H-吲哚-4-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(9mg)。
实施例18:(R)-2-[5-(3-氨基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，将(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(100mg，0.387mmol)、5-溴-1H-吲唑-3-基胺(82mg，0.387mmol)、四(三苯基膦) 钯(22mg，0.019mmol)和碳酸钾(160mg，1.16mmol)在DME/H2O(5:1，4.5mL)中的混合物在105℃暴露至微波辐射40分钟，然后真空浓缩反应混合物。通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-氨基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(3mg)。
实施例19:(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
步骤1:3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑的制备
在氩气氛下，95℃加热5-溴-3-氟-1H-吲唑(250mg，1.168mmol)、双(频哪醇合)二硼(593mg，2.336mmol)、[1,1-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(95mg，0.117mmol)和AcOK(229mg，2.336mmol)在二噁烷中的混合物过夜。冷却至室温后，浓缩该混合物并通过快速柱纯化残留物以得到白色固体状的3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(280mg)。
步骤2:(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(100mg，0.342mmol)、3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(99mg，0.377mmol)、四(三苯基膦)钯(79mg，0.068mmol)和碳酸钾(94mg，0.68mmol)在DME/H2O(5:1，4.5mL)中的混合物在100℃暴露至微波辐射1小时，然后真空浓缩反应混合物。在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(24mg)。
实施例20:(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
步骤1:3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑的制备
在氩气氛下，95℃加热5-溴-3-甲基-1H-吲唑(3g，14.2mmol)、双(频哪醇合)二硼(7.2g，28.4mmol)、[1,1-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(1.16g，1.42mmol)和AcOK(2.79g，28.4mmol)在二噁烷中的混合物过夜。冷却至室温后，浓缩该混合物并通过快速柱纯化以得到黄色油状的3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(2.5g)。
步骤2:(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，将(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(150mg，0.51mmol)、3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(146mg，0.565mmol)、四(三苯基膦)钯(119mg，0.103mmol)和碳酸钾(142mg，1.027mmol)在DME/H2O(5:1，4.5mL)中的混合物在100℃暴露至微波辐射1小时，然后真空浓缩反应混合物。在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(20mg)。
实施例21:(R)-2-[5-(3-乙基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，将(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(100mg，0.387mmol)、5-溴-3-乙基-1H-吲唑(82mg，0.387mmol)、四(三苯基膦)钯(22mg，0.019mmol)和碳酸钾(160mg，1.16mmol)在DME/H2O(5:1，4.5mL)中的混合物在105℃暴露至微波辐射40分钟，然后真空浓缩反应混合物。通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-乙基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(13mg)。
实施例22:(R)-2-[5-(3-甲基硫基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
步骤1:5-溴-3-碘-1H-吲唑的制备
往5-溴吲唑1(2.53g，12.84mmol)在DMF(20mL)中的溶液中相继加入I2(3.26g，12.84mmol)和KOH(1.44g，25.68mmol)。室温下搅拌混合物2小时。通过LC-MS监控反应完成后，加水(300mL)，并接着通过抽吸收集沉淀物以得到白色固体状的5-溴-3-碘-1H-吲唑(3.73g)。
步骤2:5-溴-3-甲基硫基-1H-吲唑的制备
往5-溴-3-碘-1H-吲唑2(3.7g，11.49mmol)在DMSO(20mL)中的溶液中相继加入20％MeSNa水溶液(2.4mL，34.47mmol)和CuI(218mg，1.15mmol)。脱气所得混合物并充N2。120℃加热3小时后，将反应冷却至室温。加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取该混合物。干燥经合并有机层并减压浓缩。通过快速柱纯化残留物以得到黄色固体状的5-溴-3-甲基硫基-1H-吲唑(2.5g)。
步骤3:(R)-2-[5-(3-甲基硫基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
脱气5-溴-3-甲基硫基-1H-吲唑(320mg，1.33mmol)、双(频哪醇合)二硼(338mg，1.33mmol)、AcOK(260mg，2.66mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(57mg，0.07mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物并充N2。伴随搅拌将反应加热至回流过夜。冷却至室温后，加水(10mL)并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取该混合物。干燥经合并有机层并接着浓缩。将残留物直接用于下一步骤。往粗硼酸酯在二噁烷(7mL)和H2O(2mL)中的溶液中加入(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(388mg，1.33mmol)和K2CO3(368mg，2.66mmol)。脱气该混合物并充N2。然后加入Pd(PPh3)4(80mg，0.07mmol)并在微波反应器中将反应加热至150℃2小时。移除溶剂并通过快速柱纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-甲基硫基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(160mg)。
实施例23:(R)-2-[5-(3-甲基磺酰基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯 基-乙醇的制备
往(R)-2-[5-(3-甲基硫基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(120mg，0.32mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入oxone(过硫酸氢钾复合物)(390mg，0.64mmol)。室温下搅拌反应过夜。用饱和NaHSO3淬灭反应并接着加入饱和NaHCO3至中和，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取该混合物。干燥经合并有机层并真空浓缩。通过快速柱纯化残留物以得到80mg(R)-2-[5-(3-甲基磺酰基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇。
实施例24:(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇的制备
