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1、10申请公布号CN104114574A43申请公布日20141022CN104114574A21申请号201380009789022申请日201302191250145820120220SEC07K14/47200601A61K38/17200601A61P9/00200601A61P29/0020060171申请人瑞典孤儿比奥维特鲁姆有限公司地址瑞典斯德哥尔摩72发明人夏洛塔伯格哈德马格纳斯伯格伦德帕特里克斯托姆博格马林林德堡埃琳贡内里乌松约阿希姆菲尔德维什74专利代理机构北京安信方达知识产权代理有限公司11262代理人王思琪郑霞54发明名称结合人补体C5的多肽57摘要本发明涉及C5结合多肽。
2、,其包括C5结合基序,BM,所述基序由选自以下的氨基酸序列构成IEX2X3X4AX6X7EIDX11LPNLX16X17X18QWX21AFIX25X26LX28D,和II与I中定义的序列具有至少86同一性的氨基酸序列,其中多肽结合C5。本发明还涉及C5结合多肽,用于在治疗中使用,例如用于在C5相关的状况的治疗中使用,以及涉及治疗的方法。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014081586PCT国际申请的申请数据PCT/SE2013/0501392013021987PCT国际申请的公布数据WO2013/126006EN2013082951INTCL权利要求书7页说明书38页序列表。
3、(电子公布)附图50页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书7页说明书38页序列表(电子公布)附图50页10申请公布号CN104114574ACN104114574A1/7页21C5结合多肽,所述C5结合多肽包括C5结合基序,BM,所述基序由选自以下的氨基酸序列构成IEX2X3X4AX6X7EIDX11LPNLX16X17X18QWX21AFIX25X26LX28D,其中,彼此独立地,X2选自H、Q、S、T和V;X3选自I、L、M和V;X4选自A、D、E、H、K、L、N、Q、R、S、T和Y;X6选自N和W;X7选自A、D、E、H、N、Q、R、S和T;X11选自A、E、G、H。
4、、K、L、Q、R、S、T和Y;X16选自N和T;X17选自I、L和V;X18选自A、D、E、H、K、N、Q、R、S和T;X21选自I、L和V;X25选自D、E、G、H、N、S和T;X26选自K和S;X28选自A、D、E、H、N、Q、S、T和Y;以及II与I中定义的序列具有至少86同一性的氨基酸序列,其中所述多肽结合C5。2根据权利要求1所述的C5结合多肽,其中X2选自H、T和V。3根据权利要求2所述的C5结合多肽,其中X2选自T和V。4根据权利要求3所述的C5结合多肽,其中X2是V。5根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X3选自I、L和V。6根据权利要求5所述的C5结合多肽,其中X。
5、3选自I和L。7根据权利要求6所述的C5结合多肽,其中X3是I。8根据权利要求6所述的C5结合多肽,其中X3是L。9根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X4选自A、D、E、K、L、Q和R。10根据权利要求9所述的C5结合多肽,其中X4选自A、D、E、K、和R。11根据权利要求10所述的C5结合多肽,其中X4选自D和E。12根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X6是W。13根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X7选自A、D、N和T。14根据权利要求13所述的C5结合多肽,其中X7选自D和N。15根据权利要求14所述的C5结合多肽,其中X7是D。16根据权利要求。
6、14所述的C5结合多肽,其中X7是N。17根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X11选自A、H、K、Q、R和S。18根据权利要求17所述的C5结合多肽,其中X11选自A、H、K和R。19根据权利要求18所述的C5结合多肽,其中X11选自A、K和R。20根据权利要求19所述的C5结合多肽,其中X11选自K和R。权利要求书CN104114574A2/7页321根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X16是T。22根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X17选自I和L。23根据权利要求22所述的C5结合多肽,其中X17是I。24根据权利要求22所述的C5结合多肽,其中。
