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1、(10)申请公布号 CN 104352397 A (43)申请公布日 2015.02.18 CN 104352397 A (21)申请号 201410675296.7 (22)申请日 2014.11.21 A61K 8/97(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) A61Q 17/04(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) (71)申请人 天津科丝美特生物科技有限公司 地址 300381 天津市西青区李七庄街天祥工 业园祥遵路 2 号 (72)发明人 叶柳青 (74)专利代理机构 天津市北洋有限责任专利代 理事务所 12201 代理人 陆艺 (54) 发明。
2、名称 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物 (57) 摘要 本发明公开了一种具有抗光老化及美白作 用的护肤组合物， 按重量计由下述组分制成 ： 金 盏花 1-10 份、 光果甘草根 1-10 份、 白花春黄菊 1-10 份、 奥氏海藻 1-10 份、 银杏根 1-10 份、 马齿 苋 1-10 份和北美金缕梅 1-10 份。本发明的组合 物可以清除自由基， 吸收紫外线， 抑制酪氨酸酶活 性， 长期使用可以美白肌肤， 并增强肌肤对外界的 抵抗力。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 。
3、(10)申请公布号 CN 104352397 A CN 104352397 A 1/1 页 2 1. 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 其特征是按重量计由下述组分制成 ： 金盏花 1-10 份、 光果甘草根 1-10 份、 白花春黄菊 1-10 份、 奥氏海藻 1-10 份、 银杏根 1-10 份、 马齿苋 1-10 份和北美金缕梅 1-10 份。 2. 根据权利要求 1 所述的一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 其特征是所述 金盏花为 8 份、 光果甘草根为 3 份、 白花春黄菊为 1 份、 奥氏海藻为 1 份、 银杏根为 1 份、 马 齿苋为 1 份和北美金缕梅为 1 份。 。
4、权 利 要 求 书 CN 104352397 A 2 1/5 页 3 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种护肤组合物， 特别是涉及一种具有抗光老化及美白作用的护肤组 合物。 背景技术 0002 人类的皮肤老化分为内源性生理性老化和外源性光老化， 内源性老化不能阻止， 只能够延缓。但是光老化就可以防护。光老化是由于皮肤暴露于紫外线下而造成的慢性损 伤。中波紫外线 ( 简称 UVB) 可以直接作用于 DNA， 使其吸收能量， 发生突变 ； UVB 与长波紫 外线 ( 简称 UVA) 产生的活性氧簇 (ROS) 可以间接损伤细胞核及线粒体 DNA， 导致细胞功能。
5、 异常或凋亡。UV 照射产生的 ROS 可氧化损伤蛋白质及脂质， 引起相应功能及结构的异常。 紫外线照射可影响皮肤色素代谢 ： 即刻反应为黑素的反应性合成增加及其重新分布 ； 迟发 反应为黑素细胞数目增加及活力升高。紫外线可以使血管内皮细胞生长因子的表达上调， 从而引起毛细血管的增生及扩张 ； 同时， 紫外线具有免疫抑制作用， 导致免疫细胞数量、 活 力及相关细胞因子表达的改变， 但与光老化表现相关性最大的是紫外线引起的真皮细胞外 基质成分的比例、 质量及功能的改变。临床上光老化皮肤的主要特征是 ： 皮肤粗糙干燥， 不 规则色素沉着， 弹性降低及深在性的皱纹。 光老化皮肤的特征性改变是 ： 胶。
6、原纤维弹力纤维 组织结构缺失， 以及无定形弹力蛋白样物质的沉积。 0003 中医理论认为皮肤光老化主要是由于五脏虚损、 气血不足不能上荣于面、 津液不 布不足以滋润及痰浊瘀阻肌肤腠理所致， 故主张以补肾填精、 健脾补肺益气、 行气活血、 化 瘀祛浊为主要治法， 通过方药的灵活运用来平衡脏腑阴阳、 调理气血达到延缓衰老的作用。 现代研究认为中医抗衰老机理与中药可清除体内自由基密切相关。且中药种类繁多、 取材 天然， 又因其毒副作用小更受人们青睐。 0004 随着人民生活水平和审美标准的提高 , 白皙的肌肤越来越被大多数妇女推崇。传 统的皮肤美白剂 , 往往采用过氧化氢、 氯化氨基汞以及各种酚类衍。