往(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(149mg，0.75mmol)在DME/H2O(5:1，6mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(173mg，0.15mmol)、K2CO3(207mg，1.5mmol)和5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(193.5mg，0.75mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(30mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×50mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇(8mg)，
实施例25:(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇的制备
往(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(149mg，0.75mmol)在DME/H2O(5:1，6mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(173mg，0.15mmol)、K2CO3(207mg，1.5mmol)和5-溴-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶(193.5mg，0.75mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(30mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×50mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇(8mg)。
实施例26:(R)-2-[5-(1H-苯并三唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(100mg，0.5mmol)、5-溴-1H-苯并三唑(130mg，0.5mmol)、四(三苯基膦)钯(30mg)和碳酸钾(138mg，1mmol)在DME/H2O(5:1，5mL)中的混合物40分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc 萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(1H-苯并三唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(12mg)。
实施例27:(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇的制备
往(R)-5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(100mg，0.5mmol)在DME/H2O(5:1，6mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(116mg，0.1mmol)、K2CO3(138mg，1.0mmol)和5-溴-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶(125mg，0.5mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(30mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×50mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-苯基-2-[5-(1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-吡啶-3-基氨基]-乙醇(5mg)。
实施例28:(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
步骤1:3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑的制备
在氩气氛下，在90℃加热5-溴-3-氯-1H-吲唑(1g，4.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.2g，8.7mmol)、[1,1’-双(二苯膦基)二茂铁]-二氯化钯(II)(700mg)和乙酸钾(1.26g，12.9mmol)在二噁烷(12mL)中的混合物过夜。在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过柱色谱纯化残留物以得到3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(420mg)，其直接用于下一步骤。
步骤2:(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(200mg，0.72mmol)、3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(212mg，0.72mmol)、四(三苯基膦)钯(40mg)和碳酸钾(200 mg，1.44mmol)在DME/H2O(5:1，8mL)中的混合物40分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙醇(20mg)。
实施例29:2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
步骤1:(5-溴-吡啶-3-基氨基)-苯基-乙酸的制备
往3,5-二溴吡啶(19g，80mmol)在DMSO(150mL)中的溶液中加入2-苯基甘氨酸(18g，120mmol)、碘化铜(I)(1.52g，8mmol)、L-脯氨酸(1.84g,16mmol)和K2CO3(22g，160mmol)。脱气所得混合物并接着在氩气氛、90℃搅拌12小时。通过LC-MS监控反应完成后，用水(500mL)稀释该混合物并接着用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过柱色谱(DCM/MeOH＝20:1)纯化残留物以得到(5-溴-吡啶-3-基氨基)-苯基-乙酸(5.6g)。
步骤2:2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺的制备
往(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酸(2.8g，9.15mmol)在无水DMF(30mL)中的溶液中加入36.6mL NH3溶液(二噁烷中0.5M)和三乙胺(1.85g，18.3mmol)。搅拌所得混合物30分钟，然后分批加入HATU(7.0g，18.3mmol)并接着在室温下搅拌混合物过夜。用水(200mL)稀释混合物并接着用EtOAc(2×100mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过柱色谱(DCM/MeOH＝20:1)纯化残留物以得到2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(1.2g)。
步骤3:(5-((2-氨基-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)硼酸的制备
在氩气氛下，将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(3.14g，10.27mmol)、双(频哪醇合)二硼(5.22g，20.55mmol)、[1,1-双(二苯膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.84g，1.027mmol)和AcOK(2.01g，20.5mmol)在二噁烷中的混合物在120℃暴露至微波辐射1小时。然后加入饱和Na2CO3水溶液并在100℃加热混合物1小时。冷却至室温后，用EtOAc萃取水层两次并接着通过缓慢加入6N HCl溶液调节至PH 3-4。用EtOAc萃取水层，然后干燥并浓缩经合并有机层。将残留物溶于乙醚中并搅拌过夜。收集沉淀物以得到(5-((2-氨基-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)硼酸(950mg)。
步骤4:2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
在氩气氛下，将(5-((2-氨基-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)吡啶-3-基)硼酸(272mg，1mmol)、5-溴氧化吲哚(212mg，1mmol)、四(三苯基膦)钯(60mg)和碳酸钾(280mg，2mmol)在DME/H2O(5:1，8mL)中的混合物在90℃微波下加热40分钟。然后在EtOAc和盐水间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(23mg)。
实施例30:N-{(R)-2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
步骤1:2-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮的制备
