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1、(10)申请公布号 CN 102920765 A (43)申请公布日 2013.02.13 CN 102920765 A *CN102920765A* (21)申请号 201210490726.9 (22)申请日 2012.11.27 A61K 36/282(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 31/14(2006.01) A61P 31/20(2006.01) (71)申请人 哈药集团中药二厂 地址 150078 黑龙江省哈尔滨市道里区机场 路 243 号 (72)发明人 王丽娜 李云涛 任瑞涛 吴志军 单钰毓 (74)专利代理机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务。
2、所 23109 代理人 韩末洙 (54) 发明名称 四季菜有效部位总黄酮的提取方法 (57) 摘要 四季菜有效部位总黄酮的提取方法， 它涉及 总黄酮的提取方法。它要解决现有总黄酮的提取 方法得到的提取物中总黄酮含量低的问题。本发 明总黄酮的提取方法 ： 一、 取四季菜中药材加水 煎煮两次， 合并两次煎煮液浓缩成清膏 ； 二、 清膏 中加水， 加入氢氧化钠溶液调节 pH 值， 浸泡后收 集上清液， 用盐酸溶液调上清液 pH 值， 静置后收 集上层液体 ； 三、 把步骤二收集的上层液体用聚 酰胺树脂柱纯化， 分别用水和乙醇洗脱， 收集乙醇 洗脱液 ； 四、 减压蒸馏乙醇洗脱液， 对洗脱液进行 减压。
3、浓缩和减压干燥后得到总黄酮提取物。本 发明提取物中总黄酮含量以芦丁计， 含量不少于 80%。本发明主要应用于高纯度总黄酮的制备。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 四季菜有效部位总黄酮的提取方法， 其特征在于四季菜有效部位总黄酮的提取方法 是通过下列步骤实现 ： 一、 取4060kg四季菜中药材放入水中煎煮13小时后， 收集第一次煎出的煎煮液， 再向四季菜药材中加水煎煮 1 3 小时后， 收集第二次煎出的煎煮液， 合并两次煎煮液， 浓 缩成以 75 8。
4、0计相对密度为 1.12 1.14 的清膏 ； 二、 向步骤一得到的清膏内加水至体积为 130 160L， 然后加入 1.5 2.5mol/L 的氢 氧化钠溶液调 pH 值至 6 7， 浸泡 12 24 小时收集上清液， 用 3 5mol/L 盐酸溶液调上 清液 pH 值至 2.0 3.0， 然后静置 12 24 小时， 收集上层液体 ； 三、 把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化， 使用 6 10 个柱体积的 水洗脱， 然后再用体积浓度为 50% 75%， 9 11 个柱体积的乙醇溶液洗脱， 收集乙醇洗脱 液 ； 四、 使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇， 再对洗脱液减压浓。
5、缩， 然后进行减 压干燥， 得到四季菜有效部位的总黄酮提取物 ； 其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的 10 16 倍， 第二次煎煮 中水的质量是四季菜中药材的 6 12 倍 ； 步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为 1 ：（2 4） ； 步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中， 用丙酮以 0.2 0.4BV/h 的流速冲洗至洗出液呈无色， 再用体积浓度为 90 96%， 用量为 4 6 倍柱体积的 乙醇以 0.2 0.4BV/h 的流速冲洗， 然后倒出乙醇， 放入烘箱以 80 100烘干， 得到预处 理的聚酰胺树脂柱。 2. 根据权利要求 1 所述的。
6、四季菜有效部位总黄酮的提取方法， 其特征在于步骤二加入 1.7 2.3mol/L 的氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 7。 3. 根据权利要求 1 所述的四季菜有效部位总黄酮的提取方法， 其特征在于步骤二用 3.5 4.5mol/L 盐酸溶液调上清液 pH 值至 2.0 3.0。 4. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的四季菜有效部位总黄酮的提取方法， 其特征在于步骤 四所述的减压干燥为喷雾干燥。 权 利 要 求 书 CN 102920765 A 2 1/3 页 3 四季菜有效部位总黄酮的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及总黄酮的提取方法， 具体涉及从四季菜有效部位提取总黄酮的方法。 。