7、生物 , 这些化合物能使 黑色素组织迅速瓦解,达到快速美白之功效。 但因其对皮肤的腐蚀性、 细胞毒性和过敏性, 使其具有极大的危险性 , 在许多国家的卫生规范中已禁用。目前要求的皮肤美白剂应该符 合两个标准 : 一是对酪氨酸酶活性有较高的抑制率 , 能显著地减少黑色素的生成 ； 二是有 较高的安全性 , 对人体皮肤无毒无刺激。为了开发符合 “回归大自然” 要求的化妆品 , 特 别是安全、 无副作用的美白产品 , 一些具有很好美白效果的中草药目前越来越受到消费者 的青睐。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物。 0006 本发明的技术方案概述如下 ： 00。
8、07 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 按重量计由下述组分制成 ： 金盏花 1-10 份、 光果甘草根 1-10 份、 白花春黄菊 1-10 份、 奥氏海藻 1-10 份、 银杏根 1-10 份、 马齿 说 明 书 CN 104352397 A 3 2/5 页 4 苋 1-10 份和北美金缕梅 1-10 份。 0008 优选的是 ： 所述金盏花为8份、 光果甘草根为3份、 白花春黄菊为1份、 奥氏海藻为 1 份、 银杏根为 1 份、 马齿苋为 1 份和北美金缕梅为 1 份。 0009 本发明的组合物可以清除自由基， 吸收紫外线， 抑制酪氨酸酶活性， 长期使用可以 美白肌肤， 并增强肌肤。
9、对外界的抵抗力。 具体实施方式 0010 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。 0011 实施例 1 0012 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 按重量由下述组分制成 ： 金盏花 8 份、 光果甘草根 3 份、 白花春黄菊 1 份、 奥氏海藻 1 份、 银杏根 1 份、 马齿苋 1 份、 北美金缕梅 1 份。 0013 实施例 2 0014 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 按重量由下述组分制成 ： 金盏花 1 份、 光果甘草根 10 份、 白花春黄菊 1 份、 奥氏海藻 10 份、 银杏根 1 份、 马齿苋 1 份、 北美金缕 梅 10 份。 0015 实施例 3 00。
10、16 一种具有抗光老化及美白作用的护肤组合物， 按重量由下述组分制成 ： 金盏花 10 份、 光果甘草根 1 份、 白花春黄菊 10 份、 奥氏海藻 1 份、 银杏根 10 份、 马齿苋 10 份、 北美金 缕梅 1 份。 0017 实施例 4 0018 对组合物进行提取 ： 0019 (1) 按实施例 1-3 之一的重量比称取原料 ： 金盏花、 光果甘草根、 白花春黄菊、 奥氏 海藻、 银杏根、 马齿苋和北美金缕梅 ； 0020 (2) 向原料中加入原料重量 10 倍的体积浓度为 50的乙醇水溶液， 加热回流 2 小 时， 过滤， 滤液浓缩至滤液体积的 1/5， 得提取物。 0021 实施例。
11、 5 0022 实验 0023 一、 SOD、 MDA、 羟脯氨酸的测定 0024 1 材料 0025 1.1 动物。SD 大鼠 40 只， 体重 18020g， 各半。 0026 1.2 材料和试剂。 本发明的实施例1-3的组合物按实施例4的方法制备得提取物 ； SOD 测定试剂盒、 MDA 0027 测定试剂盒、 羟脯氨酸测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。 0028 1.3 主要仪器。紫外灯管 ( 南京华强电子有限司， 80WUVA 灯和 160W UVB 灯 ) ； 紫 外线强度测定仪 ( 上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司， 型号 :ZQJ 254 型 ) ； 紫外可见光 分光光度。
12、计 ( 苏州江东精密仪器有限公司， 型号 :752N) ； 组织匀浆机 ( 上海越磁电子科技 有限公司， 型号 :T10 型 )。 0029 2 方法 说 明 书 CN 104352397 A 4 3/5 页 5 0030 2.1 动物分组与给药。 0031 随机分为 4 组 ； 0032 对照组 ( 即正常组 ): 不进行紫外照射且不给药 ； 0033 模型组 : 大鼠进行紫外线照射不给药 ； 0034 本发明组 ( 实施例 1-3 的组合物按实施例 4 提取， 依次简称提取物 1- 提取物 3) ： 大鼠在进行紫外线照射前 10 分钟涂抹， 5mg/ 只。 0035 2.2 造模 0036。
13、 除正常组外， 其余各组大鼠以 10 Na2S 水溶液取背部正中皮肤脱毛， 暴露 2cm2cm 大小皮肤。模拟 UV 照射。照射光源 :UVA 灯 80W 和 UVB 灯 160W。光源在距离大鼠 约 40cm 处进行照射。第 1 周每天照射 1 次， 每次 1h， 第 2 周起每天照射 2 次， 每次 40min， 持续照射至累计照射剂量达到 UVA 304.5J/cm2， UVB 6.3J/cm2。 0037 2.3 取材。 0038 末次照射 2h 后， 脱颈椎处死大鼠， 取脱毛部位皮肤约 1cm2， 拟作羟脯氨酸含量检 测 ； 取脱毛背部皮肤 0.1g 左右， 拟作 MDA 和 SOD。