7、X17是L。25根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X18选自A、D、E、N、Q、S和T。26根据权利要求25所述的C5结合多肽,其中X18选自A、D、E、Q和S。27根据权利要求26所述的C5结合多肽,其中X18选自D、E和Q。28根据权利要求27所述的C5结合多肽,其中X18选自D和E。29根据权利要求28所述的C5结合多肽,其中X18是D。30根据权利要求28所述的C5结合多肽,其中X18是E。31根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X21选自I和L。32根据权利要求31所述的C5结合多肽,其中X21是I。33根据权利要求31所述的C5结合多肽,其中X21是L。3。
8、4根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X25选自E、H、N和T。35根据权利要求34所述的C5结合多肽,其中X25选自E和N。36根据权利要求35所述的C5结合多肽,其中X25是N。37根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X26是K。38根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中X28选自A、D、E、H、N、Q和S。39根据权利要求38所述的C5结合多肽,其中X28选自A、D、E和S。40根据权利要求39所述的C5结合多肽,其中X28选自A、D和E。41根据权利要求40所述的C5结合多肽,其中X28选自D和E。42根据权利要求41所述的C5结合多肽,其中X28是D。
9、。43根据权利要求811中任一项所述的C5结合多肽,其中X3X4选自LE和LD。44根据权利要求2230中任一项所述的C5结合多肽,其中X17X18选自IE和LD。45根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸I满足以下八个条件IVIII中的至少四个IX2是V;IIX3选自I和L;IIIX6是W;VIX7选自D和N;VX17选自I和L;VIX21是L;VIIX25是N;VIIIX28是D。46根据权利要求45所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列I满足所述八个条件IVIII中的至少五个。47根据权利要求46所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列I满足所述八个条件IVIII中的至。
10、少六个。48根据权利要求47所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列I满足所述八个条件权利要求书CN104114574A3/7页4IVIII中的至少七个。49根据权利要求48所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列I满足所述八个条件IVIII的全部。50根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO1248中的任一个。51根据权利要求50所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自以下的任一个SEQIDNO112、SEQIDNO20、SEQIDNO2324、SEQIDNO2628、SEQIDNO3235、SEQIDNO3839、SEQIDNO41、SEQIDNO46。
11、、SEQIDNO49、SEQIDNO5657、SEQIDNO59、SEQIDNO66、SEQIDNO7879、SEQIDNO87、SEQIDNO92、SEQIDNO106、SEQIDNO110、SEQIDNO119、SEQIDNO125、SEQIDNO141、SEQIDNO151、SEQIDNO161、SEQIDNO166、SEQIDNO187、SEQIDNO197、SEQIDNO203、SEQIDNO205、SEQIDNO215和SEQIDNO243。52根据权利要求51所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO112中的任一个。53根据权利要求52所述的C5结合多肽,其中所述。
