《阿托西班的中间体的合成与应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《阿托西班的中间体的合成与应用.pdf（17页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104098650A43申请公布日20141015CN104098650A21申请号201310129543922申请日20130415C07K7/06200601C07K1/06200601C07K1/0220060171申请人中国医学科学院药物研究所地址100050北京市宣武区南纬路甲2号72发明人冯文化刘巾玮张韵74专利代理机构北京三高永信知识产权代理有限责任公司11138代理人何文彬54发明名称阿托西班的中间体的合成与应用57摘要本发明公开了一种阿托西班关键中间体的液相合成方法，即HILETHR（BZL）ASNCYS（BZL）PROOH的制备方法。采用此液相接肽合成方。
2、法，反应易监测，较固相合成法成本低，更适合大规模工业化生产。主要合成步骤采用BSA保护脯氨酸，通过N羟基琥珀酰亚胺酯法在脯氨酸N端逐个连接S苄基半胱氨酸、天冬酰胺、苄基保护的苏氨酸和异亮氨酸，得到五肽中间体。51INTCL权利要求书3页说明书13页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书3页说明书13页10申请公布号CN104098650ACN104098650A1/3页21阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于，包括如下步骤A以脯氨酸为原料，使用BSA保护其羧基,再与N端保护的S苄基半胱氨酸的活性酯连接,制得N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酰脯氨酸,再于酸性条件下脱去N端保。
3、护基得到S苄基半胱酰氨脯氨酸；B以S苄基半胱酰氨脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保护的天冬酰胺的活性酯连接，制得N叔丁氧羰酰基天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸；C以天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保护的O苄基苏氨酸的活性酯连接，制得N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸；D以O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保护的异亮氨酸的活性酯。
4、连接，制得N叔丁氧羰酰基异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，即HILETHR（BZL）ASNCYS（BZL）PROOH，其结构（）如下E具体合成路线如下权利要求书CN104098650A2/3页3其中R1BOC、CBZ、TRT、MZR2OSU、ONB、OBT、OOBT、OAT。2根据权利要求1所述的阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于步骤A、C、D中所述的N端保护基团选自叔丁氧羰基（BOC）、苄氧羰基（CBZ）、三苯甲基（TRT）、对甲氧苄氧羰基（MZ）。3根据权利要求1所述的阿托西班五肽中。
5、间体的液相合成方法，其特征在于用酸脱除N端保护基时所述的酸选自包括三氟乙酸、盐酸、氢氟酸；所用溶剂包括二氯甲烷、四氢呋喃、1,4二氧六环。4根据权利要求1所述的阿托西班五肽中间体的液相合成方法，其特征在于步骤A、B、C、D中所述的氨基酸的相应活性酯选自N羟基琥珀酰亚胺酯、N羟基5降冰片烯2，3二甲酰亚胺酯、1羟基苯骈三氮唑酯、3羟基4氧3，4二氢1，2，3苯骈三氮唑酯、1羟基7偶氮苯并三氮唑酯。5根据权利要求14中任一项所述的合成方法，其特征在于包括如下步骤（A）制备S苄基半胱酰氨脯氨酸将BSA和L脯氨酸加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌24H，滴入N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酸（N羟基）琥珀酰。
6、亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下反应58H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH57，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚析出白色固体；将白色固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，搅拌反应25H，减压浓缩至权利要求书CN104098650A3/3页4干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体；（B）制备天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸将S苄基半胱酰氨脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌34H，滴入N叔丁。
