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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410620033.6 (22)申请日 2014.11.05 A61K 36/424(2006.01) (71)申请人 桂林三宝生物科技有限公司 地址 546600 广西壮族自治区桂林市荔浦县 马岭镇长水岭工业区 (72)发明人 卢照凯 钟德品 谢冬养 周晓青 卢桦香 应启实 陆美珍 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 汤凌志 (54) 发明名称 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂 甙的方法， 包括下述步骤 ： 原料处理、 高压提取、 。
2、双水相萃取、 脱盐、 浓缩干燥， 得到绞股蓝皂甙。 具 有含量高， 提取率高， 工艺简单， 适合生产， 生产成 本低等优点。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 104435060 A (43)申请公布日 2015.03.25 CN 104435060 A 1/1 页 2 1. 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 其特征在于 ： 包括如下步骤 ： 1) 原料处理 ： 将绞股蓝粉碎或打碎 ； 2) 高压提取 ： 将处理后的原料， 放入高压罐中， 加入相同重量的纯净水， 加入相当于原 料重量0.。
3、05-0.25的聚醚改性有机硅， 加压至4kgf/cm2， 使其压力均匀， 并保持10-15min， 恢复常压， 过滤， 得到提取液 ； 3) 分离 ： 对绞股蓝进行双水相萃取， 获得萃取上相和萃取下相， 双水相萃取所使用的 双水相体系由聚乙二醇、 氢氧化钠和水构成， 聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比 为 15-25， 氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为 10-15， 余量为水， 所述聚乙 二醇的重均分子量为 1000-8000 ； 4) 后续处理 ： 将步骤 3) 获得的萃取上相， 脱盐、 浓缩干燥， 将步骤 3) 获得的萃取下相， 加入相当于萃取下相质量百分比 5-10氢氧化钠。
4、， 脱盐、 浓缩干燥 ； 5) 合并干燥后的获得物得到绞股蓝皂甙。 2. 根据权利要求 1 所述的一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 其特征在于 ： 所述 的绞股蓝为新鲜和 / 或干燥后的绞股蓝。 权 利 要 求 书 CN 104435060 A 2 1/4 页 3 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术领域的提取方法， 具体说是一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙 的方法。 背景技术 0002 绞股蓝， 为多年生草质藤木， 又称天堂草、 福音草、 超人参、 公罗锅底、 遍地生根、 七 叶胆、 五叶参和七叶参等， 日本称之甘蔓茶， 系葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植。
5、物。绞股 蓝喜阴湿温和的气候， 多野生在林下、 小溪边等荫蔽处， 多年生攀援草本。在中国主要分布 在陕西平利、 甘肃康县、 湖南、 湖北、 云南、 广西等省， 号称 “南方人参” ， 生长在南方的绞股蓝 药用含量比较高， 民间称其为神奇的 “不老长寿药草” ， 1986 年， 国家科委在 “星火计划” 中， 把绞股蓝列为待开发的 “名贵中药材” 之首位， 2002 年 3 月 5 日国家卫生部将其列入保健 品名单。 研究结果表明绞股蓝含有绞股蓝皂甙、 糖类、 黄酮类、 氨基酸、 蛋白质、 脂肪、 无机元 素、 纤维素和维生素。其中前三者是主要的保健功效成分， 其他尚有多糖类、 黄酮类、 氨基 。