14、 检测。 0039 2.4 羟脯氨酸含量检测。 0040 精确称取 0.050g 皮肤组织， 加入 95 100水解液中水解 40min， 离心 10min， 取 上清液严格按羟脯氨酸测定试剂盒操作说明检测。 0041 2.5 MDA、 SOD 含量检测。 0042 以预冷生理盐水漂洗所取 0.1 左右的皮肤组织， 除去结缔组织和皮下脂肪， 滤纸 拭干称重， 将组织剪碎后倒入内切式匀浆管中， 量取 9 倍该皮肤组织重量的预冷生理盐水， 先取少量倒入装有组织块匀浆器中， 冰水中匀浆 15min， 然后倒入剩余生理盐水， 制成 10 组织匀浆。将 10组织匀浆以 3000r/min 离心 10mi。
15、n 取上清液备用。严格按 MDA、 SOD 试 剂盒操作说明检测。 0043 2.6 统计学方法 0044 结果以均数 标准差 (XS) 表示用 SPSS11.5 软件进行方差分析及组间检验。 0045 3 结果 0046 3.1 大鼠皮肤一般状态 0047 正常组大鼠皮肤表面光滑有弹性， 纹理清楚， 无皱纹 ； 模型组大鼠皮肤表面有明显 红斑， 失去弹性和光泽， 表皮角化、 粗糙伴脱屑， 有深的褶皱 ； 本发明组大鼠皮肤皱纹不明 显， 接近正常组大鼠皮肤。 0048 3.2 本发明各实施例组合物的提取物对大鼠皮肤 SOD、 MDA 的影响。 0049 见表 1。与正常组比较， 模型组皮肤 S。
16、OD 活性显著降低 (P 0.01)， MDA 水平显著 升高 (P 0.01)。本发明组合物的提取物组与模型组相比， 皮肤 SOD 活性均明显升高 (P 0.01)、 MDA 含量明显降低 (P 0.01)。 0050 3.3 本发明组合物的提取物对大鼠皮肤羟脯氨酸含量的影响。见表 1。 0051 表 1 本发明药物组合物对大鼠皮肤 SOD、 MDA、 羟脯氨酸含量影响 (XS， N 10) 0052 说 明 书 CN 104352397 A 5 4/5 页 6 0053 注 : 与模型组比较 *P 0.01。 0054 本实验结果中， 本发明组合物可明显增强紫外照射后大鼠皮肤组织 SOD 。
17、活性， 降 低 MDA 含量， 表明本发明组合物可增强皮肤组织的抗氧化能力， 降低皮肤组织自由基含量。 发挥抗光老化的作用。 0055 二、 对酪氨酸酶的抑制作用的影响 0056 1.2 试 剂 ： L-Dopa(Sigma 公 司 333786-250MG) ； 蘑 菇 酪 氨 酸 酶 (Sigma 公 司 T3824-25KU) ； 其他试剂均为市售分析纯。 0057 1.3 仪器 ： 岛津 UV-2501 型紫外分光光度计， 上海精科 FN1004N 分析天平， 天津奥 特赛思斯 20500 超声仪， SY21-K 型恒温水浴锅， 微量移液器。 0058 1.4 试剂配制 0059 磷酸。
18、盐缓冲溶液 (PBS) ： 取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 250ml, 加 0.2mol/L 氢氧化 钠溶液 118ml, 用水稀释至 1000ml， 摇匀， 即得。酪氨酸酶溶液 ： 临用时用 PBS(pH6.83) 配 制， 浓度 10u/ml ； L-Dopa 溶液 ： 临用时用 PBS(pH6.83) 配制， 质量分数为 0.05 ) ； 样品溶 液 ： 实施例 1-3 的组合物提取物分别在临用时用 PBS(pH6.83) 配制， 配制成 100mg/ml,。 0060 1.4.3 酪氨酸酶活性的测定 0061 测定前， 用微量移液器准确配制 ： 0062 A1 测试样 ： 2m。
19、lPBS+1ml 酪氨酸酶溶液 ； 0063 A2 测试样 ： 3mlPBS ； 0064 A3 测试样 ： 1ml 样品溶液 +1mlPBS+1ml 酪氨酸酶溶液 ； 0065 A4 测试样 ： 1ml 样品溶液 +2mlPBS。 0066 每组设平行 2 组试管， 先置 25水浴中保温 10min 后立即分别添加 L-Dopa 溶液 1ml， 混匀。与 25水浴恒温反应 2min 立即于 475nm 处测吸光度。 0067 酪氨酸酶活性抑制率 ( ) (A1-A2)-(A3-A4)/(A1-A2)100 0068 A1 未加本发明组合物的加酶混合液。 0069 A2 未加本发明组合物和酶的液体。 0070 A3 加本发明组合物和酶的混合液。 0071 A4 加本发明组合物而未加酶的混合液。 0072 2 结果与分析 0073 按上述实验方法每组平行重复 3 次， O.D 值相加取平均值。按酪氨酸酶抑制率公 式计算， 结果见表 2。 0074 表 2 本发明药物组合物对对酪氨酸酶活性抑制比较 0075 说 明 书 CN 104352397 A 6 5/5 页 7 组别抑制率 Vc 对照组56.232.21 实施例 168.301.88 实施例 265.502.25 实施例 364.763.08 说 明 书 CN 104352397 A 7 。