7、氧羰酰基天冬酰胺（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌810H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH57，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体；（C）制备O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸将天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌34H，。
8、滴入N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌68H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH58，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，用甲醇/乙醚重结晶，得到白色固体；（D）制备异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸将O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅。
9、拌34H，滴入N叔丁氧羰酰基异亮氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌68H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH58，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，得到的白色固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，用甲醇/乙醚重结晶，得到白色固体。权利要求书CN104098650A1/13页5阿托西班的中间体的合成与应用技术领域0001本发明涉及一种合成阿托西班五肽中间体的液相合成方法，以及该关键中间体在制备阿托西班中的应用。
10、。背景技术0002阿托西班是由辉凌公司（FERRINGAB）研制，其结构如下（），是子宫内及蜕膜、胎膜上受体的环状催产素抑制剂，于2000年3月首次在奥地利上市。使用后可剂量相关性地抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素分泌减少，达到保胎目的。00030004目前阿托西班的合成多采用固相合成方法，例如使用RINKAMIDE树脂为载体，脱FMOC保护后得到H2NRINKAMIDE树脂，以HOBT、DIPCI等为缩合剂，将FMOCGLYOH的羧基与树脂氨基相连，得到FMOCGLY。再采用FMOC策略依次固相合成序列剩余氨基酸。用裂解试剂切割得到阿托西班。相似固相合成方法见专利EP0710243、。
11、CN101357937A、CN101696236A。固相合成方法存在这样几个问题制备量少、设备复杂、需要使用大量的树脂和洗涤溶剂等。0005本发明使用液相合成法制备阿托西班的关键中间体HILETHR（BZL）ASNCYS（BZL）PROOH（结构I），可用于阿托西班的制备。进而解决了阿托西班通过液相合成法生产的技术问题。其中使用BSA作为脯氨酸羧基部分的保护基，使得氨基酸在依次接肽过程中，产率高，易处理，利于大规模工业生产。发明内容0006本发明的目的在于提供阿托西班五肽中间体的一种液相合成方法，进而实现阿托西班的液相合成，解决目前采用固相合成法成本高，反应不易监测，不适宜大规模化生产等问题。。
12、0007本发明的技术解决方案是00081、阿托西班五肽中间体的液相合成方法0009A以脯氨酸为原料，使用BSA保护其羧基,再与N端保护的S苄基半胱氨酸的活性酯连接,制得N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酰脯氨酸,再于酸性条件下脱去N端说明书CN104098650A2/13页6保护基得到S苄基半胱酰氨脯氨酸；0010B以S苄基半胱酰氨脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保护的天冬酰胺的活性酯连接，制得N叔丁氧羰酰基天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸；0011C以天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再。
13、与N端保护的O苄基苏氨酸的活性酯连接，制得N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸；0012D以O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸为原料，使用BSA保护脯氨酰的羧基部分，再与N端保护的异亮氨酸的活性酯连接，制得N叔丁氧羰酰基异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，再于酸性条件下脱去N端保护基得到异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸，即HILETHR（BZL）ASNCYS（BZL）PROOH。0013合成路线如下00140015其中R1BOC、CBZ、TRT、MZ0016R2OSU。