6、酸、 维生素以及锌、 铜、 铁、 锰等。绞股蓝皂甙是绞股蓝全草含的有效成分， 现代药理学研究 证明绞股蓝皂甙具有降低血脂、 降血压、 防止衰老、 抑制肿瘤、 增强免疫力、 镇静止痛、 保护 心脏和肝脏、 抗动脉粥样硬化、 保护血管等作用， 且无毒副作用。绞股蓝的有效成分皂甙在 保健食品和新型药品研发上都有巨大的应用前景， 具有极大的研究及利用价值， 在日本等 国， 将绞股蓝中的皂甙单独提取出来制成多种保健品进行销售已成为一种趋势。在医药领 域， 将绞股蓝皂甙与糊精、 乳糖制成绞股蓝皂甙颗粒药物， 能够用于高血脂症的治疗， 绞股 蓝皂甙颗粒的剂型优点为 : 吸收快、 显效迅速、 携带方便、 质量。
7、稳定等， 作为中药制剂， 又具 有毒副作用小、 药效持久、 标本兼治等特点。 0003 目前绞股蓝皂甙的提取方法有水提法、 有机溶剂提取法、 微波辅助提取法、 超声波 辅助提取法、 酶法提取等方法， 以上方法一般都会在提取后采用大孔树脂纯化作为主要的 分离步骤， 然而采用大孔树脂纯化方法， 树脂用前需要处理， 纯化需经过吸附和洗脱过程， 生产周期长。 在用大孔树脂进行纯化洗脱时， 由于物理吸附的原因， 也容易造成一部分样品 死吸附， 而导致转移率降低。另外采用大孔树脂纯化洗脱液体积较大， 溶剂回收时间长， 增 加了生产成本， 并且溶剂回收产生较多的废液， 对环保造成一定的负担。 此外由于大孔树。
8、脂 的使用， 增加了引入苯、 甲苯、 二甲苯、 苯乙烯、 烷烃类、 二乙基苯类等有机残留溶剂的风险， 对产品的安全性造成了一定的影响。 0004 综上所述， 研究一种简单可行、 对环境污染小的绞股蓝皂甙的提取方法具有很好 的现实意义。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 具有工艺简单， 适 合生产， 时间短等优点。 0006 本发明通过以下技术方案实现， 具体包括如下步骤 ： 说 明 书 CN 104435060 A 3 2/4 页 4 0007 1) 原料处理 ： 将绞股蓝粉碎或打碎 ； 0008 2) 高压提取 ： 将处理后的原料， 放入高压罐中， 。
9、加入相同重量的纯净水， 加入相 当于原料重量 0.05-0.25的聚醚改性有机硅， 加压至 4kgf/cm2， 使其压力均匀， 并保持 10-15min， 恢复常压， 过滤， 得到提取液 ； 0009 3) 分离 ： 对绞股蓝进行双水相萃取， 获得萃取上相和萃取下相， 双水相萃取所使 用的双水相体系由聚乙二醇、 氢氧化钠和水构成， 聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百 分比为 15-25， 氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为 10-15， 余量为水， 所述 聚乙二醇的重均分子量为 1000-8000 ； 0010 4) 后续处理 ： 将步骤 3) 获得的萃取上相， 脱盐、 浓缩干燥， 将步。
10、骤 3) 获得的萃取 下相， 加入相当于萃取下相质量百分比 5-10氢氧化钠， 脱盐、 浓缩干燥 ； 0011 5) 合并干燥后的获得物得到绞股蓝皂甙。 0012 本发明所述的绞股蓝为新鲜和 / 或干燥后的绞股蓝。 0013 所述的脱盐优选采用超滤法或透析法， 超滤法采用截留分子量为 1000-100000 的 超滤膜脱盐， 透析法采用截留分子量为 1000-100000 的透析袋脱盐。 0014 所述的干燥优选喷雾干燥或冷冻干燥。 0015 本发明得到的绞股蓝皂甙， 经 HPLC 检测， 含量在 98.5以上。 0016 与现有技术相比， 本发明的优点 ： 0017 1、 现有技术采用水提法。