12、氨基酸序列选自SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4和SEQIDNO5中的任一个。54根据权利要求53所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO1和SEQIDNO4。55根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中所述C5结合基序形成三螺旋束蛋白质结构域的部分。56根据权利要求55所述的C5结合多肽,其中所述C5结合基序基本上形成所述三螺旋束蛋白质结构域中具有互连环INTERCONNECTINGLOOP的两个螺旋的部分。57根据权利要求55或56所述的C5结合多肽,其中所述三螺旋束蛋白质结构域选自来自金黄色葡萄球菌STAPHYLOCOCCUSA。
13、UREUS的蛋白质A的结构域及其衍生物。58根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,所述C5结合多肽包括选自以下的氨基酸序列IKBMDPSQSXAXBLLXCEAKKLNDXDQ;其中BM是如权利要求154中任一项定义的C5结合基序;XA选自A和S;XB选自N和E;XC选自A、S和C;XD选自A和S;以及II与以上定义的任一序列具有至少79同一性的氨基酸序列。59根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是A。60根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是S。61根据权利要求5860中任一项所述的C5结合多肽,其中XB是N。62根据权利要求5860中任一项所述的C5结合多肽,其中XB。
14、是E。权利要求书CN104114574A4/7页563根据权利要求5862中任一项所述的C5结合多肽,其中XC是A。64根据权利要求5862中任一项所述的C5结合多肽,其中XC是S。65根据权利要求5862中任一项所述的C5结合多肽,其中XC是C。66根据权利要求5865中任一项所述的C5结合多肽,其中XD是A。67根据权利要求5865中任一项所述的C5结合多肽,其中XD是S。68根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是A;XB是N;XC是A且XD是A。69根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是A;XB是N;XC是C且XD是A。70根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是S。
15、;XB是E;XC是S且XD是S。71根据权利要求58所述的C5结合多肽,其中XA是S;XB是E;XC是C且XD是S。72根据权利要求5871中任一项所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO249496中的任一个。73根据权利要求72所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自以下的任一个SEQIDNO249260、SEQIDNO268、SEQIDNO271272、SEQIDNO274276、SEQIDNO280283、SEQIDNO286287、SEQIDNO289、SEQIDNO294、SEQIDNO297、SEQIDNO304305、SEQIDNO307、SEQIDNO314。
16、、SEQIDNO326327、SEQIDNO335、SEQIDNO340、SEQIDNO354、SEQIDNO358、SEQIDNO367、SEQIDNO373、SEQIDNO389、SEQIDNO399、SEQIDNO409、SEQIDNO414、SEQIDNO435、SEQIDNO445、SEQIDNO451、SEQIDNO453、SEQIDNO463和SEQIDNO491。74根据权利要求73所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO249260中的任一个。75根据权利要求74所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO249、SEQIDNO250、SEQIDN。
17、O251、SEQIDNO252和SEQIDNO253中的任一个。76根据权利要求75所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO249和SEQIDNO252中的任一个。77根据权利要求157中任一项所述的C5结合多肽,所述C5结合多肽包括选自以下的氨基酸序列IYAKBMDPSQSSELLXCEAKKLNDSQAP;其中BM是如权利要求154中任一项定义的C5结合基序,且XC选自S和C;以及II与以上定义的任一序列具有至少81同一性的氨基酸序列。78根据权利要求157中任一项所述的C5结合多肽,所述C5结合多肽包括选自以下的氨基酸序列IFNKBMDPSQSANLLXCEAKKLNDA。