0℃氩气氛下，往(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(2.4g，8.2 mmol)、邻苯二甲酰亚胺(2.78g，18.9mmol)和三苯基膦(4.95g，18.9mmol)在THF(30mL)中的溶液中滴加偶氮二甲酸二乙酯(3.29g，18.9mmol)。室温下搅拌所得混合物过夜。用水(30mL)稀释反应混合物，然后用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩以得到粗2-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮。通过快速柱纯化粗化合物以得到黄色固体状的2-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮(3.01g)。
步骤2:(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
往2-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮(1.26g，3mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中加入水合肼(5mL)。80℃搅拌所得混合物1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将反应混合物冷却至室温并用水(20mL)稀释，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(1.0g)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤3:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(323mg，1mmol)在THF(3mL)中的溶液中滴加乙酸酐(112mg，1.1mmol)。室温下搅拌所得混合物过夜。用水(5mL)稀释反应混合物，并用二氯甲烷(30mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩以得到粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺。通过快速柱纯化粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺以得到白色固体 状的N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺(237mg)。
步骤4:N-{(R)-2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
将N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺(67mg，0.2mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3-二氢-吲哚-2-酮(67mg，0.26mmol)、四(三苯基膦)钯(11mg，0.01mmol)和碳酸钾(81mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入二噁烷(1mL)和H2O(0.2mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将所得混合物加热至100℃ 2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，用盐水(10mL)稀释经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的N-{(R)-2-[5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺(6mg)。
实施例31:2-[5-(1-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
将5-溴-2,3-二氢-异吲哚-1-酮(63mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入乙酸异丙酯(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(73mg，0.24mmol)、碳酸钾(99mg，0.72mmol)、DME(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入以上混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-[5-(1-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。通过C-18反相HPLC柱纯化粗化合物以得到白色固体状的2-[5-(1-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(30mg)。
实施例32:2-[5-(3,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热(5-((2-氨基-2-氧代-1-苯基乙基)氨基)吡啶 -3-基)硼酸(272mg，1mmol)、5-溴-3,3-二甲基-1,3-二氢-吲哚-2-酮(240mg，1mmol)、四(三苯基膦)钯(60mg)和碳酸钾(280mg，2mmol)在DME/H2O(5:1，8mL)中的混合物60分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过制备性HPLC纯化残留物以得到2-[5-(3,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(77mg)。
实施例33:2-[5-(2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
将6-溴-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮(45mg，0.2mmol)、双(频哪醇合)二硼(51mg，0.204mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(5.5mg，0.006mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(6.5mg，0.018mmol)、乙酸钾(59mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入乙酸异丙酯(0.45mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(61mg，0.2mmol)、碳酸钾(81mg，0.6mmol)、乙酸异丙酯(0.55mL)和H2O(0.2mL)相继加入以上混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-[5-(2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。通过C-18反相HPLC柱纯化粗化合物以得到白色固体状的2-[5-(2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(19mg)。
实施例34:2-[5-(7-氟-2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
将6-溴-7-氟-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮(73mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入乙酸异丙酯(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(79mg，0.26mmol)、碳酸钾(124mg，0.9mmol)、DME(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入以上混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热 至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-[5-(7-氟-2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。通过C-18反相HPLC柱纯化粗化合物以得到白色固体状的2-[5-(7-氟-2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(8mg)。
实施例35:2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺的制备
将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(61mg，0.2mmol)、3,4-亚甲基二氧苯基硼酸(43mg，0.26mmol)、四(三苯基膦)钯(11mg，0.01mmol)和碳酸钾(81mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)和H2O(0.2mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将所得混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(28mg)。通过C-18反相HPLC柱纯化粗化合物以得到白色固体状的2-(5-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(28mg)。
