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1、10申请公布号CN104098465A43申请公布日20141015CN104098465A21申请号201410271618122申请日20140618C07C65/03200601C07C51/4220060171申请人广西万寿堂药业有限公司地址530219广西壮族自治区南宁市大沙田经济开发区荣光南路1号72发明人李修善韦莉萍黄小珊叶善洋74专利代理机构成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214代理人吴彦峰54发明名称一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法57摘要本发明公开了一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，属于中药提取工艺技术领域。该方法由以下工艺制得原儿茶酸单体水提、浓缩、萃。
2、取、洗脱、TLC制备提纯，经HPLC法分析测定化合物B为99原儿茶酸，为原儿茶酸单体。本发明从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，通过水提、浓缩、萃取、洗脱等工艺，实现提取纯度高、工艺制备过程简单，适合推广，满足人们对原儿茶酸的需求。51INTCL权利要求书1页说明书4页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图2页10申请公布号CN104098465ACN104098465A1/1页21一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于由以下工艺制成1水提将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取。
3、罐中，加水煎煮二次，控制温度为6080，用180230目滤布过滤，合并滤液；2浓缩滤液浓缩至相对密度为108的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至相对密度为136138的浸膏；3萃取浸膏溶于水并加热溶解后过滤得浸膏水溶液，调PH值为26，采用有机溶剂萃取，萃取35次，分离得到水层和有机层；4洗脱取有机层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿甲醇水为653510的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；5TLC制备提纯将上步所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿丙酮甲醇为611的比例配制的溶液作为展开剂，得。
4、到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为99原儿茶酸。2如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于所述步骤1加水煎煮两次为第一次加1015倍量水煎煮12H，第二次加810倍量水煎煮115H。3如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于所述步骤2是温度控制在5865下进行浓缩。4如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于所述步骤3中浸膏溶于58倍量的水，控制加热温度为6080。5如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于步骤3中所述有机溶剂为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或。
5、石油醚中的一种或多种复合物，有机溶剂总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量。权利要求书CN104098465A1/4页3一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法技术领域0001本发明涉及中药提取工艺技术领域，具体涉及一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法。背景技术0002滇桂艾纳香BLUMEARIPARIABLDC，在中国植物志里亦有收载，称假东风草1，民间习用全草入药。中华药海中记载，滇桂艾纳香性味归经淡、甘平，入肝、肾、膀胱三经；功效主治活血止血本品甘淡入肝，养肝活血，收敛止血，具有活血不伤血、止血不留淤之功，可用于各种出血症；利水消肿本品甘淡渗利，可利湿行水，主治小便不利浮肿症，用其性平。
6、、无寒热、偏热颇，故寒症、热症可用之，尤对产后浮肿症佳。起活血养血、利水消肿之效2。新华本草纲要中亦提到其有活血、止血、利水的功能，用于治经期提前，产后血崩，产后浮肿，不孕症。0003本单位受广西壮族自治区药品检验所中药室委托，对壮药滇桂艾纳香进行分离，经过预试，对制备的滇桂艾纳香浸膏样品中发现其含有酚类、有机酸类、糖类和氨基酸等成分，根据预试的结果，我们进行了小量分离摸索实验，结果发现浸膏中含有机酸，经鉴定为原儿茶酸。0004原儿茶酸，学名3,4二羟基苯甲酸，其分子结构如下00050006它存在于鳞始蕨科植物乌蕨STENOLOMACHUSANUMLCHING的叶，冬青科植物冬青ILEXCHI。
7、NENSISSIMS的叶等植物中，其单体呈白色至褐色结晶性粉末，现代药理实验表明，其对金色葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌都有明显的抑制作用，并有收敛和促进伤面愈合的作用，故目前在临床上用于烧伤、小儿肺炎、菌痢、急性盂肾炎、急性胰腺炎及某种溃疡病的治疗。同时其平喘、祛痰、解蛇毒等部分功效国内亦有相关报道。原儿茶酸不仅应用于医药中间体、染料等亦作为一种分析试剂。0007有过滇桂艾纳香中含有原儿茶酸的相关报道，但从滇桂艾纳香中提取分离原儿茶酸的报道较少，或者从滇桂艾纳香中提取分离得到是原儿茶酸提取物，且收率低，纯度不高，更谈不上提取分离得到高纯度的原儿茶酸单体了。某些实验。
8、室的制备方法虽然能获得较高的纯度，却无法进行规模化工业生产。目前提取原儿茶酸的方法普遍存在但是不适合工业化生产，而适于工业化生产的产品纯度较低等问题。发明内容0008为了解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶说明书CN104098465A2/4页4酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，通过水提、浓缩、萃取、洗脱等工艺，实现提取纯度高、工艺制备过程简单，适合推广，满足人们对原儿茶酸的需求。0009本发明的技术方案为0010一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，由以下工艺制成00111水提将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，。
9、加水煎煮二次，控制温度为6080，用180230目滤布过滤，合并滤液；00122浓缩滤液浓缩至相对密度为108的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至相对密度为136138的浸膏；00133萃取浸膏溶于水并加热溶解后过滤得浸膏水溶液，调PH值为26，采用有机溶剂萃取，萃取35次，分离得到水层和有机层；00144洗脱取有机层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿甲醇水为653510的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；00155TLC制备提纯将上步所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿丙酮甲醇为611的比。