18、QAP;其中BM是如权利要求154中任一项定义的C5结合基序,且XC选自A和C;以及II与以上定义的任一序列具有至少81同一性的氨基酸序列。79根据权利要求157中任一项所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO497757中的任一个。80根据权利要求79所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自以下的任一个SEQIDNO497508、SEQIDNO516、SEQIDNO519520、SEQIDNO522524、SEQIDNO528531、SEQIDNO534535、SEQIDNO537、SEQIDNO542、SEQIDNO545、SEQID权利要求书CN104114574A5/。
19、7页6NO552553、SEQIDNO555、SEQIDNO562、SEQIDNO574575、SEQIDNO583、SEQIDNO588、SEQIDNO602、SEQIDNO606、SEQIDNO615、SEQIDNO621、SEQIDNO637、SEQIDNO647、SEQIDNO657、SEQIDNO662、SEQIDNO683、SEQIDNO693、SEQIDNO699、SEQIDNO701、SEQIDNO711、SEQIDNO739和SEQIDNO746757。81根据权利要求80所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO497508和SEQIDNO746757中的任一。
20、个。82根据权利要求81所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自以下的任一个SEQIDNO497、SEQIDNO498、SEQIDNO499、SEQIDNO500、SEQIDNO501、SEQIDNO746、SEQIDNO747、SEQIDNO748、SEQIDNO750和SEQIDNO753。83根据权利要求82所述的C5结合多肽,其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO497和SEQIDNO500、SEQIDNO748和SEQIDNO753中的任一个。84根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,所述C5结合多肽抑制C5的裂解。85根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中所述C5结。
21、合多肽与C5结合使得相互作用的KD值为至多1106M,诸如至多1107M、诸如至多1108M、诸如至多1109M。86根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,其中所述C5结合多肽还包括改善所述多肽的制备、纯化、体内或体外稳定性、偶联、或检测的C末端和/或N末端氨基酸。87根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽,所述C5结合多肽呈多聚体形式,所述多聚体形式包括至少两个C5结合多肽的单体单元,所述C5结合多肽的单体单元的氨基酸序列可以是相同的或不同的。88根据权利要求87所述的C5结合多肽,其中所述C5结合多肽单体单元被表达为融合蛋白。89根据权利要求87或88所述的C5结合多肽,所述C5。
22、结合多肽呈二聚体形式。90C5结合化合物,所述C5结合化合物包括至少一种根据前述权利要求中任一项所述的C5结合多肽;至少一种链球菌蛋白质G的白蛋白结合结构域,或其衍生物;以及至少一种连接部分,所述连接部分用于将所述至少一种结构域或其衍生物连接至所述至少一种C5结合多肽的C末端或N末端。91根据权利要求90所述的C5结合化合物,具有选自以下的结构CBP1L1ALBD;CBP1CBP2L1ALBD;CBP1L1ALBDL2CBP2;ALBDL1CBP1;ALBDL1CBP1CBP2;CBP1L1CBP2L2ALBD;和ALBDL1CBP1L2CBP2其中,彼此独立地,CBP1和CBP2是C5结合多。
23、肽,其可以是相同的或不同的;L1和L2是连接部分,其可以是相同的或不同的;和ALBD是链球菌蛋白质G的白蛋白结合结构域,或其衍生物。权利要求书CN104114574A6/7页792根据权利要求91所述的C5结合化合物,具有选自以下的结构CBP1L1ALBD;CBP1CBP2L1ALBD;和CBP1L1ALBDL2CBP2。93根据权利要求91所述的C5结合化合物,其中所述连接部分选自G、GS;G2SN;G3SN;G4SN;GSG4SN,其中N是07;S2GM;S3GM;S4GM;其中M是07,以及VDGS。94根据权利要求93所述的C5结合化合物,其中所述连接部分选自GS和GSG4S2。95根。
