一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用【技术领域】
本发明涉及一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用，属于植物
有效成分提取技术领域。
【背景技术】
赛北紫堇：无毛草本，高20—65厘米。主根明显，细长，具少
数纤维状分枝；根茎短，被少数叶残基。茎直立，具棱，自基部多分
枝，略带紫色。基生叶数枚，叶柄长4—6厘米，基部扩大成鞘，叶
片轮廓卵形，二至三回三出分裂，第一回全裂片具柄，第二回近无柄
或无柄，2—3深裂或浅裂，小裂片倒卵形至倒披针形，先端圆或钝，
具短尖，背面具白粉；茎生叶数枚，疏离，互生，均具叶柄且基部扩
大成鞘，叶片同基生叶。总状花序生于茎和分枝先端，长2.5—8厘
米，果时延长达14厘米，多花，先密后疏；苞片最下部者二回羽状
分裂，中部者深裂至缺刻，最上部者披针形至钻形全缘；花梗纤细，
与苞片近等长或稍短。萼片鳞片状，边缘撕裂状，早落；花瓣黄色，
上花瓣长7—8毫米，花瓣片舟状卵形，先端具短尖，边缘微波状，
背部具矮鸡冠状突起，距圆筒形，短于花瓣片，下花瓣舟状倒披针形，
长约5毫米，先端钝，具短尖，背部鸡冠状突起矮，内花瓣长3-4毫
米，花瓣片倒卵形，具1侧生囊，爪线形，与花瓣片近等长；雄蕊束
长3—4毫米，花药极小，花丝披针形，蜜腺体贯穿距的1/2；子房线
状长圆形，长约2毫米，具l列胚珠，花柱比子房短，柱头2裂，具
4个长乳突。蒴果狭圆柱形，长1—1.2厘米，粗约2毫米，有3—7
枚种子，排成1列，成熟时自果梗基部反折。种子近圆形，直径约
1.5毫米，黑色，具光泽。花果期6—10月。赛北紫堇是一种常用中
药，据《藏药大典》记载：其花、叶、根均可入药，具有清热解毒、
镇静、活血化淤、收敛止痒、祛风利气等功效。赛北紫堇是滇南地区
傣族人民常用的植物药，是一种尽人皆知的解毒良药。
产内蒙古(乌拉山)和山西(大五台山)，生于海拔1700米附近的林
下、山坡灌丛下、草丛中或地边路旁。蒙古和俄罗斯的西伯利亚广布。
在云南主要分布在滇南。本种在内蒙古和山西的分布是其分布区以南
的零星分布，这可能与第四纪冰期的影响有关。
研究表明大部分异吲哚类生物碱具有抗肿瘤作用，相关成分在诱
导肿瘤细胞分化、促进肿瘤细胞凋亡以及提高机体免疫力方面亦表现
出一定的作用，国内外对该领域的研究十分活跃，无论是天然存在的，
还是人工合成得到的异吲哚类化合物，都引起了化学家的广泛关注。
【发明内容】
本发明目的是针对现有技术中的需求，提供一种从塞北紫堇中提
取到的新的异吲哚类化合物。
本发明的另一目的是提供一种该化合物的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供一种该化合物的应用。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：
一种异吲哚类化合物，其特征在于其结构式为：
本发明异吲哚类化合物的分子式为C21H19NO5，命名为Isoindole
LYS。
本发明异吲哚类化合物是以干燥的紫堇根为原料，经浸膏提取、
浸膏萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得的。
本发明异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于具体包括以下步
骤：
a、浸膏提取：将紫堇根粗粉碎后用有机溶剂超声提取3次，每
次100min，过滤，合并提取液，旋蒸干其中的有机溶剂，得浸膏A；
b、浸膏萃取：在浸膏A中加入2％HCl进行多次研磨，至生物
碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，保
留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱化至pH9-10，静置，
将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合
并萃取物，并静置挥干氯仿，得浸膏B；
c、硅胶柱分离：将浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B
重量0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，上硅胶柱层析，装柱硅胶为
160～200目，用量为浸膏B重量的5～10倍量，用体积比为1:0～1：2的
有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同
洗脱液部分，再将洗脱液上C-18反相柱进一步分离，用体积浓度10～
100％的甲醇水溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，
合并相同洗脱液部分；
d、高效液相色谱分离：将反相柱分离后的洗脱液经高效液相色
谱进一步分离纯化，根据紫外线检测器谱峰收集目标洗脱部分；
e、将目标洗脱部分经浓缩干燥后，即得。
本发明中紫堇粗粉碎到30～40目。
本发明步骤a和步骤c中的有机溶剂为醇、乙醇、丙酮、氯仿、
石油醚、乙酸乙酯中的一种或几种。
本发明步骤b中反应至生物碱反应较弱，表示所测pH值接近中
性。
本发明在制备过程中要注意回收有机溶剂和氯仿。
本发明步骤c中收集的洗脱液为80:20部分。
本发明步骤d中高效液相色谱分离是以20～80％的甲醇为流动
相，流速10～16ml/min，21.2×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反
相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50μL，
收集15.2～16.4min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异吲哚
类化合物。
本发明对得到的异吲哚类化合物的结构鉴定方法，包括以下步
骤：
(1)本发明制备得到白色柱状结晶(氯仿-甲醇)，旋光值[a]24.8D
-5.45(溶剂为甲醇c0.25)，ESI～MS显示离子峰([M+1])366，表明
其分子量为365，HRESIMS(实测值388.1159[M+Na]+，计算值
388.1160)，在IR谱中有明显的羰基1686cm-1，在1624，1542，1498cm-1
显示有苯环存在，还有2932，1470，1038，920cm-1(次甲二氧基)，
结合其氢谱、碳谱数据，可推得分子式为C21H19NO5，不饱和度为13。
(2)1HMNR低场区有八个质子信号，其中四个为芳香质子信号，
有两个相互偶合(7.20，6.86，J＝8.1)，表明为芳香苯上相临氢；有
两个呈单峰7.28和6.65(各为1个H)，另外两组质子信号，6.03(为
-OCH2O-中两个H)，5.54，4.42(为-CH2上两个H)，高场区有二组甲基
峰3.89(3H，s)，3.73(3H，s)，还有一个单峰2.82(3H，s)为氮原子上甲
基峰，及一组多重峰3.30(2H，m)为一个亚甲基峰.结合13CNMR、
HSQC谱，HMBC谱，表明该化合物中应含有两个苯环。
(3)在HSQC谱及HMBC谱中，可知δ7.28的氢与δ105.8的碳直接
相关，并与δ151.5，155.1，123.3，170.5，146.2，104.5远程相关，δ
6.65的氢与δ104.5的碳直接相关，并与δ151.5，155.1，123.3，146.2，
105.8，75.1远程相关，δ3.89的氢与δ56.6的碳直接相关，并与δ105.8，
151.5远程相关；δ3.73的氢与δ56.6的碳直接相关，并与δ155.1，104.5
的碳远程相关；δ2.82的氢与δ25.2的碳直接相关，并与δ75.1，170.5的
碳远程相关；δ5.54，4.42的氢与δ104.9的碳直接相关，并与δ149.8，7
5.1，135.8，116.0，146.2的碳远程相关；δ7.21的氢与δ116.0的碳直接
