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1、10申请公布号CN104178538A43申请公布日20141203CN104178538A21申请号201410428837622申请日20140827C12P19/12200601C12R1/64520060171申请人齐鲁工业大学地址250353山东省济南市长清区大学路3501号72发明人陈静张红蕊74专利代理机构济南金迪知识产权代理有限公司37219代理人杨磊李宝成54发明名称一种选择性生产槐糖脂的方法57摘要本发明涉及一种选择性生产槐糖脂的方法，步骤1取拟威克酵母CGMCCNO3798接种于培养基上，活化培养2448小时，得活化的拟威克酵母；2将活化的拟威克酵母接种于种子培养基中，1。
2、00200R/MIN培养2028H，得拟威克酵母种子液；3按照体积比46的接种量，将拟威克酵母种子液接种到不同发酵培养基中，160R/MIN培养144168小时，得发酵液，发酵液经分离、纯化，即得内酯型或酸型槐糖脂。本发明能有效的人工控制选择性生产内酯型槐糖脂或酸型槐糖脂，大大简化分离工艺，降低分离成本。51INTCL权利要求书1页说明书4页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页10申请公布号CN104178538ACN104178538A1/1页21一种选择性生产槐糖脂的方法，步骤如下1取拟威克酵母WICKERHAMIELLADOMERCQI。
3、AEY2ACGMCCNO3798接种于培养基上，2832活化培养2448小时，得活化的拟威克酵母；2将步骤1制得的活化的拟威克酵母接种于种子培养基中，2832、100200R/MIN培养2028H，得拟威克酵母种子液；3按照体积比46的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基中，2832、160R/MIN培养144168小时，得发酵液，发酵液经分离、纯化，即得槐糖脂；当所述的发酵培养基为发酵培养基A时，得内酯型槐糖脂；发酵培养基A的组分如下葡萄糖7585G/L，油酸6080ML/L，硫酸铵35G/L，KH2PO40812G/L，NA2HPO412H2O0812G/L，酵母粉153。
4、5G/L，MGSO47H2O0406G/L，PH5565，水定容；当所述的发酵培养基为发酵培养基B时，得酸型槐糖脂；发酵培养基B的组分如下葡萄糖7585G/L，油酸6080ML/L，硫酸铵35G/L，KH2PO40812G/L，NA2HPO412H2O0812G/L，酵母粉1535G/L，FESO47H2O004006G/L，PH5565，水定容。2根据权利要求1所述的选择性生产槐糖脂的方法，其特征在于，步骤1中所述的培养基为斜面培养基，组分如下葡萄糖1822G/L，酵母粉812G/L，蛋白胨1822G/L，琼脂粉1822G/L，蒸馏水定容。3根据权利要求1所述的选择性生产槐糖脂的方法，其特征。
5、在于，步骤2中所述的种子培养基组分如下葡萄糖1822G/L，酵母粉812G/L，蛋白胨1822G/L，蒸馏水定容。4根据权利要求1所述的选择性生产槐糖脂的方法，其特征在于，步骤3中当所述的发酵培养基为发酵培养基A时，所述分离纯化步骤为5000R/MIN转速离心分离10分钟，沉淀，向沉淀中加入05倍发酵液体积的乙酸乙酯萃取，萃取液40减压干燥。5根据权利要求1所述的选择性生产槐糖脂的方法，其特征在于，步骤3中当所述的发酵培养基为发酵培养基B时，所述分离纯化步骤为5000R/MIN转速离心分离10分钟，弃沉淀，向上清液中加入05倍发酵液体积的乙醇萃取，萃取液40减压干燥。6根据权利要求1所述的选择。
6、性生产槐糖脂的方法，其特征在于，步骤3中发酵培养基A的组分如下葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，MGSO47H2O05G/L，PH6，水定容。7根据权利要求1所述的选择性生产槐糖脂的方法，其特征在于，步骤3中发酵培养基B的组分如下葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，FESO47H2O005G/L，PH6，水定容。权利要求书CN104178538A1/4页3一种选择性生产槐糖脂的方法技术领域0001本发明涉及槐糖脂的生产。
7、领域，具体地说是通过控制发酵培养基中金属离子的种类生产不同类型槐糖脂的方法。背景技术0002槐糖脂是一类由酵母菌产生的糖脂类生物表面活性剂，是所有生物表面活性剂中产量最高的一种。槐糖脂本身无毒、无嗅、无味，对人体皮肤无刺激作用，并且能够在自然界完全、快速地被微生物降解掉，不会对环境造成污染和破坏。因而与化学合成的表面活性剂相比，具有良好的生物相容性、可降解性、环境友好等许多优点，可以替代化学表面活性剂应用在石油开采、土壤修复、生物冶金、化妆品、食品、医药等许多领域。0003发酵结束后，发酵液中的槐糖脂是内酯型和酸型的混合物。内酯型和酸型二者结构的不同造成了生物学活性和理化特性的不同。内酯型槐糖。