7、背景技术 0002 四季菜 (Artemisia laxtiflora Wall) 是菊科蒿属的多年生草本植物。又名大力 王， 鸭脚艾， 阴毒草。四季菜资源丰富， 主要分布在我国的华东、 中南、 西南等地。其性辛， 味甘平， 具有清热解毒、 养血柔肝、 理气化瘀、 活血化瘀， 祛风止咳等功效。临床上用于治疗 慢性肝炎、 跌打损伤、 头痛、 咳嗽、 泄泻、 便血尿血、 月经不调等病症。尤其治疗气滞血瘀、 血 不养肝之慢性活动性肝炎、 迁延性肝炎有显著疗效。 对肝硬化、 急性重症肝炎亦有较好的效 果。四季菜全草中含黄酮、 酚类、 挥发油、 氨基酸、 有机酸及糖类化合物。 0003 有文献报道， 从。
8、其茎叶中分离得到的黄酮类具有抗菌、 抗霉、 解痉、 利尿等作用。 临 床研究表明， 四季菜有效成分总黄酮对于慢性肝炎、 急性黄疸性病毒性肝炎的治疗有显著 疗效。四季菜中的总黄酮对 CCl4、 乙醇所致的急性肝损伤有明显的保护作用。其总黄酮对 肝损伤的保护作用可能与其减少肝脏 GSH 耗竭 , 抑制肝脂质过氧化作用有关。也有文献报 道， 四季菜治疗肝病患者， 98% 的病例， 50 天内肝功能恢复正常， 仅 2% 的病例长达 70 天恢 复。 0004 先进的提取技术已经应用到中药材提取加工的各个领域， 但是， 对于四季菜的活 性部位总黄酮的提取并未见相关报道。多数仍然采取传统的提取方法， 黄酮。
9、类成分的提取 方法有主要包括溶剂提取、 微波提取、 超临界萃取、 酶浸渍萃取、 超声波提取、 回流、 索氏提 取、 煎煮法和渗滤等。目前， 对四季菜的有效部位总黄酮的提取的相关报道不多， 而且未见 有用聚酰胺纯化四季菜的总黄酮的相关报道， 采用现有提取方法获得的提取物中总黄酮含 量低， 以芦丁 （C27H30O16） 计在 70% 以下。 发明内容 0005 本发明的目的是为了解决现有总黄酮的提取方法得到的提取物中总黄酮含量低 的问题， 而提供四季菜有效部位总黄酮的提取方法。 0006 本发明四季菜有效部位总黄酮的提取方法是通过下列步骤实现 ： 0007 一、 取 40 60kg 四季菜中药材。
10、放入水中煎煮 1 3 小时后， 收集第一次煎出的煎 煮液， 再向四季菜药材中加水煎煮 1 3 小时后， 收集第二次煎出的煎煮液， 合并两次煎煮 液， 浓缩成以 75 80计相对密度为 1.12 1.14 的清膏 ； 0008 二、 向步骤一得到的清膏内加水至体积为 130 160L， 然后加入 1.5 2.5mol/L 的氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 7， 浸泡 12 24 小时收集上清液， 用 3 5mol/L 盐酸溶液 调上清液 pH 值至 2.0 3.0， 然后静置 12 24 小时， 收集上层液体 ； 0009 三、 把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化， 使用 6 10。
11、 个柱体 积的水洗脱， 然后再用体积浓度为 50% 75%， 9 11 个柱体积的乙醇溶液洗脱， 收集乙醇 洗脱液 ； 说 明 书 CN 102920765 A 3 2/3 页 4 0010 四、 使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇， 再对洗脱液减压浓缩， 然后进 行减压干燥， 得到四季菜有效部位的总黄酮提取物 ； 0011 其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的 10 16 倍， 第二次 煎煮中水的质量是四季菜中药材的 6 12 倍 ； 0012 步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为 1 ：（2 4） ； 0013 步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入。
12、色谱柱中， 用丙酮以 0.2 0.4BV/h 的流速冲洗至洗出液呈无色， 再用体积浓度为 90 96%， 用量为 4 6 倍柱体积的 乙醇以 0.2 0.4BV/h 的流速冲洗， 然后倒出乙醇， 放入烘箱以 80 100烘干， 得到预处 理的聚酰胺树脂柱。 0014 通过本发明四季菜有效部位总黄酮的提取方法得到的提取物中总黄酮含量以芦 丁 （C27H30O16） 计， 含量不少于 80%， 提取物单体成分中还有香豆素、 脱肠草素等， 提高了提取 物中总黄酮的含量。按药剂学方法， 可以将本发明中四季菜有效部位总黄酮制成适用于临 床的口服制剂和非肠道给药的剂型。 所说的口服制剂可制成颗粒剂、 片剂。
13、、 胶囊剂、 丸剂、 滴 丸、 混悬剂、 口服液体制剂当中的一种。 所说的非肠道给药剂型可制成注射剂、 气雾剂、 栓剂 或者皮下给药剂型当中的一种。本发明四季菜总黄酮制成各种剂型中， 还可加入常规的药 物赋形剂， 如溶剂、 崩解剂、 矫味剂、 防腐剂、 着色剂等。本发明主要应用于高纯度总黄酮的 制备， 所得总黄酮可用于口服制剂以及非肠道给药制剂。 具体实施方式 0015 具体实施方式一 ： 本实施方式四季菜有效部位总黄酮的提取方法按下列步骤实 施 ： 0016 一、 取 40 60kg 四季菜中药材放入水中煎煮 1 3 小时后， 收集第一次煎出的煎 煮液， 再向四季菜药材中加水煎煮 1 3 小。