实施例36:2-[5-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
将2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(61mg，0.2mmol)、1,4-苯并二噁英-6-硼酸(47mg，0.26mmol)、四(三苯基膦)钯(11mg，0.01mmol)和碳酸钾(81mg，0.6mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)和H2O(0.2mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将所得混合物加热至90℃40分钟。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-[5-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。通过C-18反相HPLC柱纯化粗化合物以得到白色固体状的2-[5-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(29mg)。
实施例37:2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
步骤1:吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
往5-溴吲唑(1.97g，10mmol)在二噁烷(50mL)中的溶液中加入双(频哪醇合)二硼(2.67g，10.5mmol)、1,1-双(二苯膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(0.82g，1mmol)和乙酸钾(2.0g，20mmol)。脱气所得混合物并接着在80℃、氩气氛下搅拌过夜。通过LC-MS监控反应完成后，用水(200mL)稀释该混合物并接着用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过柱色谱(EtOAc/Pet＝1:1)纯化残留物以得到吲唑-5-硼酸频哪醇酯(1.0g)
步骤2:2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
往2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(306mg，1.0mmol)在DME/H2O(5:1，12mL)中的溶液中Pd(PPh3)4(230mg，0.2mmol)、K2CO3(276mg，2.0mmol)和吲唑-5-硼酸频哪醇酯(244mg，1.0mmol)。脱气所得混合物并接着在95℃、氩气氛下搅拌10小时。冷却后，用水(50mL)稀释该混合物并用EtOAc(2×75mL)萃取。用水和盐水洗涤经合并有机层并接着干燥。浓缩溶剂并通过制备性HPLC纯化残留物以得到2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(50mg)。
实施例38:(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
手性拆分来自2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(35mg)的两种对映异构体得到手性(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(6mg)。
实施例39:(S)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
手性拆分来自2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(35mg)的两种对映异构体得到手性(S)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(6mg)。
实施例40:N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
将5-溴-1H-吲唑(60mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。将N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-乙酰胺(80mg，0.24mmol)、碳酸钾(99mg，0.72mmol)、二噁烷(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入以上混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺(40mg)。
实施例41:N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(1.0g，3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(774mg，6mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(342mg，3mmol)。室温下搅拌所得混合物2小时。用水(10mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(40mL×3)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色固体状的粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(1.19g)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
将5-溴-1H-吲唑(60mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、丁基二-1金刚烷基膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。将粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(89mg，0.24mmol)、碳酸钾(99mg，0.72mmol)、二噁烷(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的N-{(R)-2-[5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺(12mg)。
实施例42:2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
步骤1:5-溴-3-氟-1H-吲唑的制备
室温下搅拌5-溴-1H-吲唑(10.18g，51.94mmol)、4,5-二氢吡喃(13.09g，155.82mmol)和PTSA(0.98g，5.19mmol)在DCM(200mL)中的混合物并通过LC-MS监控。所有起始原料被消耗后，将饱和NaHCO3溶液加至反应。用DCM(200mL×3)萃取该混合物用盐水洗涤经合并DCM层，经Na2SO4干燥。浓缩后，通过硅胶柱色谱纯化残留物以得到粗5-溴-3-氟-1H-吲唑(13.34g)。往粗5-溴-3-氟-1H-吲唑(13.34g，47.64mmol)在CH3CN(200mL)中的溶液中相继加入选择性氟试剂(Select fluor)(33.73g，95.28mmol)和AcOH(5mL)。将混合物加热至回流并通过LC-MS监控。2小时后，起始原料完全消耗。将混合物冷却至室温并用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，然后用盐水(100mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗化合物。通过快速柱纯化残化合物以得到5-溴-3-氟-1H-吲唑(5.1g)。
步骤2:3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑的制备
伴随搅拌将5-溴-3-氟-1H-吲唑(2.0g，9.44mmol)、双(频哪醇合)二硼(2.4g，9.44mmol)、KOAc(1.86g，18.88mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(767mg，0.94mmol)在二噁烷(50mL)中的混合物加热至回流。起始原料被消耗后，浓缩反应。通过快速柱纯化残留物以得到白色固体状的3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(2.0g)。
步骤3:2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