14、、ONB、OBT、OOBT、OAT。0017步骤A、C、D中所述的N端保护基团优选的选自叔丁氧羰基（BOC）、苄氧羰基（CBZ）、三苯甲基（TRT）、对甲氧苄氧羰基（MZ）。0018用酸脱除N端保护基时优选的酸选自包括三氟乙酸、盐酸、氢氟酸；所用溶剂包说明书CN104098650A3/13页7括二氯甲烷、四氢呋喃、1,4二氧六环。0019步骤A、B、C、D中所述的氨基酸的相应活性酯优选的选自N羟基琥珀酰亚胺酯、N羟基5降冰片烯2，3二甲酰亚胺酯、1羟基苯骈三氮唑酯、3羟基4氧3，4二氢1，2，3苯骈三氮唑酯、1羟基7偶氮苯并三氮唑酯。00202、本发明优选的制备方法，其步骤如下0021（1）制。
15、备S苄基半胱酰氨脯氨酸0022将BSA和L脯氨酸加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌24H，滴入N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下反应58H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH57，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚析出白色固体；将白色固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，搅拌反应25H，减压浓缩至干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体；0023（2）制备天冬酰胺。
16、S苄基半胱氨酰脯氨酸0024将S苄基半胱酰氨脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌34H，滴入N叔丁氧羰酰基天冬酰胺（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌810H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH57，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，得到淡黄色油状物，用乙酸乙酯/乙醚重结晶，得到白色固体；0025（3）制备O。
17、苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸0026将天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌34H，滴入N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌68H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH58，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，乙酸乙酯重结晶，得到的固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，用甲醇/乙醚重结晶，得到白色固体；0027（4）。
18、制备异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸0028将O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸和BSA加到无水二氯甲烷中，1035下搅拌34H，滴入N叔丁氧羰酰基异亮氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯的二氯甲烷溶液，1035下搅拌68H，减压蒸除溶剂，加乙醚，用5的碳酸氢钠水溶液萃取；合并水相，加入柠檬酸调至PH58，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，得到的白色固体加至无水二氯甲烷中，015下搅拌滴加三氟乙酸至VCH2CL2VCF3COOH151，1035下搅拌反应25H，减压浓缩至干，用甲醇/乙醚重结晶，得到白色固体。00293、采用BSA作为脯氨酸羧基的。
19、保护基，与氨基酸反应迅速且完全，由于是中性硅烷化试剂，故不改变反应体系中的酸碱性；同时此保护基易于脱去，加入水即可分解且副产说明书CN104098650A4/13页8物溶于水，易与主产物进行分离；另外BSA来源广泛，价格便宜，常用于工业生产。00304、五肽中间体在制备阿托西班中的应用五肽中间体在BSA的保护下与MPA（BZL）DTYR（ET）N3连接，再与HORNZGLYNH2在缩合剂DCC、添加剂HOBT作用下进行反应，得到的产物经液氨钠脱去苄基，最后通过I2氧化，形成二硫键得到阿托西班。0031有益技术效果0032本发明采用液相合成法，使用BSA作为脯氨酸保护基，从而制得阿托西班五肽中间。