11、制备绞股蓝皂甙的方法中， 因绞股蓝的有效成分皂甙本身 具有一定乳化作用， 能产生泡沫， 因此在提取过程中会产生过多的泡沫， 产生的泡沫一方面 会附着在药材原料颗粒上， 进而影响了绞股蓝有效成分的充分溶出， 导致提取时间延长， 提 取溶剂的用量增大 ； 另一方面泡沫还会附着在提取设备上， 使提取液焦化、 变性， 进而影响 药效。 0018 聚醚改性有机硅， 是在硅氧烷分子中添加聚醚链段制得的聚醚 - 硅氧烷共聚物 ( 简称硅醚共聚物 )。聚硅氧烷类消泡剂具有消泡迅速， 抑泡时间长和安全无毒等特点， 但 它难溶于水， 耐高温， 耐强碱性差， 聚醚类消泡剂水溶性好， 耐高温， 耐强碱性强， 但其消泡。
12、 速度和抑泡时间都不甚理想， 而聚醚改性有机硅结合了聚醚跟有机硅消泡剂二者的优点， 具有无毒无害， 对菌种无害， 添加量极少， 是一种高性价比的产品， 通过缩合技术接枝在聚 硅氧烷链上引入聚醚链， 使之具有二类消泡剂的优点， 成为一种性能优良， 有广泛应用前景 的消泡剂。在硅醚共聚物的分子中， 硅氧烷段是亲油基， 聚醚段是亲水基。聚醚链段中聚环 氧乙烷链节能提供亲水性和起泡性， 聚环氧丙烷链节能提供疏水性和渗透力， 对降低表面 张力有较强的作用。 在提取时加入聚醚改性有机硅， 可以有效消除泡沫， 提高提取液的澄清 度， 增加皂甙的溶出率， 使得杂质分离更彻底， 更有利于后续工序操作。 0019。
13、 2、 现有技术在进行绞股蓝皂甙的提取时， 前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂， 通过加热提取来将有效成分溶出， 而本发明采用高压提取， 相比加热提取， 经过高压作用， 使得绞股蓝中含有的有机酸、 多酚、 绞股蓝皂甙等成分能充分溶出， 利于后续工艺的处理， 利于提高活性成分的收率。 0020 3、 属绞股蓝总皂甙的共约有 80 余种， 其中 78 种分别命名为绞股蓝皂苷 -LXXV ， 其中有一部分分别为人参皂苷 Rb1、 Rb3、 Rd， 以及人参二醇、 2- 羟基人参二 醇， 2， 19- 二羟基 -12- 脱氧人参二醇等， 本发明通过双水相萃取， 使得不同结构的皂甙在 说 明 书 CN 1。
14、04435060 A 4 3/4 页 5 不同的萃取相中分布， 增加了皂甙的溶出率。 0021 4、 现有技术得到的绞股蓝皂甙含量一般不超过 98， 本发明采用高压提取和双水 相萃取技术的结合， 可以极大的提高生产效率， 现有技术柱层析所用的树脂为一般为非极 性树脂， 经过一次吸附只能得到绞股蓝皂甙含量 40-50的提取物 ； 如果采用极性树脂， 经 过一次吸附也只能得到绞股蓝皂甙含量 50左右， 要想获得更高含量的绞股蓝皂甙必须通 过 2 次或更多次柱层析吸附， 从而增加了工艺时间和成本。双水相萃取技术作为一种新型 的分离技术， 具有条件温和、 操作简便、 易于放大、 分离能力强等一系列优点。
15、， 而采用本发明 的技术结合， 出现质的提高， 可以增加绞股蓝皂甙的含量和提取效率， 相比水提或醇提后柱 层析， 本发明时间短， 绞股蓝皂甙含量高。 0022 5、 本发明避免了无水乙醇、 甲醇等大量有机溶剂的使用， 更加环保。 具体实施方式 0023 下面以实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不局限于这些实施例。 0024 实施例 1 ： 0025 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 具体包括如下步骤 ： 0026 1) 原料处理 ： 将新鲜绞股蓝打碎 ； 0027 2) 高压提取 ： 将处理后的原料， 放入高压罐中， 加入相同重量的纯净水， 加入相当 于原料重量0.25的聚醚改性有机。