24、据权利要求9094中任一项所述的C5结合化合物,其中所述白蛋白结合结构域如SEQIDNO759中所列。96根据权利要求9095中任一项所述的C5结合化合物,其中所述C5结合多肽的每一个独立地选自如权利要求7983中任一项定义的多肽。97根据权利要求96所述的C5结合化合物,其中所述C5结合多肽的每一个独立地选自如权利要求83中定义的多肽。98多核苷酸,所述多核苷酸编码根据权利要求189中任一项所述的多肽或根据权利要求9097中任一项所述的化合物。99表达载体,所述表达载体包括根据权利要求98所述的多核苷酸。100宿主细胞,所述宿主细胞包括根据权利要求99所述的表达载体。101根据权利要求189。
25、中任一项所述的C5结合多肽或根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物与治疗剂的组合。102根据权利要求189中任一项所述的C5结合多肽、根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物、或根据权利要求101所述的组合,用于在治疗中使用。103根据权利要求189中任一项所述的C5结合多肽、根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物、或根据权利要求101所述的组合,用于治疗C5相关的状况。104根据权利要求189中任一项所述的C5结合多肽、根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物、或根据权利要求101所述的组合,用于治疗选自以下的C5相关的状况炎性疾病;自身免疫性疾病;传染病。
26、;心血管疾病;神经退行性紊乱;癌症;移植物损伤;创伤;眼部疾病;肾脏疾病;肺部疾病;血液疾病;变应性疾病和皮肤病。105根据权利要求189中任一项所述的C5结合多肽、根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物、或根据权利要求101所述的组合,用于治疗阵发性夜间血红蛋白尿PNH。106C5相关的状况的治疗方法,所述治疗方法包括将根据权利要求189中任一项所述的C5结合多肽、根据权利要求9097中任一项所述的C5结合化合物、或根据权利要求101所述的组合施用至有相应需要的哺乳类受试者。107根据权利要求106所述的治疗方法,其中所述C5结合多肽、所述C5结合化合物、或所述组合与C5的结合抑制。
27、C5的裂解。108根据权利要求106或107所述的治疗方法,其中所述C5相关的状况选自炎性疾病;自身免疫性疾病;传染病;心血管疾病;神经退行性紊乱;癌症;移植物损伤;创伤;眼部疾病;肾脏疾病;肺部疾病;血液疾病;变应性疾病和皮肤病。109根据权利要求108所述的治疗方法,其中所述C5相关的状况是阵发性夜间血红蛋权利要求书CN104114574A7/7页8白尿PNH。110根据权利要求106至109中任一项所述的治疗方法,其中所述C5结合多肽被静脉内、皮下、通过吸入、经鼻、口服、玻璃体内、或局部施用。权利要求书CN104114574A1/38页9结合人补体C5的多肽技术领域0001本公开内容涉及。
28、结合人补体组分5C5的多肽,并涉及此类多肽在治疗中的用途。0002背景0003补体蛋白质C5是补体系统的核心组分,所述补体系统是先天免疫系统的关键部分。补体系统是复杂的免疫生存系统IMMUNESURVIVALSYSTEM,具有处于严格控制的、多样化的过程的许多任务。其功能之一是通过从细胞碎片以及凋亡和坏死细胞中识别健康的宿主组织,作为对抗由其它生物体感染的第一道宿主防线RSTLINEHOSTDEFENSE。此外,其参与免疫复合物的清除、适应性免疫应答的调节、组织再生的促进、血管生成、干细胞的动员和中枢神经系统的发育WOODRUFF等人MOLIMMUNOL2011,481416311642;RI。
29、CKLIN等人NATIMMUNOL2010,119785795。干扰补体激活和调节的微妙平衡的任何触发,例如错误的或不受限制的激活或非足够的调节可导致病理状况,包括导致广泛的组织损伤的宿主细胞的自我攻击。0004补体系统由约30种蛋白质组成。存在三种途径启动补体免疫;使用C1Q识别细胞表面的免疫复合物的经典途径、当甘露糖结合凝集素MBL识别某些糖时启动的凝集素途径、以及通过补体因子3C3的水解自发启动的旁路途径,所述补体因子3C3的水解是一种被不在侵入病原体上存在的某些哺乳类细胞表面分子抑制的过程。旁路途径还可作为补体系统的放大回路AMPLICATIONLOOP。所有三种途径在C3水平汇合CO。
