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1、(10)申请公布号 CN 102397254 A (43)申请公布日 2012.04.04 CN 102397254 A *CN102397254A* (21)申请号 201110365349.1 (22)申请日 2011.11.17 A61K 9/127(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 广西壮都生物科技有限公司 地址 530003 广西壮族自治区南宁市科园路 东四路 5 号南宁留学人员创业园 2B02 (72)发明人 蒋桂秀 奉建芳 蒋满州 (74)专利代理机构 广西。
2、南宁公平专利事务所有 限责任公司 45104 代理人 刘小萍 (54) 发明名称 羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种羟基喜树碱柔性脂质体及 其制备方法， 该方法通过将羟基喜树碱和磷脂、 胆 固醇等载体材料共同溶于有机溶媒中， 于水浴中 通过旋转蒸发成膜， 再加入含壳聚糖的缓冲液即 制得羟基喜树碱柔性柔性脂质体。本发明的羟基 喜树碱柔性柔性脂质体毒性较低、 体内滞留时间 较长， 溶液相中稳定性高， 粒径小， 且冻干后粒径 无明显变化。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 。
3、页 CN 102397254 A1/1 页 2 1. 一种羟基喜树碱柔性脂质体， 其特征在于， 它主要由羟基喜树碱、 磷脂、 胆固醇及壳 聚糖类表面活性剂混合制成， 各组分按重量份配比是 ： 2. 根据权利要求 1 所述羟基喜树碱柔性脂质体， 其特征在于， 所述壳聚糖类表面活性 剂是壳聚糖或其衍生物中的一种或几种。 3.根据权利要求1或2所述羟基喜树碱柔性脂质体， 其特征在于， 所述磷脂选天然磷脂 或合成磷脂。 4. 根据权利要求 1 所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法， 其特征在于， 该方法包 括如下步骤 ： 1) 将羟基喜树碱和磷脂、 胆固醇溶于有机溶媒中， 蒸发成膜 ； 2) 再加入含。
4、壳聚糖类表面活性剂的缓冲液， 缓冲液中含表面活性剂的重量浓度为 0.05 5， pH 为 3.0 10.0 ； 3) 然后在 -5 5下冷藏 10 60 分钟， 搅拌混合， 即制得羟基喜树碱柔性脂质体。 5. 根据权利要求 4 所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述有机 溶媒是甲醇、 乙醇、 氯仿或乙醚中的一种或几种的混合物， 蒸发所需的温度为 50 60。 6. 根据权利要求 4 所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述 pH 为 3.0 10.0 的缓冲液为磷酸盐缓冲液。 7. 根据权利要求 4 所述的羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法， 其特征在于， 所。
5、述搅拌 混合是采用涡旋混合， 混合时间为 10 60 分钟。 权 利 要 求 书 CN 102397254 A1/3 页 3 羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种羟基喜树碱脂质体制剂及其制备方法。 背景技术 0002 羟基喜树碱是喜树碱的 10- 位羟基衍生物， 与喜树碱同属细胞度类抗癌药物， 近 年也有研究发现， 羟基喜树碱的作用靶点为拓扑异构酶， 在杀死癌细胞的同时， 对正常细胞 代谢也有影响。有文献报道了羟基喜树碱的制备方法及其理化性能参数 ( 雷英杰， 王作全， 刘鸿， 等 .10- 羟基喜树碱的制备及机理， 陕西化工， 1999， 28(4) ： 10。
6、)， 该物质为水不溶、 脂 难溶性药物， 并且具有一定的毒性， 而且由于粒径大， 稳定性差， 在体内易被内皮网状系统 吞噬， 其临床应用受到了一定局限。因此， 如何改善羟基喜树碱的性能， 成为人们所十分关 注的热点之一。 0003 中国专利文献 CN100356919C 公开的一种羟基喜树碱脂质体和长循环脂质体制备 方法， 其长循环脂质体以 Poloxamer F68 作为表面活性剂， 该脂质体粒径大至 500nm， 稳定 性差， 基本不能用于临床。 发明内容 0004 本发明所解决的技术问题是提供一种羟基喜树碱柔性脂质体及其制备方法， 以克 服现有技术存在的上述缺陷， 满足医药领域发展的需要。
7、。 0005 本发明的羟基喜树碱柔性脂质体主要由羟基喜树碱、 磷脂、 胆固醇及壳聚糖类表 面活性剂混合制成， 基特征为羟基喜树碱包封于由磷脂与胆固醇类脂双分子层薄膜中， 表 面履盖壳聚糖类表面活性剂， 各组分按重量份配比如下 ： 0006 0007 所述壳聚糖类表面活性剂是壳聚糖或其衍生物中的一种或几种 ； 0008 所述磷脂选自天然磷脂， 如卵磷脂、 蛋磷脂 ； 或者选自合成磷脂， 如磷脂酰胆碱或 其混合物 ； 0009 本发明羟基喜树碱柔性脂质体的制备方法包括如下步骤 ： 0010 1) 将羟基喜树碱和磷脂、 胆固醇溶于有机溶媒中， 蒸发成膜 ； 0011 2) 再加入含壳聚糖类表面活性剂。