相关，并与δ145.0，109.5，150.3，123.2的碳远程相关；δ6.86的氢与
δ109.5的碳直接相关，并与δ123.3，135.8，145.0，150.3的碳远程相
关；δ6.03的氢与δ103.1的碳直接相关，并与δ145.3，150.3的碳远程相
关；δ3.31的氢与δ36.7的碳直接相关，并与δ75.1，123.3，145.0，13
5.8，149.8的碳远程相关。
(4)其碳谱氢谱如表1:
表1THENMR(300Hz)DATAOF1(CD3OD，δppm，JINHz)
综上分析，确定了新化合物的结构式为式1，经文献检索证实该
化合物为一种新化合物。
一种上述异吲哚类化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。
该异吲哚类化合物的抗艾滋病活性实验如下：
对本发明异吲哚类化合物做HIV感染细胞的保护作用试验
(1)样品对C8166宿主细胞的细胞毒性检测：4×105/mLC8166
细胞悬液100μL与不同的待测化合物溶液混合，设三个重复孔。同时
设置不含化合物的对照孔，37℃，5％CO2培养3天，采用MTT比色
法检测细胞毒性。ELx800ELISA仪测定OD值，测定波长为595nm，
参考波长为630nm。计算得到CC50值(50％Cytotoxic
Concentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的
化合物浓度。
(2)样品对HIV-1IIIB诱导C8166细胞病变(CPE)的抑制试
验：将8×105/mLC8166细胞50μL/孔接种到含有100μL/孔倍比稀释化
合物的96孔细胞培养板上，然后加入50μL的HIV-1IIIB稀释上清
(M.O.I.0.0016)，设3个重复孔，同时设置不含化合物的正常细胞对
照孔，37℃，5％CO2培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞
体的形成。EC50(50％EffectiveConcentration)为抑制合胞体形成50％
时的化合物浓度。
(3)根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法
计算出化合物抑制病毒的50％有效浓度(EC50)，50％抑制细胞生
长浓度(CC50)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeuticindex)
为：TI＝CC50/EC50。
(4)经对C8166宿主细胞的细胞毒性检测，以及对HIV-1IIIB
诱导C8166细胞病变(CPE)的抑制试验，异吲哚类化合物(Isoindole
LYS)具有较好的anti-HIV-1活性，EC50值为3.24±0.15μg/mL，治
疗指数(TI)为61.73(见表2)。
表2：化合物IsoindoleLYS活性
Compound
CC50(μg/mL)
EC50(μg/mL)
TI(CC50/EC50)
Isoindole LYS
>200
3.24±0.15
61.73
以上结果揭示了本发明化合物结构新颖且活性好，可作为抗艾滋
药物的先导性化合物，在制备抗艾滋药物中有良好的应用前景。
本发明与现有技术比较，有以下优点：
本发明开发了一种新的异吲哚类化合物，该化合物结构新颖且活
性好，可作为抗艾滋药物的先导性化合物，在制备抗艾滋药物中有良
好的应用前景，同时提供了新的异吲哚类化合物来源，丰富了异吲哚
类化合物的种类。
本发明利用液相制备柱进行异吲哚类化合物高效分离，步骤简
单、效率高、直观、重现性好、出新率高，高效液相色谱分析表明，
采用该方法制备的异吲哚类新化合物纯度可高达98％以上。
【附图说明】
图1为本发明化合物(IsoindoleLYS)的ESIMS图；
图2为本发明化合物(IsoindoleLYS)的核磁共振碳谱(13CNMR)；
图3为本发明化合物(IsoindoleLYS)的核磁共振氢谱(1HNMR)；
图4为本发明化合物(IsoindoleLYS)的HSQC图；
图5为本发明化合物(IsoindoleLYS)的HMBC图；
图6为本发明化合物(IsoindoleLYS)的COSY图；
图7为本发明化合物(IsoindoleLYS)的主要HMBC(H→C)和1H-1H
COSY(–)相关。
【具体实施方式】
本发明一种异吲哚类化合物，其分子式为C21H19NO5，命名为
IsoindoleLYS，结构式为：
本发明的制备方法如下：
a、浸膏提取：将紫堇根粗粉碎到30～40目后用有机溶剂超声
提取3次，每次100min并过滤，合并提取液，旋蒸干其中的有机溶
剂，得浸膏A；
b、萃取：在浸膏A中加入2％HCl进行多次研磨，至生物碱反
应较弱即所测pH值接近中性为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿
萃取酸提取液，保留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱化至
pH9-10，静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直
至氯仿层无色，合并萃取物，并静置挥干氯仿，得浸膏B；
c、硅胶柱分离：将浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B
重量0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，上硅胶柱层析，装柱硅胶为
160～200目，用量为浸膏B重量的5～10倍量，用体积比为1:0～1：2的
有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同
洗脱液部分，再将洗脱液上反相柱进一步分离，用体积浓度10～100％
的甲醇水溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并
相同80:20部分洗脱液部分；
d、高效液相色谱分离：将反相柱分离后的洗脱液以20～80％的
甲醇为流动相，流速10～16ml/min，21.2×250mm，5μm的Zorbax
PrepHTGF反相制备柱为固定相经高效液相色谱进一步分离纯化，
紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50μL，收集15.2～16.4min
的色谱峰；
e、将目标洗脱部分经浓缩干燥后，即得异吲哚类化合物
(IsoindoleLYS)。
实施例1：
称取塞北紫堇根14kg，粉碎到30～40目后用95％乙醇超声提取
3次，每次100min并过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的
乙醇，得乙醇浸膏A，乙醇浸膏用2％HCI多次研磨，每次研磨至生
物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，
保留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10，静
置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，
合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯
仿浸膏B136g；
将上述136g氯仿浸膏B用氯仿溶解，再以80～100目硅胶122g拌
样，160～200目硅胶1100g湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，
之后用氯仿-甲醇系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，
90:10，80:20，70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL
收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用
改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积
比为90:10的氯仿-甲醇有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重20.2g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积浓度为10～
100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层
色谱(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份，
取以体积含量20％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再
以20％的甲醇为流动相，流速10ml/min，利用21.2×250mm，5μm
的ZorbaxPrepHTGF反相制备柱为固定相分离纯化单体，其中紫外
检测器检测波长为254nm，每次进样50μL，收集15.2-15.5min之间
的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物
(IsoindoleLYS)。
实施例2：
称取塞北紫堇根10kg，粉碎到30～40目后用60％丙酮超声提取
3次，每次100min，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的丙
酮，得丙酮浸膏A，丙酮浸膏A用2％HCI多次研磨，至生物碱反应
较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留并合
并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10，静置，将碱化后的酸提取液抽
滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，
将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸膏B(100g)；
取上述总氯仿浸膏B，以80～100目硅胶120g拌样，500g的160～
200目硅胶湿法装柱，上样后，首先采用纯正己烷洗脱，之后用正己
烷-甲醇系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，90:10，
80:20，70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL收集
一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用改良
碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为
80:20的正己烷-甲醇有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重16.1g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10～100％
的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱
(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份；取
以体积含量30％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再以
40％的甲醇为流动相，流速12ml/min，用21.2×250mm，5μm的
ZorbaxPrepHTGF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波
长为254nm，每次进样50μL，收集15.4-15.7min之间的色谱峰，多
次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物(IsoindoleLYS)。
实施例3：
称取塞北紫堇根12kg，粉碎到30～40目后用40％丙酮和60％
乙醇的混合溶剂超声提取3次，每次100min，过滤，合并提取液，
回收溶剂，旋蒸干其中的混合溶剂，得浸膏A，浸膏用2％HCI多次
研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取
酸液3次，保留并合并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10，静置，将
碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并
萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸
膏B(121g)；
取上述总氯仿浸膏B，以80～100目硅胶121g拌样，850g的160～
200目硅胶湿法装柱，上样后，首先采用纯石油醚洗脱，之后用石油
醚-丙酮系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，90:10，
80:20，70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL收集
一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用改良
碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为
80:20的石油醚-丙酮有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重18.2g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10～100％
的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱
(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份；取
以体积含量40％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再以
60％的甲醇为流动相，流速14ml/min，用21.2×250mm，5μm的Zorbax
PrepHTGF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为
254nm，每次进样50μL，收集15.6-15.9min之间的色谱峰，多次累加
合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物(IsoindoleLYS)。
实施例4：
称取塞北紫堇根15kg，粉碎到30～40目后用95％甲醇超声提取
3次，每次100min，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的甲
醇，得甲醇浸膏A，甲醇浸膏A用2％HCI多次研磨，至生物碱反应
较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留酸水
层并合并，用氨水碱化至pH为9-10，静置，将碱化后的酸提取液抽
滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，
将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸膏B(147g)；
取上述总氯仿浸膏B，以80～100目硅胶134g拌样，1300g的160～