30、NVERGE。将C3裂解为C3A和C3B导致转化酶的形成,其进而将补体因子5C5裂解为C5A和C5B。C5A是各种免疫细胞的非常有效的引诱剂ATTRACTANT,而C5B与C69寡聚以形成称为膜攻击复合物MAC或有时称为末端补体复合物TCC的孔。补体系统的激活引起一些具有中和病原体的目的的机制细胞诸如入侵的细菌表面MAC的形成导致裂解;C3和C4裂解产物C3B和C4B的积累DEPOSITION辅助调理作用OPSONIZATION,导致病原体通过巨噬细胞的吞噬作用;以及过敏毒素诸如C3A和C5A引诱单核细胞和嗜中性粒细胞至激活位点,上调表面标志物,导致增加的免疫敏感性及细胞因子的释放。0005C。
31、5是190KDA的糖蛋白,包括2个二硫键连接的多肽链和,分子量分别为115KDA和75KDATACK等人BIOCHEM1979,1814901497。HAVILAND等人JIMMUN1991,146362368构建了人补体前C5PROC5的完整CDNA序列,其被预测编码1,676个氨基酸的前分子PROMOLECULE,所述前分子包含分隔和链的18个氨基酸的前导肽和4个氨基酸的接头。C5裂解为C5A和C5B的阻断阻止MAC的形成和促炎性C5A的形成,但保持上游补体效应系统完整,允许C3/C4介导的调理作用。0006补体系统在针对病原体的防御中的关键作用通常使其成为药学干预的感兴趣的靶。这通过补体。
32、的许多突变或受损的调节参与各种疾病和状况的事实被强调。这些包括对自身免疫性疾病例如系统性红斑狼疮SLE的增加的易感性,其中免疫复合物的积累触发了经典途径MANDERSON等人ANNUREVIMMUNOL2004,22431456。此外,补体蛋白质C1C5的突变往往导致SLE或SLE样症状。具有补体系统强烈参与的其它自身免疫性疾病说明书CN104114574A2/38页10是类风湿关节炎RA,其中免疫复合物可激活RA关节中的补体;干燥综合征、皮肌炎及其它自身抗体驱动的疾病诸如格林巴利综合征GUILLAINBARRSYNDROME,GBS、FISHER综合征KAIDA等人JNEUROIMMUN20。
33、10,223512不同类型的血管炎、系统性硬化症、抗肾小球基底膜抗GBM和抗磷脂综合征APSCHEN等人JAUTOIMMUN2010,34J276J286。0007补体系统还参与神经退行性紊乱诸如阿尔茨海默氏病AD,其中A斑块直接激活补体系统,导致C5A介导的小神经胶质细胞的募集。这在当C5AR拮抗剂在AD小鼠模型中被证明是神经保护的时被进一步证实FONSECA等人JIMMUNOL2009,18313751383。针对乙酰胆碱受体的自身抗体和随后的补体激活是重症肌无力的最常见原因,重症肌无力是一种影响神经肌肉接头的疾病TOYKA和GOLD,SCHWEIZERARCHIVENEUROLPSYCH。
34、2007,158309321。MAC的形成涉及多发性硬化MS的病理生理学OH等人IMMUNOLRES2008,40224234。此外,在帕金森氏病、亨廷顿氏病和朊病毒病诸如CREUTZFELDJACOB病中,补体激活是病理学的一部分BONIFATI和KISHORE,MOLIMMUNOL2007,449991010。在创伤愈合中,炎性反应是恢复组织内稳态的关键组分,且补体系统参与损伤组织的早期识别。然而,在例如慢性创伤和严重烧伤模型中,补体通过例如C1抑制剂的抑制导致改善的愈合和减少的组织损伤,显示补体。此外,各种补体缺陷,诸如由C4敲除小鼠示例的,被发现保护免受由创伤引起的长期组织损伤综述于C。
35、AZENDER等人CLINICALANDDEVELOPMENTALIMMUNOLOGY2012中,在线出版。最近已显示,肿瘤的生长和增殖通过补体激活特别是通过C5A被促进,且C5A受体的阻断减慢该过程。此外,相比野生型同窝小鼠,缺乏C3的小鼠显示显著较慢的肿瘤生长MARKIEWSKI等人NATIMMUNOL2008,912251235。0008功能失调性补体调节是若干罕见至超罕见状况诸如阵发性夜间血红蛋白尿PNH和非典型性溶血尿毒综合征AHUS的原因,其中溶血是病理中的关键特征。在PNH中,具有突变的编码磷脂酰肌醇N乙酰氨基葡萄糖转移酶亚基A的PIGA基因的造血干细胞的克隆在血细胞库中占优势T。
36、AKEOVER。该突变导致GPI锚定蛋白质诸如补体调节剂CD55和CD59的损失。表面缺乏CD55和CD59的红血细胞暴露于通过MAC的补体介导的裂解。在临床上,PNH的表现为导致贫血、血栓形成和骨髓衰竭的溶血。非典型性HUS是通过主要为旁路途径的调节蛋白质中的突变,例如通过因子H中的突变引起的。0009眼部被强烈指示作为补体驱动的病理的部位。视力丧失的最常见原因是年龄相关性黄斑变性AMD,其中在其较为严重的形式渗出性或湿性AMD中,在视网膜下形成病理性脉络膜神经血管膜。在美国,约10的6574岁的群体显示黄斑变性的病征,并且多达5的群体由于AMD而患有视力障碍。这些数目随着年龄而显着增加,但。