8、脂溶解度小，以结晶或油状形式存在，易于分离，抗菌、抗肿瘤、抗炎症反应效果好；而酸型溶解度大，发泡和乳化性能好。这些特性决定了二者的应用领域不同，如果能够人工控制选择性生产槐糖脂的类型，将会大大简化分离工艺，降低分离成本。0004近年来，对槐糖脂生产方法的研究已有许多文献报道，比如采用不同的碳源、氮源、控制不同PH等，总槐糖脂的产量都大大提高。中国专利文献CN101886047A申请号2010101917077公开了一株拟威克酵母菌株，能够产生槐糖脂，但是产量有限，不能满足市场要求。0005目前，通过控制发酵培养基中金属离子的种类选择性生产槐糖脂研究和开发未见报道。发明内容0006针对现有技术的。
9、不足，本发明提供一种选择性生产槐糖脂的方法。0007本发明的技术方案如下0008一种选择性生产槐糖脂的方法，步骤如下00091取拟威克酵母WICKERHAMIELLADOMERCQIAEY2ACGMCCNO3798接种于培养基上，2832活化培养2448小时，得活化的拟威克酵母；00102将步骤1制得的活化的拟威克酵母接种于种子培养基中，2832、100200R/MIN培养2028H，得拟威克酵母种子液；00113按照体积比46的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基中，2832、160R/MIN培养144168小时，得发酵液，发酵液经分离、纯化，即得槐糖脂；0012当所述的发。
10、酵培养基为发酵培养基A时，得内酯型槐糖脂；发酵培养基A的组分如下葡萄糖7585G/L，油酸6080ML/L，硫酸铵35G/L，KH2PO40812G/L，NA2HPO412H2O0812G/L，酵母粉1535G/L，MGSO47H2O0406G/L，PH55说明书CN104178538A2/4页465，水定容；0013当所述的发酵培养基为发酵培养基B时，得酸型槐糖脂；发酵培养基B的组分如下葡萄糖7585G/L，油酸6080ML/L，硫酸铵35G/L，KH2PO40812G/L，NA2HPO412H2O0812G/L，酵母粉1535G/L，FESO47H2O004006G/L，PH5565，水定。
11、容。0014根据本发明，优选的，步骤1中所述的培养基为斜面培养基，组分如下葡萄糖1822G/L，酵母粉812G/L，蛋白胨1822G/L，琼脂粉1822G/L，蒸馏水定容。0015根据本发明，优选的，步骤2中所述的种子培养基组分如下葡萄糖1822G/L，酵母粉812G/L，蛋白胨1822G/L，蒸馏水定容。0016根据本发明，优选的，步骤3中当所述的发酵培养基为发酵培养基A时，所述分离纯化步骤为5000R/MIN转速离心分离10分钟，沉淀，向沉淀中加入05倍发酵液体积的乙酸乙酯萃取，萃取液40减压干燥；0017当所述的发酵培养基为发酵培养基B时，所述分离纯化步骤为5000R/MIN转速离心分离。
12、10分钟，弃沉淀，向上清液中加入05倍发酵液体积的乙醇萃取，萃取液40减压干燥；0018根据本发明，优选的，步骤3中发酵培养基A的组分如下0019葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，MGSO47H2O05G/L，PH6，水定容；0020优选的，步骤3中发酵培养基B的组分如下0021葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，FESO47H2O005G/L，PH6，水定容。0022本发明是通过控制发酵培养基中金属离子的种类，使得发。
13、酵结束后发酵液中酸型槐糖脂或者内酯型槐糖脂占绝对优势。具体地说就是在发酵基本培养基中添加FE2生产酸型槐糖脂，添加MG2生产内酯型槐糖脂。0023本发明的有益效果00241、本发明能有效的人工控制选择性生产内酯型槐糖脂或酸型槐糖脂，大大简化分离工艺，降低分离成本。00252、本发明操作简单、易于控制。附图说明0026图1为本发明实施例12发酵结束后发酵液的状态图。0027其中，A内酯型槐糖脂发酵液；B酸型槐糖脂发酵液。0028图2为本发明实施例12发酵液中内酯型槐糖脂和酸型槐糖脂的含量。0029总槐糖脂；内酯型槐糖脂，酸型槐糖脂0030A内酯型槐糖脂发酵液；B酸型槐糖脂发酵液具体实施方式003。
14、1下面通过实施例对本发明内容作进一步的说明，但不限于此。0032实施例1、内酯型槐糖脂的生产，步骤如下说明书CN104178538A3/4页500331取拟威克酵母WICKERHAMIELLADOMERCQIAEY2ACGMCCNO3798，在斜面培养基上30培养24小时，得活化的拟威克酵母；0034所述斜面培养基组分如下葡萄糖20G/L，酵母粉10G/L，蛋白胨20G/L，琼脂粉20G/L，蒸馏水定容；00352将步骤1制得的活化拟威克酵母接种于300ML三角瓶装50ML种子培养基，30，摇床160R/MIN振荡培养24H，得拟威克酵母种子液；0036所述种子培养基组分如下葡萄糖20G/L，。