20、体，所需设备简单，与固相合成法相比，具有很多优点（1）不需要树脂和大大过量的保护氨基酸及缩合剂；（2）不需要大量的洗涤溶剂；（3）反应易于监测；（4）选取BSA作为保护基，其来源广，反应选择性好且易于脱除；（5）易于实现规模化生产，大大降低生产成本。0033术语和简称0034BOC叔丁氧羰基0035CBZ苄氧羰基0036TRT三苯甲基0037MZ对甲氧苄氧羰基0038BSAN，O双（三甲基硅基）乙酰胺0039IBCF氯甲酸异丙酯0040NMMN甲基吗啉0041DCCN,N二环己基碳二亚胺0042EDCI13二甲氨基丙基3乙基碳二亚胺盐酸盐0043DIAD偶氮二甲酸二异丙酯0044TPP三苯基膦。
21、0045DIPCIN，N二异丙基碳二亚胺0046MPA（BZL）DTYR（ET）N3N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酸酰叠氮0047HORNZGLYNH2N苄氧羰基鸟氨酰甘氨酰胺0048HILETHR（BZL）ASNCYS（BZL）PROOH异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸0049DMFN，N二甲基甲酰胺0050HOBT1羟基苯并三唑0051HOSUN羟基琥珀酰亚胺0052HONBN羟基5降冰片烯2，3二甲酰亚胺0053HOOBT3羟基4氧3，4二氢1，2，3苯骈三氮唑0054HOAT1羟基7偶氮苯并三氮唑0055DIPEAN，N二异丙基乙胺0056TFA三氟乙酸0057THF四氢呋。
22、喃具体实施方式0058下面结合具体的实施例来对本发明进行阐述。0059制备例说明书CN104098650A5/13页90060制备例1N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯（A）00610062N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酸（200G，642MMOL）和N羟基琥珀酰亚胺（73G，642MMOL）加至1,4二氧六环（300ML）内，室温搅拌。控温于5左右，缓慢滴入DCC（145G，706MMOL）的二氯甲烷（50ML）溶液,。室温搅拌25H，过滤，滤液减压浓缩至干。所得黄色油状物，用异丙醇重结晶，得类白色固体202G，收率770。1HNMRCDCL3149S,9H281S,4H0063。
23、29M,2H380S,2H480M,1H524D,1H,J67HZ732M,5H0064制备例2N叔丁氧羰酰基天冬酰胺（N羟基）琥珀酰亚胺酯（B）00650066N叔丁氧羰酰基天冬酰胺（100G，431MMOL）和N羟基琥珀酰亚胺（50G，431MMOL）加至1,4二氧六环（100ML）内。控温于10左右搅拌，缓慢滴入DCC（89G，4316MMOL）的二氯甲烷（10ML）溶液,室温搅拌12H，过滤，滤液减压浓缩至干。所得油状物，用异丙醇重结晶，得类白色固体104G，收率733。1HNMR（DMSOD6）136S,9H264M,2H277S,4H472M,1H701S,1H747S,1H；75。
24、1D,1H,J88HZ0067制备例3N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯（C）00680069N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酸（146G，473MMOL）和N羟基琥珀酰亚胺（54G，473MMOL）加至1,4二氧六环（130ML）内。控温于10左右搅拌，缓慢滴入DCC（98G，473MMOL）的二氯甲烷（20ML）溶液,。室温搅拌4H，过滤，滤液减压浓缩至干。所得油状物，用乙酸乙酯石油醚（41）重结晶，得类白色固体163G，收率848。1HNMR（CDCL3）131（D，3H，J64HZ）；145S,9H285S,4H430（Q,1H,J68HZ）456DD,2H,J58HZ,128H。
25、Z0070471D,1H，J87HZ535D,1H,J86HZ730M,5H0071制备例4N叔丁氧羰酰基异亮氨酸（N羟基）琥珀酰亚胺酯（D）0072说明书CN104098650A6/13页100073N叔丁氧羰酰基异亮氨酸（96G，416MOL）和N羟基琥珀酰亚胺（48G，416MMOL）加至1,4二氧六环（100ML）内，搅拌至全溶。控温于10左右，缓慢滴入DCC（88G，425MMOL）的二氯甲烷（10ML）溶液,。室温搅拌6H，过滤，滤液减压浓缩至干。所得油状物，用异丙醇重结晶，得类白色固体87G，收率637。1HNMR（CDCL3）097（T，3H,J74HZ）104D,3H,J67。
26、HZ126133M,1H157S,9H159M,1H192M,1H290S,4H463（M,1H）501D,1H,J86HZ0074实施例0075实施例1S苄基半胱酰氨脯氨酸三氟乙酸盐（2）0076步骤1N叔丁氧羰酰基S苄基半胱氨酰脯氨酸（1）00770078BSA（187ML，764MMOL）和L脯氨酸（37G，318MMOL）加到无水二氯甲烷（200ML）中，室温搅拌2H，滴入化合物A（130G，318MMOL）的二氯甲烷（30ML）溶液，室温搅拌，反应6H，减压蒸除溶剂，加乙醚（50ML），用5的碳酸氢钠（50ML3）水溶液萃取。合并水相，加入5柠檬酸水溶液调至PH6，用乙酸乙酯（100。