37、也存在遗传因素。在这些基因中,与AMD最强烈相关的是补体因子H、因子B及C3和C1抑制剂BRADLEY等人EYE2011,25683693。此外,使用各种补体阻断分子COMPLEMENTBLOCKINGMOLECULE的一些研究和临床试验已被证明是有益的,表明C5阻断分子可帮助这些患者群体。然而,目前晚期AMD的治疗旨在通过玻璃体内注射例如雷珠单抗单克隆抗体片段和贝伐单抗单克隆抗体来抑制血管内皮生长因子VEGF诱导的血管形成。在葡萄膜炎的动物模型中,眼部的炎症是由于针对眼部抗原的免疫应答引起,阻断针对旁路途径因子BMANICKAM等人JBIOLCHEM2011,28684728480以及针对C。
38、5COPLAND等人CLINEXPIMMUNOL2009,159303314的抗体,改善了疾病状态。说明书CN104114574A103/38页110010在实体器官移植中,存在导致移植物排斥或功能延迟/受损的两种主要的机制途径1供体和受体之间的关于血型ABO和MCH类的免疫屏障,以及受体针对供体的预先致敏作用的程度,即,导致急性抗体介导的排斥AMR的供体特异性抗体DSA的发生;和2移植器官的条件以及其在没有恒定的血液灌注的情况下被保持的时间段,即移植物的缺血损伤或缺血再灌注损伤IRI的程度。在AMR和IRI两者中,补体系统攻击被识别为外来的器官,并因此,实体应被排斥。在AMR中,预先存在的抗。
39、供体抗体在外来器官表面快速地形成免疫复合物,导致通过C1Q和后续的补体系统激活经由经典途径的识别。称为超急性排斥的这一过程发生在几分钟内,并因此不匹配的器官的现代移植,包括移植前通过血浆除去法或血浆置换以及静脉注射结合不同的免疫抑制剂的IGG来消除DSA。新的治疗还包括通过使用抗CD20抗体利妥昔单抗的B细胞耗竭GENBERG等人TRANSPLANT2008,8517451754。这些方案已极大地消除了超急性排斥的发生,但在高致敏患者中,急性AMR的发病率周月仍高达40BURNS等人AMJTRANSPLANT2008,626842694;STEGALL等人AMJTRANSPLANT早期在线出版。
40、。关于IRI,大多数证据指向末端途径,具有后续的MAC形成和裂解作为组织损伤的主要原因。因此,C5阻断多肽将保护免受排斥,不管病因是AMR、IRI或如经常发生的AMR和IRI两者的组合。如预期的,高度灌注器官,诸如肝脏QIN等人CELLMOLIMMUNOL2006,3333340、心脏和肾脏,特别容易受到补体介导的损伤的影响。0011C5蛋白质的中心位置连接补体级联的近端和末端部分,使得其成为药学干预的有吸引力的靶。既然C5是补体激活的所有途径共有的,不管刺激如何,阻断C5将阻止级联的进展,并从而阻止末端补体激活的有害性质,而保持近端补体级联的免疫保护和免疫调节功能的完整。0012靶向人补体C。
41、5的抗体从例如WO95/29697、WO02/30985、和WO2004/007553是已知的。依库珠单抗ECULIZUMABSOLIRISTM是直接针对蛋白质C5的人源化单克隆抗体并阻止C5裂解成C5A和C5B。依库珠单抗已显示在治疗PNH方面是有效的并已被批准用于该适应症,所述PNH是一种罕见的且有时危及生命的血液疾病,其特征为血管内溶血性贫血、血栓形成倾向和骨髓衰竭。依库珠单抗最近还被FDA批准用于治疗非典型性溶血综合征AHUS,一种罕见但危及生命的疾病,该疾病是由于旁路补体途径的失控所致,导致过度激活,表现为血栓性微血管病TMA,导致重要器官诸如肾脏、心脏和脑的损伤的恒定风险。在AHU。
42、S中,损伤的器官的移植仅暂时地有助于患者,因为肝脏继续产生突变形式的控制蛋白质最常见为补体因子H或旁路途径的其它蛋白质。具有暂时性急性病理生理学的相关疾病是HUS,所述HUS是由于志贺毒素阳性大肠杆菌ECOLISTECHUS的感染所致,且存在表明依库珠单抗用于该状况也是有效的有前景的临床数据LAPEYRAQUE等人,NENGLJMED2011,36425612563。最后,C5阻断抗体依库珠单抗已被证明在预防高度不匹配的肾脏受体中的AMR方面是有效的STEGALL,MD等人AMJTRANSPLANT2011,1124052413。0013除了全长抗体,靶向C5的单链可变区片段SCFV、微抗体M。
43、INIBODY和适体在文献中被描述。这些C5抑制剂可与C5分子上的不同位点表位结合,并可具有不同的作用模式。例如,鉴于依库珠单抗在转化酶裂解位点的一段距离处与C5相互作用,微抗体与C5的裂解位点相互作用。来自软蜱非洲钝缘蜱ORNITHODOROSMOUBATA的C5抑制蛋白质非洲钝缘蜱补体抑制剂OMCI,NUNN,MA等人说明书CN104114574A114/38页12JIMMUNOL2005,17420842091,已被推测与CUBC5DMG8超级结构域SUPERDOMAIN的远端结合,其在转化酶裂解位点附近FREDSLUND等人NATIMMUNOL2008,97753760。与以上提到的抑。