8、的缓冲液， 缓冲液中含表面活性剂的重量浓度为 0.05 5， pH 为 3.0 10.0 ； 0012 3) 然后在 -5 5下冷藏 10 60 分钟， 搅拌混合， 即制得羟基喜树碱柔性脂质 体。 说 明 书 CN 102397254 A2/3 页 4 0013 所述有机溶媒是甲醇、 乙醇、 氯仿或乙醚中的一种或几种的混合物， 蒸发所需的温 度为 50 60。 0014 所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。 0015 所述搅拌混合是采用涡旋混合 ( 即将载液容器置于旋涡振荡器上进行混合的操 作 )， 混合时间为 10 60 分钟。 0016 本发明所获得的羟基喜树碱柔性脂质体的粒径为 10 100nm，。
9、 可经冻干后制备成 注射用羟基喜树碱柔性脂质体冻干粉。 0017 本发明的羟基喜树碱柔性脂质体制剂为细胞度类抗癌药物， 可用于治疗原发性肝 癌、 乳腺癌、 贲门腺癌、 结肠癌、 胃癌、 卵巢癌、 肺癌、 宫颈癌等疾病， 其剂量一般为 4 8mg/ 次50kg 体重。 0018 本发明将羟基喜树碱包封于类脂双分子层形成的薄膜中， 制成一种超微球状柔性 脂质体制剂， 使包裹的羟基喜树碱具有靶向性， 能选择性到达病变部位、 组织和细胞， 从而 增加羟基喜树碱的疗效， 减少羟基喜树碱的治疗剂量和降低药物毒性。 0019 本发明所获得的羟基喜树碱柔性脂质体， 能够充分改善羟基喜树碱在体内处置方 式， 减。
10、少与血浆中调理成分的结合， 从而增加其在血液中的稳定性。 柔性脂质体能更持久地 延长药物在血流中的时间， 避免网状内皮系统 (RES) 的吞噬， 以获得更充足的时间到达靶 向部位。 本发明的方法的优点是， 羟基喜树碱不发生碱性条件下内酯环的开环反应， 从而减 低羟基喜树碱的毒性。 附图说明 0020 图 1 是实施例 1 制备的羟基喜树碱柔性脂质体 (HCPT-lipo) 的粒径大小及分布 图。 具体实施方式 0021 实施例 1 0022 1) 将 1.0mg 的羟基喜树碱、 100.0mg 大豆磷脂、 1.0mg 胆固醇溶于 10ml 乙醇中， 得 溶液 A， 将溶液 A 于 50的水浴中。
11、通过旋转蒸发成膜， 得膜 B。 0023 2) 将 10mg 壳聚糖溶于 5ml pH 6.8 的磷酸盐缓冲液， 得溶液 C。 0024 3) 将溶液 C 加入膜 B 中， 在 5以下冷藏 30 分钟使膜充分水合， 再涡旋混合 15 分 钟即制得本发明产品。 0025 取实施例 1 制备的羟基喜树碱柔性脂质体 (HCPT-lipo) 溶液适量， 测定其中 HCPT 的含量(WT) ； 用0.22m微孔滤膜直接过滤， 测定过膜溶液中HCPT的含量(WF)， 采用ER() (WT-WF)/WZ100求算包封率。结果， HCPT-lipo 中 HCPT 包封率为 71。 0026 取实施例1制备的H。
12、CPT-lipo溶液适量， 加适量蒸馏水稀释， 用激光粒度分析仪测 定 HCPT-lipo 的粒径大小及分布。 0027 测得粒径为 53.8nm， 见图 1。 0028 实施例 2 0029 1) 将 10.0mg 的羟基喜树碱、 60.0mg 大豆磷脂、 5.0mg 胆固醇溶于 10ml 乙醇中， 得 溶液 A， 将溶液 A 于 55的水浴中通过旋转蒸发成膜， 得膜 B。 说 明 书 CN 102397254 A3/3 页 5 0030 2) 将 5mg 的羧甲基壳聚糖溶于 0.5ml pH 3.0 的磷酸盐缓冲液， 得溶液 C。 0031 3) 将溶液 C 加入膜 B 中， 在 1以下冷。
13、藏 20 分钟使膜充分水合， 再涡旋混合 60 分 钟即制得本发明产品。 0032 实施例 3 0033 1)将5mg羟基喜树碱、 80mg磷脂酰胆碱、 10mg胆固醇溶于10ml乙醇与氯仿混合物 中 ( 乙醇与氯仿按体积比为 1 1)， 得溶液 A， 将溶液 A 于 60的水浴中通过旋转蒸发成 膜， 得膜 B。 0034 2) 将 8mg 壳聚糖溶于 0.2ml pH 9.0 的磷酸盐缓冲液， 得溶液 C。 0035 3) 将溶液 C 加入膜 B 中， 在 -4以下冷藏 50 分钟使膜充分水合， 再涡旋混合 30 分钟制得产品。 0036 以下是本发明产品对癌细胞杀伤力和毒性试验 ： 0037 将本发明产品采用 2 小时细胞毒试验方法进行对癌细胞杀伤力和毒性试验， 结果 如下 ： 羟基喜树碱柔性脂质体 (HCPT-lipo) 对癌细胞的杀伤力明显优于游离药物， 是游离 药物的近2倍多， 而HCPT-lipo对正常细胞的毒性远低于游离药物(P0.05)， 表明所制备 的 HCPT-lipo 能提高对癌细胞的杀伤力并能降低药物的毒性。结果见下表 1 ： 0038 表 1 HCPT-lipo 与游离药物的细胞毒 IC50(g/ml) 0039 说 明 书 CN 102397254 A1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 。