27、ML3）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚（20ML）析出白色固体70G，收率542。ESIMSM/Z4093MH1HNMRCDCL3145S,9H201M,2H216M,2H261282M,2H342M,1H363M,1H372S,2H454M,2H539D,1H,J6HZ732M,5H0079步骤2S苄基半胱酰氨脯氨酸三氟乙酸盐（2）00800081化合物1（70G，171MMOL）加至无水二氯甲烷（25ML）中，搅拌下滴加三氟乙酸（12ML），控温于25下。减压浓缩至干，加入无水乙醚（20ML），析出类白色固体83G。
28、，收率929。ESIMSM/Z3093MHCF3COOH1HNMRDMSOD6186M,3H219M,1H272M,1H283M,1H343M,1H366M,1H383S,2H428M,2H733M,5H825BR,2H。0082实施例2天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三氟乙酸盐（4）0083步骤1N叔丁氧羰酰基天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸（3）0084说明书CN104098650A107/13页110085化合物2（73G，224MMOL）和BSA（119ML，488MMOL）加到无水二氯甲烷（100ML）中，室温搅拌3H，滴入化合物B（86G，204MMOL）的二氯甲烷（10ML）溶液，室温搅。
29、拌6H，减压蒸除溶剂，加乙醚（50ML），用5的碳酸氢钠（50ML3）水溶液萃取。合并水相，加入5柠檬酸水溶液调至PH6，用乙酸乙酯（100ML3）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚（10ML）析出类白色固体56G，收率526。ESIMSM/Z5235MH1HNMRDMSOD6139S,9H186M,3H210M,1H234247M,2H253M,1H271M,1H338M,1H352M,1H375S,2H402M,1H418426M,2H468M,1H682M,1H723M,1H733M,5H796D,1H,J8HZ00。
30、86步骤2天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三氟乙酸盐（4）00870088化合物3（50G，96MMOL）加至无水二氯甲烷（20ML）中，搅拌下滴加三氟乙酸（9ML），控温于25下。减压浓缩至干，加入无水乙醚（20ML），析出浅黄色固体54G，收率885。ESIMSM/Z4233MHCF3COOH1HNMRDMSOD6186M,3H210M,1H234247M,2H253M,1H271M,1H338M,1H352M,1H375S,2H402M,1H418426M,2H468M,1H682M,1H723M,1H733M,5H813BR,2H。0089实施例3O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三。
31、氟乙酸盐（6）0090步骤1N叔丁氧羰酰基O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸（5）00910092化合物4（41G，76MMOL）和BSA（45ML，184MMOL）加到无水二氯甲烷（40ML）说明书CN104098650A118/13页12中，室温搅拌3H，滴入化合物C（34G，84MMOL）的二氯甲烷（10ML）溶液，室温搅拌5H，减压蒸除溶剂，加乙醚（40ML），用5的碳酸氢钠（30ML3）水溶液萃取。合并水相，加入5柠檬酸水溶液调至PH6，用乙酸乙酯（60ML3）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色油状物，加入无水乙醚（20ML）。
32、析出浅黄色固体23G，收率424。ESIMSM/Z7145MH0093步骤2O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三氟乙酸盐（6）00940095化合物5（20G，28MMOL）加至无水二氯甲烷（10ML）中，搅拌下滴加三氟乙酸（5ML），控温于25下。减压浓缩至干，加入无水乙醚（10ML），析出浅黄色固体21G，收率909。ESIMSM/Z6143MHCF3COOH。0096实施例4异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三氟乙酸盐（8）0097步骤1N叔丁氧羰酰基异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸（7）00980099化合物6（20G，28MMOL）和BSA（15M。