10、例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为99原儿茶酸。0016作为本发明的优选方案，步骤1加水煎煮两次为第一次加1015倍量水煎煮12H，第二次加810倍量水煎煮115H。0017作为本发明的优选方案，步骤2是温度控制在5865下进行浓缩。0018作为本发明的优选方案，步骤3中浸膏溶于58倍量的水，控制加热温度为6080。0019作为本发明的优选方案，步骤3中所述有机溶剂为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或石油醚中的一种或多种复合物，有机溶剂总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量。0020本发明的有益效果为00211、采用控制植物水提液以及萃取料液的PH在26。
11、间，使得原儿茶酸处于分子状态，易于吸附和萃取，有效的将原儿茶酸与杂质进行分离，进一步提高了原儿茶酸的纯度。00222、工艺方法中有机溶剂均可回收再次循环使用，对环境无污染，利于降低成本。00233、滇桂艾纳香药材进行加水煎煮，不引入有机溶剂，可省去使用其他溶剂提取而引入杂质。00244、利用原儿茶酸易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂的特性进行萃取，多次萃取，能完全分离得到水层和有机层，水层不含原儿茶酸，可提取其它有用成分，实现药材有效利用分离提取。00255、上硅胶干柱，梯度洗脱，有效分离提取原儿茶酸不含其它杂质，采用薄层层析法、高效液相层析法进一步提纯得到高纯度的原儿茶酸，具有分离能力高,专属性强。。
12、00266、本发明所得产品纯度可达99以上，生产环节少、成本较低，收率高，方法简单，易于工业化生产，且原儿茶酸的提取得率较高。附图说明0027图1为本发明提取原儿茶酸的工艺流程图。说明书CN104098465A3/4页50028图2为实施例1原儿茶酸对照品的HPLC图谱。0029图3为实施例1化合物B的HPLC图谱。具体实施方式0030下面结合工艺流程图和实施例对本发明做进一步说明。0031实施例一0032从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法0033将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮15H，第二次加10倍量水煎煮1H，控制温度为60，用200目滤布过滤，合。
13、并滤液；浓缩滤液浓缩至58相对密度为108的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至58相对密度为136的浸膏；浸膏溶于5倍量的水并加热至65，溶解后过滤得浸膏水溶液，调PH值为6，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量，萃取5次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿甲醇水为653510的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿丙酮甲醇为611的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化。
14、合物B为99原儿茶酸。0034实施例二0035从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法0036将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮15H，第二次加8倍量水煎煮1H，控制温度为65，用180目滤布过滤，合并滤液；浓缩滤液浓缩至65相对密度为108的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至65相对密度为138的浸膏；浸膏溶于58倍量的水并加热至60，溶解后过滤得浸膏水溶液，调PH值为5，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量，萃取3次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿甲醇水为653510的比例。
15、配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿丙酮甲醇为611的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为99原儿茶酸。0037实施三0038从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法0039将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮2H，第二次加9倍量水煎煮15H，控制温度为80，用230目滤布过滤，合并滤液；浓缩滤液浓缩至58相对密度为108的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至58相对密度为138的。
16、浸膏；浸膏溶于8倍量的水并加热至80，溶解后过滤得浸膏水溶液，调PH值为2，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量，萃取4次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿甲醇水为653510的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制说明书CN104098465A4/4页6备，以氯仿丙酮甲醇为611的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为99原儿茶酸。0040实施例四0041本实施例与上述实施例不同之处为,有机溶剂除了选。
17、取丁酮外，还可以为正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或石油醚中的一种，有机溶剂总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量。0042实施例五0043本实施例与上述实施例不同之处为,有机溶剂还可以为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚和石油醚中的两种以上复合物，有机溶剂总量控制为021倍的浸膏水溶液体积量。0044以下以实施例1为例，详述对化合物B的测定方法0045一、TLC法薄层色谱法00461、对照品溶液制备精密称取原儿茶酸对照品，其纯度为99以上，加甲醇制成每1ML含05MG的溶液，作为对照品溶液。00472、供试品溶液制备取化合物B，加适量甲醇使溶解，作为供试品溶液。00483、鉴别参照中国药典2005年版一部附录。
18、B进行试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10L,分别点上同一硅胶G薄层板上，以氯仿丙酮甲醇为611的比例配制的溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯256NM下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。00494、结果薄层层析检查测定化合物B为原儿茶酸。0050二、HPLC法高效液相层析法00511、仪器与试剂0052高效液相色谱仪日本岛津LC6A，高效液相色谱柱中国科学院大连化学物理研究所产品，46250MM，填料为NUCLEOSIL7C18,紫外256NM检测。00532、方法00541色谱条件高效液相色谱柱NUCLEOSIL7C1846250M。
19、M，流动相为甲醇1冰醋酸溶液895,V/V，流速为1ML/MIN，柱温为室温，检测波长256NM下检测，理论板数原儿茶酸峰应不低于4000。00552对照品溶液和供试品溶液的制备同TLC法，在此不再赘述。00563精密度实验吸取对照品和供试品溶液各10L，注入高效液相色谱仪，测定原儿茶酸的含量，测定化合物B为原儿茶酸，其纯度达到99以上。00573、结果经HPLC测定与原儿茶酸对照品保留的时间一致，白色晶体，熔点为200202，其图谱见附图2和附图3，根据数据分析与文献结合，确定化合物B为原儿茶酸。0058通过实施例1表明，本发明从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，可靠，且提取纯度高，以实施例二五作同样的试验，也同样达到相近的效果。说明书CN104098465A1/2页7图1说明书附图CN104098465A2/2页8图2图3说明书附图CN104098465A。