15、酵母粉10G/L，蛋白胨20G/L，蒸馏水定容；00373按照体积比5的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基A中，30、160R/MIN培养168小时，得发酵液，发酵液5000R/MIN离心10分钟、沉淀、向沉淀中加入05倍发酵液体积的乙酸乙酯萃取，萃取液40减压干燥，即得内酯型槐糖脂；0038所述的发酵培养基A组分如下葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，MGSO47H2O05G/L，PH60，水定容；0039实施例2、酸型槐糖脂的生产，步骤如下00401取拟威克酵母WICKERHAMIE。
16、LLADOMERCQIAEY2ACGMCCNO3798，在斜面培养基上30培养24小时，得活化的拟威克酵母；0041所述斜面培养基组分如下葡萄糖20G/L，酵母粉10G/L，蛋白胨20G/L，琼脂粉20G/L，蒸馏水定容；00422将步骤1制得的活化拟威克酵母接种于300ML三角瓶装50ML种子培养基，30，摇床160R/MIN振荡培养24H，得拟威克酵母种子液；0043所述种子培养基组分如下葡萄糖20G/L，酵母粉10G/L，蛋白胨20G/L，蒸馏水定容；00443按照体积比5的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基B中，30、160R/MIN培养168小时，得发酵液；发酵液。
17、5000R/MIN离心10分钟、弃沉淀、上清液用05倍发酵液体积的乙醇萃取，萃取液40减压干燥，即得酸型槐糖脂；0045所述的发酵培养基B组分如下葡萄糖80G/L，油酸60ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO41G/L，NA2HPO412H2O1G/L，酵母粉3G/L，FESO47H2O005G/L，PH60，水定容。0046实施例3、内酯型槐糖脂的生产，步骤如下00471取拟威克酵母WICKERHAMIELLADOMERCQIAEY2ACGMCCNO3798，在斜面培养基上28培养48小时，得活化的拟威克酵母；0048所述斜面培养基组分如下葡萄糖18G/L，酵母粉8G/L，蛋白胨18G/L，。
18、琼脂粉18G/L，蒸馏水定容；00492将步骤1制得的活化拟威克酵母接种于300ML三角瓶装50ML种子培养基，28，摇床100R/MIN振荡培养20H，得拟威克酵母种子液；0050所述种子培养基组分如下葡萄糖18G/L，酵母粉8G/L，蛋白胨18G/L，蒸馏水定容；00513按照体积比4的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基A中，28、160R/MIN培养168小时，得发酵液；发酵液5000R/MIN离心10分钟、沉淀、说明书CN104178538A4/4页6向沉淀中加入05倍发酵液体积的乙酸乙酯萃取，萃取液40减压干燥，即得内酯型槐糖脂；0052所述的发酵培养基A组分如下。
19、葡萄糖75G/L，油酸60ML/L，硫酸铵3G/L，KH2PO408G/L，NA2HPO412H2O08G/L，酵母粉15G/L，MGSO47H2O04G/L，PH55，水定容。0053实施例4、酸型槐糖脂的生产，步骤如下00541取拟威克酵母WICKERHAMIELLADOMERCQIAEY2ACGMCCNO3798，在斜面培养基上32培养24小时，得活化的拟威克酵母；0055所述斜面培养基组分如下葡萄糖22G/L，酵母粉12G/L，蛋白胨22G/L，琼脂粉22G/L，蒸馏水定容；00562将步骤1制得的活化拟威克酵母接种于300ML三角瓶装50ML种子培养基，32，摇床200R/MIN振荡。
20、培养28H，得拟威克酵母种子液；0057所述种子培养基组分如下葡萄糖22G/L，酵母粉12G/L，蛋白胨22G/L，蒸馏水定容；00583按照体积比6的接种量，将步骤2制得的拟威克酵母种子液接种到发酵培养基B中，32、160R/MIN培养144小时，得发酵液；发酵液5000R/MIN离心10分钟、弃沉淀、上清液用05倍发酵液体积的乙醇萃取，萃取液40减压干燥，即得酸型槐糖脂；0059所述的发酵培养基B组分如下葡萄糖85G/L，油酸80ML/L，硫酸铵5G/L，KH2PO412G/L，NA2HPO412H2O12G/L，酵母粉35G/L，FESO47H2O006G/L，PH65，水定容。说明书CN104178538A1/1页7图1图2说明书附图CN104178538A。