14、时后， 收集第二次煎出的煎煮液， 合并两次煎煮 液， 浓缩成以 75 80计相对密度为 1.12 1.14 的清膏 ； 0017 二、 向步骤一得到的清膏内加水至体积为 130 160L， 然后加入 1.5 2.5mol/L 的氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 7， 浸泡 12 24 小时收集上清液， 用 3 5mol/L 盐酸溶液 调上清液 pH 值至 2.0 3.0， 然后静置 12 24 小时， 收集上层液体 ； 0018 三、 把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯化， 使用 6 10 个柱体 积的水洗脱， 然后再用体积浓度为 50% 75%， 9 11 个柱体积的乙醇溶液洗脱，。
15、 收集乙醇 洗脱液 ； 0019 四、 使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇， 再对洗脱液减压浓缩， 然后进 行减压干燥， 得到四季菜有效部位的总黄酮提取物 ； 0020 其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的 10 16 倍， 第二次 煎煮中水的质量是四季菜中药材的 6 12 倍 ； 0021 步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为 1 ：（2 4） ； 0022 步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中， 用丙酮以 0.2 0.4BV/h 的流速冲洗至洗出液呈无色， 再用体积浓度为 90 96%， 用量为 4 6 倍柱体积的 乙醇以 0.2 0.4B。
16、V/h 的流速冲洗， 然后倒出乙醇， 放入烘箱以 80 100烘干， 得到预处 理的聚酰胺树脂柱。 说 明 书 CN 102920765 A 4 3/3 页 5 0023 本实施方式四季菜有效部位的总黄酮提取物中主要成分为黄酮， 7- 甲氧基香豆素 和脱肠草素。 0024 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二加入 1.7 2.3mol/L 的氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 7。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。 0025 具体实施方式三 ： 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二加入 2mol/L 的 氢氧化钠溶液调 pH 值至 6 7。其它步骤及参数与具体实施方式。
17、一相同。 0026 具体实施方式四 ： 本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二用 3.5 4.5mol/L 盐酸溶液调上清液 pH 值至 2.0 3.0。其它步骤及参数与具体实施方式 一至三之一相同。 0027 具体实施方式五 ： 本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二用 4.2mol/L 盐酸溶液调上清液 pH 值至 2.0 3.0。其它步骤及参数与具体实施方式一至三 之一相同。 0028 具体实施方式六 ： 本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤四所述的 减压干燥为喷雾干燥。其它步骤和参数与具体实施方式一至五之一相同。 0029 具体实施方式七 ： 本实施方式四。
18、季菜有效部位总黄酮的提取方法按下列步骤实 施 ： 0030 一、 取50kg四季菜中药材放入水中煎煮1.5小时后， 收集第一次煎出的煎煮液， 再 向四季菜药材中加水煎煮 1.5 小时后， 收集第二次煎出的煎煮液， 合并两次煎煮液， 浓缩至 成 80计相对密度为 1.14 的清膏 ； 0031 二、 向步骤一得到的清膏内加水至体积为 150L， 然后加入 2mol/L 的氢氧化钠溶液 调 pH 值至 6， 浸泡 24 小时收集上清液， 用 4mol/L 盐酸溶液调上清液 pH 值至 3.0， 然后静置 24 小时， 收集上层液体 ； 0032 三、 把步骤二收集的上层液体用预处理的聚酰胺树脂柱纯。
19、化， 使用 8 个柱体积的 水洗脱， 然后再用体积浓度为 75%， 10 个柱体积的乙醇溶液洗脱， 收集乙醇洗脱液 ； 0033 四、 使用减压蒸馏回收步骤三乙醇洗脱液中的乙醇， 再对洗脱液减压浓缩， 然后进 行减压干燥， 得到四季菜有效部位的总黄酮提取物 ； 0034 其中步骤一所述的第一次煎煮中水的质量是四季菜中药材的 10 倍， 第二次煎煮 中水的质量是四季菜中药材的 12 倍 ； 0035 步骤三中聚酰胺树脂质量与四季菜中药材的质量比为 1 ： 2 ； 0036 步骤三中预处理的聚酰胺树脂柱是将聚酰胺树脂装入色谱柱中， 用丙酮以 0.3BV/ h 的流速冲洗至洗出液呈无色， 再用体积浓度为 95%， 用量为 5 倍柱体积的乙醇以 0.3BV/h 的流速冲洗， 然后倒出乙醇， 放入烘箱以 90烘干， 得到预处理的聚酰胺树脂柱。 0037 本实施方式四季菜有效部位的总黄酮提取物主要成分为黄酮、 7- 甲氧基香豆素和 脱肠草素， 提取物中总黄酮含量以无水芦丁 （C27H30O16） 计为 83%。 说 明 书 CN 102920765 A 5 。