在二甲氧基乙烷和H2O混合物(2.5mL/0.5mL)中混合3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(120mg，0.46mol)、2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(146mg，0.48mmol)和K2CO3(127mg，0.92mmol)。脱气该混合物并充N2。然后加入Pd(PPh3)4(26mg，0.02mmol)。将混合物加热至回流并搅拌过夜。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，然后用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗化合物。通过制备性HPLC纯化粗产物以得到2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(10.9mg)。
实施例43:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-丙酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-丙酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(150mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，1mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中滴加丙酰氯(47mg，0.5mmol)。室温下搅拌所得混合物过夜。用水(5mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的 N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-丙酰胺(210mg)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-丙酰胺的制备
将5-溴-3-氟-1H-吲唑(107mg，0.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(130mg，0.51mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(16mg，0.045mmol)、乙酸钾(147mg，1.5mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃ 1小时。接着将N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-丙酰胺(210mg，粗品)、碳酸钾(99mg，0.72mmol)、二噁烷(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，并接着用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-丙酰胺(45mg)。
实施例44:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-异丁酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异丁酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(150mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，1mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中滴加2-甲基丙酰氯(54mg，0.5mmol)。室温下搅拌所得混合物过夜。用水(5mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异丁酰胺(220mg)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-异丁酰胺的制备
将5-溴-3-氟-1H-吲唑(107mg，0.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(130mg，0.51mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(16mg，0.045mmol)、乙酸钾(147mg，1.5mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(0.75mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。接着将N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异丁酰胺(220mg，粗品)、碳酸钾(99mg，0.72mmol)、二噁烷(0.75mL)和H2O(0.3mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，然后在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，并接着用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-异丁酰胺(63mg)。
实施例45:(R)-N1-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-N2-(2-甲氧基-乙基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-甲氧基-乙酰胺的制备
在DMF(5mL)中混合(R)-N1-5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(150mg，0.51mmol)、甲氧基-乙酸(70mg，0.77mmol)、HATU(387mg，1.01mmol)和Et3N(0.5mL)并在室温下搅拌该混合物3小时。然后加入H2O(20mL)并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取混合物。干燥经合并有机层并浓缩。通过快速柱纯化残留物以得到110mg N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-甲氧基-乙酰胺。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-甲氧基-乙酰胺的制备
脱气N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-甲氧基-乙酰胺(115mg，0.44mmol)、3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(160mg，0.44mmol)和K2CO3(120mg，0.88mmol)在二噁烷/H2O(5mL/1mL)中的混合物并充N2。然后加入Pd(PPh3)4并伴随搅拌将反应混合物加热至回流。所有起始原料被消耗后，减压下浓缩反应物并通过快速柱纯化残留物以得到N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-甲氧基-乙酰胺(80mg)。
步骤3:(R)-N1-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-N2-(2-甲氧基-乙基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
往N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-甲氧基-乙酰胺(80mg，0.19mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入BH3溶液(3.8mL，3.8mmol)。加热混合物至80℃并搅拌过夜。将反应冷却至室温并用1M HCl小心淬灭。减压下浓缩所得混合物至其初始体积的一半。然后用饱和NaHCO3中和并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。干燥有机层并浓缩，接着通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-N1-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-N2-(2-甲氧基-乙基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(30mg)。
实施例46:2-羟基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-羟基-乙酰胺的制备
搅拌(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(200mg，0.69 mmol)、乙醇酸(79mg，1.03mmol)、HATU(525mg，1.38mmol)和TEA(2mL)在DMF(5mL)中的混合物3小时。然后加入H2O(20mL)并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取水层。干燥经合并有机层并浓缩。通过快速柱纯化残留物以得到160mg N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-羟基-乙酰胺。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-羟基-乙酰胺的制备