33、L，62MMOL）加到无水二氯甲烷（20ML）中，室温搅拌3H，滴入化合物物D（08G，36MMOL）的二氯甲烷（5ML）溶液，搅拌至全溶，反应6H，减压蒸除溶剂，加乙醚（20ML）和5的碳酸氢钠（20ML3）水溶液，析出白色固体，过滤，得黄褐色固体13G，收率563。ESIMS（M/Z）8274M1；0100步骤2异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸三氟乙酸盐（8）0101说明书CN104098650A129/13页130102化合物7（10G，12MMOL）加至无水二氯甲烷（10ML）中，搅拌下滴加三氟乙酸（5ML），控温于25下。减压浓缩至干，加入无水乙醚（10ML），析出黄。
34、褐色固体109G，收率872。ESIMSM/Z7271MHCF3COOH。0103应用实例0104应用实例1N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酸酰肼VI0105步骤13苄巯基丙酸I01060107巯基丙酸（100ML，1146MMOL）加至1MNAOH（250ML）和ETOH（200ML）中，降温至0，缓慢滴加溴苄（143ML，1205MMOL），搅拌10MIN，自然升温，室温搅拌3H。用1MHCL调节PH1，析出大量白色固体，二氯甲烷CH2CL2萃取（200ML3），弃去水相。用1MNAOH调节有机相至PH12，析出白色固体，水萃取。再用1MHCL调节水相PH1，过滤得到大量白色结晶，干燥，得到白色。
35、晶体143G，收率636。ESIMSM/Z19711MH1HNMR（CDCL3）259（T,2H,J68HZ）267T,2H,J68HZ374S,2H729M,5H0108步骤23苄巯基丙酰氯II01090110化合物I（100G，510MMOL）加至甲苯（300ML）内，滴加SOCL2（86ML，1188MMOL），加热至80，搅拌2H（TLC检测），减压浓缩，得到黄色油状物100G，收率91。0111步骤3D酪氨酸甲酯盐酸盐III01120113D酪氨酸（100G，550MMOL）加至无水甲醇（200ML）内，通入干燥的HCL气体1H，室温搅拌3HTLC检测，减压浓缩，得类白色固体110G。
36、，收率866。ESIMSM/Z19620MH1HNMRDMSOD6185（BR，2H）271M,2H348M,1H356S,3H682DD,4H,J86HZ,72HZ917S,1H。0114步骤4N3苄巯基丙酰D酪氨酸甲酯IV说明书CN104098650A1310/13页1401150116化合物III（90G，387MMOL）加至CH2CL2250ML中，室温搅拌下，加入吡啶（92G，1161MMOL）和TMSCL（64ML，504MMOL）。降温至0，滴加化合物II（90G，418MMOL）室温搅拌4H，减压浓缩，得黄色油状物，加入乙酸乙酯（100ML），用05MHCL调节PH7，弃去水层。
37、。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得黄色油状物，硅胶柱层析纯化（VPEVEA21）得到白色结晶84G，收率586。ESIMSM/Z37428MH1HNMR（CDCL3）236T,2H,J68HZ268T,2H,J68HZ305M,2H371S,2H374S,3H484DD,1H,J59HZ,135HZ612D,1H,J78HZ683DD,4H,J86HZ,72HZ730M,5H0117步骤5N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酸甲酯V01180119化合物IV（30G，80MMOL）加至无水DMF（30ML）和K2CO3（22G，160MMOL）中，氮气保护下，再加入碘乙。
38、烷（128ML，160MMOL），室温搅拌20H，加入乙酸乙酯（100ML）和水（80ML3）萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤后经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到白色结晶26G，收率781。ESIMSM/Z40216MH1HNMR（CDCL3）134（T，3H,J8HZ）241T,2H,J68HZ255T,2H,J68HZ291M,2H370S,2H372S,3H0120398Q,2H,J8HZ482DD,1H,J59HZ,135HZ623D,1H,J78HZ684DD,4H,JJ86HZ,72HZ732M,5H0121步骤6N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酸酰肼VI01220123化。
39、合物V（40G，100MMOL）加至MEOH（245ML）内，滴加85的水合肼（823ML），室温搅拌，5MIN后产生大量白色沉淀，继续搅拌1H，放入冰箱冷藏过夜。过滤，滤饼用水洗涤三次，得到白色固体35G，收率875。0124ESIMSM/Z40254MH1HNMRDMSOD6127（T，3H,J8HZ）0125233T,2H,J68HZ243T,2H,J68HZ265M,1H281M,1H366S,2H说明书CN104098650A1411/13页150126393Q,2H,J8HZ423BR,1H436M,1H623D,1H,J78HZ687DD,4H,0127J86HZ,72HZ732。