200目硅胶湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，之后用氯仿-
甲醇系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，90:10，80:20，
70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL收集一个组
分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用改良碘化秘
钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为95:5的
氯仿-甲醇有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重15.3g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10～100％
的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱
(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份；取
以体积含量20％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再以
80％的甲醇为流动相，流速14ml/min，利用21.2×250mm，5μm的
ZorbaxPrepHTGF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波
长为254nm，每次进样50μL，收集15.6-15.9min之间的色谱峰，多次
累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物(IsoindoleLYS)。
实施例5：
称取塞北紫堇根16kg，粉碎到30～40目后用95％甲醇超声提
取3次，每次100min，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中
的甲醇，得甲醇浸膏A，甲醇浸膏A用2％HCI多次研磨，至生物碱
反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留
酸水层，用氨水碱化至pH为9-10，静置，将碱化后的酸提取液抽滤，
滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃
取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸膏B(162g)；
取上述总氯氯仿浸膏B，以80～100目硅胶129.6g拌样，160～200
目硅胶1620g湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，之后用氯仿
-丙酮系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，90:10，80:20，
70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL收集一个组
分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用改良碘化秘
钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为80:20的
氯仿-丙酮有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重16.5g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10～100％
的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱
(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份；取
以体积含量40％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再以
50％的甲醇为流动相，流速16ml/min，利用21.2×250mm，5μm的
ZorbaxPrepHTGF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波
长为254nm，每次进样50μL，收集16.1-16.4min之间的色谱峰，多次
累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物(IsoindoleLYS)。
实施例6：
称取塞北紫堇根11kg，粉碎到30～40目后用70％丙酮超声提取3
次，每次100min，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的丙酮，
得丙酮浸膏A，丙酮浸膏A用2％HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为
止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留酸水层并合
并，用氨水碱化至pH为9-10，静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液
用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物
置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸膏B(109g)；
取上述总氯仿浸膏B，以80～100目硅胶109g拌样，160～200目硅
胶650g湿法装柱，上样后，首先采用纯乙酸乙酯洗脱，之后用乙酸乙
酯-丙酮系统洗脱，依次用不同比例的洗脱液(100:0，95:5，90:10，
80:20，70:30，60:40，30:70，1:1，1:2)进行梯度洗脱，每250mL收集
一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱(TLC)点样监测，用改良
碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为
90:10的乙酸乙酯-丙酮有机溶剂溶液的洗脱液经浓缩后重16.6g；
用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10～100％
的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱
(TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并斑点相近的组份；取
以体积含量35％甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左右，再以
50％的甲醇为流动相，流速16ml/min，用21.2×250mm，5μm的Zorbax
PrepHTGF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为
254nm，每次进样50μL，收集16.1-16.4min之间的色谱峰，多次累加
合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物(IsoindoleLYS)。
上述实施例仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明
的保护范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质
性的变化及替换均属于本发明的保护范围。