脱气N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-羟基-乙酰胺(400mg，1.15mmol)、3-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(360mg，1.38mmol)和K2CO3(635mg，4.60mmol)在二噁烷/H2O(5mL/1mL)中的混合物并充N2。然后加入Pd(PPh3)4(69mg，0.06mmol)并在微波反应器中将混合物加热至150℃2小时。通过快速柱纯化该反应混合物以得到200mg N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-羟基-乙酰胺。
实施例47:2-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇的制备
将N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-羟基-乙酰胺(150mg，0.37mmol)溶于THF(5mL)中并加入BH3溶液(7.5mL，THF中1.0M)。将混合物加热至80℃并搅拌过夜。冷却至室温后，用1M HCl淬灭该反应混合物，然后在减压下浓缩以移除一半溶剂。将饱和NaHCO3加至该残留物至中和。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取该混合物。干燥经合并有机层并浓缩。通过制备性HPLC纯化残留物并获得30mg2-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇。
实施例48:(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
脱气3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(590mg，2.29mmol)、2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙酰胺(700mg，2.29mmol)和K2CO3(630mg，4.58mmol)在二噁烷/H2O(10mL/1mL)中的混合物并充N2。然后加入Pd(PPh3)4(265mg，0.23mmol)并伴随搅拌将反应混合物加热至回流过夜。移除溶剂并接着通过快速柱纯化残留物以得到200mg2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。手性拆分2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺得到(R)-2-[5-(3-甲基-1H- 吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。
实施例49:(S)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
手性拆分200mg 2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺得到(S)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。
实施例50:N-{2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
步骤1:2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇的制备
往3,5-二溴吡啶(735mg，3.1mmol)和2-氨基-2-苯基-乙醇(650g，4.7mmol)在DMSO(8mL)中的溶液中相继加入碘化铜(I)(59mg，0.31mmol)、L-脯氨酸(71mg，0.62mmol)和碳酸钾(856mg，6.2mmol)，氩气氛下100℃搅拌所得混合物过夜。将反应混合物冷却至室温并用水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇。通过快速柱纯化粗化合物以得到黄色油状的2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(2.70mg)。
步骤2:2-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮的制备
0℃、氩气氛下往2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙醇(270mg，0.9mmol)、邻苯二甲酰亚胺(304mg，2.07mmol)和三苯基膦(542mg，2.07mmol)在THF(3mL)中的溶液中滴加偶氮二甲酸二乙酯(360mg，2.07mmol)。0℃室温下搅拌所得混合物过夜。用水(10mL)稀释反应混合物，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗2-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2- 苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮。通过快速柱纯化粗化合物以得到黄色油状的2-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮(300mg)。
步骤3:N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
往粗2-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-异吲哚-1,3-二酮(300g)在乙醇(3mL)中的溶液中加入水合肼(3mL)，80℃搅拌所得混合物1小时。通过TLC和LC-MS监控反应完成后，将反应混合物冷却至室温并用水(10mL)稀释，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的粗N1-5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(170mg)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤4:N-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺的制备
0℃往粗N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(170mg，0.58mmol)和N,N-二异丙基乙胺(150mg，1.16mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(66mg，0.58mmol)。0℃室温下搅拌所得混合物1小时。用水(10mL)稀释反应混合物，然后用二氯甲烷(30mL×3)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到白色固体状的粗N-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(200mg)。
步骤5:N-{2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(101mg，0.48mmol)、双(频哪醇合)二硼(125mg，0.49mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(13mg，0.014mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(16mg，0.043mmol)、乙酸钾(141mg，1.44mmol)加入含有电磁搅 拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃ 1小时。然后将粗N-[2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(200mg，0.48mmol)、碳酸钾(199mg，1.44mmol)、二噁烷(1mL)和H2O(0.4mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃ 2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的N-{2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺(67mg)。
实施例51:环丙烷磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