40、M,5H814D,1H,J87HZ914S,1H0128应用实例2N苄氧羰基鸟氨酰甘氨酰胺盐酸盐（X）0129步骤1N叔丁氧羰基N苄氧羰基鸟氨酸VIII01300131N苄氧羰基鸟氨酸（53G，200MMOL）与碳酸钾（30G，220MMOL）加入溶液H2O（60ML）与1,4二氧六环（25ML）中，冰浴冷却至0后。将BOC2O46G，210MMOL溶于1,4二氧六环（50ML）中，再将其缓慢滴加至上述含CBZ的混合溶液中，滴毕后撤去冰浴，室温下搅拌过夜。减压蒸除1,4二氧六环。再加入H2O（10ML），用1MOL/L盐酸调至PH23。用乙酸乙酯萃取（80ML3），合并有机相，再分别用10MM。
41、OL/L盐酸（24ML），饱和氯化铵溶液（50ML）和H2O（30ML）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干透明粘状物69G，收率945。ESIMSM/Z36725。1HNMR300MHZ,DMSO1237BR,1H,732S,4H,721S,1H,703D,1H,J77HZ,498S,2H,381S,1H,331S,1H,295D,2H,J54HZ,163M,1H,144M,3H,135S,9H。0132步骤2N叔丁氧羰基N苄氧羰基鸟氨酰甘氨酰胺IX01330134化合物VIII39G，106MMOL溶于无水THF（40ML）中，再加入NMM11G，106MMOL，N2保护，降温至18搅拌，30M。
42、IN后升温至15再缓慢滴加IBCF115G,106MMOL的无水THF（15ML）溶液，保持此温度搅拌30MIN，再加入甘氨酰胺盐酸盐12G,106MMOL和NMM11G，106MMOL后,自然升温至室温，搅拌反应18H。减压蒸除溶剂后加入乙酸乙酯（40ML），再分别用5NAHCO3溶液（50ML3），H2O（50ML）和5柠檬酸溶液（50ML3）洗涤。用无水MGSO4干燥，过滤，将滤液减压旋干，得到淡黄色固体，用少量乙酸乙酯洗去杂质，抽滤，得到白色固体23G，收率524。ESIMSM/Z42333,1HNMR300MHZ,DMSO804S,1H,734D,5H,J50HZ,720D,2H,J。
43、167HZ,710S,1H,702D,1H,J73HZ,500S,2H,385S,1H,362D,2H,J60HZ,297D,2H,J54HZ,160S,1H,142S,2H,138S,9H。0135步骤3N苄氧羰基鸟氨酰甘氨酰胺盐酸盐（X）0136说明书CN104098650A1512/13页160137化合物IX042G，10MMOL加入到4MOL/LHCL的1，4二氧六环溶液（125ML）中，室温搅拌，约6MIN后有大量白色固体析出，反应约35H（TCL检测），抽滤，烘干得白色固体03G，收率844。ESIMSM/Z32316,1HNMR300MHZ,DMSO879M,1H,832S,3。
44、H,748S,1H,736DD,6H,J119HZ,69HZ,714S,1H,501S,2H,392354M,3H,300D,2H,J60HZ,170S,2H,148S,2H。0138应用实例3阿托西班ATOSIBAN0139步骤1N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酰异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酸VII01400141化合物8（63ML,75MMOL）加至无水DMF（6ML）中，再加入BSA（439ML），室温搅拌4H，备用。化合物VI（30G，75MMOL）加至无水DMF（6ML）中，降温至15搅拌至全溶。再加入4MHCL的THF溶液94ML，缓慢滴加亚硝酸叔丁酯（09ML，09M。
45、MOL），在10下搅拌3H。加入三乙胺（52ML），溶液变浑浊后再加入备用的化合1与BSA的混合液。温度保持在10下，搅拌过夜，过滤，弃去滤饼。将滤液减压浓缩，加入乙醚，有大量固体析出。过滤得到白色固体53G，收率647。ESIMSM/Z109698MH0142步骤2N3苄巯基丙酰O乙基D酪氨酰异亮氨酰O苄基苏氨酰天冬酰胺S苄基半胱氨酰脯氨酰N苄氧羰基鸟氨酰甘氨酰胺XI01430144化合物X（17G，47MMOL）加至DMF（10ML）中，室温搅拌，加入HOBT（07G，说明书CN104098650A1613/13页1755MMOL），EDCI10G，55MMOL和DIPEA14ML,80M。
46、MOL，反应4H后，再加入化合物VII（40G，36MMOL），搅拌过夜。减压蒸除溶剂，加入乙醚（30ML）和H2O（30ML），析出大量固体，过滤，烘干得白色固体24G，收率472，ESIMSM/Z104109MH。0145步骤3阿托西班ATOSIBAN01460147NA46MG,200MMOL加至液氨（15ML）中，温度控制在78以下，溶液变蓝，加入化合物XI（250MG，018MMOL），温度保持在78下搅拌4H，加入氯化铵，用氮气吹干液氨。加入05MHCL（20ML）和THF（20ML）萃取，弃去水层，在有机层中加入碘（228MG，018MMOL），室温搅拌3H，用硫代硫酸钠水溶液萃取（15ML3），合并有机相，减压浓缩，得到黄色油壮物，通过反相制备HPLC纯化得到ATOSIBAN，ESIMSM/Z99465MH。说明书CN104098650A17。