44、制C5的裂解的三种蛋白质相反,单克隆抗体TNX558与完整C5和释放的C5A两者上存在的C5A表位结合,而不抑制C5的裂解FUNG等人CLINEXPIMMUNOL2003,1332160169。0014具有其大的、多结构域结构、12个链内和4个链间二硫键和复杂糖基化模式的抗体,具有一些与其分子结构相关的固有的缺点。例如,依库珠单抗的大小为约148KDA。人血液中C5的浓度为约400NM,且为了完全阻断C5活性,抑制剂的浓度必须至少等于或高于其。因此,使用SOLIRISTM的PNH标准终身治疗方案是每两周静脉输注900MG蛋白质,所述治疗方案是一种主要在诊所进行的治疗,导致患者极大的不便和社会成。
45、本。SOLIRISTM还被报道引起胸痛、发热、寒战、瘙痒、荨麻疹、面部潮红、皮疹、头晕、呼吸困难、或面部、舌头和喉咙肿胀,虽然这些副作用的原因不清楚。此外,依库珠单抗在任何测试动物模型包括灵长类中是没有活性的,使得具有活性药物的动物研究是不可能的。如以上所提到的,目前AMD的治疗还是抗体依赖性的,并因此,基于注射或其它施用途径的低分子量分子的治疗,是非常需要的。0015此外,抗体的生产相比小蛋白质的生产是更加困难且更昂贵的KENANOVA等人EXPERTOPINDRUGDELIV2006,315370。通常与抗体相关的其它缺点由REILLY等人CLINPHARMACOKINET1995,281。
46、26142列出,例如与正常组织的交叉反应性和非特异性结合,注射抗体的增加的代谢,以及导致治疗效果的减少或损失的人抗人抗体HAMA的形成。0016因此,具有可比的C5阻断活性的剂的继续提供依然是领域内十分关心的问题。特别地,对防止末端补体级联以及促炎性分子C5A的形成的分子存在持续的需求。对提供此类分子在疾病治疗中的用途也具有极大的兴趣。0017描述0018本发明的一个目的是提供新的C5结合剂。此外,本发明的一个目的是提供新的C5结合剂用于在治疗应用中使用。0019在一个方面,提供了C5结合多肽C5BINDINGPOLYPEPTIDE,所述C5结合多肽包括C5结合基序C5BINDINGMOTIF。
47、,BM,所述基序由选自以下的氨基酸序列构成0020IEX2X3X4AX6X7EIDX11LPNLX16X17X18QWX21AFIX25X26LX28D,0021其中,彼此独立地,0022X2选自H、Q、S、T和V;0023X3选自I、L、M和V;0024X4选自A、D、E、H、K、L、N、Q、R、S、T和Y;0025X6选自N和W;0026X7选自A、D、E、H、N、Q、R、S和T;0027X11选自A、E、G、H、K、L、Q、R、S、T和Y;0028X16选自N和T;0029X17选自I、L和V;0030X18选自A、D、E、H、K、N、Q、R、S和T;说明书CN104114574A125。
48、/38页130031X21选自I、L和V;0032X25选自D、E、G、H、N、S和T;0033X26选自K和S;0034X28选自A、D、E、H、N、Q、S、T和Y;0035和0036II与I中定义的序列具有至少86同一性的氨基酸序列,其中多肽结合C5。0037以上定义的具有C5结合亲和力的序列相关的多肽的种类,来源于共同的亲本多肽序列。更具体地,种类的定义是基于在选择实验中由于其与C5的相互作用被选择的亲本多肽的大量随机多肽变体的分析。鉴定的C5结合基序,或“BM”,对应于亲本支架的靶结合区,该区域构成三螺旋束蛋白质结构域中的两个螺旋。在亲本支架中,两个BM螺旋的不同氨基酸残基构成用于与抗。
49、体的恒定FC部分相互作用的结合表面。通过结合表面残基的随机变化和随后变体的选择,结合表面的FC相互作用能力已被替换为与C5相互作用的能力。0038如在以下实施例中解释的,C5结合多肽变体的选择,可通过例如用于蛋白质支架的幼稚变体VARIANT的选择的噬菌体展示,任选地随后为亲和力成熟,和用于亲和力成熟的C5结合变体的选择的细胞展示实现。然而,被理解的是,任何选择系统,无论是基于噬菌体的、基于细菌的、基于细胞的或其它的,都可用于C5结合多肽的选择。0039如在本说明书中使用的术语“C5结合”和“对C5的结合亲和力”是指可通过例如使用表面等离子共振技术,例如在BIACORE仪器GEHEALTHCARE中被测试的多肽的性质。C5结合亲和力可例如在实验中被测试,其中C5被固定在BIACORE仪器的传感器芯片上,并将含有待被测试的多肽的样品通过芯片。可选地,将待被测试的多肽固定在仪器的传感器芯片上,并将包含C5、或其片段的样品通过芯片。然后,技术人员可解释通过此类实验获得的结果,以建立多肽与C5结合的至少一种定性测量。如果需要定量测量,例如,以确定相互作用的表观平衡解离常数KD,也可以使用表面等离子共振方法。结合值可在例如BIACORE2000仪器GEHEALTHCARE中被确定。将C5固定在测量的传感器芯片上,并通过连续稀释制备其亲和力待被确定的多肽的。