步骤1:环丙烷磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(113mg，0.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(85mg，0.66mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中滴加环丙磺酰氯(46mg，0.33mmol)。室温下搅拌所得混合物2小时。用水(5mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的环丙烷磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(150mg)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤2:环丙烷磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(63mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器， 然后将所得混合物加热至83℃1小时。将环丙烷磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(150mg，粗品)、碳酸钾(124mg，0.9mmol)、二噁烷(2mL)和H2O(0.6mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的环丙烷磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺(15mg)。
实施例52:N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(1.0g，3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(774mg，6mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中滴加甲磺酰氯(342mg，3mmol)。室温下搅拌所得混合物2小时。用水(10mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(40mL×3)萃取。用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色固体状的粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(1.19g)。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(105mg，0.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(130mg，0.51mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(16mg，0.045mmol)、乙酸钾(147mg，1.5mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。然后将粗N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-甲基磺酰胺(190mg，0.5mmol)、碳酸钾(156mg，1.2mmol)、二噁烷(1mL)和H2O(0.4mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容 器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-甲基磺酰胺(45mg)。
实施例53:2-甲氧基-乙磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
步骤1:2-甲氧基-乙磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(190mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(129mg，1mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中滴加2-甲氧基-乙磺酰氯(79mg，0.5mmol)。室温下搅拌所得混合物过夜。用水(5mL)稀释反应混合物，并接着用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的2-甲氧基-乙磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(166mg)。
步骤2:2-甲氧基-乙磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(105mg，0.5mmol)、双(频哪醇合)二硼(130mg，0.51mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(16mg，0.045mmol)、乙酸钾(147mg，1.5mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。接着将2-甲氧基-乙磺酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(166mg，粗品)、碳酸钾(156mg，1.2mmol)、二噁烷(1mL)和H2O(0.4mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷 却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的2-甲氧基-乙磺酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺(40mg)。
实施例54:2-羟基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
脱气二噁烷/H2O(5mL/1mL)中的N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-羟基-乙酰胺(350mg，1.0mmol)、3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(390mg，1.5mmol)和K2CO3(550mg，4.0mmol)并充N2。然后加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)并在微波反应器中将混合物加热至150℃2小时。通过快速柱纯化反应混合物以得到2-羟基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺(120mg)。
实施例55:(R)-N2-(2-甲氧基-乙基)-N1-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
步骤1:2-甲氧基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺的制备
在二噁烷/H2O(5mL/1mL)中混合N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-2-甲氧基-乙酰胺(230mg，0.63mmol)、3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(196mg，0.76mmol)和K2CO3(210mg，1.52mmol)。脱气该混合物并充N2。然后加入Pd(Ph3)4(35mg，0.03mmol)并在微波反应器中将反应混合物加热至150℃2小时。移除溶剂并通过快速柱(DCM/MeOH＝80:1-20:1)纯化残留物以得到2-甲氧基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺(160mg)。
步骤2:(R)-N2-(2-甲氧基-乙基)-N1-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-1-苯基-乙烷-1,2-二胺的制备
将2-甲氧基-N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-乙酰胺(160mg，0.39mmol)溶于THF(5mL)中并加入BH3溶液(7.8mL，THF中1.0M)。将反应加热至80℃并搅拌过夜。冷却至室温后，用1M HCl淬灭反应混合物。将混合物浓缩至其一半体积。然后加入饱和NaHCO3溶液并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取混合物。干燥经合并有机层并浓缩。通过制备性HPLC纯化残留物以得到(R)-N2-(2-甲氧基-乙基)-N1-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基]-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(30mg)。
实施例56:2-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇的制备
将N-{(R)-2-[5-(3-氟-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-2-羟基-乙酰胺(100mg，0.25mmol)溶于THF(5mL)中并加入BH3溶液(5.0mL，THF中1.0M)。将混合物加热至80℃并搅拌过夜。冷却至室温后，用1M HCl淬灭反应混合物。减压下浓缩反应混合物以移除一半溶剂。然后将饱和NaHCO3加至残留物至中和，并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取该混合物。干燥经合并有机层并浓缩。通过制备性HPLC纯化残留物以得到20mg2-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基氨基}-乙醇。