16、硅， 加压至4kgf/cm2， 使其压力均匀， 并保持10min， 恢复 常压， 过滤， 得到提取液 ； 0028 3) 分离 ： 对绞股蓝进行双水相萃取， 获得萃取上相和萃取下相， 双水相萃取所使 用的双水相体系由聚乙二醇、 氢氧化钠和水构成， 聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百 分比为 20， 氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为 10， 余量为水， 聚乙二醇的 重均分子量为 1000-8000 ； 0029 4) 后续处理 ： 将步骤 3) 获得的萃取上相， 超滤法采用截留分子量为 1000-100000 的超滤膜脱盐、 浓缩、 喷雾干燥， 将步骤 3) 获得的萃取下相， 加入相当于。
17、萃取下相质量百分 比 10氢氧化钠， 超滤法采用截留分子量为 1000-100000 的超滤膜脱盐、 浓缩、 喷雾干燥 ； 0030 5) 合并干燥后的获得物得到绞股蓝皂甙。 0031 实施例 2 ： 0032 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 具体包括如下步骤 ： 0033 1) 原料处理 ： 将干燥绞股蓝粉碎 ； 0034 2) 高压提取 ： 将处理后的原料， 放入高压罐中， 加入相同重量的纯净水， 加入相当 于原料重量0.05的聚醚改性有机硅， 加压至4kgf/cm2， 使其压力均匀， 并保持15min， 恢复 常压， 过滤， 得到提取液 ； 0035 3) 分离 ： 对绞股蓝进行双。
18、水相萃取， 获得萃取上相和萃取下相， 双水相萃取所使 用的双水相体系由聚乙二醇、 氢氧化钠和水构成， 聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百 分比为 15， 氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为 15， 余量为水， 聚乙二醇的 重均分子量为 1000-8000 ； 0036 4) 后续处理 ： 将步骤 3) 获得的萃取上相， 透析法采用截留分子量为 1000-100000 的透析袋脱盐、 浓缩、 冷冻干燥， 将步骤 3) 获得的萃取下相， 加入相当于萃取下相质量百分 说 明 书 CN 104435060 A 5 4/4 页 6 比 5氢氧化钠， 透析法采用截留分子量为 1000-100000 。
19、的透析袋脱盐、 浓缩、 冷冻干燥 ； 0037 5) 合并干燥后的获得物得到绞股蓝皂甙。 0038 实施例 3 ： 0039 一种从绞股蓝中提取绞股蓝皂甙的方法， 具体包括如下步骤 ： 0040 1) 原料处理 ： 将干燥绞股蓝粉碎 ； 0041 2) 高压提取 ： 将处理后的原料， 放入高压罐中， 加入相同重量的纯净水， 加入相当 于原料重量0.15的聚醚改性有机硅， 加压至4kgf/cm2， 使其压力均匀， 并保持12min， 恢复 常压， 过滤， 得到提取液 ； 0042 3) 分离 ： 对绞股蓝进行双水相萃取， 获得萃取上相和萃取下相， 双水相萃取所使 用的双水相体系由聚乙二醇、 氢氧。
20、化钠和水构成， 聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百 分比为 25， 氢氧化钠在所述双水相体系中的质量百分比为 12， 余量为水， 聚乙二醇的 重均分子量为 1000-8000 ； 0043 4) 后续处理 ： 将步骤 3) 获得的萃取上相， 超滤法采用截留分子量为 1000-100000 的超滤膜脱盐、 浓缩、 冷冻干燥， 将步骤 3) 获得的萃取下相， 加入相当于萃取下相质量百分 比 10氢氧化钠， 超滤法采用截留分子量为 1000-100000 的超滤膜脱盐、 浓缩、 冷冻干燥 ； 0044 5) 合并干燥后的获得物得到绞股蓝皂甙。 0045 结果 ： 0046 说 明 书 CN 104435060 A 6 。