实施例57:环己羧酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
步骤1:环己羧酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(113mg，0.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(85mg，0.66mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中滴加环己羰酰氯(48mg，0.33mmol)。室温下搅拌所得混合物2小时。用水(5mL)稀释反应混合物，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄 色油状的环己羧酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(147mg)。
步骤2:环己羧酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(63mg，0.3mmol)，双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)，正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)，乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。接着将环己羧酸[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-酰胺(147mg，粗品)、碳酸钾(124mg，0.9mmol)、二噁烷(2mL)和H2O(0.6mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到白色固体状的环己羧酸{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-酰胺(15mg)。
实施例58:N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-苯甲酰胺的制备
步骤1:N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-苯甲酰胺的制备
0℃往粗(R)-N1-(5-溴-吡啶-3-基)-1-苯基-乙烷-1,2-二胺(113mg，0.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(85mg，0.66mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中滴加苯甲酰氯(46mg，0.33mmol)。室温下搅拌所得混合物2小时。用水(5mL)稀释反应混合物，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取。用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤经合并有机层，然后经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到黄色油状的N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-苯甲酰胺(135mg)，其未经纯化而直接用于下一步骤。
步骤2:N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙 基}-苯甲酰胺的制备
将5-溴-3-甲基-1H-吲唑(63mg，0.3mmol)、双(频哪醇合)二硼(78mg，0.306mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(8.2mg，0.009mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(9.7mg，0.027mmol)、乙酸钾(88mg，0.9mmol)加入含有电磁搅拌棒的10mL微波瓶中，然后加入DME(1mL)。在氩气氛下盖封该容器，然后将所得混合物加热至83℃1小时。接着将N-[(R)-2-(5-溴-吡啶-3-基氨基)-2-苯基-乙基]-苯甲酰胺(135mg，粗品)、碳酸钾(124mg，0.9mmol)、二噁烷(2mL)和H2O(0.6mL)相继加入反应混合物中。在氩气氛下盖封该容器，并接着在微波下将反应混合物加热至100℃2小时。将混合物冷却至室温并用水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。用盐水(10mL)洗涤经合并有机层，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩以得到粗标题化合物。通过C-18反相HPLC柱纯化粗标题化合物以得到黄色固体状的N-{(R)-2-[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙基}-苯甲酰胺(27mg)。
实施例59:(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
在氩气氛下，90℃微波下加热5-(2-羟基-1-苯基乙基)-氨基)-吡啶-3-基)-硼酸(350mg，1.26mmol)、3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑(371mg，1.26mmol)、四(三苯基膦)钯(70mg)和碳酸钾(350mg，2.52mmol)在DME/H2O(5:1，15mL)中的混合物60分钟。然后在EtOAc和盐水之间分配残留物。分离水层并用EtOAc萃取。浓缩经合并有机层并通过柱色谱纯化残留物以得到250mg 2-[5-(3,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺。
手性拆分2-[5-(3,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺得到(R)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(65mg)。
实施例60:(S)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺的制备
手性拆分2-[5-(3,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺得到(S)-2-[5-(3-氯-1H-吲唑-5-基)-吡啶-3-基氨基]-2-苯基-乙酰胺(53mg)。
生物学实施例
实施例61:CDK8/细胞周期蛋白C LANCE TR-FRET激酶实验：
本发明化合物生物活性的测定可使用下述实验。
CDK8/细胞周期蛋白C蛋白获得自Invitrogen，cat#PV4402。具有序列PASVPPSPSLSRHSSPHQ(pS)ED的ULight-糖原合成酶(Ulight-GS)肽，以及Europium-anti-phospho糖原合成酶(Ser641)[Eu-anti-P-GS(Ser641)]获得自Perkin Elmer，cat#TRF0131-M和cat#TRF0220。腺苷-5’-三磷酸酯(ATP)获得自Invitrogen，cat#PV3227。
在37℃温育(1)式I化合物、(2)底物[Ulight-GS肽(80nM)和ATP(24μM)]、和(3)CDK8/细胞周期蛋白C(10nM)在反应缓冲液(50mM Hepes，pH7.0，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.2mg/mL BSA，0.8mM DTT)中的混合物30分钟。然后加入[Eu-anti-P-GS(Ser641)](1.5nM)。室温下温育30分钟后，使用来自Perkin Elmer的Envision酶标仪(Ex 340nm，Em 615nm和665nm)检测TR-FRET信号。采用GraphPad Prism 5(GraphPad软件)分析百分数抑制活性或剂量响应。
CDK8/细胞周期蛋白LANCE超生化TR-FRET激酶实验的结果在表1中给出。
实施例62:体外细胞增殖实验:
以5×103细胞/孔在96-孔板上接种细胞并预培养24小时。用连续稀释化合物处理细胞并培养72小时。然后丢弃所有介质，之后将100μL 1:10(v/v)细胞计数试剂盒-8(CCK-8)-培养基溶液加至各孔。在培养器中成长板2小时，并在450nm波长下采用SpectraMAX190(MDS，Sunnyvale，CA)测定吸光度。用以下公式测定测试化合物的抑制率(IR)：IR(％)＝(ODDMSO-OD化合物)/ODDMSO×100％。采用SoftMax Pro，用IR-测试化合物浓度曲线图测定对应于50％IR的浓度(IC50)。
体外细胞增殖实验结果在表3中给出。
测试本发明化合物抑制CDK8活性的能力以及如本发明所述的活化作用。在以上实验中测试各实施例并发现其具有约0.0001μM至约30μM的IC50。发现式I的特定化合物具有约0.0001μM至约1μM的IC50。
实例A
式I化合物可以本身已知作为活性成分的方式用于制造以下组成的片剂：
每片
实例B
式I化合物可以本身已知作为活性成分的方式用于制造以下组成的胶囊：
每胶囊